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靶向人c-Cbl基因重组干扰慢病毒与过表达腺病毒载体的构建、鉴定以及病毒功效研究
1
作者 孙启鑫 吴秉毅 +2 位作者 姚倩倩 黄志伟 朱志刚 《中国实验血液学杂志》 CSCD 2024年第1期274-281,共8页
目的:构建可调控c-Cbl基因表达的重组慢病毒与腺病毒并评估其功效。方法:应用基因重组技术,分别构建靶向人c-Cbl基因的干扰慢病毒和过表达腺病毒。采用定量PCR和免疫印迹法检测病毒感染后白血病细胞(HL60、THP1)c-Cbl基因表达与转录本... 目的:构建可调控c-Cbl基因表达的重组慢病毒与腺病毒并评估其功效。方法:应用基因重组技术,分别构建靶向人c-Cbl基因的干扰慢病毒和过表达腺病毒。采用定量PCR和免疫印迹法检测病毒感染后白血病细胞(HL60、THP1)c-Cbl基因表达与转录本的变化。结果:3个靶向人c-Cbl基因的重组干扰慢病毒载体经测序验证构建成功,包装的病毒滴度均大于1×10^(8)TU/ml,其中shRNA-2号慢病毒干扰效率最高,白血病细胞感染后c-Cbl基因的表达约下调95%,CBL蛋白的表达约下调60%;同时,靶向人c-Cbl基因的重组过表达腺病毒载体也经测序验证构建成功,包装的病毒滴度大于1×10^(9)TU/ml,细胞感染腺病毒后,c-Cbl基因表达可瞬时上调约10倍,CBL蛋白表达约上调1.5倍。结论:重组干扰慢病毒和过表达腺病毒均可高效感染白血病细胞,并能分别下调和上调c-Cbl基因与CBL蛋白的表达,为后续研究肿瘤细胞内c-Cbl基因功能打下前期基础。 展开更多
关键词 c-Cbl基因 慢病毒载体 腺病毒载体
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MAFA-PDX1过表达慢病毒感染人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞的分化
2
作者 邱晓燕 李碧欣 +3 位作者 黎敬弟 范垂钦 马廉 王鸿武 《中国组织工程研究》 CAS 2024年第7期1000-1006,共7页
背景:干细胞来源胰岛β细胞移植被认为是治疗1型糖尿病的有效手段。人脐带间充质干细胞是理想的细胞来源,但其向胰岛β细胞分化的效率不高。目的:研究MAFA、PDX1修饰促进人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的潜能。方法:构建MAFA-P... 背景:干细胞来源胰岛β细胞移植被认为是治疗1型糖尿病的有效手段。人脐带间充质干细胞是理想的细胞来源,但其向胰岛β细胞分化的效率不高。目的:研究MAFA、PDX1修饰促进人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的潜能。方法:构建MAFA-PDX1过表达慢病毒载体,用细胞形态学、RT-qPCR法、双硫腙染色比较3种方案[方案A:单纯慢病毒组;方案B:先药物(尼克酰胺、β-巯基乙醇)诱导再加慢病毒组;方案C:慢病毒和药物诱导同时进行组]诱导人脐带间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的效率和潜能。结果与结论:(1)细胞形态学改变:经3种方案诱导后细胞形态均发生了改变,方案B在诱导第11天细胞聚集生长最为明显,出现聚集生长的胰岛样细胞团;(2)RT-qPCR检测胰岛相关基因的表达差异:同一诱导时间点3种方案横向比较,在诱导第5天,方案C的MAFA和PDX1基因表达量最高,方案B的GCG基因表达量最高;在诱导第11天,方案B的MAFA、PDX1基因表达量以及INS和GLUT2基因表达量最高;(3)双硫腙染色鉴定锌离子:3种方案诱导第11天部分细胞被双硫腙染成棕红色,其中方案B中部分小岛状细胞被染成棕红色,颜色较深(阳性表达);(4)结果表明,MAFA和PDX1共过表达可促进人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化;MAFA-PDX1基因修饰联合药物诱导方案优于单纯基因修饰方案。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 MAFA PDX1 过表达慢病毒载体 胰岛素分泌细胞 糖尿病 诱导分化
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慢病毒介导的稳定表达鸭干扰素-γ细胞株的构建
3
作者 陈柳 倪征 +5 位作者 刘可姝 叶伟成 华炯钢 云涛 朱寅初 张存 《浙江农业科学》 2024年第1期208-212,共5页
干扰素-γ是一种具有抗病毒活性和免疫调节能力的细胞因子之一。为了建立稳定表达鸭干扰素-γ(duIFN-γ)的细胞系,本研究优化并合成了duIFN-γ基因,插入到慢病毒表达载体plenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro,获得重组质粒plenti-IFN,将plenti-... 干扰素-γ是一种具有抗病毒活性和免疫调节能力的细胞因子之一。为了建立稳定表达鸭干扰素-γ(duIFN-γ)的细胞系,本研究优化并合成了duIFN-γ基因,插入到慢病毒表达载体plenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro,获得重组质粒plenti-IFN,将plenti-IFN与辅助质粒共转染包装细胞293T,筛选出了携带duIFN-γ基因的重组慢病毒rlenti-IFN,将该病毒感染中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞,利用有限稀释法和抗性加压筛选法,筛选出了30个具有嘌呤霉素抗性基因的单克隆细胞系。利用RT-qPCR荧光定量法对这些单克隆细胞的duIFN-γ mRNA水平进行检测,筛选出了duIFN-γ mRNA水平最高的1个单克隆细胞,对其进行扩大培养,获得了1株稳定细胞系。Western blot检测结果表明,duIFN-γ稳定表达于该细胞系中。本研究获得了1株稳定表达duIFN-γ蛋白的细胞系,该研究为开展duIFN-γ生物学功能研究、建立duIFN-γ检测方法及生产廉价鸭(禽)用干扰素奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭干扰素-γ 慢病毒 CHO细胞 稳定表达
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牦牛六个多能性相关转录因子OSKMNL的克隆和多顺反子慢病毒载体的构建
4
作者 黄显朋 邢嘉仪 +4 位作者 白媛媛 姜雨婷 麻志伟 付伟 兰道亮 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 2024年第4期1579-1591,共13页
旨在克隆牦牛6个多能性相关转录因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Nanog、Lin28(OSKMNL),构建多顺反子慢病毒载体FUW-teto-OSM-EGFP和FUW-teto-KNL-mCherry。本研究以1头3~5月龄健康雌性牦牛胎儿的生殖嵴组织为研究材料,利用RT-PCR技术克... 旨在克隆牦牛6个多能性相关转录因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Nanog、Lin28(OSKMNL),构建多顺反子慢病毒载体FUW-teto-OSM-EGFP和FUW-teto-KNL-mCherry。本研究以1头3~5月龄健康雌性牦牛胎儿的生殖嵴组织为研究材料,利用RT-PCR技术克隆牦牛6个多能性相关转录因子OSKMNL的完整编码区序列,并对其进行生物信息学分析;应用无缝克隆技术构建慢病毒载体FUW-teto-OSM-EGFP和FUW-teto-KNL-mCherry;用293T细胞包装慢病毒,将包装好的慢病毒感染293T细胞和牦牛成纤维细胞,通过观察荧光表达和RT-PCR技术检测病毒感染情况(试验分为病毒感染组和空白对照组,每个组设置3个重复)。结果表明,克隆的牦牛OSKMNL基因的编码区大小分别为1 083、963、1 434、1 320、903、618 bp;序列分析发现牦牛OSKMNL氨基酸序列与黄牛的同源性在99%以上,其中Sox2、Klf4、c-Myc与黄牛的同源性为100%;进化树结果显示牦牛与黄牛、瘤牛、水牛的亲缘关系最近,与小鼠的亲缘关系最远;蛋白结构预测发现牦牛的6个转录因子OSKMNL都具有该基因家族相应蛋白功能的结构,比如POU结构域、HOX结构域、HMG结构域、Znf-C2H2结构域、HLH结构域、CSP结构域等;构建了慢病毒载体FUW-teto-OSM-EGFP和FUW-teto-KNL-mCherry;慢病毒感染293T细胞发现试验组表达红色和绿色荧光;慢病毒感染牦牛成纤维细胞发现试验组表达红色和绿色荧光,RT-PCR结果显示预期大小的条带。本研究成功克隆了牦牛的6个多能性相关转录因子OSKMNL;构建了分别携带牦牛3个转录因子的慢病毒载体FUW-teto-OSM-EGFP和FUW-teto-KNL-mCherry;包装的慢病毒能感染牦牛成纤维细胞。有利于推动多能性相关转录因子OSKMNL在牦牛干细胞中的应用,也为后续研究牦牛iPSC做准备。 展开更多
关键词 牦牛 基因克隆 序列分析 慢病毒载体
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采用慢病毒载体干扰TRAF2表达的MH7A细胞稳转株的构建及意义
5
作者 陈露颖 蒋励萍 +5 位作者 王伟康 左书俊 蒯佳婕 马旸 韩陈陈 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 2024年第2期193-199,共7页
目的 用慢病毒载体构建干扰肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)表达的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞株MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号在MH7A异常增殖的作用。方法 根据人TRAF2的基因序列和shRNA序列设计原则,设计并合成3对TRAF2-sh... 目的 用慢病毒载体构建干扰肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)表达的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞株MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号在MH7A异常增殖的作用。方法 根据人TRAF2的基因序列和shRNA序列设计原则,设计并合成3对TRAF2-shRNA干扰序列,通过PCR对引物进行退火,通过双酶切PLKO.1-puro获得线性载体,将线性化载体与退火后引物通过Solution I连接,连接产物导入感受态细胞,涂板,挑取阳性菌落进行测序。构建3种不同的PLKO.1-TRAF2-shRNA慢病毒重组质粒,借助慢病毒包装质粒对对数生长期的HEK 293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒液感染MH7A细胞,同时使用嘌呤霉素对TRAF2低表达的MH7A稳转株进行筛选。使用CCK-8法、Western blot、qPCR检测MH7A中肿瘤坏死因子TNF-α诱导TRAF2低表达的MH7A增殖功能及下游信号TRAF2、P65蛋白表达和mRNA水平。结果 成功构建了PLKO.1-TRAF2-shRNA(1)、PLKO.1-TRAF2-shRNA(2)和PLKO.1-TRAF2-shRNA(3)慢病毒载体质粒和对照组慢病毒载体质粒PLKO.1-puro,将3个TRAF2-shRNA慢病毒载体质粒和对照组慢病毒载体质粒PLKO.1-puro分别与慢病毒包装质粒导入HEK 293T获得病毒液,将病毒液感染MH7A细胞后,经嘌呤霉素(2.00μg/ml)筛选,2 d得到MH7A稳转株;qPCR和Western blot结果显示,PLKO.1-TRAF2-shRNA(1) MH7A细胞稳转株中TRAF2 mRNA和蛋白的表达较阴性对照组明显下降;CCK-8和Western blot结果表明,MH7A中TRAF2敲低后,TNF-α诱导的TRAF2低表达的MH7A细胞增殖和P65的磷酸化水平明显下降。结论 成功构建了PLKO.1-TRAF2-shRNA(1) MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号活化介导RA滑膜细胞异常增殖中的作用。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 MH7A 肿瘤坏死因子受体相关因子2 慢病毒载体
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p62基因过表达慢病毒载体的构建及表达
6
作者 张春 苏丛 +1 位作者 伍婷 朱立雨 《安徽医科大学学报》 CAS 2024年第3期398-402,共5页
目的构建p62基因过表达慢病毒载体及其表达系统,并在人单核细胞白血病细胞(THP-1)中稳定表达,为在细胞水平研究p62基因的作用提供途径与方法。方法采用聚合酶链式反应(PCR)扩增p62基因片段,将扩增产物连接至线性化pcDNA3.1-Flag-PCDH10... 目的构建p62基因过表达慢病毒载体及其表达系统,并在人单核细胞白血病细胞(THP-1)中稳定表达,为在细胞水平研究p62基因的作用提供途径与方法。方法采用聚合酶链式反应(PCR)扩增p62基因片段,将扩增产物连接至线性化pcDNA3.1-Flag-PCDH10真核表达慢病毒载体;PCR鉴定重组质粒,将构建成功的重组质粒和包装质粒共转染至人胚胎肾细胞293(HEK 293T);用重组慢病毒感染人单核细胞白血病(THP-1)细胞,氨苄霉素筛选阳性细胞克隆株;Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测高表达p62基因的THP-1细胞株(过表达组)和转染不含p62基因空质粒(对照组)的THP-1细胞株;感染肺炎克雷伯菌(Klebsiella Pneumoniae,K.p.)后,RT-qPCR检测THP-1细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和趋化因子1(Cxcl1)表达水平。结果通过PCR成功获得p62基因片段并连接到pcDNA3.1-Flag-PCDH10病毒载体上,并且PCR检测显示p62-pcDNA3.1-Flag-PCDH10重组质粒构建成功;挑选慢病毒感染THP-1细胞后抗氨苄青霉素细胞株,Western blot检测结果显示药筛存活的THP-1细胞较对照组细胞P62蛋白表达增多(P<0.001),且RT-qPCR检测显示p62 mRNA表达增高(P<0.001),说明成功构建高表达P62蛋白的THP-1细胞株;感染K.p.后,高表达P62的THP-1细胞中TNF-α、IL-1β和Cxcl1表达水平增高(P<0.01)。结论经三质粒包装系统可以成功构建p62-pcDNA3.1-Flag-PCDH10慢病毒载体及高表达P62蛋白THP-1细胞株,为后续p62基因的研究提供了基础。 展开更多
关键词 P62 慢病毒载体构建 三质粒包装系统 THP-1细胞 肺炎克雷伯菌 过表达
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SOX7基因慢病毒载体的构建及其在缺氧条件下对HUVECs增殖与迁移功能的影响
7
作者 吴逸卓 黄俊鑫 +1 位作者 丁晓维 于昱 《新疆医科大学学报》 CAS 2024年第4期494-499,505,共7页
目的构建过表达SRY-box transcription factor 7(SOX7)基因的慢病毒载体,建立SOX7基因过表达的人脐静脉内皮细胞株(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并在常氧和缺氧条件下探究过表达SOX7对HUVECs迁移和增殖能力的影响... 目的构建过表达SRY-box transcription factor 7(SOX7)基因的慢病毒载体,建立SOX7基因过表达的人脐静脉内皮细胞株(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并在常氧和缺氧条件下探究过表达SOX7对HUVECs迁移和增殖能力的影响。方法使用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术扩增SOX7基因,通过同源重组法构建以pHAGE-CMV-MCS-IRES-ZsGreen为载体的SOX7-pHAGE重组质粒。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)和免疫印迹(Western blot)法检测目的基因的mRNA和蛋白表达。将SOX7-pHAGE重组质粒和包装质粒共转染293T细胞,获得含有SOX7-pHAGE慢病毒悬液,经浓缩后感染HUVECs,构建SOX7稳定感染细胞株。应用qPCR和Western blot技术检测SOX7基因的mRNA和蛋白的表达。在常氧及缺氧条件下,通过细胞划痕实验和CCK-8法检测过表达SOX7对HUVECs迁移和增殖能力的影响。结果SOX7-pHAGE重组质粒经测序后,序列比对正确。qPCR和Western blot法成功检测出SOX7-pHAGE重组质粒转染的293T细胞在mRNA水平过表达约111.4倍(P=0.0028),在蛋白质水平上出现过表达条带;qPCR和Western blot技术成功检测到SOX7-pHAGE慢病毒感染的HUVECs在mRNA水平上显著升高约68.2倍(P=0.0030),在蛋白水平上显著升高约1.7倍(P=0.0043),SOX7-pHAGE重组质粒及SOX7稳定感染细胞株构建成功。在常氧条件下,SOX7稳定感染细胞株的迁移能力没有发生改变(P>0.9999),而在缺氧条件下其迁移能力增强约1.2倍(P=0.0044)。在常氧条件下,SOX7稳定感染细胞株的增殖能力增强约1.3倍(P=0.0087),在缺氧条件下其增殖能力也显著增强约1.4倍(P=0.0228)。结论SOX7稳定感染细胞株可促进HUVECs的增殖能力。在缺氧条件下,SOX7稳定感染细胞株可回补HUVECs被抑制的迁移和增殖能力。 展开更多
关键词 SOX7 重组慢病毒载体 人脐静脉内皮细胞 增殖 迁移
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BMP7过表达慢病毒载体构建及其对小鼠主动脉平滑肌细胞钙化的影响
8
作者 付仕林 易雪娇 +3 位作者 潘文旭 尹纯 康华利 钱德慧 《局解手术学杂志》 2024年第2期95-99,共5页
目的构建骨形态发生蛋白7(BMP7)过表达慢病毒载体,分析BMP7过表达对小鼠主动脉内皮细胞Jagged1表达的影响及其对共培养血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响。方法根据目的基因信息Mouse-BMP7(NM_007557.3)和质粒信息pLVX-zsGreen-C1进行基... 目的构建骨形态发生蛋白7(BMP7)过表达慢病毒载体,分析BMP7过表达对小鼠主动脉内皮细胞Jagged1表达的影响及其对共培养血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响。方法根据目的基因信息Mouse-BMP7(NM_007557.3)和质粒信息pLVX-zsGreen-C1进行基因序列合成,构建BMP7过表达慢病毒。qPCR检测BMP7过表达慢病毒感染效率;Western blot检测其感染的小鼠主动脉内皮细胞Jagged1蛋白表达。将过表达BMP7慢病毒感染的内皮细胞与VSMCs共培养,茜素红染色观察共培养后VSMCs钙化情况。结果成功构建BMP7过表达慢病毒载体并转染至小鼠主动脉内皮细胞。qPCR检测结果提示,与正常对照组比较,BMP7过表达组的BMP7 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),空载体对照组BMP7 mRNA无显著变化(P>0.05)。Western blot结果显示,BMP7过表达组内皮细胞Jagged1蛋白表达水平较正常对照组显著降低(P<0.01),而空载体对照组内皮细胞Jagged1蛋白水平较正常对照组无显著改变(P>0.05)。茜素红染色结果提示,与感染过表达BMP7慢病毒的内皮细胞共培养后,VSMCs的钙化程度明显增加。结论成功构建小鼠BMP7过表达慢病毒载体,并发现过表达BMP7可以降低小鼠主动脉内皮细胞Jagged1表达,并促进共培养的VSMCs钙化。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白7 慢病毒载体构建 JAGGED1 血管钙化
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一种可满足产业化需求的靶向EpCAM嵌合抗原受体慢病毒生产工艺
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作者 周文婷 邓公平 +7 位作者 付舒翔 田方艳 吴珊珊 柏清玉 邓长云 唐颖鑫 朱淑英 张培湘 《中国医学工程》 2024年第3期18-24,共7页
目的建立一种可满足产业化需求的靶向上皮细胞粘附分子(EpCAM)嵌合抗原受体(CAR)慢病毒生产工艺。方法以EpCAM蛋白为抗原,免疫小鼠获得EpCAM单抗,采用EpCAM单抗的scFv为胞外单链可变区,构建人源化靶向EpCAM的第三代CAR载体质粒,并通过Ep... 目的建立一种可满足产业化需求的靶向上皮细胞粘附分子(EpCAM)嵌合抗原受体(CAR)慢病毒生产工艺。方法以EpCAM蛋白为抗原,免疫小鼠获得EpCAM单抗,采用EpCAM单抗的scFv为胞外单链可变区,构建人源化靶向EpCAM的第三代CAR载体质粒,并通过EpCAM CAR载体质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK 293T细胞获得慢病毒粗毒液,粗毒液经核酸酶孵育、过滤澄清、Core 700层析、浓缩换液、除菌过滤、制剂分装等工序获得EpCAM慢病毒成品。结果通过EpCAM单抗成功构建了靶向EpCAM抗原的嵌合抗原受体Humanized EpCAM ScFv-CD28-CD3ζ-CAR,并通过该EpCAM CAR进行2 L悬浮体系慢病毒包装所收获粗毒液,经层析及超滤浓缩等纯化工艺收获慢病毒成品100 mL,成品慢病毒转导滴度达2.16×10^(8)TU/mL,慢病毒总量达2.16×10^(10)TU。成功开发了可满足产业化需求的靶向EpCAM CAR慢病毒上游包装及下游纯化生产工艺。结论具有成本效益的慢病毒(LV)载体制备对于满足产业化需求至关重要,本研究在EpCAM蛋白、EpCAM抗体、及EpCAM CAR载体质粒的基础上,结合完整的慢病毒悬浮生产工艺,制备高滴度高纯度的靶向EpCAM嵌合抗原受体慢病毒,为EpCAM CAR-T细胞治疗实体瘤应用及其产业化奠定基础。 展开更多
关键词 上皮细胞粘附分子 嵌合抗原受体 CAR-T细胞治疗 慢病毒生产
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慢病毒载体介导的稳定表达eIF5A细胞系的建立及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响
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作者 李华玮 王旭英 +4 位作者 乔宏兴 李新锋 姬向波 郭科威 杨中元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1169-1176,共8页
本研究旨在通过慢病毒载体构建稳定表达真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A,eIF5A)的MARC-145细胞系并验证该细胞系对PRRSV感染的影响。全基因合成eIF5A序列,双酶切后构建慢病毒表达载体pLV-CMV-MCS-EF1a-... 本研究旨在通过慢病毒载体构建稳定表达真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A,eIF5A)的MARC-145细胞系并验证该细胞系对PRRSV感染的影响。全基因合成eIF5A序列,双酶切后构建慢病毒表达载体pLV-CMV-MCS-EF1a-Puro。将该载体和慢病毒包装质粒psPAX2与包膜蛋白质粒pMD2.G共转染HEK293T细胞,包装得到能表达eIF5A的慢病毒。将慢病毒转导至MARC-145细胞,经过嘌呤霉素筛选、细胞有限稀释法获得能稳定表达eIF5A的MARC-145细胞系。MTS试验证实构建的细胞系细胞活力无显著变化,病毒TCID50测定、实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹和间接免疫荧光技术检测eIF5A稳定表达对PRRSV滴度、PRRSV N基因及N蛋白表达的影响,发现MARC-145-eIF5A细胞系能显著促进PRRSV的增殖。本研究成功构建了稳定表达eIF5A的细胞系MARC-145-eIF5A,PRRSV感染试验证实体外稳定表达eIF5A可以促进PRRSV在MARC-145细胞的增殖。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 慢病毒载体 真核翻译起始因子5A MARC-145细胞 感染
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血栓弹力图预测乙型病毒性肝炎慢加急性肝衰竭并发出血风险的应用研究
11
作者 张洁 包依夏姆·阿巴拜克力 +4 位作者 姚磊 郑嵘炅 潘金良 柯比努尔·吐尔逊 鲁晓擘 《现代消化及介入诊疗》 2023年第8期942-945,950,共5页
目的应用血栓弹力图(thromboelastography,TEG)检测乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(HBV-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)患者的凝血功能,评估其在发生出血风险及预后方面的价值。方法收集132例HBV-ACLF患者的临床资... 目的应用血栓弹力图(thromboelastography,TEG)检测乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(HBV-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)患者的凝血功能,评估其在发生出血风险及预后方面的价值。方法收集132例HBV-ACLF患者的临床资料,用TEG检测患者全血凝血动力学,同时检测其常规生化、凝血功能等指标;比较消化道出血组和无消化道出血组之间,生存组和死亡组之间上述指标的差异;比较分析凝血参数与TEG各参数[凝血因子活性(R值)、纤维蛋白原功能(K值)、纤维蛋白原功能(α-角)等]在是否出血及是否血栓形成之间的相关性;并用ROC曲线评价TEG的参数R值和PT对HBV-ACLF患者出血预后评估的能力。结果生存组和死亡组两组间的PT、AARC评分、终末期肝病模型(MELD)、D二聚体、乳酸、总胆红素、直接胆红素均存在统计学差异(P<0.05),提示死亡组的PT、AARC、MELD、D二聚体、乳酸、总胆红素、直接胆红素均高于生存组;消化道出血组和未出血组两组间MA、Angle存在统计学差异(P<0.05),提示消化道出血组MA、Angle均较未消化道出血组明显缩短。对HBV-ACLF患者否并发出血风险的预测分析评估中MA、Angle值和K值的AUC曲线下面积分别为0.332、0.359、0.682,K值优于MA、Angle值,P值均<0.001,差异均有统计学意义。结论TEG检测能真实反映HBV-ACLF患者凝血和抗凝功能在低水平的“再平衡”状态,MA、Angle缩短提示患者并发消化道出血的风险增加,K值对于预测消化道出血风险的价值优于MA、Angle值。 展开更多
关键词 血栓弹力图 乙型肝炎病毒 慢加急性肝衰竭 出血 血栓
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鞘内注射shRNA慢病毒载体缓解慢性炎性疼痛的机制研究
12
作者 姜晓阳 冯艳茹 +1 位作者 刘亚华 侯彦深 《局解手术学杂志》 2023年第6期494-498,共5页
目的探究鞘内注射shRNA慢病毒载体对慢性炎性疼痛大鼠疼痛行为学及脊髓胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、OX42蛋白表达的影响。方法将54只SD大鼠随机分为正常组、空病毒组、慢病毒载体组,采用足底注射完全弗氏佐剂(CFA)建立大鼠慢性炎性疼痛模型... 目的探究鞘内注射shRNA慢病毒载体对慢性炎性疼痛大鼠疼痛行为学及脊髓胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、OX42蛋白表达的影响。方法将54只SD大鼠随机分为正常组、空病毒组、慢病毒载体组,采用足底注射完全弗氏佐剂(CFA)建立大鼠慢性炎性疼痛模型,正常组大鼠足底注射生理盐水,鞘内注射PBS缓冲液;空病毒组和慢病毒载体组大鼠足底注射CFA,鞘内分别注射空病毒和慢病毒液。于建模前1 d及建模后第1、3、6、9、13天测量机械缩足阈值(PMWT)及热缩足潜伏期(PTWL);于建模后第3、6、13天留取大鼠L4~L5背根神经节(DRG)组织和脊髓节段组织,检测Nav1.7和GFAP、OX42蛋白表达水平。结果与正常组大鼠比较,空病毒组及慢病毒载体组大鼠PMWT值以及慢病毒载体组大鼠PTWL值在建模后第1天明显下降,在建模后第3天下降达最低值,之后逐渐升高;空病毒组PTWL值在建模后第1天明显下降,在建模后第3天下降达最低值,之后较第3天升高,但仍低于基础值。与空病毒组大鼠比较,慢病毒载体组大鼠PMWT、PTWL值从建模后第3天开始逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在建模后第3、6、13天,正常组大鼠DRG中Nav1.7及脊髓GFAP、OX42蛋白表达水平基本无变化;空病毒组和慢病毒载体组大鼠DRG中Nav1.7及脊髓GFAP、OX42蛋白表达水平较正常组增加,差异有统计学意义(P<0.05);慢病毒载体组大鼠DRG中Nav1.7及脊髓GFAP、OX42蛋白表达水平较空病毒组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论鞘内注射shRNA慢病毒载体可抑制大鼠DRG中Nav1.7表达,抑制脊髓胶质细胞活化,下调GFAP、OX42蛋白表达,缓解大鼠慢性炎性疼痛。 展开更多
关键词 鞘内注射 慢病毒载体 慢性炎性 疼痛行为
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慢病毒介导的CBS基因沉默对人胶质瘤细胞增殖的影响
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作者 闵建平 龙彦伊 +6 位作者 王海涛 朱公建 张永东 周海红 王涛 郭红云 苏海翔 《甘肃医药》 2023年第3期193-196,共4页
目的:探究催化产生内源性H2S的酶CBS在人胶质瘤细胞增殖中的作用。方法:以人脑胶质瘤U87细胞为实验对象,使用CBS基因shRNA慢病毒载体转染胶质瘤细胞CBS基因,利用0.5μg/mL嘌呤霉素筛选建立CBS-RNAi慢病毒的U87稳定细胞株,通过qPCR法对各... 目的:探究催化产生内源性H2S的酶CBS在人胶质瘤细胞增殖中的作用。方法:以人脑胶质瘤U87细胞为实验对象,使用CBS基因shRNA慢病毒载体转染胶质瘤细胞CBS基因,利用0.5μg/mL嘌呤霉素筛选建立CBS-RNAi慢病毒的U87稳定细胞株,通过qPCR法对各组CBS基因的表达量检测,确定目标基因的沉默效果以及CBS基因沉默对于U87细胞的增殖能力的影响。结果:与空白对照组相比,CBS-RNAi 2组的CBS mRNA表达量明显降低,CBS-RNAi 1组和CBS-RNAi 3组的CBS mRNA表达量降低;证明慢病毒介导的RNAi可有效沉默人胶质瘤U87细胞的CBS基因,且CBS-RNAi组沉默人胶质瘤细胞CBS基因的效果最佳。结论:沉默CBS基因能够抑制人胶质瘤U87细胞的体外增殖,CBS基因或可成为临床治疗人脑胶质瘤的新靶点。 展开更多
关键词 胶质瘤 硫化氢 CBS 慢病毒 RNA干扰
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妊娠中期并发慢加急性乙型肝炎感染后成功实施原位肝移植:病例报道
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作者 黄翠兰 杨春丽 +2 位作者 贺慧为 王荣胜 林志颖 《江西医药》 CAS 2024年第1期134-137,共4页
我们报告了一名36岁的孕妇,因慢性和急性肝功能衰竭(Chronic and acute liver failure,CALF)和肝性脑病被转到重症监护病房。实验室检查显示肝功能异常,其他血清学检查符合乙肝病毒(HBV)感染。超声波检查显示一个死胎。该患者接受了非... 我们报告了一名36岁的孕妇,因慢性和急性肝功能衰竭(Chronic and acute liver failure,CALF)和肝性脑病被转到重症监护病房。实验室检查显示肝功能异常,其他血清学检查符合乙肝病毒(HBV)感染。超声波检查显示一个死胎。该患者接受了非常紧急的供体肝移植(Liver transplantation,LT),使用的是一名死于蛛网膜下腔出血的ABO血型相同的56岁男性。肝脏组织学检查显示小结节性肝硬化,急性和慢性肝炎,符合坏死性HBV感染。手术后,患者同种异体移植功能逐渐恢复。免疫抑制方案是巴利昔单抗联合他克莫司。原位肝移植(OLT)后第6天,在超声引导下羊膜腔穿刺后,注射利凡诺引产。OLT后第8天,一个死胎在阴道分娩,并出现大量阴道出血。全麻下超声引导下进行胎盘钳夹术。到目前为止,患者在术后2个月一般状况良好和肝功能正常。 展开更多
关键词 原位肝移植 乙肝病毒 慢加急性肝衰竭 巴利昔单抗 妊娠
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基于贝叶斯网络模型分析乙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者中乙型肝炎病毒滴度与慢加急性肝衰竭发生的关系 被引量：3
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作者 黄洁婕 蓝婧 +1 位作者 姚朝光 黄佳 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期173-180,共8页
目的 基于贝叶斯网络模型探讨乙型肝炎病毒滴度(HBV DNA)与慢性乙型肝炎(CHB)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者慢加急性肝衰竭(ACLF)发生的关系。方法 选择2018年9月—2022年1月广西河池市人民医院收治的175例合并NAFLD的CHB患者作为NAFLD... 目的 基于贝叶斯网络模型探讨乙型肝炎病毒滴度(HBV DNA)与慢性乙型肝炎(CHB)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者慢加急性肝衰竭(ACLF)发生的关系。方法 选择2018年9月—2022年1月广西河池市人民医院收治的175例合并NAFLD的CHB患者作为NAFLD组,另选择175例单纯CHB的患者作为对照组,比较两组患者的临床资料以及发生ACLF的概率。NAFLD组根据患者是否并发ACLF分为ACLF组(n=84)和非ACLF组(n=91)两个亚组。比较患者的临床资料;采用多因素logistic回归分析CHB合并NAFLD患者并发ACLF的影响因素;分析各影响因素与ACLF发生率以及各影响因素间的相关性;构建贝叶斯网络模型,使用Netica软件进行贝叶斯网络推理,并对模型效能进行评价。结果 NAFLD组ACLF的发生率为48.00%,显著高于对照组。ACLF组和非ACLF组在年龄、MELD评分、血脂异常、HBeAg阳性、lgHBV DNA、尿素氮(BUN)、总胆红素(TBIL)、血浆凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)、国际标准化比率(INR)、血小板(PLT)、白蛋白(ALB)、胆碱酯酶(CHE)、凝血酶原活动度(PTA)方面的差异均具有统计学意义(P均<0.05)。多因素logistic回归分析显示:年龄、lgHBV DNA、TBIL、PT、INR是CHB合并NAFLD患者并发ACLF的独立危险因素(P<0.05),HBeAg阳性、CHE、PTA是保护因素(P<0.05)。相关性分析结果显示:年龄、lgHBV DNA、TBIL、PT、INR与ACLF均呈明显正相关(P<0.05),HBeAg阳性、CHE、PTA与ACLF均呈明显负相关(P<0.05);年龄、lgHBV DNA、TBIL、PT、INR之间均呈明显正相关(P<0.05),分别与HBeAg阳性、CHE、PTA呈明显负相关(P<0.05)。贝叶斯网络模型显示:年龄、HBeAg阳性、PT、TBIL、PTA、INR等变量通过复杂的网络关系与ACLF建立联系,lgHBV DNA、INR、CHE与ACLF的发生有直接联系;节点治疗方式通过影响TBIL、PTA等中间节点联系,间接影响ACLF的发生。结论 HBV DNA滴度是CHB合并NAFLD患者并发ACLF的独立危险因素,对预测ACLF的发生以及控制ACLF病情发展具有重要意义。贝叶斯网络模型分析表明,HBV DNA水平与ACLF的发生有直接联系,且与多个节点之间存在直接或间接的关联,可作为临床预判ACLF发生的重要指标,具有临床应用价值。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 非酒精性脂肪肝 慢加急性肝衰竭 危险因素 贝叶斯网络模型
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体外靶向TP53BP2基因shRNA慢病毒载体的构建及功能鉴定 被引量：1
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作者 霍云飞 寇卜心 +4 位作者 柴梦音 豆双双 高明慧 石英 刘晓霓 《实用肝脏病杂志》 CAS 2023年第2期164-168,共5页
目的 本研究旨在构建靶向肿瘤蛋白p53结合蛋白2(TP53BP2)基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,以抑制肝癌细胞TP53BP2的表达。方法 设计了2对针对TP53BP2基因的RNA干扰序列,并合成相应的shRNA序列。shRNA退火形成双链oligo序列后,应用基... 目的 本研究旨在构建靶向肿瘤蛋白p53结合蛋白2(TP53BP2)基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,以抑制肝癌细胞TP53BP2的表达。方法 设计了2对针对TP53BP2基因的RNA干扰序列,并合成相应的shRNA序列。shRNA退火形成双链oligo序列后,应用基因重组技术构建重组质粒,经菌落PCR和测序鉴定,将重组正确的质粒进行慢病毒包装和滴度测定,并采用Western Blot、qRT-PCR和激光共聚焦技术观察慢病毒Lenti-shTP53BP2对HepG2细胞TP53BP2基因的干扰效果。结果 测序比对结果显示,各重组慢病毒载体与设计参考序列一致,提示各重组慢病毒体构建成功;重组慢病毒载体经慢病毒包装后,显示pHS-ASR-LW429、pHS-ASR-LW512和pHS-ASR-LW513的滴度分别为9.7×108TU/mL、6.1×108TU/mL和6.4×108TU/mL;用慢病毒Lenti-shTP53BP2(pHS-ASR-LW512和pHS-ASR-LW513)感染HepG2细胞后,与对照慢病毒(pHS-ASR-LW429)比,经Western Blot、qRT-PCR和激光共聚焦结果显示两个Lenti-shTP53BP2均能显著下调HepG2细胞TP53BP2基因水平和蛋白表达量。结论 本研究成功构建了靶向TP53BP2基因shRNA慢病毒载体,其能有效下调HepG2细胞TP53BP2的表达,为进一步研究TP53BP2在肝癌发生发展过程中的机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 肿瘤蛋白p53结合蛋白2 短发夹RNA 慢病毒 体外
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脊髓钝挫伤后慢病毒干扰水通道蛋白4对大鼠运动功能及Rho表达的影响 被引量：1
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作者 何正云 夏登桃 +6 位作者 肖颜 唐玉玲 卫家豪 徐轩 李沁轩 张晓 荣成 《成都医学院学报》 CAS 2023年第1期39-44,共6页
目的 探讨脊髓钝挫伤(SCC)后,慢病毒干扰水通道蛋白4(AQP4)对大鼠运动功能的影响,并观察凋亡相关因子Rho表达的变化。方法 将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、生理盐水组(SCC组)、空载组(Vector组)和慢病毒组(AQP4RNAi组,制备慢病毒AQP... 目的 探讨脊髓钝挫伤(SCC)后,慢病毒干扰水通道蛋白4(AQP4)对大鼠运动功能的影响,并观察凋亡相关因子Rho表达的变化。方法 将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、生理盐水组(SCC组)、空载组(Vector组)和慢病毒组(AQP4RNAi组,制备慢病毒AQP4干扰模型),每组32只。SCC组、AQP4RNAi组及Vector组均采用改良Allen’s法制备SCC模型,术后12 h及术后1、3 d,采用大鼠脊髓损伤(BBB)评分评估4组后肢运动功能;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测4组脊髓组织中rho的表达;采用免疫组织化学方法检测Rho在4组脊髓组织中的表达;生物信息学分析预测AQP4与Rho之间的相关性。结果 运动功能评分结果显示,术后12 h SCC组、Vector组和AQP4 RNAi组BBB评分均为0分,术后3 d AQP4 RNAi组BBB评分较Vector组高(P<0.05)。GeneMANIA结果显示,AQP4与Rho存在间接共表达关系。RT-PCR和免疫组织化学结果显示,术后12 h及术后1、3 d AQP4RNAi组脊髓组织中rho表达均低于Vector组(P<0.05);SCC组脊髓组织中rho表达均高于Sham组(P<0.05)。结论 大鼠SCC后脊髓组织中Rho表达上调,而干扰AQP4能使其Rho表达下调,减少神经细胞凋亡,有利于大鼠运动功能恢复。 展开更多
关键词 脊髓钝挫伤 慢病毒干扰 水通道蛋白4 凋亡
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乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭评分模型及检验参数对诊断及预后影响的研究进展 被引量：1
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作者 吴悦嘉 谢青 +2 位作者 刘玉盒 陈小勇 闫雪华 《世界华人消化杂志》 CAS 2023年第6期207-213,共7页
乙肝相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus relatedacute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)是肝衰竭的常见类型,可发生在慢性乙型病毒性肝炎或肝硬化代偿期或失代偿期的基础上,其病情进展快速,常合并肝、脑、心、肾、凝血等多器官... 乙肝相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus relatedacute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)是肝衰竭的常见类型,可发生在慢性乙型病毒性肝炎或肝硬化代偿期或失代偿期的基础上,其病情进展快速,常合并肝、脑、心、肾、凝血等多器官功能衰竭的临床综合征,病死率极高.美国胃肠病学会(American Gastroenterological Association,ACG)将其定义为具有潜在可逆性疾病,早期诊断,规范治疗,将极大影响其预后.近年来,一些新的评分模型及生物标志物的临床应用,有效提高了对HBV-ACLF的诊断及预后判断.本文对目前临床应用较广的评分模型及检验参数进行了梳理,进一步探讨其对HBV-ACLF的诊断和预后影响的价值. 展开更多
关键词 慢加急性肝衰竭 乙型肝炎病毒 诊断价值
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乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭患者血清miR-328-3p表达水平及其与疾病严重程度及预后的相关性研究 被引量：1
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作者 李新强 阎春英 +1 位作者 宗伟 张蓉 《现代检验医学杂志》 CAS 2023年第2期7-12,共6页
目的探究微小核糖核酸(microRNA,miR)-328-3p表达水平与乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)严重程度及预后的关系。方法选取2018年12月~2021年12月陕西省人民医院收治... 目的探究微小核糖核酸(microRNA,miR)-328-3p表达水平与乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)严重程度及预后的关系。方法选取2018年12月~2021年12月陕西省人民医院收治的HBV-ACLF患者120例(HBV-ACLF组)、慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者120例(CHB组),另选取同期健康体检者120例为健康组。比较三组一般资料及血清miR-328-3p表达水平,比较不同分期HBV-ACLF患者血清miR-328-3p表达水平;分析HBV-ACLF患者血清miR-328-3p表达水平与终末期肝病模型(model for end-stage liver disease,MELD)评分的相关性;比较不同预后HBV-ACLF患者基线资料及血清miR-328-3p表达水平;评估血清miR-328-3p和MELD评分对HBV-ACLF患者预后的预测价值;COX回归分析HBV-ACLF患者预后的影响因素。结果健康组、CHB组和HBV-ACLF组血清miR-328-3p(1.03±0.34,1.85±0.62和2.76±0.92)表达水平比较,差异有统计学意义(F=200.241,P<0.05);早期、中期、晚期组HBV-ACLF患者血清miR-328-3p(2.30±0.58,2.88±0.72和3.63±0.91)表达水平逐渐升高,差异有统计学意义(F=28.023,P<0.05);HBV-ACLF患者血清miR-328-3p表达水平与MELD评分、血清天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotranferase,AST)、总胆红素(total serum bilirubin,TBIL)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)呈正相关(r=0.598,0.418,0.375,0.339,均P<0.05);死亡组HBV-ACLF患者MELD评分(28.62±5.72)和血清miR-328-3p(3.34±0.67)表达水平均高于生存组(21.14±4.23,2.32±0.46),差异有统计学意义(t=8.237,9.878,均P<0.05);血清miR-328-3p和MELD评分预测HBV-ACLF患者预后的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.861(95%CI:0.791~0.932),0.853(95%CI:0.781~0.925),且二者联合预测HBV-ACLF患者预后的AUC为0.945(95%CI:0.902~0.989),高于miR-328-3p和MELD评分单独预测(Z=1.991,2.137,均P<0.05),且其敏感度和特异度分别为96.2%,86.8%;回归分析显示,MELD评分[OR(95%CI)=2.532(1.635~3.920)]和miR-328-3p[OR(95%CI)=2.928(1.836~4.668)]均是HBV-ACLF患者死亡的危险因素(均P<0.05)。结论HBV-ACLF患者血清miR-328-3p表达水平较高,与HBV-ACLF疾病严重程度和预后显著相关,且血清miR-328-3p与MELD评分联合能较为有效地预测HBV-ACLF患者预后,有一定临床参考价值。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 微小核糖核酸-328-3p 慢加急性肝衰竭
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HBV相关慢加急性肝衰竭患者血清SDC-1、ZEB1表达水平与近期预后的相关性分析
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作者 胡瑞华 《河南医学研究》 CAS 2024年第2期315-319,共5页
目的分析血清多配体蛋白聚糖-1(SDC-1)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)水平与乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)近期预后的关系。方法选取濮阳市人民医院2020年1月至2022年10月收治的130例HBV-ACLF患者和130例慢性乙型肝炎(CHB)患者,... 目的分析血清多配体蛋白聚糖-1(SDC-1)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)水平与乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)近期预后的关系。方法选取濮阳市人民医院2020年1月至2022年10月收治的130例HBV-ACLF患者和130例慢性乙型肝炎(CHB)患者,纳入同期130例健康体检者为对照组。比较3组血清SDC-1、ZEB1水平。对HBV-ACLF患者进行3个月随访,分为生存组(76例)和死亡组(54例),比较不同预后患者一般资料及血清SDC-1、ZEB1水平;分析血清SDC-1、ZEB1、终末期肝病模型(MELD)评分对HBV-ACLF患者预后的评估价值;分析HBV-ACLF预后的影响因素。结果CHB组、HBV-ACLF组患者血清SDC-1、ZEB1水平高于对照组(P<0.05),HBV-ACLF组高于CHB组(P<0.05)。死亡组HBV-ACLF患者白蛋白低于生存组(P<0.05),血清SDC-1、ZEB1水平及MELD评分高于生存组(P<0.05)。血清SDC-1、ZEB1、MELD评分联合预测HBV-ACLF患者预后的曲线下面积(AUC)大于单独预测。MELD评分、SDC-1、ZEB1是HBV-ACLF患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论HBV-ACLF患者血清SDC-1、ZEB1水平均与近期预后相关,且血清SDC-1、ZEB1与MELD评分联合预测HBV-ACLF患者近期预后的价值最高。 展开更多
关键词 多配体蛋白聚糖-1 乙型肝炎病毒 E盒结合锌指蛋白1 慢加急性肝衰竭 近期预后
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