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金嗓清音丸中僵蚕成分的特异性引物扩增鉴定
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作者 郭晶晶 唐玲玲 +7 位作者 严小萍 徐超 胡建慧 李娟 孙小祥 夏国华 林玲 杨欢 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1729-1734,共6页
目的建立特异性引物扩增鉴定金嗓清音丸中僵蚕成分。方法根据家蚕、白僵菌、绿僵菌线粒体全基因序列差异设计特异性引物PM2、PB2、PA2,采用十六烷基三甲基溴化铵法、酚仿抽提法提取纯化总DNA,并以此为模板进行特异性引物扩增和方法学考... 目的建立特异性引物扩增鉴定金嗓清音丸中僵蚕成分。方法根据家蚕、白僵菌、绿僵菌线粒体全基因序列差异设计特异性引物PM2、PB2、PA2,采用十六烷基三甲基溴化铵法、酚仿抽提法提取纯化总DNA,并以此为模板进行特异性引物扩增和方法学考察,产物以2%琼脂糖凝胶电泳检测。结果家蚕、白僵菌、绿僵菌DNA经PCR扩增后,分别在82、94、144 bp处产生条带,并且未观察到非特异性扩增条带。PM2、PB2、PA2对相应DNA的检测灵敏度分别为0.10、0.10、0.010 ng/μL。来自同一厂家的6批样品中同时检出家蚕、白僵菌DNA,但未检出绿僵菌DNA,而另外2批样品仅检出家蚕DNA。结论该方法方便可靠,专属性强,有助于更好地监控金嗓清音丸等含僵蚕中药成方制剂的质量,可为其临床用药的安全性和有效性提供保障,并为其他中成药中动物药的专属性鉴定提供参考。 展开更多
关键词 金嗓清音丸 僵蚕 成分鉴定 异性引物
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花鲈虹彩病毒交叉引物恒温扩增检测方法的建立
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作者 马艳平 覃宝田 +4 位作者 梁曦 王刚 郝乐 周东来 刘振兴 《广东农业科学》 CAS 2024年第3期148-156,共9页
【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全,无特效防控药物,早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法,可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方... 【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全,无特效防控药物,早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法,可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方法】利用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA),针对LMIV ATPase基因高保守区设计1套单交叉引物。以构建的ATPase重组质粒作为阳性模板,对反应体系中的引物浓度比,Bst DNA聚合酶、Betaine、MgSO_(4)、dNTP浓度,以及反应温度和反应时间进行优化;结合一次性核酸试纸条,建立可视化检测LMIV-CPA的方法。【结果】最优引物浓度比组合为交叉引物CPF1.0μmol/L,引物F3和B3均为0.4μmol/L,探针引物B1(FAM)和B2(Biotin)均为0.8μmol/L;MgSO4浓度为6 mmol/L、Betaine浓度为0.4 mol/L、dNTP浓度为0.6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为0.256 U/μL;最佳反应温度为62℃,最佳反应时间为45 min。扩增产物经凝胶电泳检测呈梯形条带,带有探针的反应产物采用一次性核酸试纸条检测装置进行检测,在3~5 min内即可通过是否出现特征性条带而使反应结果可视化。该方法可特异性地检测出LMIV,不与其他水生常见病毒和常见细菌发生交叉反应。使用LMIV-CPA方法和常规PCR方法共同检测156份临床样品,LMIV-CPA的阳性检出率为93.30%,常规PCR方法的阳性检出率为85.83%;在比较二者的灵敏度差异时,LMIV-CPA的检测限为102 copies/μL,灵敏度为常规PCR的10倍,综合结果显示LMIV-CPA优于PCR。【结论】LMIV-CPA检测方法不依赖昂贵的仪器设备与专业技术人员,可应用于LMIV的现场快速检测,为花鲈LMIV的准确快速诊断和有效防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 花鲈虹彩病毒 交叉引物恒温 异性 灵敏度 核酸试纸条 可视化
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引物3’端不同碱基错配情况下实时荧光定量PCR非特异性扩增的发生规律 被引量:5
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作者 李金春 李家鹏 +6 位作者 周彤 乔晓玲 许随根 戚彪 米瑞芳 曲超 许典 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第10期277-283,共7页
以错配反应与正常反应之间的ΔCt值为指示,研究不同碱基错配类型、位置与个数条件下引物3′端与模板之间非特异性扩增的发生规律,并构建ΔCt值的二次多项式回归模型。结果表明,碱基错配种类、位置、个数对实时荧光定量聚合酶链式反应(qu... 以错配反应与正常反应之间的ΔCt值为指示,研究不同碱基错配类型、位置与个数条件下引物3′端与模板之间非特异性扩增的发生规律,并构建ΔCt值的二次多项式回归模型。结果表明,碱基错配种类、位置、个数对实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-q PCR)的非特异性扩增都有显著影响,并呈现出较强的规律性。碱基类型上,研究的各个位置上异型错配较易发生非特异性扩增,而同型错配则较难发生,并且两种错配类型之间有显著性差异(P<0.05);错配位置上,相同条件下引物3’端第1位碱基错配对ΔCt值影响最大,错配位置远离3’端时对ΔCt值的影响逐渐减小,非特异性扩增也更容易发生;错配个数上,随着错配碱基个数的增加对ΔCt值得影响程度不断增大,非特异性扩增较难发生。构建ΔCt值预测模型R2达到0.837 1,根据此模型可以预测出不同位置、不同错配类型条件下ΔCt值,从而可以判断RT-q PCR非特异性扩增的发生的难易程度。 展开更多
关键词 肉类掺假 循环阈值 碱基错配 异性 引物异性
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等位基因特异性引物和TaqMan-MGB探针双抑制野生等位基因扩增的实时荧光定量PCR检测JAK2V617F突变率 被引量:2
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作者 梁国威 邵冬华 +1 位作者 何美琳 曹清芸 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1486-1491,共6页
本研究建立在外周血基因组DNA中定量检测JAK2V617F突变率的荧光定量PCR检测方法并探讨其临床应用价值。在实时荧光定量PCR分析系统中,应用等位基因突变引物和等位基因野生TaqMan-MGB探针共同抑制JAK2V617F野生等位基因扩增,从而特异性... 本研究建立在外周血基因组DNA中定量检测JAK2V617F突变率的荧光定量PCR检测方法并探讨其临床应用价值。在实时荧光定量PCR分析系统中,应用等位基因突变引物和等位基因野生TaqMan-MGB探针共同抑制JAK2V617F野生等位基因扩增,从而特异性地扩增JAK2V617F突变等位基因。通过测定不同JAK2V617F突变率标准品及其循环阈值(Ct值),建立JAK2V617F突变率定量测定方法,并对89例表观健康人外周血基因组DNA中JAK2V617F突变率进行检测。结果表明,建立的方法定量检测JAK2V617F突变率的下限为0.1%,检测JAK2V617F突变率的批内、批间平均变异率分别为4.1%和6.1%。对89例表观健康人外周血基因组DNA中JAK2V617F突变率检测显示,其中2例为JAK2V617F阳性,突变率分别为0.64%和0.98%。结论:建立的JAK2V617F突变率定量检测方法具有检测灵敏度高和重复性好的特性,适合骨髓增殖性疾病的诊断及疾病进程和疗效监测。本方法检测原理可用于各种单碱基突变率的检测,具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 JAK2V617F突变 骨髓殖性疾病 实时荧光定量PCR 等位基因异性引物 TAQMAN-MGB探针 双抑 野生等位基因
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基于随机扩增多态DNA的序列特异性扩增标记法对乌苏里貉食毛症的分析
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作者 魏来 付晶 +1 位作者 杨春山 白秀娟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第3期41-43,共3页
貉(Nyctereutes)在动物分类上属食肉目(Carnivora),犬科(Canidae),貉属(Nyctereutes genus),别名貉子,是珍贵的毛皮动物。其皮是制做皮大衣、皮领、皮帽的高级原料。食毛症是笼养貉的常见病,该病导致貉被毛粗乱,轻者造成针毛、... 貉(Nyctereutes)在动物分类上属食肉目(Carnivora),犬科(Canidae),貉属(Nyctereutes genus),别名貉子,是珍贵的毛皮动物。其皮是制做皮大衣、皮领、皮帽的高级原料。食毛症是笼养貉的常见病,该病导致貉被毛粗乱,轻者造成针毛、底绒参差不齐,尾根裸露;严重者皮肤外露,甚至出血、 展开更多
关键词 乌苏里貉 随机多态DNA 食毛症 异性 标记法 序列 动物分类 毛皮动物
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过量DMSO显著降低低模板浓度PCR扩增的特异性 被引量:6
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作者 肖志壮 曲音波 +2 位作者 汪天虹 高培基 刘梦海 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期341-343,共3页
DMSO通常经验性地用于提高PCR扩增的效率 ,但是过量的DMSO可以显著降低特异序列的扩增效率 ,尤其是导致非特异性扩增的现象却被忽视。在 6 %的DMSO存在时 ,开始出现非特异条带 ,同时特异扩增产物减少。本文首次报道DMSO对PCR产物特异性... DMSO通常经验性地用于提高PCR扩增的效率 ,但是过量的DMSO可以显著降低特异序列的扩增效率 ,尤其是导致非特异性扩增的现象却被忽视。在 6 %的DMSO存在时 ,开始出现非特异条带 ,同时特异扩增产物减少。本文首次报道DMSO对PCR产物特异性的影响并确定了克服上述现象产生的途径 ,即通过增加模板 -引物的比例消除非特异条带。而通常提高复性温度只能部分减少非特异产物 ,不能避免非特异扩增。本文结果有助于提高常规PCR ,尤其是分子遗传学分析中经常使用的随机扩增多态性DNA (randomamplifiedpolymorphicDNA ,RAPD)检测的准确度。 展开更多
关键词 DMSO PCR 异性 效率 基因 模板-引物比例
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基于酶介导双重指数扩增技术(EmDEA)的小火蚁快速检测方法的开发
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作者 韩蕊 滕祎 +10 位作者 李献锋 王临静 魏霜 张雍哲 乔曦 刘海军 吴尧 马骏 万方浩 刘聪辉 钱万强 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2024年第5期1059-1067,共9页
小火蚁Wasmannia auropunctata是危害性最严重的入侵蚂蚁之一,对动植物、生态、经济甚至是人类都容易造成严重影响,是我国的重大检疫害虫之一。本研究为实现小火蚁的现场快速精准检测,通过自研程序筛选出小火蚁全基因组中的特异性片段,... 小火蚁Wasmannia auropunctata是危害性最严重的入侵蚂蚁之一,对动植物、生态、经济甚至是人类都容易造成严重影响,是我国的重大检疫害虫之一。本研究为实现小火蚁的现场快速精准检测,通过自研程序筛选出小火蚁全基因组中的特异性片段,具有更高的特异性,基于酶介导双重指数扩增技术(EmDEA)筛选了适用的引物、RNA探针,全部反应所需时间小于20 min,并验证了其特异性和灵敏度。结果显示这种方法可在短时间内达到极高检测灵敏度与特异性,最低检出限约为4 ng。这种方法极大程度降低对设备的依赖,简单、快速、特异,为小火蚁的基层检测与现场诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 小火蚁 酶介导双重指数技术(EmDEA) 异性引物 RNA探针 快速鉴定 精准检测
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视网膜特异性Rho启动子的基因克隆与序列分析
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作者 吕秀兰 吕林 +2 位作者 李永浩 张静琳 李石毅 《眼科学报》 2005年第2期119-121,共3页
目的:获取视网膜特异性表达Rho启动子基因,为实现外源基因在视网膜组织中特异性表达做准备。方法:用酚氯仿异戊醇抽提BLAB/c鼠全基因组DNA;设计引物,从基因组中通过PCR扩增获得视网膜特异性表达的Rho启动子基因;克隆入PcDNA3.1+载体,酶... 目的:获取视网膜特异性表达Rho启动子基因,为实现外源基因在视网膜组织中特异性表达做准备。方法:用酚氯仿异戊醇抽提BLAB/c鼠全基因组DNA;设计引物,从基因组中通过PCR扩增获得视网膜特异性表达的Rho启动子基因;克隆入PcDNA3.1+载体,酶切、PCR鉴定,上海博亚生物技术公司测序;序列分析。结果:从BLAB/c鼠全基因组DNA中PCR扩增得到预期大小的启动子片段;构建重组PcDNA3.1+-Rho载体具有与目标片段长度相符的插入片段,插入方向正确;测序结果分析显示,视网膜特异性Rho启动子高度保守,所获得的BLAB/c鼠Rho启动子与Genebank报道的序列一致。结论:成功获得BLAB/c鼠Rho视网膜特异性启动子,为下一步研究视网膜疾病的发病机制和基因治疗奠定了一定的工作基础。 展开更多
关键词 克隆与序列分析 RHO BLAB/c鼠 基因组DNA PCDNA3 异性表达 启动子基因 PCR 生物技术公司 视网膜组织 PCR鉴定 视网膜疾病 外源基因 设计引物 插入片段 片段长度 基因治疗 发病机制 异戊醇 克隆人 步研究 载体 测序
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五引物单管聚合酶链反应(PCR)扩增法快速测定人CYP2D610等位基因的类型 被引量:6
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作者 卜莹 张晓丹 +1 位作者 马涛 周国华 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期155-160,共6页
以人CYP2D6 10等位基因位点为研究对象,建立了一种由5条引物同时PCR扩增在单管中进行等 位基因快速检测的新方法。该方法在等位基因特异性扩增法的基础上,在内引物3′端引入了一个人工错配 碱基并在5′端附加一段“尾巴”作为引物... 以人CYP2D6 10等位基因位点为研究对象,建立了一种由5条引物同时PCR扩增在单管中进行等 位基因快速检测的新方法。该方法在等位基因特异性扩增法的基础上,在内引物3′端引入了一个人工错配 碱基并在5′端附加一段“尾巴”作为引物的锚定部分,使扩增反应的特异性得到了提高。本实验所建立的方 法可在单管中同时完成SNP3种可能等位基因类型的快速检测。实测了47份样品的CYP2D6 10等位基因 的类型,并随机对其中20份样品的测定结果用RFLP法进行了验证,结果完全一致。结果表明本法简便、快 速,结果准确。 展开更多
关键词 等位基因 CYP2D6 异性 引物 快速检测 聚合酶链反应(PCR) 尾巴 位点 RFLP
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应用特异性引物检测中国不同地区旋毛虫DNA
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作者 徐克成 姚春雨 +1 位作者 于连富 王虹 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S2期150-150,共1页
根据 Jean-Dupouy-Camet 报道1.7 kb 基因序列而设计合成的引物,对中国9个地区(哈尔滨海伦猪株、哈尔演五常犬株、黑龙江孙吴猫株、长春犬株、沈阳猪株、河南南阳猪株、湖南十堰猪株、西安猪株、云南大理猪株)的肌组织旋毛虫 DNA 进行... 根据 Jean-Dupouy-Camet 报道1.7 kb 基因序列而设计合成的引物,对中国9个地区(哈尔滨海伦猪株、哈尔演五常犬株、黑龙江孙吴猫株、长春犬株、沈阳猪株、河南南阳猪株、湖南十堰猪株、西安猪株、云南大理猪株)的肌组织旋毛虫 DNA 进行了聚合酶链式反应(PCR).扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,可见中国猪源旋毛虫均扩增出特异性的602bp 和230 bp 大小的 DNA 条带",而中国犬源和猫源以及正常对照肌组织 DNA 均未扩增出特异性片段.本法对中国猪源旋毛虫可检测到0.02条旋毛虫 DNA,具有高度的特异性和敏感性. 展开更多
关键词 旋毛虫 聚合酶链式反应 设计合成 异性引物 肌组织 中国猪 产物 河南南阳 电泳分析 黑龙江
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交叉引物等温扩增技术在EHEC检测中的应用
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作者 刘文鑫 袁超文 冯瑜菲 《中国卫生标准管理》 2019年第6期104-108,共5页
目的建立一种新型的交叉引物等温扩增技术检测组织中的肠出血性大肠杆菌(EHEC),为临床诊断提供快速、灵敏、有效的检测方法。方法根据EHEC O157:H7的基因特征性保守序列,进行交叉、剥离引物设计之后,采用检测探针来进行O157:H7检测,从... 目的建立一种新型的交叉引物等温扩增技术检测组织中的肠出血性大肠杆菌(EHEC),为临床诊断提供快速、灵敏、有效的检测方法。方法根据EHEC O157:H7的基因特征性保守序列,进行交叉、剥离引物设计之后,采用检测探针来进行O157:H7检测,从而检测出比较常见的食源性细菌并对这些细菌的特异性进行验证,对菌液进行不同浓度稀释,从而对交叉引物等温扩增技术检测的灵敏度进行评估,多次实验验证此方法的实用性。结果检测中,仅O157:H7菌株呈阳性,特异性良好,灵敏度也比较高。结论在EHEC O157:H7进行检测的过程中,应用交叉引物等温扩增技术来进行,操作简单易上手,检测速度比较快,检测灵敏结果准确,特异性比较强,应当广泛应用于肠出血性大肠杆菌O157:H7的检测实践当中。 展开更多
关键词 交叉引物 等温技术 肠出血性大肠杆菌 快速检测 异性 灵敏度
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稻瘟病广谱抗性基因Pigm特异性分子标记的开发和应用 被引量:16
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作者 陈涛 孙旭超 +9 位作者 张善磊 梁文化 周丽慧 赵庆勇 姚姝 赵凌 赵春芳 朱镇 张亚东 王才林 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期28-36,共9页
【目的】来自籼稻品种谷梅4号的Pigm是一个对稻瘟病菌具有广谱和持久抗性的重要基因。为有效提高Pigm基因的选择效率,有必要开发具有特异性的共显性分子标记进行辅助育种。【方法】本研究根据谷梅4号Pigm位点存在的特异性核苷酸变异,利... 【目的】来自籼稻品种谷梅4号的Pigm是一个对稻瘟病菌具有广谱和持久抗性的重要基因。为有效提高Pigm基因的选择效率,有必要开发具有特异性的共显性分子标记进行辅助育种。【方法】本研究根据谷梅4号Pigm位点存在的特异性核苷酸变异,利用Tetra-primerARMS-PCR和KASP两种不同的基因分型技术开发出分子标记T-Pigm和K-Pigm,对不同品种(品系)以及淮稻9号/谷梅4号的F2分离群体进行基因型检测,并结合穗颈瘟人工接种鉴定,对标记的准确性进行评价。【结果】序列比对分析表明,谷梅4号Pigm位点中Pigm-Nbs2基因起始密码子上游515 bp处存在一个特殊的单核苷酸变异。利用已开发的两种类型的分子标记能够有效区分3种不同的基因型,且基因型与穗颈瘟人工接种鉴定结果完全一致。【结论】利用分子标记T-Pigm和K-Pigm可以实现对Pigm基因型快速、准确的检测,加快抗稻瘟病水稻新品种的选育进程。 展开更多
关键词 稻瘟病 Pigm 异性标记 引物受阻突变体系PCR 竞争性等位基因异性PCR
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PCR扩增Sry基因进行鲸类动物性别的鉴定 被引量:5
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作者 王加连 杨光 +2 位作者 周开亚 魏辅文 严洁 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期20-23,共4页
哺乳动物Y染色体短臂上的Sry基因决定雄性发育方向。本研究参照哺乳动物Sry基因保守区序列设计引物 ,以非性别特异性的线粒体DNA细胞色素b基因作为阳性对照 ,用PCR扩增江豚、长喙真海豚等鲸类动物的Sry基因片断并对其进行凝胶电泳分析... 哺乳动物Y染色体短臂上的Sry基因决定雄性发育方向。本研究参照哺乳动物Sry基因保守区序列设计引物 ,以非性别特异性的线粒体DNA细胞色素b基因作为阳性对照 ,用PCR扩增江豚、长喙真海豚等鲸类动物的Sry基因片断并对其进行凝胶电泳分析来鉴定鲸类动物的性别。通过此方法对 87个已知性别鲸类动物标本的检验 ,结果完全正确 ,并进一步应用此方法成功地完成了另外 33个未知性别鲸类标本的性别鉴定。由此建立了一套简单、快速。 展开更多
关键词 SRY基因 性别鉴定 标本 性发育 PCR 鉴定 异性 鲸类动物 哺乳动物 引物
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东方田鼠特异DNA片段的克隆及核苷酸序列分析 被引量:14
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作者 杨榕 胡维新 +1 位作者 朱敏 彭兴华 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第2期67-72,共6页
目的 获得东方田鼠的特异DNA序列。方法 Aβ基因使用PCR ,基因克隆 ,斑点杂交 ,DNA序列分析 ,生物信息学技术。结果 根据小鼠MHCⅡ外显子 2及其两侧序列 ,合成引物并扩增东方田鼠基因组DNA ,将PCR产物回收、测序后 ,分别设计内引物... 目的 获得东方田鼠的特异DNA序列。方法 Aβ基因使用PCR ,基因克隆 ,斑点杂交 ,DNA序列分析 ,生物信息学技术。结果 根据小鼠MHCⅡ外显子 2及其两侧序列 ,合成引物并扩增东方田鼠基因组DNA ,将PCR产物回收、测序后 ,分别设计内引物扩增东方田鼠基因组DNA ,其中一对引物可得到特异性扩增带 ,将得到的DNA片段插入PGEM Teasy载体 ,进行序列分析。用这对引物扩增人、昆明小鼠、BALB c小鼠及C57BL 6J小鼠基因组DNA ,均无扩增产物。以东方田鼠特异性扩增产物为探针进行斑点杂交 ,除东方田鼠基因组DNA外 ,其他几种动物基因组DNA均为阴性结果。进一步对该DNA片段进行了BLAST同源性搜索和外显子预测 ,在Genbank中没有发现高度同源序列 ,并且找到一个可能的外显子 ,该外显子由 69个氨基酸组成。结论 获得的DNA片段为东方田鼠的特异片段 ,这将为从分子水平深入研究东方田鼠的遗传背景、生物进化规律以及东方田鼠抗日本血吸虫的机理奠定基础。 展开更多
关键词 东方田鼠 外显子 DNA片段 斑点杂交 引物 异性 基因组DNA 动物基因组 生物进化
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杉木第四号染色体特异性RAPD片段的获得 被引量:4
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作者 李湘阳 周坚 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期418-421,425,共5页
分别分离杉木(Cunninghamia lanceolata(Lamb.)Hook)同一细胞中的第四号具随体染色体及剩余20条非随体染色体,进行DOP-PCR扩增,分别以随体染色体及非随体染色体的DOP-PCR产物为模板,用成对随机引物进行RAPD分析。用引物对OPB07+OPB10进... 分别分离杉木(Cunninghamia lanceolata(Lamb.)Hook)同一细胞中的第四号具随体染色体及剩余20条非随体染色体,进行DOP-PCR扩增,分别以随体染色体及非随体染色体的DOP-PCR产物为模板,用成对随机引物进行RAPD分析。用引物对OPB07+OPB10进行扩增,在500-250 bp之间,随体染色体有4条特异扩增带;用引物对OPB07+OPB18在900 bp左右获得1条随体染色体特异带;用引物对OPD07+OPD05在250 bp左右得到随体染色体1条特异扩增带。 展开更多
关键词 杉木 随机引物 第四号染色体 RAPD分析 异性 分离 左右 细胞 产物
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滚环DNA扩增的原理、应用和展望 被引量:3
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作者 肖乐义 祁自柏 +1 位作者 姜俊 张子宽 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第9期33-38,共6页
滚环DNA扩增 (rollingcircleDNAamplification ,RCA)是一种等温信号扩增方法 ,其线性扩增倍数为 1 0 5,指数化扩增能力大于 1 0 9,产生的扩增产物连接在固相支持物 (如玻片、微孔板等 )表面的DNA引物或抗体上。RCA是一种适合在芯片上 (o... 滚环DNA扩增 (rollingcircleDNAamplification ,RCA)是一种等温信号扩增方法 ,其线性扩增倍数为 1 0 5,指数化扩增能力大于 1 0 9,产生的扩增产物连接在固相支持物 (如玻片、微孔板等 )表面的DNA引物或抗体上。RCA是一种适合在芯片上 (on chip)进行信号扩增的新技术 ,它既能提供研究分析的敏感性和特异性 ,又能保持立体分析的多元性。RCA亦是一种痕量的分子检测方法 。 展开更多
关键词 DNA DNA引物 RCA 微孔板 抗体 生物标志 异性 生物大分子 玻片 产物
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环介导等温扩增过程监测与结果分析技术研究进展
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作者 张旭志 吕志林 +1 位作者 崔正国 孔青 《医学研究杂志》 2011年第11期165-168,共4页
2000年,Notomi等^1]一种新颖的核酸扩增方法一环介导等温扩增(100p-ediated sothermal mplification,LAMP)。该技术利用4种不同的特异性引物识别靶基因的6个特定区域,在恒温条件进行反应,不需要模板的热变性和长时间温度循环。
关键词 环介导等温 监测 异性引物 方法 定区域 靶基因 热变性
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提高PCR反应特异性的几点策略 被引量:5
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作者 李谦 李雅青 《临沂师范学院学报》 2001年第4期56-57,共2页
根据近年来PCR方法学的一些新进展 。
关键词 异性 引物 热启动 模板 回落法 效剂 分子生物学 PCR反应方法学 PCR
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多重特异性引物扩增技术鉴定小儿肺咳颗粒中鸡内金成分
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作者 盛玉青 张玉立 沈丰 《中文科技期刊数据库(全文版)医药卫生》 2023年第2期70-73,共4页
建立多重PCR分子技术鉴定小儿肺咳颗粒中鸡内金真伪的方法。方法 采用甲醇预沉淀与CTAB结合法提取DNA,根据家鸡、麻鸭、家鹅的线粒体基因序列设计和筛选引物,建立基于特异性引物检测鸡内金的多重PCR方法,并进行方法学考察,用于市售小儿... 建立多重PCR分子技术鉴定小儿肺咳颗粒中鸡内金真伪的方法。方法 采用甲醇预沉淀与CTAB结合法提取DNA,根据家鸡、麻鸭、家鹅的线粒体基因序列设计和筛选引物,建立基于特异性引物检测鸡内金的多重PCR方法,并进行方法学考察,用于市售小儿肺咳颗粒中鸡内金的真伪鉴别。结果 筛选得到的鸡、鸭、鹅内金DNA分别在94 bp,123 bp和155 bp处产生清晰明亮条带且未发现非特异性扩增,引物最佳组合浓度PGD: PAP: PAA为0.28: 0.16: 0.08 μM,PCR循环33次得到的条带清晰且无非特异性扩增,该方法特异性良好,灵敏度达1 ng/μL,该方法检测不同厂家10个批次小儿肺咳颗粒样品,发现1个批次检出有鹅内金掺伪,检出率为10.0%。结论 多重PCR分子技术鉴定方法可以很好地监控含鸡内金成方制剂的质量。 展开更多
关键词 小儿肺咳颗粒 鸡内金 多重异性引物
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云南黑山羊性别决定基因体外扩增研究
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作者 兰蓉 杨红远 洪琼花 《云南畜牧兽医》 2004年第4期1-2,共2页
对云南黑山羊 (10♂ ,2♀ )的基因组DNA性别决定基因 (SRY)进行了体外PCR扩增的研究 ,结果表明适当引物可特异性扩增出雄性个体的性别决定基因片段 (大小约为 185bp) ,而对雌性个体则不能扩增出任何片段 ;研究还利用已筛选出的性别决定... 对云南黑山羊 (10♂ ,2♀ )的基因组DNA性别决定基因 (SRY)进行了体外PCR扩增的研究 ,结果表明适当引物可特异性扩增出雄性个体的性别决定基因片段 (大小约为 185bp) ,而对雌性个体则不能扩增出任何片段 ;研究还利用已筛选出的性别决定基因特异性引物对少量的胚胎细胞进行了特异性扩增 ,检测了 2 0枚云南黑山羊的胚胎 ,其中有 5枚胚胎可扩增出约为 185bp的特异性片段。以上结果为山羊胚胎早期性别鉴定奠定了技术基础。 展开更多
关键词 黑山羊 性别决定基因 胚胎 异性引物 性别鉴定 异性片段 基因组DNA 体外 早期 研究
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