目的:利用成簇规律性间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)相关蛋白9(CRISP associated protein 9,Cas9)技术构建微小核糖核酸-551b(miR-551b)基因敲除小鼠模型。方法:选择健康C57BL/6...目的:利用成簇规律性间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)相关蛋白9(CRISP associated protein 9,Cas9)技术构建微小核糖核酸-551b(miR-551b)基因敲除小鼠模型。方法:选择健康C57BL/6J小鼠,针对miR-551b外显子1区域,设计导向RNA(guide RNA,gRNA),构建Cas9载体质粒,将体外转录的Cas9 RNA及gRNA显微注射入小鼠的受精卵并体外培养。将培养合格的胚胎移植到代孕小鼠的输卵管中,待小鼠生育后得到F0代小鼠,使用基因测序确定基因敲除情况,与野生型小鼠繁育后,得到F1代杂合小鼠,F1代小鼠经自交繁育获得F2代小鼠,F3代小鼠由F2代纯合小鼠自交获得,采用电泳鉴定小鼠基因型,RT-PCR检测F3代小鼠组织miR-551b的表达。结果:利用CRISPR/Cas9技术构建模型小鼠得到F0代小鼠,通过测序筛选出缺失目标序列的F0代杂合子小鼠。与WT小鼠繁育后,琼脂糖凝胶电泳及测序筛选出F1代杂合小鼠,同样的方法鉴定并获得F2、F3代基因敲除小鼠,获取F3代纯合小鼠的心脏及下腔静脉样本,RT-PCR结果证实F3代纯合小鼠miR551b表达明显低于WT小鼠(P<0.05),成功敲除miR-551b基因。结论:通过CRISPR-Cas9技术成功构建miR⁃155基因敲除小鼠模型并稳定遗传,为进一步研究提供了有利条件。展开更多
目的:探讨孕晚期孕妇生殖道定植及侵袭性感染患儿的B族链球菌(group B Streptococcus,GBS)规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)分布及其与多位点序列分型(multilocus sequen...目的:探讨孕晚期孕妇生殖道定植及侵袭性感染患儿的B族链球菌(group B Streptococcus,GBS)规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)分布及其与多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、耐药基因的关系。方法:回顾性收集2017年1月至2022年1月山西医科大学附属儿童医院(山西省妇幼保健院)收治的孕晚期孕妇定植GBS及GBS侵袭性感染患儿临床分离的84株GBS菌株(包括侵袭性菌株17株、定植菌株67株),检测其CRISPR、MLST、耐药表型及耐药基因。采用χ^(2)检验或Fisher精确概率法进行统计分析,并采用MEGA11构建发育树图。结果:84株中共有10种ST型别,最常见的是ST10(46.4%)。GBS对青霉素敏感,对红霉素和克林霉素的耐药率分别为75.0%和73.8%;17株GBS侵袭性菌株中,ST10型对红霉素、克林霉素以及左氧氟沙星耐药率达100%。62株检出CRISPR1基因,阳性率为73.8%;CRISPR1阳性菌株中ST10占比显著高于CRISPR1阴性菌株[56.5%(35/62)与18.2%(4/22),χ^(2)=9.56,P=0.002];CRISPR1阳性菌株中检出ermB、gyrA、parC比例明显高于阴性菌株[分别为54.8%(34/62)与22.7%(5/22)、67.7%(42/62)与36.4%(8/22)及71.0%(44/62)与36.4%(8/22),χ^(2)值分别为6.73、6.64及8.25,P值均<0.05],而ermA的比例低于阴性菌株[6.5%(4/62)与31.8%(7/22),χ^(2)=7.09,P=0.008]。结论:ST10是孕妇生殖道定植GBS及婴儿侵袭性GBS感染的主要基因型;GBS对青霉素敏感;在CRISPR1阳性菌株中ST10型GBS占优势;CRISPR1与部分耐药基因的传播相关。展开更多
文摘目的:探讨孕晚期孕妇生殖道定植及侵袭性感染患儿的B族链球菌(group B Streptococcus,GBS)规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)分布及其与多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、耐药基因的关系。方法:回顾性收集2017年1月至2022年1月山西医科大学附属儿童医院(山西省妇幼保健院)收治的孕晚期孕妇定植GBS及GBS侵袭性感染患儿临床分离的84株GBS菌株(包括侵袭性菌株17株、定植菌株67株),检测其CRISPR、MLST、耐药表型及耐药基因。采用χ^(2)检验或Fisher精确概率法进行统计分析,并采用MEGA11构建发育树图。结果:84株中共有10种ST型别,最常见的是ST10(46.4%)。GBS对青霉素敏感,对红霉素和克林霉素的耐药率分别为75.0%和73.8%;17株GBS侵袭性菌株中,ST10型对红霉素、克林霉素以及左氧氟沙星耐药率达100%。62株检出CRISPR1基因,阳性率为73.8%;CRISPR1阳性菌株中ST10占比显著高于CRISPR1阴性菌株[56.5%(35/62)与18.2%(4/22),χ^(2)=9.56,P=0.002];CRISPR1阳性菌株中检出ermB、gyrA、parC比例明显高于阴性菌株[分别为54.8%(34/62)与22.7%(5/22)、67.7%(42/62)与36.4%(8/22)及71.0%(44/62)与36.4%(8/22),χ^(2)值分别为6.73、6.64及8.25,P值均<0.05],而ermA的比例低于阴性菌株[6.5%(4/62)与31.8%(7/22),χ^(2)=7.09,P=0.008]。结论:ST10是孕妇生殖道定植GBS及婴儿侵袭性GBS感染的主要基因型;GBS对青霉素敏感;在CRISPR1阳性菌株中ST10型GBS占优势;CRISPR1与部分耐药基因的传播相关。
