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不同成熟期人卵母细胞慢速冷冻的初步研究 被引量:6
1
作者 陈子江 李梅 +3 位作者 马金龙 李媛 马水英 高选 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期571-574,共4页
目的:研究不同成熟期人卵母细胞冻融后超微结构的改变和冷冻保护剂浓度对卵母细胞发育潜能的影响。方法:收集多囊卵巢综合征患者辅助生殖周期获得的卵母细胞进行慢速冷冻。根据冷冻保护剂中蔗糖浓度的不同(0.1,0.2或0.3 mol/L)对不... 目的:研究不同成熟期人卵母细胞冻融后超微结构的改变和冷冻保护剂浓度对卵母细胞发育潜能的影响。方法:收集多囊卵巢综合征患者辅助生殖周期获得的卵母细胞进行慢速冷冻。根据冷冻保护剂中蔗糖浓度的不同(0.1,0.2或0.3 mol/L)对不同成熟期的卵母细胞分组,进行发育潜能的实验研究,同时收集部分未冷冻的和冻融后的卵母细胞进行超微结构观察。并将部分冷冻卵母细胞获得的胚胎用于临床患者。结果:0.2mol/L 的蔗糖浓度较0.1mol/L 更有利于各成熟期卵母细胞的冷冻,成熟卵母细胞用0.3mol/L 的蔗糖冷冻效果较好,经体外受精得到的胚胎移植后,获得2例临床妊娠。电镜结果显示,未成熟卵母细胞卵浆内的线粒体和泡状物较成熟卵母细胞少,且分布没有规律;冷冻对成熟卵母细胞超微结构的影响较未成熟卵母细胞大。结论:适当提高冷冻保护剂中蔗糖浓度,有利于各成熟期卵母细胞的冷冻保存,0.3mol/L 浓度的蔗糖冷冻保护剂是成熟卵母细胞冷冻的最佳浓度。慢速冷冻可以引起卵母细胞超微结构的改变。 展开更多
关键词 人卵母细胞 冷冻保护剂 超微结构 未成熟卵母细胞 改变 慢速冷冻 初步研究 发育 胚胎 线粒体
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慢速冷冻和玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响 被引量:7
2
作者 彭艳 于丛一 +4 位作者 李予 麦美琪 冯淑英 杨冬梓 张清学 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期70-74,共5页
【目的】比较慢速冷冻、麦管玻璃化冷冻和尼龙网玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响。【方法】16例人卵巢组织切成薄片随机分配到新鲜卵巢组(A组)、麦管玻璃化冷冻组(B组)、尼龙网玻璃化冷冻组(C组)和慢速冷冻组(D组)后行组织学... 【目的】比较慢速冷冻、麦管玻璃化冷冻和尼龙网玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响。【方法】16例人卵巢组织切成薄片随机分配到新鲜卵巢组(A组)、麦管玻璃化冷冻组(B组)、尼龙网玻璃化冷冻组(C组)和慢速冷冻组(D组)后行组织学和电镜检查。【结果】A、B、C、D组中形态正常的原始卵泡比例分别为72.5%±8.4%、65.6%±12.8%、66.1%±11.1%、48.4%±13.3%;形态正常的初级卵泡比例分别为62.0%±13.9%、58.1%±7.9%、59.0%±16.2%、37.0%±14.0%。D组中形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例均明显低于A、B、C组。B、C组形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例,与A组相比无统计学差异。B、C组中形态正常的原始卵泡超微结构无明显改变,D组中形态正常的原始卵泡超微结构存在一定程度的改变。【结论】玻璃化冷冻是人类卵巢组织较适宜的冷冻保存方法。 展开更多
关键词 卵巢组织 慢速冷冻 玻璃化冷冻 卵泡
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慢速冷冻对人成熟卵与未成熟卵发育潜能的影响 被引量:5
3
作者 李梅 陈子江 +3 位作者 李媛 赵力新 高选 马水英 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期147-149,T001,共4页
目的 :探讨慢速冷冻保存对人成熟卵子和未成熟卵子发育潜能的影响。方法 :在行宫腔配子移植和多囊卵巢综合征患者未成熟卵穿刺周期中收集不同成熟期的卵子 10 5个 ,其中成熟卵 (MII) 6 9个 ,未成熟卵 (MI和GV) 36个。各成熟期卵子经慢冻... 目的 :探讨慢速冷冻保存对人成熟卵子和未成熟卵子发育潜能的影响。方法 :在行宫腔配子移植和多囊卵巢综合征患者未成熟卵穿刺周期中收集不同成熟期的卵子 10 5个 ,其中成熟卵 (MII) 6 9个 ,未成熟卵 (MI和GV) 36个。各成熟期卵子经慢冻 速融后进行形态学和存活力观察 ,并进一步观察体外成熟、受精及胚胎培养情况。结果 :经慢速冷冻后各个成熟期卵子的形态都发生了改变。冷冻后的未成熟卵子可以体外成熟 (76 6 7% )。冻融成熟卵子受精后的分裂率 (76 92 % )高于体外成熟卵受精后的分裂率 (P <0 .0 1) ,只有冻融成熟卵子经胚胎培养获得优质胚胎 (33 33% )。结论 :用慢速冷冻法保存成熟卵子可以得到较好的胚胎发育结果 ,未成熟卵子的冷冻保存仍然存在相当的难度。 展开更多
关键词 慢速冷冻保存 成熟卵 未成熟卵 胚胎发育
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蔗糖浓度及ICSI前培养时间对人卵母细胞慢速冷冻影响的初步研究 被引量:3
4
作者 李莉 丛林 +5 位作者 曹云霞 章志国 魏兆莲 周平 赵济华 李芬 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期585-588,共4页
目的:研究2种蔗糖浓度对人类卵母细胞冻融结果的影响。方法:采用慢冻-快融程序化冷冻方法冻融不同时期的人卵母细胞,根据冷冻液中蔗糖浓度不同分为二组(A组:0.2mol/L蔗糖组;B组:0.3mol/L蔗糖组),比较其复苏后存活情况。B组复苏后成熟卵... 目的:研究2种蔗糖浓度对人类卵母细胞冻融结果的影响。方法:采用慢冻-快融程序化冷冻方法冻融不同时期的人卵母细胞,根据冷冻液中蔗糖浓度不同分为二组(A组:0.2mol/L蔗糖组;B组:0.3mol/L蔗糖组),比较其复苏后存活情况。B组复苏后成熟卵母细胞培养不同的时间行单精子卵胞浆内注射(ICSI),分析培养时间对卵母细胞受精和发育结果的影响。结果:相对于A组的冷冻方法,B组明显提高了未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞的存活率(72.0% vs 54.4%,68.8% vs 44.4%),二组卵母细胞复苏后形态异常率无明显差异;复苏后存活的成熟卵母细胞ICSI前培养3-4h后受精率、优质胚胎率、囊胚形成率明显高于培养1h、2h和5h。结论:适当提高蔗糖浓度更有利于各时期卵母细胞的冻存,复苏的成熟卵母细胞培养3-4h有助于卵母细胞结构的恢复,提高正常受精率和后期发育潜能。 展开更多
关键词 卵母细胞 慢速冷冻 蔗糖浓度 培养时间
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鸡胚19期原始生殖细胞慢速冷冻和玻璃化冷冻保存的研究 被引量:3
5
作者 韩威 李碧春 +4 位作者 朱云芬 秦洁 周冠月 陈国宏 张学余 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第3期55-59,共5页
本研究对发育至第19期的鸡胚性腺原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)分离提纯后,在DMEM中添加冷冻保护剂DMSO(二甲基亚砜)、EG(乙二醇)、蔗糖、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)分别组成6种慢速冷冻保护液和6种玻璃化冷冻保护液,进行超低温... 本研究对发育至第19期的鸡胚性腺原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)分离提纯后,在DMEM中添加冷冻保护剂DMSO(二甲基亚砜)、EG(乙二醇)、蔗糖、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)分别组成6种慢速冷冻保护液和6种玻璃化冷冻保护液,进行超低温冷冻保存。复苏后苔盼蓝染色测定细胞存活率,体外接种培养、传代。结果:①慢速冷冻保存中,PGCs在慢速冷冻液V(10%EG+10%FBS+0.1mol/L蔗糖)条件下复苏后存活率最高(92.20%),且与慢速冷冻液I(10%DMSO+10%FBS)存活率之间差异显著(P<0.05)。②玻璃化冷冻保存中,PGCs在玻璃化冷冻液I(10%DMSO+10%EG+20%FBS+10%PVP)条件下复苏后存活率最高(84.15%),且与其余5种玻璃化冷冻液下复苏后存活率之间差异均极显著(P<0.01)。③培养传至第3代的慢速冷冻复苏后PGCs细胞和培养传至第2代的玻璃化冷冻复苏后PGCs细胞,PAS染色、AKP染色呈阳性并保持完整的二倍体核型。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 慢速冷冻保存 玻璃化冷冻保存 培养传代
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小鼠卵母细胞慢速冷冻的初步研究——附人妊娠分娩1例报道 被引量:1
6
作者 刘素英 韩金兰 +4 位作者 陆朱娣 曹英 彭献东 陈华 严敬明 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期644-647,共4页
目的:探讨不同浓度蔗糖联合丙二醇(PROH)冷冻保护剂对小鼠卵母细胞冻融的影响。方法:①观察不同蔗糖浓度(0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L)联合应用1.5mol/L的PROH对小鼠卵母细胞复苏率的影响。②对1例采卵日未能取得精子的不孕症患者,应... 目的:探讨不同浓度蔗糖联合丙二醇(PROH)冷冻保护剂对小鼠卵母细胞冻融的影响。方法:①观察不同蔗糖浓度(0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L)联合应用1.5mol/L的PROH对小鼠卵母细胞复苏率的影响。②对1例采卵日未能取得精子的不孕症患者,应用0.3mol/L蔗糖联合1.5mol/LPROH将其卵母细胞用慢速冷冻方法冷冻保存,随后解冻并移植。结果:①随着蔗糖浓度的提高,卵母细胞复苏率也随之升高,0.3mol/L蔗糖组复苏率达74%。②1例患者卵母细胞复苏后行卵胞浆内ICSI-ET,获临床妊娠,妊娠中期羊水染色体核型分析正常,妊娠35周因妊高征剖宫产1健康男婴。结论:对卵母细胞慢速冷冻中,适当提高蔗糖浓度可获得较满意的复苏率、受精率及卵裂率,胚胎移植后能够出生健康新生儿。 展开更多
关键词 卵母细胞 慢速冷冻 卵母细胞单精子注射(ICSI)
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玻璃化冷冻与慢速冷冻对微量精子活动力和DNA完整性的影响 被引量:3
7
作者 池霖生 冼卓杰 +1 位作者 陈棪焜 黄建洲 《深圳中西医结合杂志》 2018年第13期167-168,共2页
目的:观察分析玻璃化冷冻与慢速冷冻对微量精子活动力和DNA完整性的影响。方法:选取佛山市妇幼保健院在2017年6月至2018年4月收集的58份正常精液标本,按照不同冷冻方式分为玻璃化冷冻组(29例,应用玻璃化冷冻方法)和慢速冷冻组(29例,应... 目的:观察分析玻璃化冷冻与慢速冷冻对微量精子活动力和DNA完整性的影响。方法:选取佛山市妇幼保健院在2017年6月至2018年4月收集的58份正常精液标本,按照不同冷冻方式分为玻璃化冷冻组(29例,应用玻璃化冷冻方法)和慢速冷冻组(29例,应用慢速冷冻方法)。采用统计学分析两组精液标本的精子活动率、DNA碎片指数(DFI)。结果:两组正常精液标本冷冻前精子活动率、DFI比较,差异无统计学意义(P>0.05),冷冻后两组正常精液标本精子活动率显著降低,精子DFI显著升高,与冷冻前比较,差异具有统计学意义(P<0.05),两组精液标本冷冻后的精子活动率、DFI比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:玻璃化冷冻与慢速冷冻方法均会降低微量精子活动力和增加DNA损伤。 展开更多
关键词 玻璃化冷冻 慢速冷冻 微量精子活动力 DNA完整性
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乙二醇在人类胚胎慢速冷冻中的应用研究 被引量:3
8
作者 何荣环 孙秀芹 《国外医学(妇幼保健分册)》 2003年第4期255-256,共2页
关键词 乙二醇 人类胚胎 慢速冷冻 渗透性 毒性 冷冻保护液
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慢速冷冻法、玻璃化冷冻法保存小鼠卵巢组织的效果对比观察 被引量:5
9
作者 李微 张娜 +2 位作者 张聪 刘月平 任曙光 《山东医药》 CAS 2018年第12期45-48,共4页
目的对比分析慢速冷冻法、玻璃化冷冻法保存小鼠卵巢组织的效果。方法将BALB/C雌性小鼠随机均分为慢速冷冻组、玻璃化冷冻组,取卵巢组织后分别进行慢速冷冻、玻璃化冷冻。冷冻21天结束时,取卵巢组织进行病理学观察,比较两组各级卵泡正常... 目的对比分析慢速冷冻法、玻璃化冷冻法保存小鼠卵巢组织的效果。方法将BALB/C雌性小鼠随机均分为慢速冷冻组、玻璃化冷冻组,取卵巢组织后分别进行慢速冷冻、玻璃化冷冻。冷冻21天结束时,取卵巢组织进行病理学观察,比较两组各级卵泡正常率;采用免疫组化法检测卵巢组织中血管生成素2(Ang-2)及其受体酪氨酸激酶受体2(Tie-2)表达。结果慢速冷冻组始基卵泡正常率高于玻璃化冷冻组(P<0.05),初级卵泡、次级卵泡正常率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。两组颗粒细胞冷冻前Ang-2(+++)、Tie-2(+++)阳性表达率均高于冷冻后,慢速冷冻组解冻后颗粒细胞Ang-2(+++)、Tie-2(+++)阳性表达率均高于玻璃化冷冻组;两组卵泡膜细胞冷冻前Ang-2、Tie-2阳性表达率均高于冷冻后,慢速冷冻组解冻后卵泡膜细胞Ang-2、Tie-2阳性表达率均高于玻璃化冷冻组;组间及组内比较P均<0.05。结论慢速冷冻法、玻璃化冷冻法均会损伤卵巢组织内各级卵泡,并导致Ang-2、Tie-2表达变化,但慢速冷冻法对卵巢组织的损伤更小。 展开更多
关键词 卵巢冷冻 慢速冷冻 玻璃化冷冻 血管生成素2 酪氨酸激酶受体2 小鼠
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不同防冻剂对兔胚胎干细胞慢速冷冻保存的影响 被引量:2
10
作者 袁晓华 王淑芬 +3 位作者 杨世华 李亚辉 陈洪伟 季维智 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期81-87,共7页
干细胞冷冻保存是干细胞研究和临床应用中的必需技术。为提高兔胚胎干细胞在慢速冻存过程中的保存效果,比较了二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(ethylene glycol,EG)对兔胚胎干细胞冷冻保护效果。对冷冻复苏后的细胞进行台盼蓝染色,并研究其胚... 干细胞冷冻保存是干细胞研究和临床应用中的必需技术。为提高兔胚胎干细胞在慢速冻存过程中的保存效果,比较了二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(ethylene glycol,EG)对兔胚胎干细胞冷冻保护效果。对冷冻复苏后的细胞进行台盼蓝染色,并研究其胚胎干细胞分子特性,结果表明DMSO比EG具有更好的冷冻保护效果。再在以10%DMSO为基础的防冻液中添加膜稳定剂海藻糖(trehalose)或谷氨酰胺(glutamine),细胞冷冻复苏后结果显示,谷氨酰胺对兔胚胎干细胞有明显的冷冻保护作用,使细胞存活率从71%提高到83.7%。当谷氨酰胺浓度为0、5、10、20、40mmol/L分别加入防冻液中后,20mmol/L的谷氨酰胺具有最佳的冷冻保护效果。以上结果得出兔胚胎干细胞慢速冷冻的防冻液改进配方为:在胚胎干细胞培养液中添加10%DMSO+20mmol/L谷氨酰胺。 展开更多
关键词 兔胚胎干细胞 慢速冷冻 防冻液 谷氨酰胺
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兔卵巢组织慢速冷冻和玻璃化冷冻保存方法的研究 被引量:2
11
作者 符晓倩 何方方 甄璟然 《生殖医学杂志》 CAS 2011年第5期400-405,共6页
目的比较不同冷冻方法对兔卵巢组织的保存效果。方法 15只新西兰雌兔,取卵巢皮质切块后,随机分成5组:新鲜组(A组)、二甲亚砜慢速冷冻组(B组)、丙二醇慢速冷冻组(C组)、冷冻管玻璃化冷冻组(D组)及固相表面玻璃化冷冻组(E组)。比较各组卵... 目的比较不同冷冻方法对兔卵巢组织的保存效果。方法 15只新西兰雌兔,取卵巢皮质切块后,随机分成5组:新鲜组(A组)、二甲亚砜慢速冷冻组(B组)、丙二醇慢速冷冻组(C组)、冷冻管玻璃化冷冻组(D组)及固相表面玻璃化冷冻组(E组)。比较各组卵巢组织的原始和初级卵泡形态正常率;通过体外培养测定培养液中雌二醇(E_2)水平;比较冻融后卵巢组织的内分泌功能;通过TdT介导的dUTP缺口末端标记技术,检测细胞凋亡情况。结果原始卵泡正常形态率与A组相比,B、D组显著降低(P<0.05),C、E组无显著性差异;初级卵泡正常形态率5组间无显著性差异。培养14 d后,各实验组原始卵泡形态正常率均低于A组(P<0.001),各实验组间无显著性差异;组间初级卵泡形态正常率无明显差异。体外培养过程中,培养液E_2水平不断增加(P<0.001),慢速冷冻和玻璃化冷冻的E_2平均浓度有显著性差异(P<0.05)。细胞凋亡检测显示,无论是原始卵泡还是初级卵泡,与A组相比,各实验组的卵泡凋亡率均无显著性差异。结论本实验中,慢速冷冻和固相表面玻璃化冷冻均能很好地保存兔卵巢组织,经过体外培养,能保持一定的内分泌功能。 展开更多
关键词 慢速冷冻 玻璃化冷冻 卵巢组织
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慢速冷冻卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植的临床结局分析 被引量:3
12
作者 莫美兰 孙青 +6 位作者 李观贵 万才云 陈培林 黄菊 黄丽施 曾勇 熊风 《生殖医学杂志》 CAS 2018年第2期145-149,共5页
目的分析早期慢速冷冻的D3卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植的临床结局。方法选取2013年1月至2016年12月深圳中山泌尿外科医院生殖中心D3卵裂期胚胎慢速冷冻复苏周期为研究对象,同一患者复苏的胚胎来自于同一取卵周期。根据移植胚胎策略... 目的分析早期慢速冷冻的D3卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植的临床结局。方法选取2013年1月至2016年12月深圳中山泌尿外科医院生殖中心D3卵裂期胚胎慢速冷冻复苏周期为研究对象,同一患者复苏的胚胎来自于同一取卵周期。根据移植胚胎策略不同分为:(1)卵裂期移植组,即慢速冷冻复苏后直接行卵裂期胚胎移植,共55个复苏周期。(2)囊胚移植组,即复苏后继续培养至囊胚移植,共57个复苏周期。分析囊胚移植组胚胎复苏后继续培养的囊胚形成率,两组患者移植后的种植率、临床妊娠率、异位妊娠率、多胎妊娠率、早期流产率及抱婴率等临床结局。结果早期慢速冷冻的D3卵裂期胚胎复苏存活率为72.57%,继续培养后的囊胚形成率为29.50%。移植时卵裂期移植组平均移植胚胎数显著高于囊胚移植组[(2.64±0.53)vs.(1.39±0.54)枚,P<0.05],移植胚胎中优质胚胎占比无显著性差异(58.82%vs.47.37%,P>0.05)。移植后的临床结局显示,两组临床妊娠率(44.44%vs.39.02%)、异位妊娠率(5.00%vs.0%)、多胎妊娠率(20.00%vs.25.00%)、早期流产率(20.00%vs.18.75%)、抱婴率(26.19%vs.28.21%)比较均无显著性差异(P>0.05)。卵裂期移植组的种植率略低于囊胚移植组(22.69%vs.33.33%),但无显著性差异(P>0.05)。结论两组临床结局差异不大,培养至囊胚移植显著减少平均移植胚胎数,但是增加无可移植胚胎的风险,各中心需要综合考虑患者意愿及具体情况,选择合适的慢速冷冻胚胎复苏后移植策略。 展开更多
关键词 慢速冷冻 卵裂期胚胎 囊胚 复苏后继续培养 临床结局
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小鼠睾丸组织慢速冷冻保存工艺的优化研究
13
作者 谭佳 郭莹莹 周新丽 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第10期2054-2062,共9页
目的冷冻保存睾丸组织用于后期移植,是除精子冻存以外保持男性生育力的另一有效途径。本文对块状睾丸组织常用的慢速冷冻降温程序进行了改进。方法通过缩短保护剂加载时间、提高第一阶段的冷却速率、第二阶段直接投入液氮等方法对小鼠... 目的冷冻保存睾丸组织用于后期移植,是除精子冻存以外保持男性生育力的另一有效途径。本文对块状睾丸组织常用的慢速冷冻降温程序进行了改进。方法通过缩短保护剂加载时间、提高第一阶段的冷却速率、第二阶段直接投入液氮等方法对小鼠睾丸组织进行冷冻保存。在不同温度对小鼠睾丸组织冻存体系进行诱导冰晶成核并冻存,降低睾丸组织慢速冷冻保存所需保护剂浓度。结果改进的两步法冻后组织内生殖细胞的凋亡阴性率均较高,其中精原细胞98.4%、精母细胞99.2%、精子细胞88.4%、支持细胞98.1%,显著高于常用慢速冷冻组,与对照组均无显著性差异。相比于未置核组,-10℃置核可显著提高5%DMSO保护剂慢速冷冻保存的冻后效果,生殖细胞的凋亡阴性率为精原细胞82.9%、精子细胞92.1%、精母细胞93.2%及支持细胞88.9%,与较高浓度保护剂10%DMSO组冻存结果无显著性差异,说明置核能够降低所需保护剂的浓度,降低毒性损伤。结论本研究通过改进两步法和置核提高了小鼠睾丸组织冻后的质量,为临床上人睾丸组织的冻存提供参考。 展开更多
关键词 睾丸组织 慢速冷冻 两步法冷冻 置核
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利用高糖溶液慢速冷冻卵子的临床结果
14
作者 梁菊艳 《国外医学(计划生育.生殖健康分册)》 2006年第6期342-343,共2页
关键词 卵子冷冻技术 临床结果 慢速冷冻 糖溶液 卵子存活率 冷冻方法 临床结局 有效性
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慢速冷冻中糖浓度对卵母细胞纺锤体和染色体构型的影响
15
作者 邢琼 《国外医学(计划生育.生殖健康分册)》 2007年第1期49-49,共1页
关键词 人卵母细胞 慢速冷冻 染色体 纺锤体 糖浓度 构型 玻璃化冷冻 冷冻保护剂
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玻璃化冷冻及慢速程序化冷冻对未成熟睾丸组织的保护效果分析
16
作者 马朦惠 苏文龙 +4 位作者 吕林艳 陈海城 方丛 孙鹏 刘贵华 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期776-782,共7页
目的:探究比较目前常见主流睾丸组织冷冻方法学,即玻璃化冷冻与慢速程序化冷冻,筛选适宜的睾丸组织冷冻方法。方法:分别收集3周龄小鼠及<2岁龄青春期前食蟹猴的睾丸组织,将其剪碎至6~26 mm^(3),均分为3组:新鲜组、玻璃化冷冻组和慢... 目的:探究比较目前常见主流睾丸组织冷冻方法学,即玻璃化冷冻与慢速程序化冷冻,筛选适宜的睾丸组织冷冻方法。方法:分别收集3周龄小鼠及<2岁龄青春期前食蟹猴的睾丸组织,将其剪碎至6~26 mm^(3),均分为3组:新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速程序化冷冻组,在冷冻5~7 d后复苏冷冻睾丸组织,使用HE染色、免疫荧光染色、TUNEL染色和Western印迹对冷冻-复苏睾丸组织进行评估。结果:①在C57BL6/J小鼠睾丸组织中,慢速程序化冷冻组精原干细胞标志物UCHL1表达量高于玻璃化冷冻组,凋亡细胞(TUNEL+细胞)含量低于玻璃化冷冻组。②食蟹猴睾丸组织中,慢速程序化冷冻组精原干细胞标志物UCHL1、细胞增殖标志物PCNA的表达量高于玻璃化冷冻组。结论:玻璃化冷冻和慢速程序化冷冻均可成功保存青春期前未成熟的小鼠及食蟹猴睾丸组织。但是在玻璃化冷冻保存中,对于冻存体积为6~26 mm^(3)的睾丸组织存在更多冷冻损伤区域,可能影响睾丸组织中精原干细胞的冷冻储存效果。 展开更多
关键词 玻璃化冷冻 程序化冷冻 男性生育保存 精原干细胞
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透明带薄化法激光辅助孵化对慢速冷冻和玻璃化冷冻卵裂期胚胎临床结局的影响 被引量:11
17
作者 陈曦 梁蓉 +3 位作者 石程 王筠 田莉 沈浣 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期671-675,共5页
目的:探讨透明带薄化法激光辅助孵化技术对慢速冷冻和玻璃化冷冻卵裂期胚胎临床结局的影响。方法:回顾性分析复苏后至少有1个胚胎是完整存活的564例卵裂期冻融胚胎移植周期,根据胚胎移植前是否行激光辅助孵化,分为辅助孵化组(研究组)与... 目的:探讨透明带薄化法激光辅助孵化技术对慢速冷冻和玻璃化冷冻卵裂期胚胎临床结局的影响。方法:回顾性分析复苏后至少有1个胚胎是完整存活的564例卵裂期冻融胚胎移植周期,根据胚胎移植前是否行激光辅助孵化,分为辅助孵化组(研究组)与非辅助孵化组(对照组),分别观察透明带薄化法激光辅助孵化技术对慢速冷冻胚胎及玻璃化冷冻胚胎的临床妊娠率、种植率及流产率的影响。结果:胚胎经慢速冷冻后,研究组胚胎种植率(19.5%)显著高于对照组(13.5%),差异有统计学意义(P<0.05),而临床妊娠率及流产率(37.9%vs 28.5%、15.5%vs 10.8%)无显著差异;胚胎经玻璃化冷冻后,研究组和对照组胚胎的临床妊娠率(38.0%vs 35.6%)、种植率(17.3%vs 15.9%)及流产率(7.6%vs 19.2%)相比较均无统计学差异;研究组中来源于2种冷冻方法的卵裂期胚胎的临床妊娠率(37.9%vs 38.0%)和种植率(19.5%vs 17.3%)无统计学差异(P>0.05)。结论:透明带薄化法激光辅助孵化能够提高慢速冷冻的卵裂期胚胎的种植能力,且不会增加其流产风险,但并不能提高玻璃化冷冻的卵裂期胚胎的种植能力。 展开更多
关键词 激光辅助孵化(AH) 透明带薄化 慢速冷冻 玻璃化冷冻 卵裂期胚胎
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以细胞筛为载体的玻璃化冷冻和慢速程序化冷冻保存人卵巢组织的效果比较 被引量:5
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作者 姬萌霞 孙正怡 +3 位作者 郁琦 甄璟然 王雪 刘美芝 《生殖医学杂志》 CAS 2016年第9期821-826,共6页
目的比较以细胞筛为载体的玻璃化冷冻与慢速程序化冷冻用于人卵巢组织冷冻的效果。方法人卵巢组织取皮质切块后,随机分为3组:新鲜组织对照组(F组)、慢速程序化冷冻组(S组)及以细胞筛为载体玻璃化冷冻组(V组)。卵巢组织冷冻复苏后,固定... 目的比较以细胞筛为载体的玻璃化冷冻与慢速程序化冷冻用于人卵巢组织冷冻的效果。方法人卵巢组织取皮质切块后,随机分为3组:新鲜组织对照组(F组)、慢速程序化冷冻组(S组)及以细胞筛为载体玻璃化冷冻组(V组)。卵巢组织冷冻复苏后,固定切片后行苏木素-伊红染色,观察卵泡形态;使用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术,观察卵泡凋亡情况;部分卵巢组织体外培养,隔日采集培养液后检测雌二醇(E2)浓度。比较三组卵泡正常形态率、卵泡凋亡率及E2浓度。结果与F组原始卵泡正常形态率(91.1%)相比,V组原始卵泡正常形态率(88.1%)无显著差异(P>0.05),而S组原始卵泡正常形态率(79.6%)显著下降(P<0.001);V组初级卵泡正常形态率(74.2%)与S组(73.6%)相似,但两组均低于F组(89.0%)(P<0.05);凋亡检测中,3组凋亡率无显著差异(P>0.05);体外培养2周,各组E2浓度持续上升,F组E2浓度显著高于S组、V组(P<0.001),而S组与V组E2浓度无显著差异(P>0.05)。结论以细胞筛为载体的玻璃化冷冻能较好地保存人卵巢组织,复苏后组织体外培养后,还可持续分泌E2。 展开更多
关键词 细胞筛 玻璃化冷冻 慢速冷冻 卵巢冷冻 生育力保存
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分裂期胚胎慢速冷冻保存时长对复苏后临床结局的影响 被引量:2
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作者 张宁媛 孙海翔 +3 位作者 徐志鹏 陈林君 王玢 胡娅莉 《中国妇幼保健》 CAS 2015年第21期3646-3648,共3页
目的探讨分裂期胚胎慢速冷冻保存时间长短对复苏后胚胎质量与临床结局的影响。方法回顾性研究2010年1月~2011年12月在南京市鼓楼医院生殖医学中心进行分裂期胚胎慢速冷冻后复苏周期共441例,根据复苏前胚胎冷冻保存时间分为〈6个月、6... 目的探讨分裂期胚胎慢速冷冻保存时间长短对复苏后胚胎质量与临床结局的影响。方法回顾性研究2010年1月~2011年12月在南京市鼓楼医院生殖医学中心进行分裂期胚胎慢速冷冻后复苏周期共441例,根据复苏前胚胎冷冻保存时间分为〈6个月、6—11个月、12—17个月、18~23个月、≥24个月共5组,分析不同冷冻保存时间下胚胎存活状态与临床妊娠及分娩结局。结果〈6月、6~11月、12—17月、18—23月、≥24月5组胚胎复苏后存活率分别为85.34%、80.22%、78.54%、75.23%和81.25%,胚胎完整率分别为46.83%、41.10%、33.20%、32.11%和40.97%,胚胎种植率分别为39.46%、26.37%、29.20%、23.73%和28.40%,临床妊娠率分别为56.95%、38.03%、45.07%、40.00%和47.62%,妊娠周期流产率分别为10.47%、11.11%、15.63%、8.33%和25.00%,抱婴回家率分别为46.36%、29.58%、32.39%、23.33%和21.43%。结论慢速冷冻胚胎保存时间在6个月以内的复苏后胚胎存活状况与远期临床结局最佳。长期保存对胚胎存活与妊娠维持的远期影响仍是值得关注的问题。 展开更多
关键词 慢速冷冻保存 体外受精-胚胎移植 流产率 抱婴回家率
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人卵巢组织慢速冷冻保护液中添加抗凋亡剂研究 被引量:2
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作者 肖准 张曜曜 +1 位作者 李灵玲 李尚为 《华西医学》 CAS 2016年第3期507-510,共4页
目的探讨在人卵巢组织慢速冷冻保护液中添加抗凋亡剂对人卵巢组织的冷冻保存效果。方法收集2012年3月-2013年4月行妇科手术的患者卵巢组织共9例,使用慢速冷冻法保存。实验组冷冻保护液中添加抗凋亡剂维生素C,并与未添加抗凋亡剂组(对照... 目的探讨在人卵巢组织慢速冷冻保护液中添加抗凋亡剂对人卵巢组织的冷冻保存效果。方法收集2012年3月-2013年4月行妇科手术的患者卵巢组织共9例,使用慢速冷冻法保存。实验组冷冻保护液中添加抗凋亡剂维生素C,并与未添加抗凋亡剂组(对照组)比较始基卵泡形态、始基卵泡及间质细胞凋亡发生率。结果实验组中始基卵泡形态正常百分率高于对照组(P<0.05);在凋亡发生率检测中,实验组与对照组相比较,始基卵泡和间质细胞凋亡发生率降低(P<0.05)。结论慢速冷冻法中,冷冻保护液中添加抗凋亡剂能更好地保存始基卵泡及周围间质细胞,在深低温保存人卵巢组织中具有推广价值。 展开更多
关键词 慢速冷冻 人卵巢组织 凋亡 冷冻保护液
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