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双氢青蒿素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞分泌胶原及激活PI3K/AKT通路的影响 被引量：1
1
作者 张素华 栗志英 +5 位作者 蔡安盛 姚晓华 杜相珠 行红燕 郭永泽 马景红 《中国实验诊断学》 2024年第4期483-485,共3页
心肌纤维化常由于心脏多次短暂缺血、负荷过重、心肌炎等多种有害因素所致。研究显示心肌组织中的胶原异常沉积为心肌纤维化病理学特征[1-2],引起心肌硬度增加、收缩能力下降,易发生心律失常、心室重构以及心功能不全等并发症。心肌成... 心肌纤维化常由于心脏多次短暂缺血、负荷过重、心肌炎等多种有害因素所致。研究显示心肌组织中的胶原异常沉积为心肌纤维化病理学特征[1-2],引起心肌硬度增加、收缩能力下降,易发生心律失常、心室重构以及心功能不全等并发症。心肌成纤维细胞数量增多和异常活化释放大量基质成分为心肌纤维化的重要机制,也是疾病治疗的关键点[3-4]。实验表明血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是促进心肌发生纤维化的重要因子[5-6]。本研究采用AngⅡ孵育心肌成纤维细胞制备细胞模型,经双氢青蒿素(DHA)干预后,分析细胞的数目及分泌胶原含量的变化,探究DHA抗心肌纤维化的作用机制,报道如下。 展开更多
关键词 心功能不全 心肌成纤维细胞 心肌纤维化 基质成分 双氢青蒿素 收缩能力 有害因素 心肌组织
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活血潜阳祛痰方抑制心肌成纤维细胞增殖的机制研究
2
作者 芦波 周训杰 +6 位作者 桂明泰 马玉龙 陈晓喆 姚磊 李建华 王明珠 符德玉 《世界中西医结合杂志》 2024年第9期1703-1707,共5页
目的观察活血潜阳祛痰方(HQQR)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响及可能机制。方法分离、培养SD大鼠原代CFs,并进行鉴定。应用AngⅡ诱导CFs建立体外心肌纤维化模型。将CFs分成空白细胞组、AngⅡ组、AngⅡ+HQQR... 目的观察活血潜阳祛痰方(HQQR)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响及可能机制。方法分离、培养SD大鼠原代CFs,并进行鉴定。应用AngⅡ诱导CFs建立体外心肌纤维化模型。将CFs分成空白细胞组、AngⅡ组、AngⅡ+HQQR(低剂量)组、AngⅡ+HQQR(高剂量)组和AngⅡ+缬沙坦组,作用48 h。应用CCK-8法检测各组细胞增殖水平,流式细胞仪检测各组细胞ROS水平,Elisa检测各组上清中羟脯氨酸水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测NADPH氧化酶4(NOX4)、核因子κB p65(NF-κB p65),细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p-ERK1/2的水平,对相关数据进行统计分析。结果HQQR可显著改善AngⅡ诱导CFs增殖。AngⅡ组上清中羟脯氨酸水平显著高于空白组(P<0.05),ROS水平和NOX4蛋白表达量亦显著升高(P<0.05)。AngⅡ刺激CFs后,细胞中NF-κB p65蛋白表达量和ERK1/2磷酸化比值高于空白细胞组(P<0.05)。HQQR治疗可以改善CFs增殖和胶原分泌,降低ROS水平,并显著减少NOX4、NF-κB p65蛋白表达量和ERK1/2磷酸化比值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HQQR可能通过抑制氧化应激、减轻炎症反应来抑制CFs增殖,改善心肌纤维化。 展开更多
关键词 活血潜阳祛痰方 血管紧张素Ⅱ 心肌成纤维细胞 炎症 氧化应激
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过表达sFRP3对小鼠原代心肌成纤维细胞活化增殖的影响 被引量：1
3
作者 江舜祥 涂彬 +3 位作者 宋凯 何缓缓 陶辉 曹炜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期809-814,共6页
目的探讨Wnt信号通路调控剂分泌型卷曲相关蛋白3(sFRP3)在小鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法购入1~3 d的小鼠乳鼠,行手术对心脏取材,消化后分离CFs进行培养。细胞贴壁生长后使用转化生长因子(TGF-β1)刺激构建CFs活化增殖... 目的探讨Wnt信号通路调控剂分泌型卷曲相关蛋白3(sFRP3)在小鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法购入1~3 d的小鼠乳鼠,行手术对心脏取材,消化后分离CFs进行培养。细胞贴壁生长后使用转化生长因子(TGF-β1)刺激构建CFs活化增殖模型;确认模型构建成功后分别向实验组和对照组细胞转染sFRP3过表达质粒和空载质粒24~48 h。通过Western blot、qRT-PCR的方法在分子层面对sFRP3、Periostin(POSTN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达进行检测;使用MTT法、CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力的改变。结果在TGF-β1刺激构建的CFs活化增殖模型中,相较于对照组,模型组sFRP3蛋白及mRNA表达下降,活化增殖相关蛋白PCNA、POSTN和CollagenⅠ表达上调。另外,在质粒转染sFRP3过表达组的CFs中,PCNA、POSTN和CollagenⅠ蛋白及mRNA表达相较于空载组下降。MTT、CCK-8与EdU实验表明,质粒转染sFRP3过表达组的CFs增殖活性较空载组明显下降。结论过表达sFRP3明显抑制CFs活化增殖,提示sFRP3可能是参与调控CFs活化增殖的关键基因。 展开更多
关键词 sFRP3 心肌成纤维细胞 心肌纤维化 活化 增殖
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红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化的保护作用 被引量：1
4
作者 海振 宁忠平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第20期3137-3142,共6页
背景:目前已有研究表明红景天苷对多器官纤维化具有改善作用,但红景天苷对血管紧张素Ⅱ引起心肌成纤维细胞纤维化的保护作用尚不明确。目的:探究红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞氧化应激及细胞外基质沉积的保护作用... 背景:目前已有研究表明红景天苷对多器官纤维化具有改善作用,但红景天苷对血管紧张素Ⅱ引起心肌成纤维细胞纤维化的保护作用尚不明确。目的:探究红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞氧化应激及细胞外基质沉积的保护作用及其作用机制。方法:血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化,实验分为5组:正常对照组;模型组(培养基血管紧张素Ⅱ终浓度为1μmol/L);红景天苷低剂量和高剂量组(加入红景天苷50,100μmol/L处理2 h,再加入血管紧张素Ⅱ共同孵育48 h);SIRT1抑制剂组(加入SIRT1抑制剂EX52710μmol/L处理2 h,再加高剂量红景天苷处理2 h,再加血管紧张素Ⅱ共同孵育48 h)。使用CCK8法检测各组细胞活力,Transwell检测细胞迁移率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧水平,试剂盒检测细胞内丙二醛含量、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性;采用Western blot和qRT-PCR法检测心肌成纤维细胞纤维化相关mRNA和蛋白的表达水平。结果与结论:①经Vimentin荧光鉴定实验细胞为心肌成纤维细胞;②与正常对照组相比,模型组细胞活力、细胞迁移率、活性氧水平、丙二醛含量显著增加,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性明显降低,LOXL2、α-SMA、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白ⅢmRNA和蛋白表达显著升高,SIRT1蛋白表达水平明显降低(均P<0.01);与模型组相比,红景天苷低、高剂量组上述指标呈现相反的变化(均P<0.05),且红景天苷呈剂量依赖性调控;与红景天苷组相比,SIRT1抑制剂组细胞迁移率、α-SMA蛋白表达水平显著增加(均P<0.001);③结果表明,红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞具有保护作用,能够剂量依赖性地抑制氧化应激和细胞外基质沉积。 展开更多
关键词 红景天苷 血管紧张素Ⅱ 心肌成纤维细胞 氧化应激 纤维化
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氧化苦参碱对高糖诱导乳鼠原代心肌成纤维细胞转分化的作用及机制
5
作者 张宇菲 罗红 +3 位作者 肖红 陶玲 沈祥春 常楚瑞 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第3期329-339,共11页
目的探讨氧化苦参碱(OMT)对高糖(HG)诱导乳鼠原代心肌成纤维细胞(CFBs)增殖和转分化的作用及机制。方法Sprague-Dawley(SD)乳鼠20只,取乳鼠心脏的心尖部分分离与培养原代CFBs,取对数生长期CFBs细胞分为空白(Control)组、40 mmol/L甘露醇... 目的探讨氧化苦参碱(OMT)对高糖(HG)诱导乳鼠原代心肌成纤维细胞(CFBs)增殖和转分化的作用及机制。方法Sprague-Dawley(SD)乳鼠20只,取乳鼠心脏的心尖部分分离与培养原代CFBs,取对数生长期CFBs细胞分为空白(Control)组、40 mmol/L甘露醇(Mannitol)组、不同浓度(30、35、40、45及50 mmol/L)HG组及不同浓度(25、50、100、200、400 mg/L)OMT组,采用噻唑蓝比色法(MTT)法检测细胞的增殖情况并确定后续实验OMT的保护浓度;按前述OMT的保护浓度结果,取对数生长期CFBs细胞分为空白(Control)组、40 mmol/L甘露醇(Mannitol)组、40 mmol/L HG(HG)组、40 mmol/L HG+50 mg/L OMT(OMT低剂量)组、40 mmol/L HG+100 mg/L OMT(OMT中剂量)组及40 mmol/LHG+200 mg/L OMT(OMT高剂量)组,采用天狼星红和苏木素-伊红(HE)染色法观察各组细胞的胶原纤维表达及形态变化,采用羟脯氨酸(Hyp)试剂盒检测法和免疫荧光染色法检测各组细胞Hyp及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,采用流式细胞术检测各组细胞的周期分布比例,采用Western blot检测CFBs中α-SMA、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、血管内皮生长因子A(VEGFA)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达。结果与HG组相比,50、100及200 mg/L OMT组CFBs细胞活力下降(P<0.05);与HG组相比,50、100及200 mg/L OMT组CFBs细胞形态发生变化,细胞数量变少;与HG组相比,50、100及200 mg/L OMT组CFBs内Hyp含量减少,细胞在S期分布比例降低(P<0.05);与Control组相比,HG组CFBs细胞数量增多,α-SMA表达增多;与HG组相比,50、100及200 mg/L OMT组CFBs细胞数量减少,α-SMA表达减少;与HG组相比,50、100及200 mg/L OMT组HIF-1α、VEGFA、α-SMA、CTGF、CollagenⅠ、CollagenⅢ及FN表达下调(P<0.05)。结论OMT可抑制乳鼠CFBs增殖并诱导细胞转分化,其机制可能与调节HIF-1α信号相关。 展开更多
关键词 细胞增殖 糖尿病心肌病 缺氧诱导因子-1α 乳鼠 氧化苦参碱 高糖 心肌成纤维细胞 转分化
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CircSLC8A1_005通过编码蛋白抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用
6
作者 胡雅婷 高原 +5 位作者 伍华燕 梁俣 李晖 徐金东 刘宇鹏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期35-44,共10页
【目的】探究环形RNA circSLC8A1_005调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及可能机制。【方法】利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circSLC8A1_005,并检测mCFs中纤维化相关因I型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1... 【目的】探究环形RNA circSLC8A1_005调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及可能机制。【方法】利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circSLC8A1_005,并检测mCFs中纤维化相关因I型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和平滑肌肌动蛋白α2(Acta2)基因表达,通过EdU和划痕实验检测不同干预对mCFs的增殖和迁移能力的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circSLC8A1_005包含的潜在核糖体进入序列(IRES)的活性。通过Western blot实验检测circSLC8A1_005翻译蛋白SLC8A1-605aa及其在细胞内分布情况。双萤光素酶报告基因实验检测SLC8A1-605aa对超氧化物歧化酶2(Sod2)的转录激活作用。通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA的结合作用。放线菌素D实验检测SLC8A1-605aa对Sod2 mRNA稳定性的影响。【结果】利用腺病毒可在mCFs中有效介导过表达circSLC8A1_005,过表达circSLC8A1_005可显著抑制mCFs中纤维化相关基因表达,抑制mCFs的增殖和迁移能力。双萤光素酶报告基因实验结果提示circ⁃SLC8A1_005包含的2个IRES具有活性。Western blot检测结果显示circSLC8A1_005可翻译预期大小为70 ku的SLC8A1-605aa蛋白,并主要分布于细胞核内。过表达SLC8A1-605aa和circSLC8A1_005可一致地抑制mCFs的纤维化表型。SLC8A1-605aa可特异上调超氧化物歧化酶2(Sod2)表达,但并不能转录激活Sod2表达;RIP实验结果显示SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA有特异结合作用,而放线菌素D实验结果显示SLC8A1-605aa能够增强Sod2 mRNA的稳定性。【结论】CircSLC8A1_005通过翻译蛋白SLC8A1-605aa发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用,SLC8A1-605aa可能是潜在的用于心肌纤维化治疗的靶点。 展开更多
关键词 心肌纤维化 环形RNA circSLC8A1_005 翻译 心肌成纤维细胞
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环状RNA circ_0120051通过miR-144-3p/IDH2轴抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型研究
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作者 梁俣 胡志琴 +5 位作者 温艺红 伍华燕 王娅 刘宇鹏 单志新 方咸宏 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期196-205,共10页
【目的】研究环形RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制。【方法】通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(S... 【目的】研究环形RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制。【方法】通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平。核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验鉴定circ_0120051的RNA稳定性。RT-qPCR检测circ_0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况。利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circ_0120051,通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ_0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响,利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响。通过RNA免疫共沉淀技术(RIP)验证circ_0120051与miR-144-3p间的结合作用,利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2(Idh2)3’-UTR的结合位点。【结果】Circ_0120051在心衰病人心肌中表达显著增加,而其宿主基因SLC8A1表达无显著差异。Circ_0120051主要定位于人心肌细胞的胞质中。RNase R消化实验证实circ_0120051相对于线性SLC8A1 mRNA具有典型的环状RNA稳定性。过表达circ_0120051可抑制mCFs中纤维化相关基因表达和mCFs的迁移能力。RIP实验证实circ_0120051与miR-144-3p之间具有明显结合作用。在mCFs中转染miR-144-3p可促进纤维化相关基因的表达,并有效逆转circ_0120051对mCFs纤维化表型的抑制作用。双萤光素酶报告基因实验证实miR-144-3p与Idh2的3’-UTR存在结合作用。miR-144-3p可在转录水平抑制mCFs中Idh2表达,而过表达circ_0120051可增加mCFs中IDH2表达。在mCFs中转染miR-144-3p和Idh2的小干扰RNA(siRNA),可一致性地逆转circ_0120051对纤维化相关基因表达和mCFs迁移的抑制作用。【结论】Circ_0120051通过特异结合miR-144-3p并增加其靶基因IDH2表达来发挥抑制mCFs纤维化表型的作用。 展开更多
关键词 心肌纤维化 环状RNA 微RNA Circ_0120051 心肌成纤维细胞
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牛磺熊去氧胆酸通过调节内质网应激抑制转化生长因子β1所诱导的心肌成纤维细胞纤维化
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作者 张含林 林辉 郭航远 《中国心血管杂志》 北大核心 2024年第1期56-64,共9页
目的探讨牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的心肌成纤维细胞(CFs)活化的作用及相关机制,为TUDCA治疗糖尿病心肌纤维化提供新的治疗目标。方法提取原代SD乳鼠CFs和心肌细胞,通过免疫荧光法鉴定CFs的纯度。分别将... 目的探讨牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的心肌成纤维细胞(CFs)活化的作用及相关机制,为TUDCA治疗糖尿病心肌纤维化提供新的治疗目标。方法提取原代SD乳鼠CFs和心肌细胞,通过免疫荧光法鉴定CFs的纯度。分别将高糖培养下的CFs用不同时间的TGF-β1干预,用Western blot检测内质网应激(ERS)通路相关蛋白和纤维化指标的表达,探讨TGF-β1对CFs活化及ERS相关通路的影响。用Western blot检测CFs和心肌细胞内同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1(Herpud1)的表达情况。通过沉默Herpud1的表达及用Transwell和Western blot检测沉默Herpud1后CFs纤维化指标的表达,探讨Herpud1在TGF-β1诱导的CFs活化中的作用。用CCK-8检测不同浓度的TUDCA处理下CFs的活力。用免疫荧光和Western blot检测TUDCA对TGF-β1诱导的CFs中Herpud1、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录激活因子6(ATF6)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的影响。为进一步明确Herpud1在TUDCA抑制CFs活化中的作用,用Western blot检测过表达Herpud1后相关蛋白的表达情况。结果在成功构建CFs纤维化模型的基础上,TGF-β1能够诱导CFs活化及ERS通路相关蛋白的表达;Herpud1在CFs中的表达高于心肌细胞;敲除Herpud1可抑制TGF-β1所诱导的CFs活化;TUDCA能显著降低TGF-β1诱导的CFs中GRP78、ATF6、α-SMA、Vimentin和CollagenⅠ的表达水平;此外,过表达Herpud1还可逆转TUDCA对TGF-β1诱导的CFs活化的抑制。结论下调Herpud1基因的表达是TUDCA抑制TGF-β1诱导的CFs纤维化的机制之一。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 Herpud1 牛磺熊去氧胆酸 转化生长因子Β1 纤维化
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芍药苷对血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化的保护作用
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作者 纪雅琼 宁忠平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第25期5382-5389,共8页
背景:研究表明芍药苷对肝、肾等器官纤维化具有改善作用,尤其是在肝纤维化中表现出突出优势,但芍药苷对于血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化的保护作用尚不明确。目的:探讨芍药苷对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的保护作用及分子机制。... 背景:研究表明芍药苷对肝、肾等器官纤维化具有改善作用,尤其是在肝纤维化中表现出突出优势,但芍药苷对于血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化的保护作用尚不明确。目的:探讨芍药苷对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的保护作用及分子机制。方法:在分离培养的SD大鼠乳鼠心肌成纤维细胞中加入血管紧张素Ⅱ(1μmol/L)干预48 h作为模型组;芍药苷低、高剂量组给予不同剂量的芍药苷(50,100μmol/L)预处理2 h,再用血管紧张素Ⅱ处理48 h;SIRT1抑制剂组先用10μmol/L SIRT1抑制剂EX527处理2 h,再用100μmol/L芍药苷处理2 h,最后用血管紧张素Ⅱ处理48 h。采用CCK-8法检测细胞活力,Transwell检测细胞迁移能力,用DHA荧光探针检测细胞内活性氧水平,用试剂盒检测氧化应激标志物水平,Western blot检测纤维化相关基因的蛋白表达,qRT-PCR检测细胞外基质和纤维化相关基因的mRNA表达。结果与结论:①与对照组相比,血管紧张素Ⅱ干预后心肌成纤维细胞的增殖、迁移能力明显提高,细胞内活性氧和丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性降低,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、纤维连接蛋白、结缔组织生长因子、基质金属蛋白酶9的mRNA表达增加;与模型组相比,芍药苷剂量依赖性抑制上述效应改变(P<0.01);②与模型组相比,芍药苷剂量依赖性上调SIRT1的蛋白表达(P<0.001);③与芍药苷高剂量组相比,SIRT1抑制剂组细胞迁移数量、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白表达水平显著增加(P<0.01)。结果表明,芍药苷可能通过上调SIRT1的表达,有效减轻了血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞纤维化改变,剂量依赖性地抑制了心肌成纤维细胞氧化应激和细胞外基质沉积,对于心肌成纤维细胞纤维化具有保护作用。 展开更多
关键词 芍药苷 心肌成纤维细胞 血管紧张素Ⅱ 细胞外基质 纤维化 氧化应激
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石蒜碱对缺氧条件下心肌细胞损伤和心肌成纤维细胞活化与胶原合成的影响及其生物学机制 被引量：1
10
作者 韩明磊 刘振 +2 位作者 侯永兰 崔佳佳 金卫东 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期1165-1172,共8页
目的 在体外探讨石蒜碱(LYC)对缺氧条件下心肌细胞损伤和心肌成纤维细胞活化与胶原合成的影响及其生物学机制。方法 分离SD乳鼠心肌细胞与心肌成纤维细胞;使用低氧条件诱导心肌细胞损伤,并将细胞分为4组:对照(Ctl)组、缺氧(Hyp)组、缺氧... 目的 在体外探讨石蒜碱(LYC)对缺氧条件下心肌细胞损伤和心肌成纤维细胞活化与胶原合成的影响及其生物学机制。方法 分离SD乳鼠心肌细胞与心肌成纤维细胞;使用低氧条件诱导心肌细胞损伤,并将细胞分为4组:对照(Ctl)组、缺氧(Hyp)组、缺氧与LYC联合处理(Hyp+LYC)组、缺氧与含NLR家族Pyrin域蛋白(NLRP)3炎症小体抑制剂MCC950联合处理(Hyp+MCC950)组;Western印迹检测不同缺氧时间(1、2、4、8 h)对心肌细胞中NLRP3蛋白表达的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述4组心肌细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α与心肌细胞损伤标记分子乳酸脱氢酶(LDH)的含量;TUNEL染色检测各组心肌细胞的凋亡水平;Western印迹检测各组心肌细胞中NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)-1、cleaved IL-1β和cleaved IL-18与cleaved GSDMD蛋白表达水平;应用血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化,并将细胞同样分为4组:对照(Control)组,AngⅡ处理(AngⅡ)组,联合使用AngⅡ与LYC处理(AngⅡ+LYC)组,联合使用AngⅡ与MCC950处理(AngⅡ+MCC950)组;5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)染色与Transwell实验观察各组心肌成纤维细胞的增殖活力与迁移能力;细胞免疫荧光(IHC)染色检测各组心肌成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(SMA)表达丰度;Western印迹检测心肌成纤维细胞中纤维化标志分子Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、α-SMA和转化生长因子(TGF)-β的蛋白表达水平。结果 低氧处理可显著刺激心肌细胞中NLRP3蛋白表达(P<0.05,P<0.01),且处理4 h时细胞中NLRP3增加趋势最为显著(P<0.01);与Ctl组相比,Hyp组心肌细胞中IL-1β、IL-18、TNF-α与LDH浓度、TUNEL阳性细胞率和NLRP3、ASC与cleaved caspase-1、cleaved IL-1β与leaved IL-18及cleaved GSDMD蛋白表达水平均显著增加(P<0.05,P<0.01);与Hyp组相比,Hyp+LYC组与Hyp+MCC950组上述检测指标均明显降低(P<0.05),后两组无明显差异(P>0.05);与Control组相比,AngⅡ组、AngⅡ+LYC与AngⅡ+MCC950组心肌成纤维细胞的EDU阳性率、迁移能力和细胞中α-SMA蛋白表达丰度及ColⅠ、ColⅢ、α-SMA和TGF-β蛋白表达水平均显著增加(P<0.05,P<0.01);较AngⅡ组相比,AngⅡ+LYC与AngⅡ+MCC950组成纤维细胞的上述检测指标均明显降低(P<0.05),后两组无明显差异(P>0.05)。结论 LYC可能通过降低NLRP3炎症小体的激活在体外改善缺氧诱导的心肌损伤与炎症反应,并抑制心肌成纤维细胞的活化与促纤维介质的释放。 展开更多
关键词 石蒜碱 心肌细胞 心肌成纤维细胞 含NLR家族Pyrin域蛋白(NLRP)3炎症小体
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TEAD1在小鼠急性心肌梗死后心肌成纤维细胞中的表达
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作者 张驰 李礼 +3 位作者 燕茹 裴建升 张萌 贾绍斌 《宁夏医学杂志》 CAS 2024年第4期277-280,F0002,共5页
目的观察转录因子TEAD1在小鼠急性心肌梗死后心肌成纤维细胞中的表达情况,为探究其作用机制提供理论基础。方法取40只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为急性心肌梗死组(AMI组)和假手术组(Sham组),术后以普通饲料喂养至1、3、7、14 d处死并... 目的观察转录因子TEAD1在小鼠急性心肌梗死后心肌成纤维细胞中的表达情况,为探究其作用机制提供理论基础。方法取40只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为急性心肌梗死组(AMI组)和假手术组(Sham组),术后以普通饲料喂养至1、3、7、14 d处死并取材。本研究以实时心电图变化、TTC染色判断造模是否成功,使用蛋白印迹法检测心脏中TEAD1的表达情况,使用TEAD1免疫荧光和麦胚凝集素(WGA)染色双标法检测TEAD1在心肌组织中的表达情况,使用免疫荧光双标法检测TEAD1在心肌成纤维细胞中的表达情况。结果与Sham相比,AMI组第3天和第7天TEAD1在心脏中表达明显增加(P<0.05),AMI组各天数梗死交界区TEAD1表达量明显增加(P<0.05),呈现先增后减的趋势,且第3天表达量最多,各相邻天数TEAD1的表达量之间差异均具有统计学意义(P<0.05);免疫荧光双标结果显示转录因子TEAD1在急性心肌梗死后心肌组织的心肌成纤维细胞中呈现高表达,且相较于Sham组,AMI组表达TEAD1的心肌成纤维细胞数量在急性心肌梗死后明显增加(P<0.05),以第7天和第14天较多,并主要在梗死交界区表达。结论TEAD1在急性心肌梗死后心肌组织中梗死交界区表达明显增加,且在心肌成纤维细胞中呈现高表达。 展开更多
关键词 TEAD1 急性心肌梗死 心肌成纤维细胞 小鼠
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心康冲剂含药血清调控GAS5-miR21对心肌成纤维细胞增殖的影响
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作者 刘蓉芳 郭冰 +2 位作者 余意 李园 王敏 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2024年第9期102-109,共8页
目的 观察心康冲剂含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,基于GAS5-miR-21探讨其抑制CFs增殖的作用机制。方法 取SD乳鼠心肌,差速贴壁法分离CFs,采用血管紧张素Ⅱ诱导CFs增殖,在转染微小RNA-21(miR-21)过表达慢... 目的 观察心康冲剂含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,基于GAS5-miR-21探讨其抑制CFs增殖的作用机制。方法 取SD乳鼠心肌,差速贴壁法分离CFs,采用血管紧张素Ⅱ诱导CFs增殖,在转染微小RNA-21(miR-21)过表达慢病毒、生长阻滞特异性转录本5(GAS5)沉默慢病毒后,分别用心康冲剂含药血清干预24 h。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,RT-qPCR检测GAS5、miR-2l、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)mRNA表达,Western blot检测PTEN、Akt、周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低;mi R-21过表达组和GAS5沉默组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-21过表达组、GAS5沉默组比较,miR-21过表达+心康冲剂组、GAS5沉默+心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 心康冲剂含药血清可抑制沉默GAS5所致miR-21、Akt表达升高,对抗过表达miR-21所致GAS5和PTEN表达降低,抑制CFs增殖周期,促进GAS5发挥“分子海绵”作用,改善血管紧张素Ⅱ诱导的CFs过度增殖。 展开更多
关键词 心肌纤维化 细胞周期 心康冲剂 生长阻滞特异性转录本5 微小RNA-21 心肌成纤维细胞
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银杏叶提取物通过miR-133a调节TGFβ1诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖的作用及机制
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作者 姚雨彤 钱宇 +1 位作者 游赣花 何尤夫 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第7期975-981,共7页
目的研究银杏叶提取物(GBE)对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖的作用及机制,探索miR-133a在心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法使用TGFβ1诱导乳鼠心肌成纤维细胞增殖,并加入GBE与细胞模型共培养;使用CCK8、流式细... 目的研究银杏叶提取物(GBE)对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖的作用及机制,探索miR-133a在心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法使用TGFβ1诱导乳鼠心肌成纤维细胞增殖,并加入GBE与细胞模型共培养;使用CCK8、流式细胞术分别检测细胞增殖活性和细胞周期;Mimic和siRNA构建miR-133a过表达及抑制表达的模型,并使用RT-PCR检测各组细胞中miR-133a、TGFβ1及TGFβ受体表达。结果TGFβ1可促进心肌成纤维细胞活性、提高心肌成纤维细胞由G0/G1期进入S期的比例,而GBE则可明显改善TGFβ1造成的相关影响;TGFβ1诱导的心肌成纤维细胞模型中,GBE处理或过表达miR-133a均可明显改善TGFβ1诱导的心肌成纤维细胞增殖及TGFβ受体的mRNA水平表达,而在细胞模型中抑制miR-133a表达,则会部分抵消GBE对于细胞增殖的调节作用。结论GBE可明显改善TGFβ1诱导的心肌成纤维细胞增殖,这或与其上调miR-133a并抑制TGFβ受体表达有关。 展开更多
关键词 银杏叶提取物 心肌成纤维细胞 心肌纤维化 转化生长因子Β1 细胞增殖 miR-133a
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敲低MKL1通过激活自噬流抑制心肌成纤维细胞活化与纤维化表型的作用研究
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作者 魏俊萍 符达佳 +2 位作者 孟庆雯 林道飞 林燕仔 《转化医学杂志》 2024年第1期1-6,共6页
目的探究敲低巨核细胞白血病因子1(MKL1)对心肌成纤维细胞(CFs)活化与纤维化表型的影响及作用机制。方法选取人CFs,敲低CFs中MKL1表达,检测敲低效果;将CFs分为对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、shNC+AngⅡ组、shMKL1+AngⅡ组,shNC+AngⅡ... 目的探究敲低巨核细胞白血病因子1(MKL1)对心肌成纤维细胞(CFs)活化与纤维化表型的影响及作用机制。方法选取人CFs,敲低CFs中MKL1表达,检测敲低效果;将CFs分为对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、shNC+AngⅡ组、shMKL1+AngⅡ组,shNC+AngⅡ组与shMKL1+AngⅡ组分别转染shRNA NC、shRNA MKL1,AngⅡ组、shNC+AngⅡ组及shMKL1+AngⅡ组CFs再使用AngⅡ刺激建立心肌纤维化模型;处理结束后,检测各组CFs增殖活性,测定各组CFs细胞培养上清液中Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)水平,观察各组CFs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,检测各组CFs中α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达水平。观察各组CFs自噬流,检测各组CFs中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值、Beclin1蛋白表达水平。结果转染shMKL1的CFs中MKL1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均低于未转染的CFs和转染shNC的CFs(P<0.05);与对照组比较,AngⅡ组同一时间下CFs增殖活性升高(P<0.05),上清液中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ水平升高(P<0.05),CFs中α-SMA荧光染色强度增加,α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白相对表达量上调(P<0.05),自噬溶酶体与自噬体减少,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值下降(P<0.05),Beclin1蛋白相对表达量下调(P<0.05);与AngⅡ组、shNC+AngⅡ组比较,shMKL1+AngⅡ组同一时间下CFs增殖活性降低(P<0.05),上清液中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ降低(P<0.05),CFs中α-SMA荧光染色强度减弱,α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白相对表达量下调(P<0.05),CFs中自噬溶酶体与自噬体增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值升高(P<0.05),Beclin1蛋白相对表达量上调(P<0.05)。结论敲低MKL1能够抑制CFs活化与心肌纤维化表型,该作用可能与激活细胞内阻滞的自噬流有关。 展开更多
关键词 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 细胞增殖 巨核细胞性白血因子1 自噬流 纤维化表型 血管紧张素Ⅱ
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肌球蛋白重链7基因来源的miR-208b-3p促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达 被引量：2
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作者 张梦珍 翟琳 +5 位作者 郭林林 朱杰宁 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期642-650,共9页
【目的】探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p(miR-208b-3p)对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。【方法】通过miRNA表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR... 【目的】探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p(miR-208b-3p)对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。【方法】通过miRNA表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-208b-3p在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和高糖/葡萄糖氧化酶(G/Go)处理的C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVCs)和心肌成纤维细胞(mCFs)中的表达;利用CCK8细胞增殖实验、流式细胞术和纤维化相关蛋白(包括COL1A1、COL3A1和α-SMA)表达检测来了解miR-208b-3p对mCFs纤维化表型的影响;双萤光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因Mtf2和Pgrmc1 3′端非翻译区(3′-UTR)的结合作用;利用RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-208b-3p转染的mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达;通过小干扰RNA(siRNA)抑制Mtf2和Pgrmc1表达,并检测对mCFs中纤维化相关蛋白表达的作用。【结果】miRNA表达谱和RTqPCR结果证实miR-208b-3p在糖尿病db/db小鼠心肌中表达显著升高。miR-208b-3p前体与宿主基因Myh7在db/db小鼠心肌中表达显著升高,miR-208b-3p与Myh7 mRNA在乳小鼠来源的mCFs和NMVCs中均有表达,但在NMVCs中水平更高。miR-208b-3p在AngⅡ和G/Go处理后的mCFs和NMVCs中表达均明显升高。miR-208b-3p可显著增加mCFs中纤维化相关蛋白COL1A1、COL3A1和α-SMA表达,但不影响mCFs的增殖能力和细胞周期分布特征。双萤光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与Mtf2和Pgrmc1 3′-UTR有结合作用。miR-208b-3p可在转录后水平抑制mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达。miR-208b-3p、Mtf2 siRNA和Pgrmc1 siRNA均能一致性地促进mCFs中纤维化相关蛋白表达。【结论】miR-208b-3p通过靶向Mtf2和Pgrmc1基因发挥促进mCFs中纤维化相关基因表达的作用。 展开更多
关键词 心肌纤维化 微小RNA miR-208b-3p 心肌成纤维细胞
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金莲花总黄酮下调miR-215-5p抑制PI3K/AKT信号通路影响AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和迁移
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作者 邹勇 徐亚宁 +3 位作者 刘波 庄红 尹俊 张苏川 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期964-968,共5页
目的 探讨金莲花总黄酮对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖、迁移的影响和潜在机制。方法 不同浓度(0.2、0.4、0.8 mmol/L)的金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导CFs。细胞计数试剂盒检测细胞活力确定金莲花总黄酮使用浓度。Tra... 目的 探讨金莲花总黄酮对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖、迁移的影响和潜在机制。方法 不同浓度(0.2、0.4、0.8 mmol/L)的金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导CFs。细胞计数试剂盒检测细胞活力确定金莲花总黄酮使用浓度。Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞迁移、miR-215-5p表达水平。Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。将miR-215-5p模拟物、抑制物分别转染CFs,检测上调或下调miR-215-5p对AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移的影响。结果 金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导的CFs后,细胞活力、迁移能力、miR-215-5p、磷酸化(p)-PI3K和p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达能够显著降低金莲花总黄酮对AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力及PI3K/AKT信号通路的影响(P<0.05)。结论 金莲花总黄酮能够降低AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移,其机制可能与下调miR-215-5p表达和抑制PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 金莲花总黄酮 血管紧张素(Ang)Ⅱ 心肌成纤维细胞 miR-215-5p 磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路 增殖 迁移
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双氢青蒿素对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞及NLRP3炎性小体活性的影响
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作者 单铁强 栗志英 +6 位作者 张素华 蔡安盛 姚晓华 杜相珠 行红燕 郭永泽 马景红 《中西医结合心脑血管病杂志》 2023年第21期3947-3950,共4页
目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖、转分化及激活NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体的作用,分析DHA拮抗心肌纤维化的分子机制。方法:采用胰酶消化新生大鼠的心肌组织,分离出成纤维... 目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖、转分化及激活NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体的作用,分析DHA拮抗心肌纤维化的分子机制。方法:采用胰酶消化新生大鼠的心肌组织,分离出成纤维细胞并进行免疫鉴定。实验分为正常组、DHA对照组、AngⅡ组、DHA处理组。比较各组细胞的数量变化;采用酶联免疫吸附试验检测各组细胞孵育液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞表型分子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,细胞内NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量。结果:与正常组比较,DHA对照组吸光度值、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量、细胞表型分子α-SMA表达、细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β表达水平,差异均无统计学意义(P>0.05),AngⅡ组吸光度值增加,孵育液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量、细胞表型分子α-SMA表达升高,细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与AngⅡ组比较,DHA处理组吸光度值降低,孵育液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量、细胞表型分子α-SMA表达降低,细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:DHA能够明显拮抗AngⅡ诱导的成纤维细胞的增殖、转分化以及NLRP3小体的激活,说明DHA能通过抑制NLRP3小体的活性起到保护心肌纤维化的作用。 展开更多
关键词 双氢青蒿素 血管紧张素Ⅱ 心肌成纤维细胞 NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 炎性小体 实验研究
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环状RNA circ_0036167与融合肉瘤蛋白结合发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用 被引量：1
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作者 陈泽润 郭继深 +7 位作者 丰嘉欣 胡雅婷 欧涛 朱杰宁 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2023年第2期101-109,共9页
[目的]研究环状RNA circ_0036167对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用及可能机制。[方法]对心衰患者及器官捐献者心肌组织进行Masson三色染色以检测心肌胶原水平。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0036167及其宿主MYO9A在心衰心肌... [目的]研究环状RNA circ_0036167对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用及可能机制。[方法]对心衰患者及器官捐献者心肌组织进行Masson三色染色以检测心肌胶原水平。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0036167及其宿主MYO9A在心衰心肌中的表达。通过放线菌素D和RNase R处理实验鉴定人心肌细胞AC16中circ_0036167的RNA稳定性。利用重组circ_0036167腺病毒感染C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞(mCF),在RNA和蛋白水平检测纤维化相关基因COL1A1、COL3A1和ACTA2的表达。利用EdU染色和Transwell细胞迁移实验鉴定circ_0036167对mCF增殖和迁移能力的影响。基于生物信息学预测和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证circ_0036167与融合肉瘤蛋白(FUS)的结合作用。检测敲低mCF中FUS表达对circ_0036167调控心肌纤维化相关基因表达的影响。[结果]Masson三色染色显示心衰心肌发生明显的纤维化(P<0.001)。RT-qPCR结果显示circ_0036167在心衰心肌中表达显著增加(P<0.05),而宿主基因MYO9A表达无显著差异。放线菌素D和RNase R消化实验证实circ_0036167具有环状RNA典型的RNA稳定性。过表达circ_0036167可显著抑制mCF的增殖、迁移能力和纤维化相关基因的表达。RIP实验证实circ_0036167可与FUS结合。敲低mCF后FUS的表达可促进mCF中纤维化相关蛋白表达(P<0.05或P<0.01),并可减弱circ_0036167对纤维化相关基因表达的抑制作用(P<0.01或P<0.001)。[结论]FUS可介导circ_0036167发挥抑制mCF心肌纤维化表型的作用。 展开更多
关键词 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 环状RNA 融合肉瘤蛋白
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高糖环境中雄激素受体对心肌成纤维细胞增殖和脂质合成能力的影响 被引量：1
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作者 温馨 周洋 +4 位作者 林丽婵 刘芷言 宋凯 陶辉 臧洪梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2274-2280,共7页
目的探究雄激素受体(androgen receptor,AR)对高糖环境下心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和脂质合成能力的影响及可能的分子机制。方法解剖新生乳鼠的心脏进行CFs原代培养,镜下观察CFs生长状态,并通过波形蛋白的免疫荧光... 目的探究雄激素受体(androgen receptor,AR)对高糖环境下心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和脂质合成能力的影响及可能的分子机制。方法解剖新生乳鼠的心脏进行CFs原代培养,镜下观察CFs生长状态,并通过波形蛋白的免疫荧光鉴定细胞属性。细胞贴壁后分为空白对照组、高糖模型组、阴性对照组,过表达AR组,除空白对照组葡萄糖浓度为5.5 mmol·L^(-1)外,其余各组葡萄糖浓度均为33.0 mmol·L^(-1)。培养24 h后通过Western blot和RT-qPCR检测AR、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、PCNA、cyclin D1、α-SMA、collagenⅠ的表达情况。油红O和CCK-8分别检测脂质合成和细胞增殖能力的改变。结果与空白对照组相比,高糖模型组中CFs的脂质合成和增殖能力增强。Western blot和RT-qPCR结果显示AR的蛋白和mRNA的表达降低,而FASN、增殖标志蛋白PCNA、cyclin D1和纤维化标志蛋白α-SMA、collagenⅠ的蛋白和mRNA的表达增加。在过表达AR质粒载体转染高糖模型组CFs后,过表达组CFs中的FASN、PCNA、cyclin D1、α-SMA、collagenⅠ蛋白和mRNA同空载体组相比表达下降。同时,油红O染色和CCK-8结果分别表明过表达AR组的脂质合成和增殖能力相比空载体组减弱。结论高糖环境下心肌成纤维细胞的增殖和脂质合成能力增强,其作用机制可能AR调控脂质合成有关。 展开更多
关键词 脂质合成 心肌纤维化 细胞增殖 心肌成纤维细胞 细胞代谢 雄激素受体
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黄芪甲苷通过激活短链酰基辅酶A脱氢酶抑制Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原表达 被引量：4
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作者 刘兰婷 徐庆萍 +4 位作者 彭欢 沈千惠 贾康 卿丽媛 周四桂 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1450-1456,共7页
目的观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和胶原表达的影响。方法原代提取并体外培养大鼠CFs,用短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chain acyl-... 目的观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和胶原表达的影响。方法原代提取并体外培养大鼠CFs,用短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chain acyl-CoA dehydrogenase,SCAD)的沉默基因SiRNA1186预处理CFs 12 h后,加入Ang Ⅱ和AS-Ⅳ共同处理36 h。Western blot检测SCAD、α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的蛋白表达水平;荧光定量PCR检测SCAD、α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的mRNA表达水平;检测各组CFs中SCAD酶活性、ATP、羟脯氨酸和游离脂肪酸含量变化。结果Ang Ⅱ作用CFs 36 h后,与空白对照组比较,Ang Ⅱ组CFs增殖率,α-SMA、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ的蛋白和mRNA表达水平明显增加(P均<0.01),SCAD表达和酶活性均明显降低(P<0.01,P<0.05),ATP生成减少(P<0.01),羟脯氨酸和游离脂肪酸含量升高(P均<0.01);AS-Ⅳ给药处理后,CFs增殖和胶原表达明显减少(P均<0.01),SCAD表达和酶活性明显升高(P均<0.01),ATP生成增加(P<0.01),羟脯氨酸和游离脂肪酸含量减少(P均<0.01);然而,与Ang Ⅱ+NC组相比,Ang Ⅱ+SiRNA1186+AS-Ⅳ组各项指标均无差异,在SCAD SiRNA1186的干扰下,AS-Ⅳ对Ang Ⅱ诱导的CFs增殖和胶原表达的保护作用被取消。结论AS-Ⅳ可能通过激活SCAD,从而抑制Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原表达。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 短链酰基辅酶A脱氢酶 心肌成纤维细胞 血管紧张素Ⅱ 心肌纤维化 能量代谢
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