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RAD51C表达下调对小鼠卵巢癌体内成瘤和VEGF、NRP-2表达的调控
1
作者 卢小丽 李夏影 +2 位作者 王芬 刘丝荪 芦春斌 《南昌大学学报（医学版）》 2024年第5期44-49,68,共7页
目的探讨RAD51旁系同源基因C(RAD51C)表达下调对小鼠卵巢癌体内成瘤和血管内皮生长因子(VEGF)、神经纤毛蛋白-2(NRP-2)表达调控的影响。方法使用A2780卵巢癌细胞,通过培养检测细胞中RAD51C的表达,构建3种RAD51C干扰载体(SiRNA-47、SiRNA... 目的探讨RAD51旁系同源基因C(RAD51C)表达下调对小鼠卵巢癌体内成瘤和血管内皮生长因子(VEGF)、神经纤毛蛋白-2(NRP-2)表达调控的影响。方法使用A2780卵巢癌细胞,通过培养检测细胞中RAD51C的表达,构建3种RAD51C干扰载体(SiRNA-47、SiRNA-183和SiRNA-285),并包装成慢病毒,转染细胞,逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证转染效果,进行稳筛,构建稳转细胞株。使用Balb/c雌性裸鼠建立细胞系来源的异体移植肿瘤模型(CDX)模型,将18只建模成功的裸鼠分为3组:A2780细胞组(Control组)、A2780细胞+空载体对照组(NC组)、A2780细胞+RAD51C干扰组(Si-RAD51C组),每组各6只。Control组注射生理盐水,NC组注射空载慢病毒50μL,Si-RAD51C组注射RAD51C干扰慢病毒50μL。观察各组成瘤情况,取肿瘤组织,采用蛋白质印迹法(WB)、免疫组织化学检测RAD51C、VEGF、NRP-2蛋白表达情况。结果RT-qPCR验证RAD51C干扰慢病毒转染效果以SiRAN-285最明显(P<0.05)。Si-RAD51C组与Control组、NC组比较瘤体的体积最小、重量也最轻,且RAD51C、NRP-2及VEGF蛋白的表达显著降低(P<0.05)。结论RAD51C干扰慢病毒可抑制小鼠A2780卵巢癌细胞肿瘤的形成,且对RAD51C、NRP-2及VEGF蛋白的表达均有抑制作用。 展开更多
关键词 RAD51旁系同源基因C 卵巢癌 血管内皮生长因子 神经纤毛蛋白-2 裸鼠成瘤模型 体外实验 小鼠
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沉默Rictor对肝癌细胞体外血管生成、成瘤能力及P4HB/Hedgehog表达的影响
2
作者 杨晓丽 丁子蓉 +3 位作者 孟宇澄 卜春艳 周婷婷 陈自力 《中国医疗设备》 2024年第9期125-129,143,共6页
目的探究沉默Rictor对肝癌细胞体外血管生成、成瘤能力及P4HB/Hedgehog表达的影响。方法取肝癌细胞,将其分为肝癌细胞组(LC组)、肝癌细胞+Rictor-NC组(NC组)、肝癌细胞+siRictor组(SR组),荧光显微镜下观察各组转染情况,实时定量PCR法检... 目的探究沉默Rictor对肝癌细胞体外血管生成、成瘤能力及P4HB/Hedgehog表达的影响。方法取肝癌细胞,将其分为肝癌细胞组(LC组)、肝癌细胞+Rictor-NC组(NC组)、肝癌细胞+siRictor组(SR组),荧光显微镜下观察各组转染情况,实时定量PCR法检测Rictor相关表达,细胞三维培养观察细胞形成拟态血管能力,裸鼠成瘤实验观察成瘤能力,免疫印迹法检测血管生成相关指标及P4HB/Hedgehog表达。结果LC组无转染,而NC组、SR组均可见绿色荧光,说明转染成功,且转染率均达90%以上,说明转染的细胞较为稳定;SR组细胞Rictor mRNA表达、血管形成数量、裸鼠瘤体生长曲线、血管内皮生长因子、P4HB、Hedgehog蛋白表达明显降低(P<0.05),说明沉默Rictor可促进肝癌细胞凋亡并抑制瘤体生成。结论沉默Rictor可显著抑制肝癌细胞体外血管生成,降低裸鼠成瘤能力,并抑制P4HB/Hedgehog表达。 展开更多
关键词 RICTOR 肝癌细胞 体外血管生成 成瘤能力 P4HB/Hedgehog 细胞培养
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成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞的培养及其代谢表型与成瘤能力鉴定 被引量：1
3
作者 仇佳星 刘宇涵 +4 位作者 郭泓江 张迪雅 王钰铖 鞠瑞 郭磊 《基础医学与临床》 2024年第1期16-22,共7页
目的培养成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞(U87 SLCs),检测其干性标志物的水平、线粒体呼吸能力和体内成瘤能力。方法DMEM/F-12中添加B-27以及生长因子EGF和bFGF作为无血清干细胞培养基培养U87 SLCs;悬浮培养U87 SLCs使用神经球培养法,贴壁... 目的培养成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞(U87 SLCs),检测其干性标志物的水平、线粒体呼吸能力和体内成瘤能力。方法DMEM/F-12中添加B-27以及生长因子EGF和bFGF作为无血清干细胞培养基培养U87 SLCs;悬浮培养U87 SLCs使用神经球培养法,贴壁培养U87 SLCs通过在培养表面包被Matrigel基质胶实现;通过RT-qPCR和Western blot检测培养物的干性标志物mRNA和蛋白质水平;通过流式细胞测量术检测培养物中CD133+细胞的比例;通过Seahorse实时细胞代谢分析检测细胞耗氧速率的变化;通过接种动物皮下移植瘤验证细胞成瘤能力的改变。结果干细胞培养基中的U87 SLCs在1周内即会成长为典型的细胞球形态,细胞球在培养过程中会不断增大;在贴壁剂合适的浓度下,U87 SLCs可以在干细胞培养基中完好地平铺贴壁增殖;CD133、nestin、OLIG2、CD44、CD15、整合素α6(ITGA6)等干性标志物的mRNA表达水平在两种方式培养后与U87相比均显著提升(P<0.05),CD133和nestin的蛋白水平在两种方式培养后也均升高(P<0.05);U87 SLCs展现出了更高的线粒体储备呼吸能力(P<0.05);U87 SLCs能够以更少的接种细胞数形成更大的皮下肿瘤(P<0.05),U87 SLCs体内增殖更加迅速,具有更强的成瘤能力。结论U87 SLCs具有典型的干性特征,是一个良好的干性更高的肿瘤细胞模型。 展开更多
关键词 成胶质细胞瘤 干细胞样细胞 神经球 干性
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结直肠癌PDX模型成瘤率的影响因素及临床意义 被引量：1
4
作者 张燕萍 姚刘旭 +3 位作者 丁倩男 黄则勇 李玉红 黄素琴 《基础医学与临床》 2023年第4期596-602,共7页
目的建立结直肠癌(CRC)患者来源的肿瘤组织异种移植(PDX)模型,评估PDX模型成瘤率的影响因素,并初步进行化学治疗实验。方法选取2019年11月至2020年10月绍兴市人民医院择期手术CRC患者。将手术获取的肿瘤组织接种于NSG小鼠右侧腰背部,建... 目的建立结直肠癌(CRC)患者来源的肿瘤组织异种移植(PDX)模型,评估PDX模型成瘤率的影响因素,并初步进行化学治疗实验。方法选取2019年11月至2020年10月绍兴市人民医院择期手术CRC患者。将手术获取的肿瘤组织接种于NSG小鼠右侧腰背部,建立PDX模型,并传至F3代,分析PDX模型成瘤率的影响因素;化学治疗药物选择5-氟尿嘧啶、奥沙利铂以及丙泊酚。结果本研究共纳入60例CRC患者,PDX模型成瘤为37例,成瘤率62%;平均成瘤时间为(34±12)d;原发瘤恶性程度(CRC分期和细胞分化程度)、术前癌胚抗原(CEA)水平以及肿瘤位置等因素影响PDX模型成瘤率(P<0.01)。CRC-PDX移植瘤组织与患者肿瘤组织生物学特征高度一致。4种化学治疗方案均能抑制肿瘤生长,致肿瘤组织破坏,丙泊酚可以抑制小鼠腹泻,对肠黏膜具有保护作用。结论本研究建立的CRC-PDX模型,较好地保持原发肿瘤的生物学特性,可作为CRC患者个体化治疗的参考模型。原发肿瘤恶性程度是PDX模型成瘤率的主要影响因素。 展开更多
关键词 结直肠癌 患者来源异种移植 影响因素 成瘤率 个体化治疗
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LRRC4基因表达能降低胶质母细胞瘤细胞系U251的生长和成瘤潜能(英文) 被引量：14
5
作者 王洁如 李小玲 +5 位作者 范松清 谭琛 向娟娟 唐珂 王蓉 李桂源 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第9期897-902,共6页
背景与目的:LRRC4是作者最近克隆的一个新基因,该基因在原发性脑肿瘤活检标本中明显表达下调。本研究旨在研究LRRC4基因是否具有抑制脑肿瘤生长的能力。方法:LRRC4基因的全长编码区被亚克隆至表达载体pcDNA3.1中,应用脂质体转染的方法... 背景与目的:LRRC4是作者最近克隆的一个新基因,该基因在原发性脑肿瘤活检标本中明显表达下调。本研究旨在研究LRRC4基因是否具有抑制脑肿瘤生长的能力。方法:LRRC4基因的全长编码区被亚克隆至表达载体pcDNA3.1中,应用脂质体转染的方法将重组的质粒载体导入胶质母细胞瘤细胞系U251,经G418筛选,建立稳定表达LRRC4基因的U251的细胞系。采用细胞增殖实验、软琼脂实验、肿瘤形成实验来考察LRRC4基因表达对于细胞生长和肿瘤形成的影响。结果:经过脂质体转染和筛选,建立了稳定表达LRRC4全长编码区的U251细胞系,用于进一步实验。比较未转染组和转染空白载体组,Northernblot实验证实转染了LRRC4基因的细胞LRRC4mRNA的表达增强。细胞增殖一定时间后,转染LRRC4基因的细胞较未转染细胞的生长速度明显减慢,克隆形成率明显降低。将这些细胞注射入无胸腺裸鼠体内,40天后处死裸鼠,测量肿瘤大小,结果显示转染LRRC4基因的细胞形成的肿瘤明显小于对照组。结论LRRC4基因可转染于人脑胶质母细胞瘤细胞系U251。LRRC4在U251细胞的表达有抑制瘤细胞增殖和抑制裸鼠移植瘤的形成和生长的作用。 展开更多
关键词 LRRC4 基因表达 胶质母细胞 瘤细胞系 U251生长 成瘤潜能
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肝癌中高表达的新基因LAPTM4B对细胞增殖及成瘤性的影响 被引量：13
6
作者 何静 邵根泽 周柔丽 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期348-352,共5页
目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Wester... 目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Western杂交法筛选和鉴定转染后LAPTM4B基因高表达的单克隆细胞株 ,研究其与细胞增殖相关的生物学特征的变化。结果 :与转染空载体的对照组相比 ,转染了LAPTM4BcDNA的NIH3T3细胞表面发生明显变化 ,微绒毛的数量和长度增加 ,多分枝且缠绕成团。转染细胞在纤黏连蛋白、人工基膜和层黏连蛋白基质上的黏附 /铺展能力增强。生长曲线显示转染细胞的生长速率增高。流式细胞仪检测显示转染细胞的S期细胞数比未转染细胞显著增多 ,而G0 ～G1期细胞数减少。Western杂交显示CyclinE蛋白在转染细胞中的表达显著增加。转染细胞对血清的依赖性下降并具有成瘤性。结论 :LAPTM 4B基因能影响细胞增殖的调节 ,促进NIH3T3细胞的增殖 ,并使NIH3T3细胞具有成瘤性 ,在肿瘤发生过程中具有重要的作用。 展开更多
关键词 肝癌 表达 基因 LAPTM4B 细胞增殖 成瘤性
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Foxp3对肺癌细胞增殖及成瘤的影响 被引量：5
7
作者 刘瑞敏 晁玮霞 +4 位作者 王少龙 王明丽 贾彩云 白慧玲 马远方 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1481-1484,共4页
目的:研究转录因子Foxp3在肺癌细胞中的高表达对肺癌细胞增殖及成瘤的影响。方法:利用脂质体转染法建立稳定高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株。MTT法观测NCIH-h Foxp3及对照细胞的增殖。ELISA法检测NCIHh Foxp3及对照细胞IL-8、IL-1... 目的:研究转录因子Foxp3在肺癌细胞中的高表达对肺癌细胞增殖及成瘤的影响。方法:利用脂质体转染法建立稳定高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株。MTT法观测NCIH-h Foxp3及对照细胞的增殖。ELISA法检测NCIHh Foxp3及对照细胞IL-8、IL-10的分泌。建立移植瘤小鼠模型,观察成瘤情况。结果:成功建立高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株;与阴性对照相比,NCIH-h Foxp3细胞增殖减慢,但成瘤能力强。NCIH-h Foxp3细胞培养上清IL-8表达量减低,IL-10表达量升高。结论:高表达Foxp3的肺癌细胞可能通过表达细胞因子改变局部生长的微环境,逃逸免疫监视,而促进肿瘤细胞的成瘤和发展。 展开更多
关键词 FOXP3 高表达 增殖 成瘤
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裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性研究 被引量：9
8
作者 陈莉 许小平 +4 位作者 王健民 吕书晴 居小萍 周虹 黄正霞 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期507-511,共5页
目的:建立裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系并研究其生物学特性。方法:采用逐步递增长春新碱(VCR)剂量的方法培养高成瘤性人白血病细胞系K56g-n,采用细胞培养技术、透射电镜观察、流式细胞术、RT-PCR、免疫组化、染色体核型分析及体内... 目的:建立裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系并研究其生物学特性。方法:采用逐步递增长春新碱(VCR)剂量的方法培养高成瘤性人白血病细胞系K56g-n,采用细胞培养技术、透射电镜观察、流式细胞术、RT-PCR、免疫组化、染色体核型分析及体内接种等方法研究其生物学特性。结果:建立1株裸鼠高成瘤性人白血病多药耐药细胞系K562-n／VCR。与K562-n细胞比较,K562-n／VCR细胞对VCR耐药为其297.38倍,对蒽环类、鬼臼类等多种化疗药物具有交叉耐药性,bcr-abl融合基因仍为阳性,裸鼠体内成瘤性不变,但成瘤潜伏期缩短,成瘤体积明显增大。结论:裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系K562-n／VCR具有其独特的生物学特性。 展开更多
关键词 裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系 建立 生物学特性 长春新碱 致癌性试验
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RNAi沉默Rac1基因对结肠癌细胞增殖及裸鼠成瘤的影响 被引量：9
9
作者 解娜 黄幼生 +1 位作者 罗志飞 薛逢贵 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第40期1-4,I0001,共5页
目的：探讨RNAi沉默Rac1基因对结肠癌细胞增殖及裸鼠成瘤的影响。方法①细胞实验：体外培养结肠癌细胞SW480，随机分为空白对照组、阴性对照组、shRNA-Rac1组，阴性对照组、shRNA-Rac1组分别转染空载质粒慢病毒、shRNA-Rac1慢病毒。采用... 目的：探讨RNAi沉默Rac1基因对结肠癌细胞增殖及裸鼠成瘤的影响。方法①细胞实验：体外培养结肠癌细胞SW480，随机分为空白对照组、阴性对照组、shRNA-Rac1组，阴性对照组、shRNA-Rac1组分别转染空载质粒慢病毒、shRNA-Rac1慢病毒。采用RT-PCR技术、Western blotting法检测各组Rac1 mRNA及其蛋白表达；采用MTT法检测各组转染24、48、72、96 h的细胞增殖情况。②动物实验：取shRNA-Rac1组、阴性对照组转染后细胞分别接种于裸鼠皮下，建立结肠癌裸鼠移植瘤模型（分别记为观察组、对照组），观察裸鼠成瘤及移植瘤生长情况，喂养35天脱臼处死，完整剥离肿瘤组织，称取瘤体质量并测量肿瘤体积。同时检测瘤体 Rac1蛋白表达情况。结果①细胞实验：与阴性对照组比较，shRNA-Rac1组Rac1 mRNA及其蛋白表达明显降低（P均＜0．05）；与阴性对照组比较，shRNA-Rac1组各时间点细胞增殖速度明显降低（P均＜0．05）。②动物实验：对照组癌细胞接种4～8天均可见瘤体形成，观察组接种35天仅2只成瘤，且瘤体形成时间较对照组晚10天。接种35天，观察组、对照组瘤体体积分别为（32．54±43．13）、（948．13±523．50）mm3，瘤体质量分别为（0．023±0．031）、（0．873±0．372）g，两组比较P均＜0．01。与对照组比较，观察组瘤体组织Rac1蛋白阳性表达率明显降低（ P＜0．05）。结论抑制Rac1表达能降低结肠癌细胞增殖速度，抑制裸鼠移植瘤生长。 展开更多
关键词 结肠癌 RAC1 RNA干扰 裸鼠成瘤 细胞增殖
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Bad联合Caspase-8促凋亡基因共表达对SK-HEP-1肝癌细胞体外增殖、凋亡、迁移和体内成瘤影响的实验研究 被引量：8
10
作者 鲁斌 程敏 周凡 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第8期1030-1034,共5页
目的观察Bad联合Caspase-8促凋亡基因共表达对SK-HEP-1肝癌细胞体外增殖、凋亡、迁移和体内成瘤影响。方法利用基因重组技术构建Bad-Caspase-8共表达融合基因。慢病毒转染SK-HEP-1肝癌细胞72 h后,蛋白质免疫印迹法观察细胞中Bad蛋白和Ca... 目的观察Bad联合Caspase-8促凋亡基因共表达对SK-HEP-1肝癌细胞体外增殖、凋亡、迁移和体内成瘤影响。方法利用基因重组技术构建Bad-Caspase-8共表达融合基因。慢病毒转染SK-HEP-1肝癌细胞72 h后,蛋白质免疫印迹法观察细胞中Bad蛋白和Caspase-8蛋白表达,CCK-8法检测BadCaspase-8融合基因过表达对SK-HEP-1肝癌细胞增殖影响,流式细胞仪检测其对SK-HEP-1肝癌细胞凋亡影响,Transwell侵袭实验检测转染后细胞迁移变化,最后将转染SK-HEP-1肝癌细胞接种至裸鼠皮下观察成瘤效果。结果转染72 h后,SK-HEP-1肝癌细胞中Bad蛋白和Caspase-8蛋白水平显著增加,细胞增殖能力显著降低,实验组、对照组和空白组OD值分别为0.86±0.122、1.89±0.315和2.01±0.194,P<0.001;转染后SK-HEP-1肝癌细胞凋亡率明显增加,实验组、对照组和空白组细胞凋亡率分别为(31.6±2.8)%、(3.2±0.9)%和(2.9±1.1)%,P<0.001,转染后SK-HEP-1肝癌细胞迁移能力显著降低,实验组、对照组和空白组细胞迁移数分别为18±3,77±10和85±11,P<0.001;细胞接种至裸鼠皮下15 d,与对照组和空白组相比,实验组肿瘤生长速度缓慢,实验组、对照组和空白组成瘤体积分别为(1.6±0.17)cm3、(4.4±0.29)cm3和(4.9±0.42)cm3,P<0.001。结论促凋亡基因Bad和Caspase-8共表达可显著降低SK-HEP-1肝癌细胞增殖活性,促进SK-HEP-1肝癌细胞凋亡,减少SK-HEP-1肝癌细胞迁移,抑制SK-HEP-1肝癌细胞体内成瘤效率,可作为肝癌靶向治疗潜在靶点。 展开更多
关键词 BAD CASPASE-8 细胞凋亡 细胞增殖 细胞迁移 移植成瘤
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大鼠骨髓间充质干细胞的纯化、冻存及成瘤性分析 被引量：3
11
作者 佟明华 雷香丽 +2 位作者 王亚萍 孔祥平 罗显荣 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第41期7601-7606,共6页
背景:骨髓间充质干细胞在骨髓中的含量极低,体外的长期培养过程中易丧失干细胞潜能以及体内移植后安全性等问题的存在,限制了骨髓间充质干细胞在临床上的广泛应用。目的:探索体外分离纯化、冻存大鼠骨髓间充质干细胞的最适方法,并观察... 背景:骨髓间充质干细胞在骨髓中的含量极低,体外的长期培养过程中易丧失干细胞潜能以及体内移植后安全性等问题的存在,限制了骨髓间充质干细胞在临床上的广泛应用。目的:探索体外分离纯化、冻存大鼠骨髓间充质干细胞的最适方法,并观察以此方法培养的骨髓间充质干细胞移植体内后是否具有成瘤性。方法:分别采用差速贴壁结合24h首次换液、24h首次换液、48h首次换液的方法纯化培养骨髓间充质干细胞,筛选最适纯化方法进行后续实验。配制含体积分数为10%,20%,30%,40%,50%胎牛血清的细胞冻存液冻存细胞,复苏后计算细胞存活率,测定复苏后细胞的生长曲线及成脂诱导能力。将第3,15代骨髓间充质干细胞进行裸鼠肌肉、肝脏局部注射体内移植,45d后取注射部位行病理组织标本检查。结果与结论:差速贴壁结合24h首次换液法所获得骨髓间充质干细胞纯度最高,而细胞增殖能力与其他两组无明显差别,因此选用该方法纯化骨髓间充质干细胞,然后进行传代培养;含体积分数为30%血清冻存液既可保证细胞活性与增殖能力,又可保证干细胞特性及多向分化潜能。骨髓间充质干细胞传至15代仍保持间充质干细胞特性,骨髓间充质干细胞移植入裸鼠肝脏45d后仍可在肝脏局部存活,生长状态与体外培养相似,无异型性及向周围浸润生长,提示体外长时间培养15代以内的骨髓间充质干细胞可在裸鼠体内存活且无成瘤性。 展开更多
关键词 大鼠 骨髓间充质干细胞 分离纯化 冻存 细胞移植 成瘤性 干细胞
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槐耳清膏抑制MCF-7细胞裸鼠成瘤性实验研究 被引量：4
12
作者 鲁明骞 冯雪松 +5 位作者 孔庆志 卢宏达 卢忠心 王纯 周刚 张蓉 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2018年第1期18-21,共4页
目的:构建裸鼠异种乳腺癌移植瘤模型(裸鼠接种MCF-7细胞),给予该模型鼠槐耳清膏处理,观察移植瘤组织病理变化特点,探讨其对裸鼠致瘤性的影响。方法:将裸鼠随机分为实验组和对照组,分别给予槐耳清膏(浓度150 mg·ml^(-1))和0.9%生理... 目的:构建裸鼠异种乳腺癌移植瘤模型(裸鼠接种MCF-7细胞),给予该模型鼠槐耳清膏处理,观察移植瘤组织病理变化特点,探讨其对裸鼠致瘤性的影响。方法:将裸鼠随机分为实验组和对照组,分别给予槐耳清膏(浓度150 mg·ml^(-1))和0.9%生理盐水各0.2 ml灌胃,每天两次,共30 d。观察裸鼠瘤体积及瘤体重的变化,显微镜观察移植瘤组织病理变化特点。结果:裸鼠在接种MCF-7细胞3周后,接种部位均长出肿瘤,成瘤率100%,实验组和对照组移植瘤重分别为(0.20±0.07)g和(0.57±0.32)g,实验组裸鼠移植瘤体重明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),两组移植瘤体积分别为(0.32±0.74)cm^3与(0.84±0.62)cm^3,实验组移植瘤体积较对照组小,具有统计学差异(P<0.01)。HE染色后,实验组裸鼠移植瘤镜下可见肿瘤组织细胞出现不同程度的退行性变,中央及边缘细胞出现大片缺血坏死区,在血供较丰富的区域表现尤为明显,而在坏死灶周围可见残存的肿瘤细胞。对照组细胞生长旺盛,有异型性,形态不规则,大小不等,细胞核大、浓染,可见病理性核分裂相,无明显坏死区。结论:在裸鼠体内,槐耳清膏能抑制乳腺癌细胞MCF-7的成瘤性,从而达到抑制乳腺癌细胞生长的作用。 展开更多
关键词 乳腺癌 槐耳清膏 MCF-7细胞 成瘤性
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肺腺癌中FPR1的表达及其对细胞迁移、成瘤能力的影响 被引量：4
13
作者 黄波 郭红荣 +2 位作者 丁洁 王红娟 徐建群 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1104-1109,共6页
目的探讨甲酰肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)在肺腺癌组织中的表达以及对肺腺癌细胞迁移、成瘤能力的影响。方法采用免疫组化法检测肺腺癌组织及癌旁组织中FPR1的表达,分析患者临床资料的相关性。采用人肺腺癌细胞A549为分析... 目的探讨甲酰肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)在肺腺癌组织中的表达以及对肺腺癌细胞迁移、成瘤能力的影响。方法采用免疫组化法检测肺腺癌组织及癌旁组织中FPR1的表达,分析患者临床资料的相关性。采用人肺腺癌细胞A549为分析对象,检测FPR1激动剂甲酰甲硫氨酰(N-formyl methionyl leucyl phenylalanine,f MLP)以及拮抗剂Boc2对细胞迁移的影响;构建裸鼠皮下成瘤模型,绘制肿瘤生长曲线; 2周后处死全部裸鼠,比较各组裸鼠肿瘤平均质量;应用酶联免疫吸附反应(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组裸鼠血清中血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factorC,VEGF-C)的表达水平;应用Western blot检测各组细胞中FPR1、ERK蛋白活性以及各组裸鼠肿瘤中FPR1蛋白的表达变化。结果 50例肺腺癌癌组织中FPR1阳性率为68%(34/50),与肺腺癌TNM分期显著相关;与患者年龄、性别、吸烟史无相关性。与对照组相比,f MLP能显著促进癌细胞的迁移能力、促进FPR1和p-ERK1/2蛋白表达(P均<0. 01),而Boc2则抑制了该作用(P均<0. 01)。与模型组相比,f MLP能促进肿瘤的生长及肿瘤中FPR1、血清中VEGF-C的水平(P均<0. 01),而Boc2则对该效果起抑制作用(P均<0. 05)。结论 f MLP能通过上调FPR1表达促进人肺腺癌细胞的迁移和成瘤能力,可能与ERK信号通路的激活有关及VEGF-C的分泌调控相关;且FPR1的阳性与肺腺癌TNM分期呈显著相关性,提示FPR1表达可能与肺腺癌的发生、发展密切相关。 展开更多
关键词 肺肿瘤 腺癌 甲酰肽受体1 迁移 成瘤能力
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PDCD4对甲状腺癌SW579细胞调亡及成瘤能力的影响 被引量：6
14
作者 谢茂云 黄耀 +1 位作者 杨莉涛 王新根 《海南医学》 CAS 2016年第23期3790-3793,共4页
目的研究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)诱导的对甲状腺癌SW579细胞凋亡效应及抑制成瘤能力的可能作用机制。方法将对数生长期的细胞分为两组,观察组先予以PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激14 h进行细胞的收集,然后加入t PA刺激细胞进行收集。... 目的研究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)诱导的对甲状腺癌SW579细胞凋亡效应及抑制成瘤能力的可能作用机制。方法将对数生长期的细胞分为两组,观察组先予以PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激14 h进行细胞的收集,然后加入t PA刺激细胞进行收集。对照组未加PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激和t PA刺激。应用Annexin V/PI和API等标记,Cyclins/DNA双标流式细胞仪检测甲状腺癌SW579细胞的凋亡及周期特异性,运用RT-PCR的方法检查Caspase-3、Caspase-9活化情况。结果处于静止期的外周血对PDCD4凋亡诱导不敏感,而G1期PDCD4诱导甲状腺癌SW579细胞出现了明显的细胞凋亡。PDCD4诱导的细胞凋亡主要是在细胞周期的G1期发生。观察组的Caspase-3、Caspase-9 m RNA的表达值分别为(1.12±0.56)、(1.10±0.29),显著高于对照组的(0.82±0.31)、(0.72±0.26),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDCD4诱导的细胞凋亡与甲状腺癌SW579细胞的细胞周期相关,存在G1期细胞周期阻滞的周期特异性,且此过程中发生了Caspase活化,参与细胞凋亡及可能抑制细胞成瘤能力。 展开更多
关键词 程序性细胞死亡因子4 甲状腺癌SW579细胞 细胞凋亡 细胞周期 成瘤能力
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shRNA沉默Survivin基因对人骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响 被引量：2
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作者 段大鹏 秦静 +5 位作者 卫文博 宋启春 李伟伟 段亮 范亚一 弓立群 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第22期3555-3558,共4页
目的:研究Survivin-shRNA对骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响,并探讨其可能的机制。方法:采用皮下异种移植法构建裸鼠骨肉瘤模型,骨肉瘤MG-63细胞培养成功后,重组腺病毒Survivin-shRNA转染。细胞以1∶5比例进行传代,挑选稳定转染的MG-63... 目的:研究Survivin-shRNA对骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响,并探讨其可能的机制。方法:采用皮下异种移植法构建裸鼠骨肉瘤模型,骨肉瘤MG-63细胞培养成功后,重组腺病毒Survivin-shRNA转染。细胞以1∶5比例进行传代,挑选稳定转染的MG-63细胞并扩增,Survivin-shRNA组为Survivin-shRNA转染的细胞,GFP组和CON组为阴性对照组。每3天用卡尺测定肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。颈椎脱臼法处死裸鼠,取骨肉瘤标本称重。Western blot法检测SUV、VEGF、PCNA及CAS-3蛋白的表达。结果:腺病毒介导的RNA干扰构建Survivin-shRNA载体,Survivin-shRNA组转染细胞的胞质及胞核可见绿色荧光,并伴有少量小颗粒物质。骨肉瘤生长曲线显示,与CON和GFP组相比,Survivin-shRNA组的肿瘤增长缓慢,表明Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤的生长。肿瘤的重量结果显示,Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤重量的增加。Western blot结果显示,SUV、VEGF的表达在Survivin-shRNA组中明显低于对照组,而CAS-3表达相反。结论:Survivin-shRNA可抑制骨肉瘤细胞增殖及成瘤能力,其机制可能是通过调节SUV、VEGF、CAS-3的表达及抑制肿瘤新生血管形成等来实现的。 展开更多
关键词 骨肉瘤 SURVIVIN RNA干扰 成瘤能力
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Xklp2靶蛋白对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制研究 被引量：7
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作者 杨忠信 李晓宇 +2 位作者 蔡静 黄志昂 张双林 《实用医院临床杂志》 2018年第2期4-8,共5页
目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法慢病毒感染肺癌细胞A549,以感染TPX2小干扰RNA(siRNA TPX2)和siRNA阴性对照慢病毒的细胞作为siRNA TPX2组和siRNA-NC组,同时以不做处理的细胞为Control组,RT-PCR和We... 目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法慢病毒感染肺癌细胞A549,以感染TPX2小干扰RNA(siRNA TPX2)和siRNA阴性对照慢病毒的细胞作为siRNA TPX2组和siRNA-NC组,同时以不做处理的细胞为Control组,RT-PCR和Western blot检测感染后细胞中TPX2水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,将各组细胞接种到裸鼠皮下,检测各组裸鼠肿瘤体积和重量,Western blot检测肿瘤组织中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、TPX2、p53水平。结果 siRNA-NC组细胞中TPX2 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率及Cleaved Caspase-3、TPX2、p53水平与Control组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA TPX2组细胞中TPX2mRNA和蛋白均明显低于Control组(P<0.05)。siRNA TPX2组细胞增殖活性明显降低,凋亡率明显升高,与Control组比较差异有统计学意义(P<0.05)。接种siRNA TPX2组细胞的裸鼠肿瘤体积和重量均低于Control组,而肿瘤组织中Cleaved Caspase-3、p53水平均高于Control组,TPX2水平低于Control组(P<0.05)。结论下调TPX2抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞裸鼠成瘤能力,这可能与促进p53表达和促进Caspase-3活化有关。 展开更多
关键词 Xklp2靶蛋白 肺癌 裸鼠成瘤 凋亡
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PRPS2对肺癌细胞体外生长、增殖和体内成瘤的影响及其机制 被引量：2
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作者 顾鸿莉 宋卫峰 +2 位作者 王静珏 蔡讯 李琦 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第32期21-24,共4页
目的探讨磷酸核糖焦磷酸合成酶2(PRPS2)对肺癌细胞体外生长、增殖和体内成瘤的影响及其机制。方法将体外培养的肺癌A549细胞随机分为对照组、Lenti-sh1组、Lenti-sh2组,分别感染scramble序列慢病毒及能够沉默PRPS2基因表达的慢病毒Lenti... 目的探讨磷酸核糖焦磷酸合成酶2(PRPS2)对肺癌细胞体外生长、增殖和体内成瘤的影响及其机制。方法将体外培养的肺癌A549细胞随机分为对照组、Lenti-sh1组、Lenti-sh2组,分别感染scramble序列慢病毒及能够沉默PRPS2基因表达的慢病毒Lenti-sh1、Lenti-sh2,作用时间均为12 h,结果显示Lenti-sh1组、Lenti-sh2组PRPS2 mRNA及蛋白表达均低于对照组(P均<0.05),说明慢病毒可抑制A549细胞PRPS2基因表达,该分组及处理方法可用于以下研究。采用克隆形成实验检测三组细胞形成的克隆数量,CCK-8法检测细胞增殖能力(吸光度值),流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法及Western blotting法检测Wnt信号通路中的关键基因β-连环蛋白(β-catenin)、APC、糖原合成酶激酶3β(Gsk-3β)mRNA和蛋白表达。将18只裸鼠随机分成3组,分别接种对照组、Lenti-sh1组、Lenti-sh2组细胞,每组6只;接种6周时剥离瘤体称重,并测量体积。结果 Lenti-sh1组、Lenti-sh2组细胞形成的克隆数量均少于对照组(P均<0.05);培养72、96 h时,Lenti-sh1组、Lenti-sh2组细胞吸光度值均低于同时间点对照组(P均<0.05)。Lenti-sh1组、Lenti-sh2组G_0/G_1期细胞比例均高于对照组,S期、G_2/M期细胞比例均低于对照组(P均<0.05)。Lenti-sh1组、Lenti-sh2组Wnt信号通路中的关键基因β-catenin、APC mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组,Gsk-3βmRNA和蛋白相对表达量均高于对照组(P均<0.05)。接种对照组细胞的裸鼠瘤体质量及体积均大于接种Lenti-sh1组、Lenti-sh2组细胞的裸鼠(P均<0.05)。结论沉默PRPS2基因可抑制肺癌细胞的体外生长、增殖,减弱体内成瘤能力;调控Wnt信号通路可能是其作用机制。 展开更多
关键词 肺癌 磷酸核糖焦磷酸合成酶2 细胞增殖 细胞周期 体外成瘤能力
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大鼠骨髓来源肝干细胞的成瘤性 被引量：2
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作者 侯建彬 刘超 +1 位作者 余先焕 许磊波 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1015-1018,共4页
背景:通过动员自身或移植外来的骨髓来源肝干细胞可促进肝再生,但是,在大规模临床应用前,其安全性需要进一步研究。目的:采用含体积分数5%淤胆血清的培养基诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝干细胞方向分化,将这些骨髓来源肝干细胞接种到裸... 背景:通过动员自身或移植外来的骨髓来源肝干细胞可促进肝再生,但是,在大规模临床应用前,其安全性需要进一步研究。目的:采用含体积分数5%淤胆血清的培养基诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝干细胞方向分化,将这些骨髓来源肝干细胞接种到裸鼠体内,观察其是否具有成瘤性。方法:用含体积分数5%淤胆血清的培养基培养大鼠骨髓间充质干细胞;以免疫荧光法检测白蛋白、甲胎蛋白及细胞角皮素18在诱导后细胞的表达;以糖原染色及尿素合成检测细胞功能。将培养14d的大鼠骨髓来源肝干细胞接种于裸鼠皮下,观察局部有无新生物形成。结果与结论:用含体积分数5%淤胆血清的培养基培养大鼠骨髓间充质干细胞,4d后出现细胞集落,细胞为圆形;7d后集落变大,其周围开始出现多角形细胞;培养14d后可见细胞呈多角形和排列成铺路石样,免疫荧光染色发现这些细胞表达角皮素18、甲胎蛋白和白蛋白,糖原染色显示细胞内有糖原颗粒;培养第12～15天的培养液中尿素氮浓度逐渐升高。经诱导的大鼠骨髓来源的肝干细胞接种到裸鼠皮下,30d后局部未见新生物形成,组织结构未见异常。结果提示用体积分数5%淤胆血清培养基诱导的大鼠骨髓源性肝干细胞可能无成瘤性。 展开更多
关键词 大鼠 骨髓间充质干细胞 肝干细胞 成瘤性 细胞移植
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葡萄胎病理相关新基因F10与绒癌细胞系JEG-3成瘤性的关系 被引量：2
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作者 苏晓华 庞战军 苏桂栋 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期707-711,共5页
目的：探讨葡萄胎病理相关新基因F10与绒癌细胞系JEG-3裸鼠皮下成瘤的关系。方法通过细胞转染技术及RNA干扰技术，分别建立和筛选出F10基因稳定过表达及沉默的绒癌细胞系JEG-3。取SPF级裸鼠（4~5周龄）30只，随机均分为JEG-3 F10过表达... 目的：探讨葡萄胎病理相关新基因F10与绒癌细胞系JEG-3裸鼠皮下成瘤的关系。方法通过细胞转染技术及RNA干扰技术，分别建立和筛选出F10基因稳定过表达及沉默的绒癌细胞系JEG-3。取SPF级裸鼠（4~5周龄）30只，随机均分为JEG-3 F10过表达组、JEG-3 F10沉默组、JEG-3未处理组（n=10），分别接种F10基因过表达的JEG-3细胞、F10基因沉默的JEG-3细胞和未处理的JEG-3细胞株5×107个于颈背部皮下。接种后每3~4 d称量裸鼠质量观察，记录肿瘤发生时间，观察皮下肿瘤的生长情况。绘制在体肿瘤生长曲线，计算各组裸鼠的成瘤率。结果3组的成瘤率均为100%（10/10）。JEG-3 F10过表达组、JEG-3 F10沉默组、JEG-3未处理组的成瘤时间分别为6.2±0.78、7±2.49、6.3±0.67 d，组间比较无统计学差异（F=0.781，P=0.468）。JEG-3 F10过表达组肿瘤的在体生长速度较JEG-3 F10沉默组、JEG-3未处理组增快，差异有统计学意义（P〈0.05），JEG-3 F10未处理组肿瘤的在体生长速度较JEG-3 F10沉默组快（P〈0.05）。细胞接种5周后处死小鼠，取瘤组织称重，JEG-3 F10过表达组、JEG-3 F10沉默组、JEG-3未处理组肿瘤重量分别为571.1±221.10 mg、136.2±66.25 mg、354.5±116.23 mg，组间比较存在统计学差异（F=21.199，P=0.000）。结论 F10基因与绒癌细胞系JEG-3的增殖调节有关，可增强JEG-3细胞系在裸鼠体内的致瘤性。 展开更多
关键词 绒癌 F10基因 JEG-3细胞 成瘤性试验
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基于“单细胞移植-成瘤性验证”模式鉴定肝癌干细胞 被引量：2
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作者 贾微 岑妍慧 +4 位作者 包鹃 杨瑞 何国珍 吴晓君 李熠毅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第9期1324-1328,共5页
背景:目前尚无较有效的肝癌干细胞的鉴定方法。目的:探索更为简单有效并适用于鉴定肝癌肿瘤细胞株中干细胞的方法。方法:首先利用单细胞分离技术获得单个细胞,逐个种入96孔板中,经筛选获得单细胞克隆(即成瘤性克隆)来源的细胞亚株,细胞... 背景:目前尚无较有效的肝癌干细胞的鉴定方法。目的:探索更为简单有效并适用于鉴定肝癌肿瘤细胞株中干细胞的方法。方法:首先利用单细胞分离技术获得单个细胞,逐个种入96孔板中,经筛选获得单细胞克隆(即成瘤性克隆)来源的细胞亚株,细胞亚株移植到裸鼠前肢腋下观察其成瘤作用。结果与结论:利用单细胞分离技术获得单细胞/孔的孔数为371个,成功率为96.4%;按照单细胞克隆的生长情况,筛选获得的来源于成瘤性克隆的细胞亚株移植到裸鼠前肢腋下,成瘤率为100%。结果证实"单细胞移植-成瘤性验证"具有鉴定肝癌干细胞的有效性,为后续的研究奠定技术和方法基础。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 肿瘤干细胞 组织工程 干细胞 单细胞移植-成瘤性 肝癌干细胞 干细胞鉴定 HEPG2肝癌细胞 裸鼠 细胞移植 国家自然科学基金
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