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TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法同步检测兰花中的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒
1
作者 孙爱青 王丽花 +3 位作者 张艺萍 杨秀梅 许凤 苏艳 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期219-227,239,共10页
为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标... 为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标序列及对应的最优特异性引物探针组合,建立了基于TaqMan探针的双重实时荧光定量PCR方法。该方法最低检出限为1拷贝或6.2×10^(-3)fg,最低稳定检出限为10拷贝或6.2×10^(-2)fg,是RT-PCR的10~100倍;构建的标准曲线线性关系良好,扩增效率分别为97.7%和100.2%,相关系数R2分别为1.000和0.999;对其他5种常见病毒均无扩增曲线,检测特异性强;批组内与批组间重复性试验Ct值变异系数≤0.60%,重复性和稳定性好。利用该方法和基因芯片法分别对4个种属的66个兰花样品进行方法验证,该方法相较于基因芯片法检出率提高了53.85%(CymMV)和162.5%(ORSV)。综上所述,本方法可同时高通量检测CymMV和ORSV 2种病毒靶基因,结果可靠,应用前景广阔,可为开展病毒精准鉴定、科学防控以及从源头遏制病毒传播提供技术支撑。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 TAQMAN探针 RT-QPCR 兰花
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蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的实时荧光定量PCR检测
2
作者 宋起萱 浦艳飞 +5 位作者 余蓉培 瞿素萍 杨春梅 吴丽芳 汪国鲜 阮继伟 《江苏农业科学》 北大核心 2023年第15期21-28,共8页
建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,简称CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,简称ORSV)是蝴蝶兰生产中的主要病毒病害,建立稳定、灵敏的检测体系是进行病毒早期检测和脱毒技术研究的前提。本研究首先对CymMV和ORSV... 建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,简称CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,简称ORSV)是蝴蝶兰生产中的主要病毒病害,建立稳定、灵敏的检测体系是进行病毒早期检测和脱毒技术研究的前提。本研究首先对CymMV和ORSV的外壳蛋白(coat protein,简称CP)基因片段进行克隆和序列比对,随后设计特异性引物,分别构建2种病毒的RT-qPCR(real time quantitative PCR,简称RT-qPC)检测体系,并对云南地区20份样品进行检测。研究结果显示,CymMV和ORSV CP基因序列与其他地区分离物中这2种病毒的核苷酸序列相似性分别为97.92%~98.66%和99.12%~99.56%,其CP基因序列具有保守性。CymMV和ORSV在RT-qPCR体系中最低检出浓度分别为30.9、35.0 copies/μL,灵敏度较RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,简称RT-PCR)提高10倍。利用RT-qPCR体系对20份温室样品进行检测,CymMV阳性率为100%,ORSV阳性率为90%,阳性率均高于RT-PCR检测结果。本研究构建的CymMV和ORSV RT-qPCR检测体系将为蝴蝶兰病毒病早期监测和脱毒种苗的培育奠定基础。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 实时荧光定量PCR 病毒检测
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复合感染建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的兰花超微结构观察及病原物快速鉴定 被引量：17
3
作者 施农农 徐莺 +2 位作者 王慧中 谢礼 洪健 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2007年第2期153-163,共11页
通过负染和超薄切片观察到蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)病叶中线状和杆状病毒颗粒。组织切片观察,同时发现两种病毒粒子的典型聚集体:线状粒子的带状聚集体,粒子多层排列,层间呈一定角度或螺旋相叠;杆状粒子的平行、角层状或螺旋型排... 通过负染和超薄切片观察到蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)病叶中线状和杆状病毒颗粒。组织切片观察,同时发现两种病毒粒子的典型聚集体:线状粒子的带状聚集体,粒子多层排列,层间呈一定角度或螺旋相叠;杆状粒子的平行、角层状或螺旋型排列聚集体。二种病毒聚集体均出现于薄壁细胞、细胞间隙和输导组织细胞中。感病细胞中叶绿体发育不全;线粒体增生、肿胀甚至空化;细胞核膨大、空化。进一步的多重RT-PCR与病毒核酸序列分析,同时扩增到建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)的外壳蛋白基因,与GenBank已知分离物同源性分别达到98%和99%-100%。从细胞和分子层面揭示了蝴蝶兰受CymMV和ORSV复合侵染并可能导致严重病症的事实,分析和明确了感病兰细胞超微结构的病变特征以及田间病症发生的细胞病理学依据。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 细胞超微结构 多重RT-PCR 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 复合感染
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墨兰组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv)的研究 被引量：15
4
作者 姜玲 张明涛 +1 位作者 陈泽雄 马国华 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1056-1060,共5页
对墨兰原球茎顶端分生组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv)病原的效果进行了研究.取1～2 mm大小的墨兰原球茎顶端分生组织,经0,20和40 mg·L-1的三氮唑核苷浸泡15 min处理和继代培养,诱导再生植株.RT-PCR检测表明:从带病... 对墨兰原球茎顶端分生组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv)病原的效果进行了研究.取1～2 mm大小的墨兰原球茎顶端分生组织,经0,20和40 mg·L-1的三氮唑核苷浸泡15 min处理和继代培养,诱导再生植株.RT-PCR检测表明:从带病叶样提取的RNA经反向转录和PCR扩增反应,在琼脂糖凝胶电泳中检测到长为767 bp的CymMv病原特异扩增产物,而健康墨兰叶样中未检测到该扩增产物.单纯利用原球茎顶端分生组织培养获得的试管苗,脱毒率为72.9%;原球茎顶端分生组织经过20 mg·L-1的三氮唑核苷处理,可以获得100%的无病毒苗.虽然三氮唑核苷处理造成原球茎顶端分生组织细胞一定程度的伤害,但经过5～6个月的培养,分生组织能恢复生长,不定芽能有效地增殖,并获得了再生植株.当三氮唑核苷处理浓度为40 mg·L-1时,原球茎的顶端分生组织出现透明和褐变现象,细胞活力难以恢复. 展开更多
关键词 墨兰 建兰花叶病毒 三氮唑核苷 RT—PCR
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建兰花叶病毒单克隆抗体的制备及检测应用 被引量：9
5
作者 孟春梅 吴建祥 +3 位作者 谢礼 郑锦凯 洪健 周雪平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期928-931,共4页
用建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得3株能稳定传代并分泌抗CymMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞(2C6、5B7和12G9),分别制备它们的单抗腹水。其中5B7和12G92株单... 用建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得3株能稳定传代并分泌抗CymMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞(2C6、5B7和12G9),分别制备它们的单抗腹水。其中5B7和12G92株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,3株单抗的抗体类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链。利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)检测CymMV的方法。蝴蝶兰病叶作1∶10240倍稀释、提纯CymMV病毒浓度为4.87ng/mL(每孔的病毒绝对量为0.487ng)时,该方法仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA方法检测了田间样品,发现CymMV在兰花上发病很普遍。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 单克隆抗体 ACP-ELISA
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建兰花叶病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：10
6
作者 梁芳 张燕 +3 位作者 王若斓 许申平 程喜梅 崔波 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期572-580,共9页
建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)是引起兰科植物病毒病的最重要病原体。研究根据NCBI上已登录的CyMV外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因保守区设计两对特异性引物,用RT-PCR法从感病蝴蝶兰中克隆到2条CyMV CP基因序列,编码区ORF长... 建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)是引起兰科植物病毒病的最重要病原体。研究根据NCBI上已登录的CyMV外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因保守区设计两对特异性引物,用RT-PCR法从感病蝴蝶兰中克隆到2条CyMV CP基因序列,编码区ORF长672 bp,编码223个氨基酸。序列分析表明这两个分离物之间有13个核苷酸差异,与已报道的其他地区CyMV分离物CP基因核苷酸相似性分别为97%~99%和97%~98%,氨基酸相似性分别为95%~99%和96%~100%。运用实时荧光定量RT-q PCR法对该病毒检测方法进行了一系列条件优化,建立起一套基于SYBR Green I的CyMV实时荧光定量PCR检测体系。该检测方法比普通RT-PCR法灵敏度高100倍,标准曲线循环阈值(Ct)与模板浓度的对数呈现良好的线性关系,扩增效率为100%,相关性系数为0.998。重复性试验表明组内及组间变异系数均在2.58%以内,表明该方法重复性较好,可为兰花CyMV的早期预警及病毒在植物体内侵染途径研究提供技术支持。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 实时荧光定量PCR 外壳蛋白基因 病毒检测
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国产蝴蝶兰种苗携带建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)的调查及脱毒的初步研究 被引量：13
7
作者 丁兰 郭艳 +3 位作者 董刚 杨玲 张丽 刘国安 《北方园艺》 CAS 北大核心 2012年第2期137-140,共4页
采用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)对国内不同蝴蝶兰种植场的17个蝴蝶兰分生苗品系种苗(22个样本)携带的2种主要病毒(CymMV和ORSV)的情况进行了检测调查,并采用茎尖培养和原球茎诱导的方式对携带病毒的4个蝴蝶兰品系进行了脱毒研... 采用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)对国内不同蝴蝶兰种植场的17个蝴蝶兰分生苗品系种苗(22个样本)携带的2种主要病毒(CymMV和ORSV)的情况进行了检测调查,并采用茎尖培养和原球茎诱导的方式对携带病毒的4个蝴蝶兰品系进行了脱毒研究。结果表明:22个样本中有20个样本复合感染2种病毒,仅有1个样本显示了阴性结果。采用茎尖培养的‘R-2-2’和‘Y-4-2’品系,其脱毒率分别为22.7%(CymMV)和19.1%(ORSV),30.3%(CymMV)和8.0%(ORSV);采用原球茎脱毒的‘R-1-2’和‘R-11-1’品系,其脱毒率分别为25.4%(CymMV)和1.4%(ORSV),25.2%(CymMV)和24.2%(ORSV)。茎尖培养和原球茎诱导方式均不能一次性彻底脱毒。 展开更多
关键词 DAS-ELISA 蝴蝶兰 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 脱毒
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建兰花叶病毒研究进展(综述) 被引量：14
8
作者 明艳林 李梅 郑国华 《福建农业学报》 CAS 2005年第1期30-33,共4页
综述建兰花叶病毒(CyMV)的病害发生、症状表现、寄主范围、病原学、血清学、病害流行学、分子生 物学及其检测和防治的研究进展,探讨了须进一步澄清和解决的问题。
关键词 兰花 建兰花叶病毒 研究进展
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实时荧光RT-PCR方法检测齿兰环斑病毒与建兰花叶病毒 被引量：8
9
作者 闻伟刚 谭钟 崔俊霞 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期101-104,共4页
齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的2种主要病毒。本研究根据病毒不同分离株外壳蛋白基因的保守序列,分别设计了ORSV与CymMV各自的特异性引物与荧光探... 齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的2种主要病毒。本研究根据病毒不同分离株外壳蛋白基因的保守序列,分别设计了ORSV与CymMV各自的特异性引物与荧光探针,建立了基于TaqMan探针的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高104倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对ORSV和CymMV的快速检测。应用该方法,从来自台湾的蝴蝶兰样品中检出齿兰环斑病毒。 展开更多
关键词 齿兰环斑病毒 建兰花叶病毒 实时荧光RT-PCR 检测
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建兰花叶病毒厦门分离物的鉴定及其抗血清的制备与应用 被引量：6
10
作者 明艳林 郑国华 李梅 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期366-369,共4页
关键词 建兰花叶病毒 分离物 抗血清 分子生物学研究 应用 制备 鉴定 马铃薯X病毒
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齿兰环斑病毒与建兰花叶病毒分子检测研究 被引量：5
11
作者 闻伟刚 谭钟 +1 位作者 崔俊霞 陈先锋 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期65-69,共5页
齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cy MV)是严重危害兰科植物的两种主要病毒。本研究根据病毒外壳蛋白基因设计特异性引物,应用ELISA、普通RT-PCR、巢式RT-PCR和免疫捕获RT-PCR4... 齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cy MV)是严重危害兰科植物的两种主要病毒。本研究根据病毒外壳蛋白基因设计特异性引物,应用ELISA、普通RT-PCR、巢式RT-PCR和免疫捕获RT-PCR4种方法进行了检测研究与比较。结果表明:普通RT-PCR与ELISA方法检测灵敏度相当;巢式RT-PCR检测灵敏度要比普通RT-PCR与ELISA方法高出104倍以上;免疫捕获RT-PCR检测灵敏度介于普通RT-PCR和巢式RT-PCR之间。采用巢式RT-PCR方法对我国台湾进境的蝴蝶兰植株样本检测,1号样本出现与阳性对照一致的特异条带。双向测序分析,扩增产物序列与ORSV外壳蛋白基因具有100%的同源性,表明1号蝴蝶兰样本携带ORSV。 展开更多
关键词 齿兰环斑病毒 建兰花叶病毒 巢式RT—PCR 免疫捕获RT-PCR 检测灵敏度
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建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒联合免疫胶体金试纸条的研制及应用 被引量：5
12
作者 于子翔 李丽 +4 位作者 俞禄珍 杨翠云 吴建祥 黄卫昌 于翠 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期139-143,共5页
为了实现兰花种植苗圃和口岸一线直接检测样品中建兰花叶病毒Cymbidium mosaic virus(CymMV)和齿兰环斑病毒Odontoglossum ringspot virus(ORSV)的目的,我们研制了上述两种病毒联合免疫胶体金检测试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体... 为了实现兰花种植苗圃和口岸一线直接检测样品中建兰花叶病毒Cymbidium mosaic virus(CymMV)和齿兰环斑病毒Odontoglossum ringspot virus(ORSV)的目的,我们研制了上述两种病毒联合免疫胶体金检测试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记单抗C10并固定于胶金垫上;将抗体5B7和4F3分别固定于硝酸纤维素膜上作为检测线,将羊抗鼠抗体包被固定于硝酸纤维素膜上作为质控线,经优化后组装胶体金试纸条。结果表明研制的联合试纸条特异性强,能够在10min之内同时检出两种病毒,操作简便。对两个种植苗圃的93份兰花样品进行实际检测所得结果与ELISA的检测结果符合性好(Kappa值分别为84.6%和86.7%),能满足兰花样品中建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的初筛要求。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 联合免疫胶体金试纸条
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应用IC-RT-PCR方法检测齿兰环斑病毒和建兰花叶病毒 被引量：3
13
作者 李志勇 郭京泽 +2 位作者 司贺龙 李兴红 董金皋 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期40-42,共3页
根据已报道的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,建立了蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒IC-RT-PCR检测方法。用该方法对天津地区8个蝴蝶兰标样检测,结果显示:8个标样中有4个检测到建兰花叶病毒,另外4个检测到齿... 根据已报道的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,建立了蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒IC-RT-PCR检测方法。用该方法对天津地区8个蝴蝶兰标样检测,结果显示:8个标样中有4个检测到建兰花叶病毒,另外4个检测到齿兰环斑病毒。该方法简化了操作程序,为蝴蝶兰种苗病毒的快速检测奠定了基础。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 齿兰环斑病毒 建兰花叶病毒 外壳蛋白基因 免疫捕获PCR 序列分析
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建兰花叶病毒的分子生物学检测 被引量：8
14
作者 高焕利 杨翠云 +1 位作者 于翠 马青 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期289-292,296,共5页
根据建兰花叶病毒外壳蛋白基因的保守序列设计2对引物,采用IC-RT-PCR方法和质粒梯度稀释的方法,研究建兰花叶病毒的分子检测方法和灵敏度。结果表明,从21个建兰花叶病毒的病株样品中均能扩增出与预期大小相同的DNA条带,序列测定和序列... 根据建兰花叶病毒外壳蛋白基因的保守序列设计2对引物,采用IC-RT-PCR方法和质粒梯度稀释的方法,研究建兰花叶病毒的分子检测方法和灵敏度。结果表明,从21个建兰花叶病毒的病株样品中均能扩增出与预期大小相同的DNA条带,序列测定和序列同源性分析表明所测定的序列均为CyMV外壳蛋白基因的部分序列,序列同源性均达到89%以上;灵敏度检测结果表明:可检测的最低病毒含量为2.72×10-7μg/mL。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒(CyMV) 免疫捕获反转录聚合酶链式反应 灵敏度检测
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建兰花叶病毒运动蛋白基因克隆及序列分析 被引量：11
15
作者 刘志昕 吴豪 +1 位作者 潘俊松 郑学勤 《中国病毒学》 CSCD 2001年第1期51-54,共4页
从建兰花叶病毒 (CyMV)石斛兰分离物中提取病毒RNA ,用反转录———聚合酶链式反应 (RT PCR)方法获得约 5 0 0bp的运动蛋白基因片断 ,插入 pGEM T载体克隆并测序。序列分析表明 ,该基因片断由 474个核苷酸组成 ,和CyMV美国夏威夷分离物... 从建兰花叶病毒 (CyMV)石斛兰分离物中提取病毒RNA ,用反转录———聚合酶链式反应 (RT PCR)方法获得约 5 0 0bp的运动蛋白基因片断 ,插入 pGEM T载体克隆并测序。序列分析表明 ,该基因片断由 474个核苷酸组成 ,和CyMV美国夏威夷分离物、新加坡分离物相应基因核甘酸序列分别具有 97.8%同源性 ;根据核酸序列推导该片断含有 3个部分重叠的开放阅读框架 (ORF) ,分别编码 14kD、12kD和 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 运动蛋白 基因克隆 序列分析 兰花 病毒
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广东省兰花建兰花叶病毒分子鉴定及其外壳蛋白基因序列分析 被引量：10
16
作者 周国辉 陈晓琴 +3 位作者 周洁浪 唐添华 冯盛祥 郭丽晶 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期381-384,共4页
根据已报道的建兰花叶病毒 (Cymbidiummosaicvirus,CyMV)基因组序列设计PCR引物 ,采集广东省顺德等地墨兰 (Cymbidiumsinensevar.margicoloratum)和文心兰 (Oncidiumsp .)表现病毒病症状的兰株 ,抽提病叶组织总RNA ,经RT PCR反应在约 7... 根据已报道的建兰花叶病毒 (Cymbidiummosaicvirus,CyMV)基因组序列设计PCR引物 ,采集广东省顺德等地墨兰 (Cymbidiumsinensevar.margicoloratum)和文心兰 (Oncidiumsp .)表现病毒病症状的兰株 ,抽提病叶组织总RNA ,经RT PCR反应在约 70 %的样品中获得预期大小的DNA扩增产物 ,并对其中来自不同品种的 3个扩增产物进行克隆和序列分析。结果表明所获得的核苷酸序列与世界各地已报道的CyMV外壳蛋白 (CP)基因序列高度同源 ,据此将RT PCR反应呈阳性的病样病原鉴定为CyMV。通过对CyMVCP基因序列进行进化树分析 ,表明CyMV的多样性可能起因于其广泛的地理分布 ,而不是起因于寄主多样性。 展开更多
关键词 广东 兰花 建兰花叶病毒 分子鉴定 外壳蛋白基因
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建兰花叶病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：3
17
作者 樊荣辉 黄敏玲 +2 位作者 钟淮钦 罗远华 叶秀仙 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期541-545,共5页
建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)是侵染兰花的主要病毒,严重影响其观赏价值,建立快速、灵敏的检测方法显得尤为重要。根据CyMV的外壳蛋白基因序列设计4对特异性引物,经过优化反应条件,建立该病毒的RT-LAMP检测方法,并进行LAM... 建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)是侵染兰花的主要病毒,严重影响其观赏价值,建立快速、灵敏的检测方法显得尤为重要。根据CyMV的外壳蛋白基因序列设计4对特异性引物,经过优化反应条件,建立该病毒的RT-LAMP检测方法,并进行LAMP检测的特异性、敏感性检测。该方法能特异扩增CyMV,与其他4种病毒(齿兰环斑病毒、菜豆黄花叶病毒、黄瓜花叶病毒和小苍兰花叶病毒)不发生反应;灵敏度为RT-PCR的10倍。田间检测20份样品中,RT-LAMP和RT-PCR检测结果一致,检出率为60%。在产物中加入荧光染料SYBR GreenⅠ,直接用肉眼观察就可判断样品是否感染CyMV,可省去电泳分析的时间。针对CyMV建立的RT-LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单、快速等特点,适用于在进境检疫及种苗繁育过程中的检测鉴定。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 RT-LAMP 检测
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兰花上凤仙花坏死斑病毒和建兰花叶病毒双重RT-PCR检测方法的建立 被引量：4
18
作者 丁元明 张巧萍 +5 位作者 王云月 李旻 周剑 白永华 段禄华 和万忠 《植物检疫》 北大核心 2009年第4期32-33,共2页
根据凤仙花坏死斑病毒(Impatiens necrotic spot virus,INSV)和建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)的保守序列设计特异性引物,建立了双重RT-PCR同时检测两种病毒的方法。用该方法对兰花基地的可疑发病兰株进行检测,结果从田间... 根据凤仙花坏死斑病毒(Impatiens necrotic spot virus,INSV)和建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)的保守序列设计特异性引物,建立了双重RT-PCR同时检测两种病毒的方法。用该方法对兰花基地的可疑发病兰株进行检测,结果从田间采取的12株可疑兰花中有6株检出INSV,1株检出CyMV,2株同时检出两种病毒。 展开更多
关键词 凤仙花坏死斑病毒 建兰花叶病毒 双重RT—PCR
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建兰花叶病毒TGB1和TGB2基因的原核表达 被引量：2
19
作者 邓衍福 陈芝娟 +3 位作者 程晓非 章鹏程 胡凤 施农农 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期1045-1049,共5页
建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的主要病毒之一。本研究根据NCBI登录序列号(AB197937)的CymMV-TGB1,-TGB2基因分别设计特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从感染CymMV蝴蝶兰病叶中扩增TGB... 建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的主要病毒之一。本研究根据NCBI登录序列号(AB197937)的CymMV-TGB1,-TGB2基因分别设计特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从感染CymMV蝴蝶兰病叶中扩增TGB1,TGB2基因,并将目的基因插入pGEX-4T3中,构建相应的原核表达载体。将表达载体转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后成功表达出目的蛋白;SDS-PAGE及Western blot检测证实目的蛋白分别是融合GST的CymMV TGB1和TGB2蛋白。两个蛋白的表达为下一步抗体制备以深入开展CymMV TGB1和TGB2功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 建兰花叶病毒 原核表达 WESTERN BLOT
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建兰花叶病毒检测标准方法的建立 被引量：2
20
作者 杨翠云 于翠 +4 位作者 郑建中 陶庭典 王寿南 顾劲翊 赵惠玲 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2006年第3期250-255,共6页
经过2004￣2005两年对上海口岸进境和进境后种植的260个兰花品种上建兰花叶病毒(CyMV)检测方法的研究,分别建立了检测和鉴定兰花上建兰花叶病毒的DAS-ELISA、电镜观察、鉴别寄主反应、RT-PCR和IC-RT-PCR的方法。
关键词 建兰花叶病毒 鉴别寄主反应 DAS-ELISA 电镜观察 RT-PCR IC-RT-PCR
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