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ω-转氨酶的筛选和异源表达用于制备S-甲氧基异丙胺
1
作者 张涛 周海胜 +1 位作者 徐佳琪 杨立荣 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期8-15,56,共9页
根据转氨酶家族进化分类和底物特异性,构建一个包含36个ω-转氨酶的酶库;将酶库中的基因克隆进大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)中进行异源重组表达,考察酶蛋白表达水平并测定相应的酶活以及对映体选择性。通过筛选,获得最佳的ω-转氨酶为来... 根据转氨酶家族进化分类和底物特异性,构建一个包含36个ω-转氨酶的酶库;将酶库中的基因克隆进大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)中进行异源重组表达,考察酶蛋白表达水平并测定相应的酶活以及对映体选择性。通过筛选,获得最佳的ω-转氨酶为来源于巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium的ω-转氨酶BmeTA,其重组表达粗酶活为2.0 U/mL,纯酶比活为9.5 U/mg蛋白;酶学性质表征发现其最适温度为35℃,最适pH为8.0。在此基础上进一步优化其催化反应工艺条件,在20 g/L加酶量、0.5 mmol/L辅酶添加量以及1.4的氨基供体/氨基受体比例条件下,反应18 h获得450 mmol/L的S-甲氧基异丙胺,原料转化率达到90%,为实现生物催化制备S-甲氧基异丙胺的工业化奠定基础。 展开更多
关键词 S-甲氧基异丙胺 ω-转氨酶 异源表达 氨基转移 生物催化
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不同来源胰蛋白酶的基因挖掘、在Komagataella phaffii GS115的异源表达及其酶学性质分析
2
作者 何林曼 钮成拓 +4 位作者 刘国正 郑飞云 刘春凤 王金晶 李崎 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期100-105,共6页
胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,广泛应用于皮革、食品加工、生化检测和制药行业。该文旨在挖掘不同来源的胰蛋白酶,并在Komagataella phaffii GS115进行异源表达,最终分析并比较其酶学性质。通过基因挖掘手段分别克隆了人源胰蛋白酶(homo ... 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,广泛应用于皮革、食品加工、生化检测和制药行业。该文旨在挖掘不同来源的胰蛋白酶,并在Komagataella phaffii GS115进行异源表达,最终分析并比较其酶学性质。通过基因挖掘手段分别克隆了人源胰蛋白酶(homo spanies trypsin,HST)、牛源胰蛋白酶(bos taurus trypsin,BTT)、虾源胰蛋白酶(penaeus vannamei trypsin,PVT)和弗氏链霉菌源胰蛋白酶(Streptomyces fradiae trypsin,SFT),以pPIC9k为载体构建重组质粒,并在Komagataella phaffii GS115中成功实现异源表达。经纯化激活后,HST,BTT,PVT,SFT的酰胺酶活性分别为18.6、12.3、44.7、13.8 U/mL;4种来源胰蛋白酶的最适温度分别为20、35、40、45℃,而其最适pH值分别为9、8.5、8.5、9,其中SFT在pH 9~11的稳定性更优。 展开更多
关键词 胰蛋白酶 基因挖掘 异源表达 毕赤酵母 酶学性质
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低温β-1,4-内切葡聚糖酶的基因挖掘、异源表达及其酶学性质表征
3
作者 圣弟青 钮成拓 +4 位作者 闫亚楠 郑飞云 刘春凤 王金晶 李崎 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期17-24,共8页
β-1,4-内切葡聚糖酶在洗涤行业有着广泛的应用价值,其中具有较好的低温和碱性耐受能力是其实现工业应用的重要前提。该论文通过基因挖掘获得一株具有低温耐受能力的Deinococcus cellulosilyticus来源新型β-1,4-内切葡聚糖酶基因EgDC,... β-1,4-内切葡聚糖酶在洗涤行业有着广泛的应用价值,其中具有较好的低温和碱性耐受能力是其实现工业应用的重要前提。该论文通过基因挖掘获得一株具有低温耐受能力的Deinococcus cellulosilyticus来源新型β-1,4-内切葡聚糖酶基因EgDC,并将其在大肠杆菌中实现了可溶性表达,其中大部分存在于周质空间,少部分分泌至胞外。对EgDC酶的酶学性质进行了表征,发现该酶的最适温度和最适pH值分别为40℃和pH 6.5,其在20℃能保持70%以上活力,且在pH 8.0和pH 9.0的半衰期分别达到83.43 min和53.79 min。EgDC酶具有较好的催化性质,其比酶活力k_(cat)/K_(m)值分别为(26.38±1.43)U/mg和(520.03±17.07)s^(-1)/mg,且对于金属离子以及表面活性剂均具有较强耐受能力。由此可见,新型β-1,4-内切葡聚糖酶EgDC具有较好的催化能力,且在低温、碱性以及存在表面活性剂环境下较为稳定,因此具有潜在的工业应用价值。 展开更多
关键词 基因挖掘 β-1 4-内切葡聚糖酶 异源表达 酶学性质 低温 耐碱性
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长双歧杆菌蔗糖磷酸化酶的异源表达及其酶学性质
4
作者 项蓉 杨金山 +6 位作者 娄婷婷 吴子健 张宏宇 赵彦巧 王丹芸 张得光 马兴 《食品研究与开发》 CAS 2024年第5期196-204,共9页
为挖掘来源于长双歧杆菌的蔗糖磷酸化酶(Bifidobacterium longum sucrose phosphorylase,BloSPase)合成2⁃O⁃α⁃D⁃吡喃葡糖基⁃L⁃抗坏血酸(2⁃O⁃α⁃D⁃glucopyranosyl⁃L⁃ascorbic acid,AA⁃2G)的潜力,该研究将BloSPase基因在大肠杆菌中异源表... 为挖掘来源于长双歧杆菌的蔗糖磷酸化酶(Bifidobacterium longum sucrose phosphorylase,BloSPase)合成2⁃O⁃α⁃D⁃吡喃葡糖基⁃L⁃抗坏血酸(2⁃O⁃α⁃D⁃glucopyranosyl⁃L⁃ascorbic acid,AA⁃2G)的潜力,该研究将BloSPase基因在大肠杆菌中异源表达,以BloSPase的水解酶活力为指标,通过单因素试验和响应面法对其表达条件进行优化;并通过镍柱纯化后对其转糖基化活力进行研究。结果表明,BloSPase的最佳表达条件为诱导时间10 h、异丙基⁃β⁃D⁃硫代半乳糖苷(isopropylthio⁃β⁃D⁃galactoside,IPTG)浓度0.47 mmol/L、诱导温度23℃。在该条件下,水解酶活力可达到(730.35±0.58)U/mL,比酶活达到(95.22±2.45)U/mg。酶学性质研究显示,BloSPase转糖基化活力的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5.2,在40、50℃时表现出较强的热稳定性。其动力学参数Km值为(266.80±23.76)mmol/L,Vmax值为(0.2350±0.0099)mmol/(L·min)。 展开更多
关键词 蔗糖磷酸化酶 大肠杆菌 异源表达 转糖基化活力 酶学性质
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基于麦芽糖诱导型启动子在枯草芽胞杆菌中异源表达麦芽四糖淀粉酶及其酶学性质的研究
5
作者 丛贵龙 李明玉 +4 位作者 姜梦彤 国丹 刘羽欣 王从纲 李宪臻 《微生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期23-31,共9页
麦芽四糖淀粉酶(Maltotetraose amylase,Mta)可以从淀粉的非还原末端特异性依次切割第4个α-1,4糖苷键形成麦芽四糖,目前在食品、医疗保健和造纸等领域具有重要应用。构建安全、高效的表达系统强化麦芽四糖淀粉酶的重组表达,进而降低以... 麦芽四糖淀粉酶(Maltotetraose amylase,Mta)可以从淀粉的非还原末端特异性依次切割第4个α-1,4糖苷键形成麦芽四糖,目前在食品、医疗保健和造纸等领域具有重要应用。构建安全、高效的表达系统强化麦芽四糖淀粉酶的重组表达,进而降低以其为核心酶的麦芽四糖生物转化过程的生产成本具有迫切的现实需求。本研究将源自Pseudomonas saccharophila(DSM 654)的麦芽四糖淀粉酶基因mta在枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis中重组表达,利用麦芽糖诱导型启动子实现其安全高效表达,之后对重组酶进行分离纯化和酶学性质表征。结果显示,将携带麦芽糖诱导型启动子Pglv的表达载体转入B.subtilis WB800N中,成功构建工程菌后进行诱导表达,并且利用金属离子螯合层析技术成功获得了Mta纯酶。酶学性质研究结果显示其最适反应温度为55℃,最适反应pH为7.5。动力学常数Km为(1.26±0.17)g/L、kcat/Km为(2275.07±32.83)L/s·g,纯酶在4℃储存14 d后保留40%的酶活力。本研究成功构建出安全、高效表达重组麦芽四糖淀粉酶的表达系统,为其规模化制备和应用提供了新策略。 展开更多
关键词 麦芽四糖 麦芽四糖淀粉酶 枯草芽胞杆菌 异源表达 启动子 酶学性质
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来源于Pseudomonas多巴脱羧酶的异源表达、纯化及酶学性质研究
6
作者 周耀林 孙登岳 +1 位作者 曾志雄 李霞 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期14-19,共6页
将来源于Pseudomonas的多巴脱羧酶(DOPA decarboxylase,DODC)基因序列经过PCR扩增,双酶切,连接到载体CV6-pGEX-6P-1上,经验证、测序成功构建表达载体CV6-pGEX-6P-1-DODC。转入大肠杆菌BL21(DE3)重组表达,表达条件为OD值达到0.6~0.8,异... 将来源于Pseudomonas的多巴脱羧酶(DOPA decarboxylase,DODC)基因序列经过PCR扩增,双酶切,连接到载体CV6-pGEX-6P-1上,经验证、测序成功构建表达载体CV6-pGEX-6P-1-DODC。转入大肠杆菌BL21(DE3)重组表达,表达条件为OD值达到0.6~0.8,异丙基β-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度为0.1 mmol/L,16℃过夜培养12~16 h。结果表明:在BL21(DE3)大肠杆菌中经诱导表达得到较高表达量的DODC融合蛋白;经过GST-亲和层析、3C蛋白酶切、离子交换层析得到纯度95%以上的DODC纯化蛋白;对DODC的酶学性质进行研究,该酶的最适反应温度为40℃,对温度的影响比较敏感,在20~30℃酶活在80%以上,超过30℃酶活大幅度降低,最适缓冲液为PBS缓冲液,最适反应pH值为7.5,最适底物为左旋多巴(L-DOPA),金属阳离子Ca^(2+)对酶活力有促进作用。序列同源性分析表明,来源于Pseudomonas的DODC属于AAT-Ι超家族,并且预测出该酶的保守催化活性位点为Thr 241。 展开更多
关键词 多巴脱羧酶(DODC) 异源表达 蛋白纯化 酶学性质 底物特异性
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大理牛街热泉来源嗜热纤维素酶基因的克隆、异源表达及其酶学性质研究
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作者 饶孟迪 李文孟 +3 位作者 李蕾 普孝英 阿周存 尹以瑞 《中国饲料》 北大核心 2024年第3期28-33,共6页
纤维素作为自然界储量较大且廉价的可再生资源,其能被纤维素酶有效分解。由于工业生产常在高温下进行,所以嗜热纤维素酶成为研究重点。本研究从大理牛街热泉宏基因组测序数据中获得一个纤维素酶基因,命名为njcel6。将该基因在大肠杆菌... 纤维素作为自然界储量较大且廉价的可再生资源,其能被纤维素酶有效分解。由于工业生产常在高温下进行,所以嗜热纤维素酶成为研究重点。本研究从大理牛街热泉宏基因组测序数据中获得一个纤维素酶基因,命名为njcel6。将该基因在大肠杆菌中进行异源表达,并对其酶学性质进行研究。结果表明:该纤维素酶的最适pH为5.0,最适温度为50℃;50℃孵育120 min保持100%的相对活性,pH 3~10缓冲液中,孵育24 h仍能保持80%以上相对活性。该酶在K^(+)、Mg^(2+)、Fe^(3+)、Ni^(2+)和Co^(2+)等11种金属离子存在下均能保持85%以上相对活性。浓度为0.1%和1%的SDS抑制剂对酶活力抑制作用明显,抑制率达80%。综上所述,njcel6是一种具有良好热稳定性和酸碱稳定性的嗜热纤维素酶,该酶在食品加工和饲料生产等行业具有广泛的运用价值。 展开更多
关键词 热泉 纤维素酶 异源表达 酶学性质 嗜热
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黄色瘤胃球菌木聚糖酶基因xynB的异源表达与酶学性质研究
8
作者 毕海红 胡馨元 +5 位作者 王玉洁 翟圣君 张竞月 孙丽萍 王琴 夏呈强 《现代畜牧科技》 2024年第2期1-5,共5页
该试验以黄色瘤胃球菌基因组为模板,通过PCR扩增获得目的基因xynB,将xynB与表达载体PET28a连接,获得重组载体PET28a-xynB。用IPTG对含有重组载体的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,镍离子层析柱纯化后检测其酶学性质。生物信息学分析表明... 该试验以黄色瘤胃球菌基因组为模板,通过PCR扩增获得目的基因xynB,将xynB与表达载体PET28a连接,获得重组载体PET28a-xynB。用IPTG对含有重组载体的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,镍离子层析柱纯化后检测其酶学性质。生物信息学分析表明,XynB理论大小为47 kDa,预测等电点为4.49,不含信号肽,含有1个糖苷水解酶11家族结构域和1个碳水化合物结合结构域。酶学性质研究结果表明,该酶的最适pH值为5.0,最适反应温度为40℃,金属离子Mg^(2+)、Na^(+)、K^(+)和Ba^(2+)对木聚糖酶XynB有较好的激活效果。综上可知,黄色瘤胃球菌木聚糖酶XynB属于GH11家族,最适pH值为5.0,最适温度为40℃,酶比活力为62.94 U/mg。 展开更多
关键词 黄色瘤胃球菌 木聚糖酶 XYNB 异源表达 酶学性质
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β-半乳糖苷酶的来源、改造、异源表达及其在食品中的应用
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作者 李云亮 谢鹏飞 +4 位作者 刘晓霜 晁嘉品 赵晓雪 王晓静 马海乐 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第23期387-393,共7页
β-半乳糖苷酶作为一种安全无毒的酶制剂,不仅广泛应用于食品工业领域中,而且在酶工程、蛋白质工程等生物技术领域也有着很大的应用潜力。微生物发酵法作为生产β-半乳糖苷酶的主流生产方法,仍存在发酵时间较长、提取率低等问题;而利用... β-半乳糖苷酶作为一种安全无毒的酶制剂,不仅广泛应用于食品工业领域中,而且在酶工程、蛋白质工程等生物技术领域也有着很大的应用潜力。微生物发酵法作为生产β-半乳糖苷酶的主流生产方法,仍存在发酵时间较长、提取率低等问题;而利用工程菌的异源表达系统生产β-半乳糖苷酶的方式具有表达量高、成本低等优点。本文对β-半乳糖苷酶异源表达系统的基因来源、表达宿主菌、表达方式以及β-半乳糖苷酶应用价值等进行阐述,旨在为新型β-半乳糖苷酶产品的开发利用提供科学依据与理论参考。 展开更多
关键词 Β-半乳糖苷酶 应用价值 基因改造 固定化 异源表达
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具有辅助降解纤维素功能的大斑刚毛座腔菌糖苷水解酶GH61的鉴定、异源表达及功能分析 被引量：2
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作者 马玉倩 孙东辉 +3 位作者 岳浩峰 辛佳瑜 刘宁 曹志艳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期124-135,共12页
糖苷水解酶61家族(GH61)属于一类同时具有氧化作用和水解作用的纤维素降解酶类,既具有微弱的纤维素内切酶活性,也可通过氧化作用破坏纤维素晶体结构促进纤维素酶对木质纤维素的降解,在生物质资源的利用方面具有潜在的应用价值。对大斑... 糖苷水解酶61家族(GH61)属于一类同时具有氧化作用和水解作用的纤维素降解酶类,既具有微弱的纤维素内切酶活性,也可通过氧化作用破坏纤维素晶体结构促进纤维素酶对木质纤维素的降解,在生物质资源的利用方面具有潜在的应用价值。对大斑刚毛座腔菌Setosphaeria turcica的GH61家族基因进行鉴定及生物信息学分析,通过转录组数据分析及荧光定量PCR验证,筛选出受玉米秸秆木质纤维素底物诱导表达的GH61家族基因StGH61-11。将StGH61-11进行重组表达,使用2,6-二甲氧基苯酚氧化反应测定其酶活力并优化诱导条件,表征其酶学性质并检测其对纤维素酶水解木质纤维素的促进作用。结果表明,在S.turcica基因组中存在21个GH61家族基因,且S.turcica在玉米秸秆的诱导下滤纸酶活明显增加,对其进行转录组分析发现,在以玉米秸秆为碳源时GH61家族基因中有11个基因的表达量增加。将其中StGH61-11基因在大肠杆菌中诱导表达,最佳诱导条件为25℃、1 mmol/L IPTG诱导9 h,此时获得的蛋白比活力可达到(54.08±1.67)U/g。重组蛋白StGH61-11的最佳催化条件为温度50℃、pH 5,在最佳催化条件下可以显著提高纤维素酶水解玉米秸秆的活性,协同度最高可达2.5,糖化率最高可达46.5%。 展开更多
关键词 GH61糖苷水解酶家族 多糖单加氧酶 纤维素酶 AA9 大斑刚毛座腔菌 协同降解 异源表达
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高山被孢霉NADP^(+)依赖型异柠檬酸脱氢酶的异源表达与活性分析
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作者 王旭旭 孙晓琪 +3 位作者 陈海琴 赵建新 陈卫 唐鑫 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期13-19,共7页
产油真菌胞质中NADP^(+)依赖型异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)能够为脂肪酸合成提供还原力,前期研究表明高山被孢霉的异柠檬酸脱氢酶4(Mortierella alpina isocitrate dehydrogenase4,MaIDH4)对脂质积累有积极的影响。... 产油真菌胞质中NADP^(+)依赖型异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)能够为脂肪酸合成提供还原力,前期研究表明高山被孢霉的异柠檬酸脱氢酶4(Mortierella alpina isocitrate dehydrogenase4,MaIDH4)对脂质积累有积极的影响。为了深入研究MaIDH4的性质,该文将其在大肠杆菌和毕赤酵母系统中分别进行异源表达并纯化,均成功获得纯酶,并考察了不同表达系统对酶活性和产量的影响。首先克隆MaIDH4至表达载体pET28a(+)和pPink-HC-3CZHEK构建重组质粒,然后分别转化至Escherichia coli BL21(DE3)和PichiaPink TM Strain 2进行诱导表达,最后采用镍柱纯化获得携带10×His标签的MaIDH4重组酶,检测纯酶的比活力分别是34.10 U/mg和43.00 U/mg,酶产量分别为10.28 U/L和159.12 U/L。通过纯酶比活力和酶产量分析表明相比于大肠杆菌表达系统,毕赤酵母宿主更适合MaIDH4的异源表达。 展开更多
关键词 高山被孢霉 异柠檬酸脱氢酶 异源表达 酶活性 酶产量
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蛋白质谷氨酰胺酶在毕赤酵母中的异源表达
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作者 郭瑞琪 向康铭 +3 位作者 张峥宇 黄静 邹春静 金明飞 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期26-31,共6页
蛋白质谷氨酰胺酶(protein glutaminase,PG)可水解蛋白质侧链的谷氨酰胺残基,生成氨和蛋白质-L-谷氨酸,从而增加负电荷、降低蛋白等电点,进而改善蛋白质的功能特性。但其生产菌株解朊金黄杆菌的产酶量较低,仅有0.258 U/mL,且基因操作效... 蛋白质谷氨酰胺酶(protein glutaminase,PG)可水解蛋白质侧链的谷氨酰胺残基,生成氨和蛋白质-L-谷氨酸,从而增加负电荷、降低蛋白等电点,进而改善蛋白质的功能特性。但其生产菌株解朊金黄杆菌的产酶量较低,仅有0.258 U/mL,且基因操作效率低,故近年来多采用异源表达的方法,以提高其产量。该实验成功实现蛋白质谷氨酰胺酶酶原(Pro-PG)在毕赤酵母GS115中异源表达,还进行了培养基优化及重组酶学性质的研究。结果表明:重组毕赤酵母pPIC9K-Pro-PG/GS115在摇瓶水平经1%(体积分数)甲醇诱导120 h,表达出的Pro-PG经胰蛋白酶加工后,PG酶活力达到0.878 U/mL。酶学性质研究发现,重组的PG最适作用温度为60℃,在不超过60℃时孵育1 h其相对酶活力可保持在80%以上;该酶作用的最适pH为6.0,在pH 3.0~8.0条件下孵育1 h其相对酶活力可保持在70%以上。 展开更多
关键词 毕赤酵母 蛋白质谷氨酰胺酶 异源表达 发酵条件优化
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谷氨酸棒杆菌脂肪酸合成酶fasA基因的异源表达对脂肪酸合成的影响
13
作者 金晶晶 孙子羽 +3 位作者 满都拉 刘瑾 胡晨玥 陈忠军 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期94-98,104,共6页
旨在为脂肪酸高产菌株的筛选和构建奠定理论基础,研究谷氨酸棒杆菌脂肪酸合成酶A(FasA)对大肠杆菌脂肪酸合成的影响,利用生物信息学软件预测分析了FasA的性质并构建过表达载体pXMJ19-fasA,转化至大肠杆菌进行表达,对表达诱导剂异丙基-β... 旨在为脂肪酸高产菌株的筛选和构建奠定理论基础,研究谷氨酸棒杆菌脂肪酸合成酶A(FasA)对大肠杆菌脂肪酸合成的影响,利用生物信息学软件预测分析了FasA的性质并构建过表达载体pXMJ19-fasA,转化至大肠杆菌进行表达,对表达诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度进行考察,并测定了异源表达后的脂肪酸组成。结果表明,重组菌株在IPTG浓度为1 mmol/L下诱导20 h,棕榈油酸和油酸产量分别达到1.735、2.325 mg/g,与对照菌株相比分别提高了53.95%和59.68%。研究结果说明FasA对大肠杆菌合成棕榈油酸和油酸有促进作用。 展开更多
关键词 脂肪酸合成酶 谷氨酸棒杆菌 棕榈油酸 油酸 异源表达
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高羊茅FaGI基因在拟南芥中异源表达及蛋白互作分析
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作者 路雪萍 马培杰 +4 位作者 童伟杨 罗文举 李亚娇 赵德刚 王小利 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期27-41,共15页
为探究高羊茅FaGI基因的生物学功能,本研究利用酵母双杂交、双分子荧光互补和免疫共沉淀探究与FaGI互作的蛋白;通过农杆菌介导法将过表达载体p1300-FaGI遗传转化拟南芥,获得转FaGI基因拟南芥株系,以拟南芥野生型Col-0、过表达FaGI基因... 为探究高羊茅FaGI基因的生物学功能,本研究利用酵母双杂交、双分子荧光互补和免疫共沉淀探究与FaGI互作的蛋白;通过农杆菌介导法将过表达载体p1300-FaGI遗传转化拟南芥,获得转FaGI基因拟南芥株系,以拟南芥野生型Col-0、过表达FaGI基因株系和gi突变体为材料进行转录组学测序并观察其开花表型。结果表明,利用酵母双杂交方法筛选出与FaGI互作的FaCO蛋白,并通过双分子荧光互补和免疫共沉淀证明了FaGI和FaCO在体内和体外存在互作关系;过表达FaGI基因拟南芥植株的开花时间比野生型Col-0提前约1.24 d;将FaGI-OE、gi与野生型比对,分别筛选出1963和92个差异表达基因(DEGs),与野生型植株相比,过表达FaGI基因株系的差异基因富集在与生长发育、光周期途径、激素合成和信号传导、碳代谢等相关生物过程和代谢通路。综上,FaGI影响光周期途径相关基因的表达,在长日照条件下过表达FaGI基因促进了拟南芥开花,同时该基因的功能具有多样性与复杂性,可作为高羊茅调控分子育种的目标基因。本研究结果为揭示FaGI基因的功能及其调控网络奠定了基础。 展开更多
关键词 高羊茅 FaGI基因 蛋白互作 异源表达 转录组学
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植物乳杆菌素LPL-1的异源表达及理化性质分析
15
作者 王玉 王瑶 李平兰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第20期100-106,共7页
为在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的Ⅱa类细菌素,以植物乳杆菌素LPL-1为研究对象,将植物乳杆菌素LPL-1的表达基因克隆至阿拉伯糖启动子下,C-端与His-tag序列融合表达,以单核细胞性李斯特菌ATCC 54002为指示菌,鉴定重组细菌素的活性... 为在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的Ⅱa类细菌素,以植物乳杆菌素LPL-1为研究对象,将植物乳杆菌素LPL-1的表达基因克隆至阿拉伯糖启动子下,C-端与His-tag序列融合表达,以单核细胞性李斯特菌ATCC 54002为指示菌,鉴定重组细菌素的活性。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术对大肠杆菌BW25331基因组进行编辑,突变过氧化物酶基因(ahpC),敲除硫氧还蛋白还原酶(trxB)和谷胱甘肽还原酶(gor)基因,成功构建了适宜IIa类细菌素表达的细胞工厂E. coil(ΔtrxB+Δgor+ahpC^(M))。表达产物经亲和层析纯化后,对其理化性质进行分析,证明重组细菌素具有热稳定性(60~100℃)、酸碱稳定性(pH 2~11)、表面活性剂稳定性。本研究实现了植物乳杆菌素LPL-1在大肠杆菌中的活性表达,重组表达的细菌素具有稳定的理化性质,在食品行业具有广泛的应用潜力。 展开更多
关键词 Ⅱa类乳酸菌细菌素 植物乳杆菌素LPL-1 异源表达 包涵体 CRISPR/Cas9
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豆血红蛋白在酿酒酵母中的异源表达
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作者 薛常鲁 张鹏飞 +2 位作者 白丽君 肖功年 魏培莲 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第20期101-107,共7页
豆血红蛋白是一种植物源血红蛋白,在植物蛋白肉加工中可作为重要的风味催化剂和着色剂,大大增加植物蛋白肉的拟真性。为实现豆血红蛋白在食品级微生物中的异源表达,将携带豆血红蛋白LBC2基因的质粒PESC-TRP转入酿酒酵母CEN.PK2-1C中,通... 豆血红蛋白是一种植物源血红蛋白,在植物蛋白肉加工中可作为重要的风味催化剂和着色剂,大大增加植物蛋白肉的拟真性。为实现豆血红蛋白在食品级微生物中的异源表达,将携带豆血红蛋白LBC2基因的质粒PESC-TRP转入酿酒酵母CEN.PK2-1C中,通过添加kozak序列促进其翻译,并进一步对启动子序列进行选择,以提高豆血红蛋白表达量。对重组菌株进行发酵,用Western blot分析LegH蛋白表达水平。结果显示,诱导型启动子GAL1,10较三种组成型启动子TEF1、ADH1、GAP在表达LegH能力上具有显著优势,较产量最低的ADH1启动子提升了3.93倍。在组成型启动子中,TEF1启动子能力较优,是ADH1启动子的2.91倍,是GAP启动子的1.2倍。最后,利用Ni柱亲和层析对蛋白进行浓缩纯化,测得LegH发酵浓度为2.79 mg/L。本研究成功实现了豆血红蛋白在酿酒酵母中的异源表达,经后续优化有可能成为豆血红蛋白异源表达的又一途径。 展开更多
关键词 酿酒酵母 豆血红蛋白 启动子优化 异源表达 蛋白质印迹
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α-葡萄糖苷酶的异源表达及应用研究进展 被引量：1
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作者 李林波 张士双 +2 位作者 杨天佑 王宝石 张明霞 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期325-332,共8页
α-葡萄糖苷酶因其有水解糖苷键和转移糖基的功能,目前在工业上主要用于制备低聚异麦芽糖,同时该酶在合成有生物功能的糖-共轭复合物方面显示出巨大的应用潜力,在化妆品、食品、医药等领域展现出广阔的应用前景。该文综述了不同来源的α... α-葡萄糖苷酶因其有水解糖苷键和转移糖基的功能,目前在工业上主要用于制备低聚异麦芽糖,同时该酶在合成有生物功能的糖-共轭复合物方面显示出巨大的应用潜力,在化妆品、食品、医药等领域展现出广阔的应用前景。该文综述了不同来源的α-葡萄糖苷酶的特征和异源表达的研究进展,探讨了α-葡萄糖苷酶制备低聚异麦芽糖的工业合成途径和合成糖苷类生物活性物质方面的应用潜力,并展望了α-葡萄糖苷酶分子改造的发展方向,为获得符合特殊需求的糖苷合成酶突变体提供参考。 展开更多
关键词 Α-葡萄糖苷酶 异源表达 低聚异麦芽糖 糖苷
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草酸青霉16β-葡萄糖苷酶的异源表达
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作者 张念 林颖颖 +3 位作者 祁可丹 王国平 欧阳蓓 赵喜华 《江西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第3期237-241,共5页
为探究真核菌株草酸青霉16的β-葡萄糖苷酶(16BGL)在不同宿主中的异源表达情况,该文通过基因克隆技术,将16BGL基因分别与pPIC9K、pET-28a、pGAPZαA载体进行连接,转化到毕氏酵母GS115或大肠杆菌Rosetta(DE3)上,筛选阳性克隆子,比较并分... 为探究真核菌株草酸青霉16的β-葡萄糖苷酶(16BGL)在不同宿主中的异源表达情况,该文通过基因克隆技术,将16BGL基因分别与pPIC9K、pET-28a、pGAPZαA载体进行连接,转化到毕氏酵母GS115或大肠杆菌Rosetta(DE3)上,筛选阳性克隆子,比较并分析其表达情况.结果表明:16BGL-9K未能成功电转到毕氏酵母GS115上;将16BGL-28a转化到大肠杆菌Rosetta上,使用最终物质的量浓度为50μmol·L^(-1)的IPTG和质量分数为1.7%的乳糖在22℃下诱导可实现高水平表达,但极易形成包涵体且无活性.为了消除包涵体的影响,在相同条件下将16BGL的N端加入DsbA分泌信号肽,经SDS-PAGE检验,16BGL有高水平可溶性表达,但无活性;将16BGL-ZαA电转到GS115上,筛选阳性克隆子并接种到含YPG培养基的摇瓶中,结果表明:上清液蛋白质量浓度达到23.723 mg·mL^(-1),且有活性.真核来源的16BGL基因适合于真核宿主表达. 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 异源表达 酶活
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微生物来源谷氨酰胺转氨酶的异源表达、发酵及应用研究进展
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作者 闫文慧 孙鑫洁 +2 位作者 袭祥恒 王晨莹 任喜东 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第23期223-230,共8页
谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TG)是一类应用广泛、具有优秀蛋白交联能力的酶。TG普遍存在于动植物和微生物中,微生物来源的TG(microbial TG,mTG)拥有良好的酶学性质,因此广泛应用于工业化生产和应用中。本文阐述了mTG的理化性质和... 谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TG)是一类应用广泛、具有优秀蛋白交联能力的酶。TG普遍存在于动植物和微生物中,微生物来源的TG(microbial TG,mTG)拥有良好的酶学性质,因此广泛应用于工业化生产和应用中。本文阐述了mTG的理化性质和自身的活化机理,以及利用野生菌株和不同的重组基因工程菌株发酵生产mTG的研究成果及进展,同时综述了mTG在多种工业生产中的应用及潜力,以期为mTG在工业生产和应用方面的研究提供参考和新的思路。 展开更多
关键词 谷氨酰胺转氨酶 活化机理 发酵 异源表达 应用
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茶树CsC7蛋白异源表达及抗真菌活性分析
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作者 曹瑞 姜看文 +3 位作者 赵懿琛 陆莹霞 彭磊 董旋 《种子》 北大核心 2023年第9期9-17,共9页
几丁质酶是一种重要的植物病程相关蛋白,本实验室前期研究发现,不同抗性的茶树品种在接种茶饼病病原菌(坏损外担菌)后,茶树几丁质酶CsC7相对表达量显著提高。本研究在此基础上,以“梅占”为材料,同源克隆得到茶树几丁质酶CsC7基因序列,... 几丁质酶是一种重要的植物病程相关蛋白,本实验室前期研究发现,不同抗性的茶树品种在接种茶饼病病原菌(坏损外担菌)后,茶树几丁质酶CsC7相对表达量显著提高。本研究在此基础上,以“梅占”为材料,同源克隆得到茶树几丁质酶CsC7基因序列,通过生物信息学分析对CsC7蛋白功能进行初步研究。进一步通过载体构建将CsC7转入毕赤酵母X-33表达蛋白,利用平板抑菌法对脆弱毛霉菌、白桦茸担子菌、尖孢镰刀菌、赤星菌、灰霉菌、厚孢镰刀菌、枯叶格孢腔菌等7种真菌进行抗菌活性分析。结果表明,纯化后的酵母异源表达蛋白CsC7对脆弱毛霉菌、白桦茸担子菌、厚孢镰刀菌、尖孢镰刀菌、灰霉菌有明显抑制活性,抑菌率分别为27.07%,21.90%,28.45%,39.21%和32.23%,而对赤星菌和枯叶格孢腔菌没有显著抑制作用。 展开更多
关键词 茶树 几丁质酶 抗菌活性 蛋白异源表达
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