三种大鼠椎间盘细胞提取、鉴定及在单层和微团培养中的基质表达

1

作者 胡思远 陈建权 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第12期2528-2535,共8页

背景:目前获得椎间盘原代细胞的方法大多较繁琐,且缺少同时提取纤维环、终板与髓核原代细胞的相关报道,因此找到同时提取3种细胞的方法十分关键。目的:探索一种同时提取并培养大鼠来源3种椎间盘细胞(纤维环、终板与髓核)的方法,对之进... 背景:目前获得椎间盘原代细胞的方法大多较繁琐,且缺少同时提取纤维环、终板与髓核原代细胞的相关报道,因此找到同时提取3种细胞的方法十分关键。目的:探索一种同时提取并培养大鼠来源3种椎间盘细胞(纤维环、终板与髓核)的方法,对之进行鉴定并探究单层与微团培养对细胞外基质的影响。方法:取材自3周龄雄性SD大鼠椎间盘组织,从其中分离出软骨终板、髓核与纤维环组织。针对髓核及纤维环组织,先使用0.1%链酶蛋白酶E于37℃消化30 min,然后使用0.2%Ⅱ型胶原酶消化4 h来释放其中的细胞;针对终板组织,直接使用0.2%Ⅱ型胶原酶消化4 h来释放其中的细胞。将去除消化酶后的细胞接种于含有培养基的培养皿中,并观察细胞形态;通过实时定量荧光PCR与蛋白印迹实验检测各细胞标记物的表达水平;单层或微团培养大鼠原代纤维环细胞与软骨终板细胞,并采用阿尔新蓝与番红染色检测细胞外基质的表达能力。结果与结论:①3种椎间盘细胞均在培养4 d后开始贴附在皿底,并逐渐展现出增殖的活力;培养至第8天时,3种细胞增殖显著,形态均呈梭形,其中髓核细胞中存在多囊泡的脊索样细胞;②通过实时定量荧光PCR和/或蛋白免疫印迹实验发现原代髓核细胞中K19与Car3表达较高,原代纤维环细胞中Sparc与Bgn表达较高,原代软骨终板细胞中Pth1r与Lars2表达较高;③原代纤维环、软骨终板细胞微团培养后,经阿尔新蓝与番红染色证明这种培养方式相较于单层培养能够提高细胞外基质的表达能力;④结果表明,通过此次实验方法提取并培养获得的原代椎间盘细胞形态较好并具有较高的胞外基质表达水平,这一成果有望为科研人员提供一种新的科研工具,帮助科研人员更好地理解椎间盘生物学。 展开更多

关键词 原代髓核细胞 原代纤维环细胞 原代终板细胞 细胞提取 细胞鉴定 微团培养

下载PDF 职称材料

采用微团培养技术探讨双酚A的体外发育毒性 被引量：3

2

作者 李勇 龙鼎新 裴新荣 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期178-179,183,共3页

采用微团培养观察了不同浓度的双酚A(0～ 5 0mg L)对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响 ,旨在了解双酚A的体外发育毒性特点及其可能的作用机制。结果显示 :双酚A对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑... 采用微团培养观察了不同浓度的双酚A(0～ 5 0mg L)对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响 ,旨在了解双酚A的体外发育毒性特点及其可能的作用机制。结果显示 :双酚A对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用 ,表现为染毒组肢芽细胞集落形成数量减少 ,细胞毒性试验吸光度值下降 ,并呈现出明显的剂量 反应关系。双酚A对肢芽细胞的 5 0 %增殖抑制浓度 (IP50 )和5 0 %分化抑制浓度 (ID50 )分别为 38 74mg L和 2 7 93mg L ,IP50 ID50 =1 39。按照Renault等人推荐的体外致畸分类标准 ,双酚A属于阳性致畸物 。 展开更多

关键词 微团培养 双酚A 体外发育毒性 肢芽细胞

下载PDF 职称材料

胚胎中脑细胞微团培养评价饮用水中有机物致畸性 被引量：1

3

作者 吴源 姬艳丽 +2 位作者 丁锐 杨媛媛 冀元棠 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期35-37,共3页

关键词 微团培养 脑细胞 有机物 饮用水

下载PDF 职称材料

平移计数法在微团培养技术中的应用 被引量：1

4

作者 吴源 姬艳丽 +2 位作者 丁锐 冀元棠 徐迎春 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2006年第2期153-155,共3页

背景与目的探索一种经济、快速而又准确的计数方法,以应用于微团培养技术中集落的评价。材料与方法采用5d连续培养妊娠13d的大鼠胚胎中脑及肢芽细胞后,以倒置显微镜视场直径为间距将微团划分为若干等间距平行区间,沿一定方向移动视场并... 背景与目的探索一种经济、快速而又准确的计数方法,以应用于微团培养技术中集落的评价。材料与方法采用5d连续培养妊娠13d的大鼠胚胎中脑及肢芽细胞后,以倒置显微镜视场直径为间距将微团划分为若干等间距平行区间,沿一定方向移动视场并依次计数各区间内集落数,通过摄像分析和批内重复实验评价方法的准确度及灵敏度。结果各组数据经Grubbs检验法检验均为正常数据,中脑细胞集落数和肢芽细胞集落数的相对误差分别为0.776%、0.213%;批内标准差分别为0.9339、2.8839;批内变异系数分别为1.24%、2.05%,均小于WHO提出的OCV(3%)标准。结论平移记数法无需特殊设备,不仅具有较好的准确度和极高的灵敏度,而且适用于即时分析,从而缩短实验周期,可以作为微团培养技术中集落计数的常规方法。 展开更多

关键词 微团培养 肢芽细胞 中脑细胞 计数法

下载PDF 职称材料

应用中脑细胞微团培养技术探讨双酚A的发育毒性 被引量：2

5

作者 龙鼎新 李勇 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2003年第2期5-7,共3页

目的　为揭示双酚A(BPA)是否具有神经系统发育毒性及其毒作用机制提供实验依据。方法　采用微团培养技术观察不同浓度的BPA( 0～ 60mg/L)对体外培养的 13d龄Wistar大鼠胚胎中脑细胞分化的影响及其细胞毒性作用。结果　BPA对体外培养的... 目的　为揭示双酚A(BPA)是否具有神经系统发育毒性及其毒作用机制提供实验依据。方法　采用微团培养技术观察不同浓度的BPA( 0～ 60mg/L)对体外培养的 13d龄Wistar大鼠胚胎中脑细胞分化的影响及其细胞毒性作用。结果　BPA对体外培养的大鼠胚胎中脑细胞的存活和分化均有抑制作用并呈现出明显的剂量反应关系。BPA对中脑细胞的 5 0 %细胞存活抑制浓度 (ICV50 )和 5 0 %分化抑制浓度 (ICD50 )分别为 5 7 2mg/L和 2 4 6mg/L。两者比值为 2 3 3。结论　BPA对大鼠胚胎中脑细胞分化的抑制作用大于对细胞存活的抑制作用。按照Flint等人推荐的体外致畸分类标准 。 展开更多

关键词 双酚A 中脑细胞 微团培养 细胞毒性 分化

下载PDF 职称材料

肢芽细胞微团培养评价饮水中有机物致畸性

6

作者 吴源 丁瑞 +2 位作者 姬艳丽 冀元棠 徐迎春 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1209-1211,共3页

目的应用大鼠肢芽细胞微团培养技术快速评价饮用水中有机物的致畸性,并比较氯化消毒过程对致畸作用的影响。方法XAD-4树脂富集、浓缩饮用水中有机物,连续5 d微团培养d13大鼠肢芽细胞,根据半数分化抑制浓度(ID50)和半数增殖抑制浓度(IP50... 目的应用大鼠肢芽细胞微团培养技术快速评价饮用水中有机物的致畸性,并比较氯化消毒过程对致畸作用的影响。方法XAD-4树脂富集、浓缩饮用水中有机物,连续5 d微团培养d13大鼠肢芽细胞,根据半数分化抑制浓度(ID50)和半数增殖抑制浓度(IP50)及IP50/ID50比值判定有机浓集物的致畸性。结果在较低剂量范围内,管网末梢水中有机物对大鼠肢芽细胞的分化有明显的抑制作用,ID50分别为363.1 ml/ml(-S9)和5.67 ml/ml(+S9);IP50分别为1355.2 ml/ml(-S9)和1264.5 ml/ml(+S9),IP50/ID50=3.7(-S9);IP50/ID50=223(+S9),显示该组分特异性抑制肢芽细胞的分化,经代谢转化后其ID50降低达63倍;原水中有机浓集物的ID50分别为1.17 ml/ml(-S9)和0.387 ml/ml(+S9);IP50分别为15.8 ml/ml(-S9)和41.1 ml/ml(+S9);IP50/ID50=13.5(-S9);IP50/ID50=106.2(+S9),代谢活化增加该组分的抑制分化作用。结论管网末梢水及原水中有机浓集物属特异性细胞分化抑制物,具有潜在的直接和间接致畸性,为潜在的强致畸原,显示多种致畸机制。氯化消毒过程可能增加饮用水中有机物的间接致畸作用。 展开更多

关键词 微团培养 饮用水 肢芽细胞 氯化消毒副产物

下载PDF 职称材料

采用微团培养模型探讨染料木黄酮的发育毒性 被引量：7

7

作者 肖杨 刘然 +3 位作者 邢丽娜 尚兰琴 许雅君 郝卫东 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2010年第4期271-275,共5页

目的:利用大鼠胚胎肢芽和中脑细胞微团培养模型研究染料木黄酮(genistein,GEN)的发育毒性,并探讨其发育毒性机制。方法:实验分为不同浓度的GEN(0、0.94、1.875、3.75、7.5、15.0μg/ml)染毒组,受试物分别作用于培养大鼠胚胎肢芽细胞和... 目的:利用大鼠胚胎肢芽和中脑细胞微团培养模型研究染料木黄酮(genistein,GEN)的发育毒性,并探讨其发育毒性机制。方法:实验分为不同浓度的GEN(0、0.94、1.875、3.75、7.5、15.0μg/ml)染毒组,受试物分别作用于培养大鼠胚胎肢芽细胞和中脑细胞微团,采用中性红摄取法检测GEN对细胞增殖的影响,采用阿利新蓝染色方法检测GEN对肢芽细胞分化的影响,采用图像处理分析方法检测GEN对中脑细胞分化的影响。计算细胞50%增殖抑制浓度(IC50_P)和50%分化抑制浓度(IC50_D)。用不同浓度的雌激素受体拮抗剂ICI182780(0.1,0.5,1μmol/L)分别预处理细胞后再加入GEN(7.5μg/ml),观察雌激素受体途径在GEN诱导的发育毒性中的作用。结果:GEN对肢芽细胞的IC5_0P和IC5_0D分别为5.4μg/ml和4.9μg/ml,GEN对中脑细胞的IC5_0P为6.2μg/ml,IC5_0D分别为7.1μg/ml(集落分化个数)或5.3μg/ml(集落分化面积)。IC5_0P/IC50_D的比值均接近1。在GEN7.5μg/ml染毒组,用ICI182780预处理细胞,不能改变GEN诱导的发育毒性作用。结论:根据Flint's和欧洲替代方法验证中心ECVAM致畸物判别标准,并结合人体实际可能接触水平,认为GEN为强致畸物,并且对人类存在可能的风险。其致畸作用可能主要通过细胞毒性发挥作用,不依赖于雌激素受体途径。 展开更多

关键词 染料木黄酮 微团培养 发育毒性 雌激素受体

下载PDF 职称材料

二维及微团培养法对软骨细胞表型的影响 被引量：2

8

作者 宋雄波 吴江怡 +3 位作者 黄术 陈诚 杨柳 刘宝荣 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第11期1456-1458,1462,共4页

目的探讨二维及微团培养对软骨细胞表型的影响。方法体外高密度二维及微团培养方法培养兔软骨细胞,从细胞形态、细胞外基质表达情况分析软骨细胞表型的差异。结果高密度二维方案培养兔软骨细胞,2周后软骨细胞多层分布,HE染色显示细胞呈... 目的探讨二维及微团培养对软骨细胞表型的影响。方法体外高密度二维及微团培养方法培养兔软骨细胞,从细胞形态、细胞外基质表达情况分析软骨细胞表型的差异。结果高密度二维方案培养兔软骨细胞,2周后软骨细胞多层分布,HE染色显示细胞呈圆形,细胞间联系较密,阿尔新蓝染色显示细胞外蛋白多糖分泌较少;微团培养方法培养兔软骨细胞,2周后形成肉眼可见的白色组织,HE染色显示细胞呈多边形,细胞较分散,阿尔新蓝染色显示细胞外蛋白多糖分泌明显多于二维培养,差异有统计学意义(P<0.05)。结论微团培养方法培养兔软骨细胞,有利于软骨细胞分泌细胞外基质。 展开更多

关键词 软骨细胞 二维培养 微团培养 软骨表型

下载PDF 职称材料

利用全胚胎和微团培养模型评价硝酸镧的发育毒性 被引量：4

9

作者 康陈萍 刘青云 +1 位作者 肖倩倩 郝卫东 《癌变．畸变．突变》 CAS 2020年第4期256-263,268,共9页

目的:利用大鼠植入后全胚胎培养模型和微团培养模型评价硝酸镧潜在的胚胎早期和中、晚期发育毒性。方法:将大鼠胚胎随机分为5组后培养于含不同剂量硝酸镧(0、0.12、0.23、0.46及1 mmol/L)的即刻离心血清中,48 h后测量胚胎卵黄囊直径(YSD... 目的:利用大鼠植入后全胚胎培养模型和微团培养模型评价硝酸镧潜在的胚胎早期和中、晚期发育毒性。方法:将大鼠胚胎随机分为5组后培养于含不同剂量硝酸镧(0、0.12、0.23、0.46及1 mmol/L)的即刻离心血清中,48 h后测量胚胎卵黄囊直径(YSD)、顶臀长(CRL)和头长(HL),计数体节,并根据Brown’s评分法对胚胎进行总形态学评分(TMS)。同时,对BALB/c 3T3细胞进行细胞毒性测试。根据欧洲替代方法验证中心(ECVAM)的预测模型对硝酸镧的胚胎早期发育毒性进行评价。分离大鼠胚胎肢芽细胞,制成单细胞悬液,进行微团培养。分别用0.03、0.06、0.13、0.25、0.5、1、2及3 mmol/L硝酸镧进行染毒,利用中性红活细胞摄取染色法测定50%细胞增殖受抑制时的浓度(IC50)以反映细胞增殖情况,利用阿利新蓝染色法测定50%细胞分化受抑制时的浓度(ID50)以反映细胞分化情况。根据ECVAM预测模型对硝酸镧胚胎中晚期发育毒性进行评价。结果:硝酸镧对胚胎生长的无可见有害作用水平(NOAEL)为0.12 mmol/L,0.46 mmol/L硝酸镧可明显降低胚胎YSD、CRL和HL(P<0.05),对胚胎生长有明显的抑制效应。0.46mmol/L硝酸镧可诱导胚胎产生发育畸形,减少胚胎体节形成数目(P<0.05)。硝酸镧对肢芽细胞增殖活性的NOAEL为1 mmol/L,对肢芽细胞分化为软骨细胞的NOAEL为0.25 mmol/L,其IC50和ID50分别为1.57 mmol/L(510.25μg/mL)和0.99 mmol/L(321.75μg/mL)。结论:经全胚胎培养预测模型评价硝酸镧为弱胚胎发育毒性化学物;经微团培养模型评价硝酸镧为无胚胎发育毒性化学物。 展开更多

关键词 硝酸镧 全胚胎培养 微团培养 发育毒性

下载PDF 职称材料

利用全胚胎和微团培养模型评价硝酸铈的发育毒性

10

作者 刘青云 康陈萍 +1 位作者 肖倩倩 郝卫东 《癌变．畸变．突变》 CAS 2021年第3期178-186,共9页

目的:利用大鼠植入后全胚胎培养模型和微团培养模型模拟胚胎发育早期和中、晚期过程,评价硝酸铈的发育毒性,以期为进一步开展体内实验研究及合理制定人群稀土接触的健康指导值提供科学依据。方法:取孕9.5 d的SD大鼠胚胎,分别在含0.00、0... 目的:利用大鼠植入后全胚胎培养模型和微团培养模型模拟胚胎发育早期和中、晚期过程,评价硝酸铈的发育毒性,以期为进一步开展体内实验研究及合理制定人群稀土接触的健康指导值提供科学依据。方法:取孕9.5 d的SD大鼠胚胎,分别在含0.00、0.50、0.75、1.00 mmol/L硝酸铈的大鼠即刻离心血清中37℃旋转培养,48 h后根据Brown's评分法对胚胎的生长发育及形态功能进行评分,结合BALB/c 3T3细胞毒性结果,利用欧洲替代方法验证中心(ECVAM)全胚胎预测模型评价硝酸铈胚胎早期发育毒性。分离孕13 d的SD大鼠胚胎肢芽原代细胞进行微团培养,分别用0.03、0.06、0.13、0.25、0.50、1.00、2.00和3.00 mmol/L硝酸铈进行染毒,培养5 d后利用中性红活细胞摄取染色法测定50%细胞增殖受抑制时的浓度(IC50),利用阿利新蓝染色法测定50%细胞分化受抑制时的浓度(ID50),根据ECVAM微团培养预测模型评价硝酸铈胚胎中、晚期发育毒性。结果:全胚胎培养模型中硝酸铈对胚胎生长的无可见有害作用水平(NOAEL)为0.50 mmol/L,0.75 mmol/L以上浓度硝酸铈可显著降低胚胎卵黄囊直径和顶臀长(P<0.05),抑制胚胎生长,并可致胚胎体节数目减少(P<0.05),胚胎发育畸形。微团培养模型中硝酸铈对肢芽细胞增殖活性的NOAEL为0.25 mmol/L,对肢芽细胞分化为软骨细胞的NOAEL为0.12 mmol/L,其IC50和ID50分别为1.23和0.76 mmol/L。结论:经全胚胎培养预测模型和微团培养模型评价硝酸铈为弱发育毒性化学物。 展开更多

关键词 硝酸铈 全胚胎培养 微团培养 发育毒性

下载PDF 职称材料

应用神经细胞微团培养法筛选化学致畸物 被引量：19

11

作者 陈婉蓉 傅中滇 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第3期180-182,共3页

关键词 化学致畸物 微团培养法 神经细胞

原文传递

应用微团培养和胚胎干细胞试验模型评价二硝酰胺铵的发育毒性

12

作者 高俊宏 王鸿 +3 位作者 范小琳 刘志永 赵彬 高婷 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期815-818,共4页

目的利用微团培养和胚胎干细胞试验评价二硝酰胺铵(ADN)潜在的胚胎发育毒性,并评估其是否为致畸物。方法于2018年9月,分离大鼠胚胎并收集肢芽细胞,使用不同浓度(0、312.50、625.00、1250.00、2500.00、5000.00、10000.00μg/ml)ADN进行... 目的利用微团培养和胚胎干细胞试验评价二硝酰胺铵(ADN)潜在的胚胎发育毒性,并评估其是否为致畸物。方法于2018年9月,分离大鼠胚胎并收集肢芽细胞,使用不同浓度(0、312.50、625.00、1250.00、2500.00、5000.00、10000.00μg/ml)ADN进行染毒,计算细胞半数增殖抑制浓度和半数分化抑制浓度并评价ADN致畸作用。在胚胎干细胞试验中,检测不同浓度(0、39.06、78.13、156.25、312.50、625.00、1250.00、2500.00μg/ml)ADN对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向心肌细胞分化的抑制作用,以及对mESCs和3T3细胞的细胞毒性,并评价其胚胎毒性。以已知的强胚胎毒性药物5-氟尿嘧啶和非胚胎毒性药物青霉素-G为试验材料,对模型的有效性进行验证,并采用验证性试验模型评价ADN的胚胎毒性。结果微团培养试验中,各个浓度ADN组大鼠胚胎肢芽细胞增殖抑制率和分化抑制率均高于对照组(P<0.05);ADN对肢芽细胞的半数增殖抑制浓度和半数分化抑制浓度分别为7480.32和4526.09μg/ml,判定ADN为非致畸物。胚胎干细胞试验中,各个浓度ADN组mESCs增殖抑制率高于对照组,156.25、312.50、625.00、1250.00、2500.00μg/ml ADN组3T3细胞增殖抑制率高于对照组(P<0.05)。ADN对mESCs的半数增殖抑制浓度和半数分化抑制浓度分别为1851.73、1796.39μg/ml,对3T3细胞的半数增殖抑制浓度为3334.35μg/ml,判定ADN为无胚胎毒性。结论经微团培养和胚胎干细胞试验模型评价,ADN无胚胎毒性,属于非致畸物。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 二硝酰胺铵 微团培养 发育毒性 大鼠

原文传递

双酚A抑制大鼠胚胎中脑微团细胞的存活和分化与Notch-Hes通路有关 被引量：1

13

作者 刘然 蒋建军 +3 位作者 尚兰琴 魏雪涛 吴双 郝卫东 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期175-181,共7页

目的探讨雌激素受体(ER)途径在双酚A(BPA)诱导的大鼠胚胎中脑微团细胞存活和分化抑制效应中的作用。方法制备的胎龄13 d大鼠胚胎中脑微团细胞,以BPA 10-4,10-6,10-8,10-10和10-12mol·L-1染毒5 d,中性红摄取实验检测细胞存活,苏木... 目的探讨雌激素受体(ER)途径在双酚A(BPA)诱导的大鼠胚胎中脑微团细胞存活和分化抑制效应中的作用。方法制备的胎龄13 d大鼠胚胎中脑微团细胞,以BPA 10-4,10-6,10-8,10-10和10-12mol·L-1染毒5 d,中性红摄取实验检测细胞存活,苏木精染色检测中脑细胞集落分化总面积。BPA0.1 mmol·L-1+雌激素受体抑制剂ICI182780 0.1 nmol·L-1、BPA 0.1 mmol·L-1+雌激素受体抑制剂他莫西芬1 nmol·L-1共同培养5 d,检测中脑微团细胞存活和集落分化总面积。Western blot法检测胎龄18 d大鼠胚胎脑组织、成年大鼠的睾丸和未染毒中脑微团细胞ER蛋白的表达。实时定量PCR法检测胎龄13和18 d胎鼠脑组织、成年大鼠的睾丸及卵巢、未染毒中脑微团细胞中ER mRNA的表达水平。采用实时定量PCR法检测BPA 0.1 mmol·L-1染毒5 d的中脑微团细胞中Notch1和Hes1 mRNA表达水平。结果 BPA 0.1 mmol·L-1可以明显的抑制原代培养中脑微团细胞的存活和集落分化,但此效应不能被ICI182780和他莫西芬逆转。正常的胎鼠脑组织和未染BPA中脑细胞中ER蛋白和mRNA的表达水平较低。BPA0.1 mmol·L-1可以明显增加Notch1和Hes1 mRNA表达水平。结论 BPA可抑制中脑微团细胞的的存活和分化,ER途径在此效应中不发挥主要作用,Notch-Hes信号通路可能参与了这一效应。 展开更多

关键词 双酚A 微团培养 雌激素受体 细胞存活 细胞分化

下载PDF 职称材料

基因工程玉米Bt799对大鼠胚胎中脑细胞微团及腭板发育的影响

14

作者 侯超 郭倩颖 +4 位作者 刘欣然 刘思奇 麻慧娟 刘珊 王军波 《中国生育健康杂志》 2021年第4期343-349,共7页

目的通过体外培养大鼠中脑细胞微团和胚胎腭板,研究基因工程玉米Bt799及所表达Cry1Ac蛋白发育毒性。方法实验用大鼠选用Wistar大鼠,购自北京大学医学部实验动物部,年龄9周,体重(200±20)g,常规饲养于SPF级动物房。第一部分:于雌鼠孕... 目的通过体外培养大鼠中脑细胞微团和胚胎腭板,研究基因工程玉米Bt799及所表达Cry1Ac蛋白发育毒性。方法实验用大鼠选用Wistar大鼠,购自北京大学医学部实验动物部,年龄9周,体重(200±20)g,常规饲养于SPF级动物房。第一部分:于雌鼠孕13 d提取胚胎中脑细胞,以即刻离心血清替代培养基中胎牛血清,在不同条件下培养中脑细胞5 d,并观察其增殖分化情况。中脑细胞微团培养分八个组进行,分别对应八种不同培养环境。将制备ICS的Wistar大鼠随机分为六组,其中NM组、TM3组、TM1M组、TM3M组、PCB组为前五组大鼠,BP组、BC组、PCA组因大鼠未经直接干预且不影响组间比较,故共同使用第六组大鼠的血清。其中TM3、TM1M、TM3M组使用经Bt799玉米干预3 d、1个月、3个月大鼠的血清,BP组使用添加Cry1Ac蛋白的血清,PCA使用添加双酚A的血清,PCB组使用经双酚A灌胃3 d大鼠的血清,NM组使用经亲本玉米郑58干预3 d大鼠的血清、BC组使用经AIN-93G饲料喂养3 d大鼠的血清。第二部分:于雌鼠孕12.5 d摘取大鼠胚胎腭板,以加入Cry1Ac蛋白(BP组)或全反式视黄酸(RA组)条件旋转培养腭板72 h,根据腭板融合情况计算融合率,判断Cry1Ac蛋白对大鼠胚胎腭板发育的影响。结果第一部分:TM3、TM1M、TM3M、BP组细胞增殖率、分化率与NM组、BC组相比差异均无统计学意义。PCA组和PCB组细胞增殖率和分化率低于NM组、BC组且差异有统计学意义。第二部分:BP组腭板融合率与BC组相比差异无统计学意义。RA组腭板融合率低于BC组,且差异有统计学意义。结论本研究未观察到Bt799玉米及其表达蛋白Cry1Ac的胚胎发育毒性。 展开更多

关键词 Cry1Ac蛋白 Bt799玉米 腭板培养 微团培养 发育毒性

下载PDF 职称材料

金属致畸的体外系统研究 被引量：7

15

作者 陈婉蓉 傅中滇 端礼荣 《环境与健康杂志》 CAS CSSCI CSCD 北大核心 1994年第1期14-16,共3页

用大鼠胚胎神经细胞微团培养法，研究了镉、铬、铝、铅、镍、钡、锆、钯八种金属化合物的体外致畸作用，并提出了金属化合物的体外细胞致畸结果判断标准。结果表明，八种金属化合物都有较明显的细胞毒性，都能抑制胚胎神经细胞分化。镉... 用大鼠胚胎神经细胞微团培养法，研究了镉、铬、铝、铅、镍、钡、锆、钯八种金属化合物的体外致畸作用，并提出了金属化合物的体外细胞致畸结果判断标准。结果表明，八种金属化合物都有较明显的细胞毒性，都能抑制胚胎神经细胞分化。镉、铬、铝、铅、镍五种化合物对神经细胞的半数分化抑制浓度（ＩＣｄ５０）均小于１μｇ／ｍｌ，半数存活抑制浓度（ＩＣｖ５０）与ＩＣｄ５０比值（Ｖ／Ｄ）均大于６．０，判断为体外细胞致畸试验阳性。钡、锆、钯三种金属化合物Ｖ／Ｄ值近于１，认为其对细胞分化的抑制作用是由细胞毒性所致。 展开更多

关键词 微团培养 体外致畸 细胞分化 金属

下载PDF 职称材料

稳恒磁场对体外胚胎中脑神经元细胞分化影响的研究 被引量：9

16

作者 吴全义 端礼荣 +1 位作者 杜玉珍 刘方平 《中国医学物理学杂志》 CSCD 1999年第4期258-259,共2页

本文利用大鼠胚胎中脑神经细胞作原代微团培养，培养物经不同强度（分别为５ ｍ Ｔ，１０ ｍ Ｔ，２０ｍ Ｔ，３０ ｍ Ｔ，４０ ｍ Ｔ，５０ ｍ Ｔ和６０ ｍ Ｔ）的稳恒磁场作用，研究其对细胞生长和分化的影响，并利用图像分析细胞形... 本文利用大鼠胚胎中脑神经细胞作原代微团培养，培养物经不同强度（分别为５ ｍ Ｔ，１０ ｍ Ｔ，２０ｍ Ｔ，３０ ｍ Ｔ，４０ ｍ Ｔ，５０ ｍ Ｔ和６０ ｍ Ｔ）的稳恒磁场作用，研究其对细胞生长和分化的影响，并利用图像分析细胞形态的变化。结果表明：各种强度的稳恒磁场能明显地抑制中脑神经细胞的分化，集落形成率明显减少，且细胞表面的突起和集落间的神经纤维束减少。 展开更多

关键词 稳恒磁场 抑制作用 神经细胞微团培养 细胞分化

下载PDF 职称材料

五氧化二钒对大鼠胚胎中脑细胞增殖和分化的影响 被引量：5

17

作者 张天宝 孙棉龄 李勇 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 1998年第2期81-84,共4页

本研究采用微团培养观察了Ｖ２Ｏ５对大鼠胚胎中脑细胞增殖和分化的影响，旨在为进一步揭示其发育毒作用机理提供依据。结果显示，Ｖ２Ｏ５对体外中脑细胞的增殖和分化均有抑制作用，并有明显的剂量－反应关系。Ｖ２Ｏ５抑制中脑增殖和... 本研究采用微团培养观察了Ｖ２Ｏ５对大鼠胚胎中脑细胞增殖和分化的影响，旨在为进一步揭示其发育毒作用机理提供依据。结果显示，Ｖ２Ｏ５对体外中脑细胞的增殖和分化均有抑制作用，并有明显的剂量－反应关系。Ｖ２Ｏ５抑制中脑增殖和分化的ＩＣ５０分别为９１和６８μｍｏｌ／ｌ。体内／体外结合试验显示，Ｖ２Ｏ５在２０ｍｇ／ｋｇ时对细胞分化有明显的抑制作用，而在５０ｍｇ／ｋｇ时才对细胞增殖出现抑制作用，按照Ｒｅｎａｕｌｔ的分类标准。 展开更多

关键词 微团培养 胚胎 脑细胞增殖 五氧化二钒 发育毒性

下载PDF 职称材料

细胞骨架结构改变对软骨细胞表型的影响 被引量：5

18

作者 黄术 杨君君 +4 位作者 吴江怡 周益昭 夏铎 刘仁峰 刘宝荣 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2017年第12期1287-1292,共6页

目的:分析细胞骨架结构改变对软骨细胞表型的影响。方法:二维及三维微团培养兔膝关节软骨细胞,分别破坏软骨细胞骨架的微管、肌动蛋白及波形蛋白,分析细胞骨架改变引起软骨细胞表型改变的关系。结果:破坏软骨细胞骨架的波形蛋白,可引起... 目的:分析细胞骨架结构改变对软骨细胞表型的影响。方法:二维及三维微团培养兔膝关节软骨细胞,分别破坏软骨细胞骨架的微管、肌动蛋白及波形蛋白,分析细胞骨架改变引起软骨细胞表型改变的关系。结果:破坏软骨细胞骨架的波形蛋白,可引起Ⅱ型胶原蛋白及蛋白聚糖表达下降,且三维微团培养较二维培养下降更明显,而Ⅰ型胶原蛋白表达则无明显改变;破坏软骨细胞骨架的微管,不引起Ⅰ型胶原蛋白、Ⅱ型胶原蛋白及蛋白聚糖表达的改变;破坏软骨细胞骨架的肌动蛋白,在二维培养条件下可促进Ⅱ型胶原蛋白的表达,而在三维微团培养条件下,Ⅱ型胶原蛋白表达则无明显改变。结论:波形蛋白对维持正常软骨细胞表型起重要作用。 展开更多

关键词 软骨细胞 细胞骨架 二维培养 微团培养 软骨表型

下载PDF 职称材料

苯对小鼠胚胎肢芽和中脑细胞分化与增殖的影响 被引量：2

19

作者 吴成秋 李纯颖 +2 位作者 李梓民 张英彪 陈立章 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1640-1642,共3页

目的探讨苯对胚胎肢芽、中脑细胞分化和增殖的影响及对肢芽器官发育的影响。方法分离12d龄小鼠胚胎肢芽和中脑细胞进行微团培养,观察肢芽和中脑细胞的分化与增殖;结果随着苯染毒浓度的增加,胚胎肢芽细胞分化为软骨细胞的集落数逐渐减少... 目的探讨苯对胚胎肢芽、中脑细胞分化和增殖的影响及对肢芽器官发育的影响。方法分离12d龄小鼠胚胎肢芽和中脑细胞进行微团培养,观察肢芽和中脑细胞的分化与增殖;结果随着苯染毒浓度的增加,胚胎肢芽细胞分化为软骨细胞的集落数逐渐减少,中脑细胞形成神经集落数减少、体积小,集落细胞间突起数量减少,肢芽细胞和中脑细胞增殖率下降,均具有较明显的剂量-效应关系;苯对肢芽细胞的半数分化抑制浓度(dID50)和半数增殖抑制浓度(pID50)分别为89.93μmol/L和396.77μmol/L,对中脑细胞的dID50和pID50分别为116.29μmol/L和831.46μmol/L,对细胞分化的抑制作用大于对增殖的抑制作用。结论苯对胚胎中脑及肢芽细胞的分化和增殖有特异性抑制作用,可能对胚胎骨和脑具有发育毒性。 展开更多

关键词 苯 微团培养 胚胎 细胞 分化和增殖

下载PDF 职称材料

砷对大鼠肢芽细胞增殖和分化的影响 被引量：3

20

作者 李勇 朱惠刚 孔佩艳 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期161-163,共3页

为了进一步阐明三氧化二砷的发育毒性，本研究应用Ｆｌｉｎｔ等人建立的胚胎肢芽细胞微团培养法，探讨了不同浓度砷对体外培养的ＳＤ大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果表明砷对大鼠肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用，呈明显的剂... 为了进一步阐明三氧化二砷的发育毒性，本研究应用Ｆｌｉｎｔ等人建立的胚胎肢芽细胞微团培养法，探讨了不同浓度砷对体外培养的ＳＤ大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果表明砷对大鼠肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用，呈明显的剂量－反应关系；砷对肢芽细胞的５０％增殖抑制浓度（ＩＰ５０）和５０％分化抑制浓度（ＩＤ５０）分别为０．７０ｍｇ／Ｌ和０．２１ｍｇ／Ｌ；ＩＰ５０／ＩＤ５０值为３．３，揭示砷对大鼠肢芽细胞分化的影响要远大于对细胞增殖的影响。根据Ｒｅｎａｕｌｔ等人推荐的体外致畸判断标准，砷属于强致畸物。实验结果提示砷对大鼠肢芽细胞分化的抑制作用可能并非其细胞毒性作用所致，这是砷致畸作用的重要基础之一。此外还初步探讨了大鼠肢芽细胞异常分化的分子机制。 展开更多

关键词 肢芽细胞 微团培养 分化 三氯化二砷 致畸性

下载PDF 职称材料