目的：探索一种适合于中试生产的重组人干细胞因子（recombinant human stem cell factor,rhSCF）的发酵表达与纯化工艺。方法：研究不同培养基和热诱导时间对rhSCF表达量影响；探索最佳纯化工艺和各因素对rhSCF得率和生物学活性的影响...目的：探索一种适合于中试生产的重组人干细胞因子（recombinant human stem cell factor,rhSCF）的发酵表达与纯化工艺。方法：研究不同培养基和热诱导时间对rhSCF表达量影响；探索最佳纯化工艺和各因素对rhSCF得率和生物学活性的影响。结果：rhSCF工程菌在含甘油、酪蛋白水解物、酵母浸出粉、胰蛋白胨及微量元素的培养基中表达量最高。灰度扫描显示热诱导后2h开始表达，6h表达量最高，目的蛋白约可达菌体总蛋白30％。高表达蛋白经复性后，可用酸沉淀作粗分离纯化，随后用阳离子交换层析分离，纯度达80％，经反相层析去除二聚体后，最后用DEAE柱浓缩后并经S200转换缓冲液，最终获得纯度＞95％和经活性＞6×10^5U/mg的rhSCF制品。结论：成功地建立了注射用rhSCF的中试生产工艺，为随后进行的临床前研究及临床试验奠定基础。展开更多
文摘目的：探索一种适合于中试生产的重组人干细胞因子（recombinant human stem cell factor,rhSCF）的发酵表达与纯化工艺。方法：研究不同培养基和热诱导时间对rhSCF表达量影响；探索最佳纯化工艺和各因素对rhSCF得率和生物学活性的影响。结果：rhSCF工程菌在含甘油、酪蛋白水解物、酵母浸出粉、胰蛋白胨及微量元素的培养基中表达量最高。灰度扫描显示热诱导后2h开始表达，6h表达量最高，目的蛋白约可达菌体总蛋白30％。高表达蛋白经复性后，可用酸沉淀作粗分离纯化，随后用阳离子交换层析分离，纯度达80％，经反相层析去除二聚体后，最后用DEAE柱浓缩后并经S200转换缓冲液，最终获得纯度＞95％和经活性＞6×10^5U/mg的rhSCF制品。结论：成功地建立了注射用rhSCF的中试生产工艺，为随后进行的临床前研究及临床试验奠定基础。
