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白藜芦醇对类风湿性关节炎患者成纤维样滑膜细胞cGAS-STING信号通路的影响
1
作者 汪陶荣 邵玉宝 +3 位作者 刘楠楠 李文昊 李梦 陈晓宇 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第1期73-78,共6页
目的探究白藜芦醇(Res)对类风湿性关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并初步分析Res抑制FLS释放炎症因子的可能机制。方法体外培养RA患者FLS细胞,采用不同浓度的Res(0、20、40、80、160、320μmol/L)进行处理,12、24 h后CCK-8... 目的探究白藜芦醇(Res)对类风湿性关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并初步分析Res抑制FLS释放炎症因子的可能机制。方法体外培养RA患者FLS细胞,采用不同浓度的Res(0、20、40、80、160、320μmol/L)进行处理,12、24 h后CCK-8法分别检测FLS细胞活力;采用不同浓度的Res(0、40、80、160μmol/L)进行处理FLS细胞24 h后,ELISA法分析FLS细胞分泌的炎症因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot测定细胞中环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)、干扰素刺激因子(STING)蛋白的表达水平;慢病毒感染FLS使其过表达cGAS,将细胞分为Control(对照)组、cGAS组(cGAS过表达)、Res+cGAS组(Res 160μmol/L+cGAS过表达)、Res组(Res 160μmol/L)。Western blot测定各组细胞中STING蛋白的表达水平,CCK-8法检测各组FLS细胞活力,ELISA法检测各组细胞上清液中炎症因子IL-6和TNF-α含量。结果CCK-8实验结果显示,与0μmol/L Res组比较,使用40、80、160μmol/L的Res处理24 h后的三组FLS细胞活力下降(P<0.01);ELISA结果也表明与0μmol/L Res组比较,使用40、80、160μmol/L的Res处理后的三组FLS细胞上清液中IL-6和TNF-α含量也降低(P<0.01)。同时,Western blot结果显示,与0μnmol/L的Res组相比,经过40、80、160μnmol/L的Res处理后的三组FLS细胞中STING和cGAS蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与Control组相比,过表达cGAS后,CGAS组中FLS中STING蛋白表达水平增加(P<0.05),与Res组相比,Res+cGAS组中FLS细胞上清液中炎症因子含量及FLS中STING蛋白表达水平显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论适当剂量的Res能有效减少FLS细胞分泌炎症因子,而这一抑制作用机制可能源于其对cGAS-STING信号传导途径的阻断作用。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 白藜芦醇 cGAS-STING信号通路 白介素-6 肿瘤坏死因子-α
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类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞特征基因TNFAIP6的鉴定及验证
2
作者 雷蕾 吕玉欣 +1 位作者 张晶 陈陵 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第3期234-242,共9页
目的鉴定类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞的特征基因,并验证其对增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库下载4个独立的滑膜组织微阵列转录组测序数据集(GSE1919... 目的鉴定类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞的特征基因,并验证其对增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库下载4个独立的滑膜组织微阵列转录组测序数据集(GSE1919、GSE55235、GSE55457、GSE77298)和1个滑膜细胞单细胞测序数据集(GSE192504),利用差异基因分析、加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)、单细胞测序数据分析等多种生物信息学分析方法鉴定RA成纤维样滑膜细胞的特征基因。利用RT-qPCR和Western blot检测肿瘤坏死因子α诱导蛋白6(TNF alpha induced protein 6,TNFAIP6)在人RA成纤维样滑膜细胞系MH7A体外模拟炎症环境下的表达水平。MH7A转染si-TNFAIP6进行基因沉默,采用CCK-8和Transwell实验检测沉默TNFAIP6对MH7A细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果联合差异基因分析、WGCNA和单细胞测序数据分析,确定了1个RA成纤维样滑膜细胞特征基因(TNFAIP6)。RT-qPCR和Western blot显示,与无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)处理比较,10 ng/mL浓度的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)显著上调MH7A细胞TNFAIP6的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。CCK-8和Transwell实验显示,在MH7A细胞敲低TNFAIP6的表达后,敲低组(si-TNFAIP6)的细胞增殖、迁移和侵袭能力相较于对照组(FAM-si-NC)有显著的降低(P<0.05)。结论TNFAIP6在RA成纤维样滑膜细胞中特异性高表达,促进其增殖、迁移、侵袭能力,可能是RA成纤维样滑膜细胞异常活化的主要贡献者。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 肿瘤坏死因子α诱导蛋白6
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从NF-κB/Bcl-2信号通路调控成纤维样滑膜细胞凋亡角度探讨中医药抑制类风湿关节炎滑膜炎症机制的研究进展 被引量：1
3
作者 陈平 杜小正 +5 位作者 王海东 井维尧 刘翠 李浩林 陶鹏飞 王金磊 《中医研究》 2024年第1期87-91,共5页
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为主要特征的自身免疫性疾病,成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的抗凋亡是导致该病病情发展的主要因素。如何促进FLS凋亡并抑制炎症反应是目前RA治疗和... 类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为主要特征的自身免疫性疾病,成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的抗凋亡是导致该病病情发展的主要因素。如何促进FLS凋亡并抑制炎症反应是目前RA治疗和研究的重点。核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)信号通路在RA发病过程中发挥了关键作用,其与FLS炎症倾向、抗凋亡等密切相关。研究并探讨NF-κB/Bcl-2信号通路调控FLS凋亡的机制及作用,介绍中医药靶向该通路促进FLS凋亡进而抑制RA滑膜炎症的研究现状,旨在为中医药治疗RA的研究提供一定基础。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 滑膜炎症 NF-κB/Bcl-2信号通路 成纤维样滑膜细胞 凋亡 机制
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丹参素对缺氧诱导成纤维样滑膜细胞损伤的影响及作用机制研究
4
作者 杨帆 曹姗 +1 位作者 吕章明 李云海 《世界中医药》 北大核心 2024年第23期3625-3631,共7页
目的:探讨丹参素对缺氧诱导的成纤维样滑膜细胞损伤的作用机制。方法:将大鼠成纤维样滑膜细胞按照简单随机法分为对照组、缺氧组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,检测丹参素对成纤维样滑膜细胞的影响。另取同代大鼠细胞按照简单随机法... 目的:探讨丹参素对缺氧诱导的成纤维样滑膜细胞损伤的作用机制。方法:将大鼠成纤维样滑膜细胞按照简单随机法分为对照组、缺氧组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,检测丹参素对成纤维样滑膜细胞的影响。另取同代大鼠细胞按照简单随机法分为对照组、缺氧组、高剂量组、BAY11-7082组,检测核因子κB p65(NF-κB p65)抑制剂BAY11-7082对成纤维样滑膜细胞损伤的影响。以5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(Edu)法检测各组细胞增殖,蛋白质印迹法检测细胞蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞细胞基质金属蛋白酶(MMP)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达。结果:缺氧组细胞Edu阳性细胞率、增殖细胞核抗原(Ki67)、细胞周期素蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达和MMP-1、MMP-9、MMP-3、VEGF mRNA及磷酸化(p)-NF-κB p65、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8蛋白表达高于对照组;与缺氧组比较,低、中、高剂量组细胞Edu阳性细胞率及Ki67、PCNA、CyclinD1蛋白表达及MMP-1、MMP-9、MMP-3、VEGF mRNA、p-NF-κB p65、HIF-1α、IL-6、IL-8蛋白表达低(P<0.05);与高剂量组比较,BAY11-7082组细胞p-NF-κB p65、HIF-1α、IL-6、IL-8蛋白表达、Edu阳性细胞率及MMP、VEGF mRNA低(P<0.05)。结论:丹参素可能通过抑制NF-κB/HIF-1α信号通路改善缺氧诱导的大鼠成纤维样滑膜细胞损伤。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 丹参素 缺氧 成纤维样滑膜细胞 核因子κB/低氧诱导因子1α信号通路 细胞增殖 细胞损伤 大鼠
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红景天苷调控miR-20a-5p/TIMP2轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和迁移的影响 被引量：2
5
作者 朱光昭 方璐 +1 位作者 严婕 李琴 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期803-809,共7页
目的探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响。方法以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-... 目的探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响。方法以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-20a-5p抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、miR-20a-5p抑制物组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物阴性对照(mimic NC)组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HFLS-RA细胞中miR-20a-5p表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HFLS-RA细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测HFLS-RA细胞增殖;划痕实验检测HFLS-RA细胞迁移;免疫印迹实验(Western blot)检测HFLS-RA细胞中TIMP2、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达;双荧光素酶验证miR-20a-5p与TIMP2的关系。结果与对照组比较,TNF-α组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、吸光度(OD_(450))值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白上调,TIMP2蛋白下调(P<0.05);与TNF-α组相比,红景天苷组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与inhibitor NC组、TNF-α组相比比较,miR-20a-5p抑制物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与红景天苷+mimic NC组、红景天苷组相比,红景天苷+miR-20a-5p模拟物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白表达升高,TIMP2蛋白表达降低(P<0.05)。miR-20a-5p与TIMP2存在靶向调控关系。结论红景天苷可能通过调控miR-20a-5p/TIMP2抑制TNF-α诱导的HFLS-RA细胞增殖、迁移及炎症反应。 展开更多
关键词 红景天苷 miR-20a-5p 金属蛋白酶组织抑制剂-2 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 增殖 迁移
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盐酸小檗碱对强直性脊柱炎患者成纤维样滑膜细胞体外增殖和成骨分化的影响
6
作者 刘跃振 张邦能 +3 位作者 汪丽娟 孟祥云 张磊 李红专 《中医正骨》 2024年第6期10-15,31,共7页
目的:探讨盐酸小檗碱对强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)体外增殖和成骨分化的影响。方法:从AS患者的髋关节滑膜组织中分离培养FLS,经免疫荧光染色鉴定后进行后续实... 目的:探讨盐酸小檗碱对强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)体外增殖和成骨分化的影响。方法:从AS患者的髋关节滑膜组织中分离培养FLS,经免疫荧光染色鉴定后进行后续实验。取第3代FLS,以白细胞介素(interleukin, IL)-17、IL-23预处理,再以0μmol·L^(-1)(空白组)、80μmol·L^(-1)(盐酸小檗碱低剂量组)、120μmol·L^(-1)(盐酸小檗碱中剂量组)、200μmol·L^(-1)(盐酸小檗碱高剂量组)的盐酸小檗碱干预后,采用光学显微镜观察细胞增殖情况,以酶联免疫吸附法检测炎症因子水平和骨稳态调节因子水平,通过茜素红染色观察细胞成骨分化情况。结果:(1)炎症因子水平测定结果。盐酸小檗碱低、中、高剂量组IL-17、IL-23、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平均低于空白组(IL-17:P=0.046,P=0.005,P=0.004;IL-23:P=0.024,P=0.002,P=0.000;IL-6:P=0.012,P=0.000,P=0.000;TNF-α:P=0.012,P=0.004,P=0.001),盐酸小檗碱中、高剂量组IL-17、IL-23、IL-6、TNF-α水平均低于盐酸小檗碱低剂量组(IL-17:P=0.034,P=0.024;IL-23:P=0.020,P=0.000;IL-6:P=0.000,P=0.000;TNF-α:P=0.012,P=0.002),盐酸小檗碱高剂量组IL-17、IL-23、IL-6、TNF-α水平均低于盐酸小檗碱中剂量组(IL-17:P=0.029;IL-23:P=0.014;IL-6:P=0.005;TNF-α:P=0.026)。(2)FLS增殖情况观察结果。光学显微镜观察结果显示,与空白组相比,盐酸小檗碱低、中、高剂量组细胞间隙增大、凋亡细胞数量增加,变化程度呈现剂量依赖性。(3)FLS成骨分化情况观察结果。与空白组相比,盐酸小檗碱低、中、高剂量组茜素红染色程度均降低,而且降低程度呈现剂量依赖性。(4)骨稳态调节因子水平测定结果。盐酸小檗碱低、中、高剂量组Dickkopf相关蛋白1(dickkopf-related protein 1,DKK-1)和核因子κB受体激活蛋白配体(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)水平均低于空白组(DKK-1:P=0.048,P=0.032,P=0.001;RANKL:P=0.046,P=0.021,P=0.001),盐酸小檗碱中、高剂量组DKK-1和RANKL水平均低于盐酸小檗碱低剂量组(DKK-1:P=0.028,P=0.002;RANKL:P=0.047,P=0.002),盐酸小檗碱高剂量组DKK-1和RANKL水平均低于盐酸小檗碱中剂量组(DKK-1:P=0.018;RANKL:P=0.011)。结论:盐酸小檗碱能够抑制AS患者FLS体外增殖,并通过减少FLS分泌骨稳态调节因子RANKL和DKK-1抑制FLS成骨分化,而且其作用具有剂量依赖性。 展开更多
关键词 脊柱炎 强直性 小檗碱 成纤维样滑膜细胞 细胞增殖 细胞分化
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成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞Ahr入核的比较
7
作者 程梦 王燚 +2 位作者 董伟波 魏伟 常艳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第9期1524-1528,共5页
目的探究成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞中Ahr入核的差别。方法用15%的DMEM培养人来源的成纤维样滑膜细胞细胞株MH7A,分别用激光共聚焦显微镜和量化成像流式细胞仪(ImageStreamX MarkⅡ)检测空白对照组、Kyn组和Kyn+... 目的探究成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞中Ahr入核的差别。方法用15%的DMEM培养人来源的成纤维样滑膜细胞细胞株MH7A,分别用激光共聚焦显微镜和量化成像流式细胞仪(ImageStreamX MarkⅡ)检测空白对照组、Kyn组和Kyn+CH223191组对MH7A中Ahr的入核水平,并采用非参数检验比较两种检测技术检测结果的相关性。结果与空白对照组相比,免疫荧光技术和成像流式细胞术测得的MH7A细胞中Kyn组和Kyn+CH223191组Ahr入核能力增加(P<0.05),两种实验方法测得的三组结果相关性良好,R 2值分别是0.8638、0.9287和0.9018,差异有统计学意义(P<0.05)。结论相较于免疫荧光技术的操作和结果,成像流式细胞术数据处理比较复杂,但所得结果精确度高,避免了实验者的主观性,减少实验误差。 展开更多
关键词 免疫荧光技术 成像流式细胞术 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 芳香烃受体 入核 相关性
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独活寄生汤对TNF-α诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡和炎症的影响 被引量：3
8
作者 吴婧若 步亚男 +3 位作者 岳进茹 陈佳 王桂宇 张育敏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1665-1673,共9页
目的探究独活寄生汤含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、凋亡和炎症的影响及作用机制。方法将MH7A细胞分为正常组(10%空白血清)、模型组(10μg·L^(-1) TNF-α+10%空白血清)、... 目的探究独活寄生汤含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、凋亡和炎症的影响及作用机制。方法将MH7A细胞分为正常组(10%空白血清)、模型组(10μg·L^(-1) TNF-α+10%空白血清)、独活寄生汤低(10μg·L^(-1) TNF-α+2.5%含药血清+7.5%空白血清)、中(10μg·L^(-1) TNF-α+5%含药血清+5%空白血清)、高(10μg·L^(-1) TNF-α+10%含药血清)剂量组共5组;MTT法筛选独活寄生汤含药血清给药浓度;EdU染色检测细胞增殖情况;免疫荧光染色检测增殖标志物Ki67表达情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中IFN-γ、IL-4、IL-6和IL-10的含量;RT-qPCR和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常组比较,模型组细胞增殖水平明显上升,凋亡水平明显减弱,IFN-γ和IL-6的含量升高,IL-4和IL-10的含量减少,TLR4/MyD88/NF-κB信号通路被激活;经独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组干预后,均能有效改善细胞异常增殖情况,增强细胞凋亡,抑制炎性反应和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活。结论独活寄生汤含药血清能够抑制TNF-α诱导的RA-FLS异常增殖和促炎因子的分泌,增强细胞凋亡和抗炎水平,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 独活寄生汤 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 增殖 凋亡 炎症因子 TLR4/MyD88/NF-κB信号通路
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RAP1B对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞生物学行为的影响研究
9
作者 张韵格 张可悦 +3 位作者 黄娴倩 陈吉 黄佳丽 陈勇 《中华临床免疫和变态反应杂志》 CAS 2024年第5期432-438,共7页
目的探讨RAP1B对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-1ike synoviocyte,FLS)增殖、迁移以及炎症因子分泌能力的影响。方法通过构建RAP1B过表达及干扰表达的慢病毒载体,转染至人RA成纤维样滑... 目的探讨RAP1B对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-1ike synoviocyte,FLS)增殖、迁移以及炎症因子分泌能力的影响。方法通过构建RAP1B过表达及干扰表达的慢病毒载体,转染至人RA成纤维样滑膜细胞(MH7A),分别采用CCK8法、划痕实验、Transwell-迁移实验及ELISA法,对MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力进行检测。结果RAP1B表达上调后,MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力均明显增强(均P<0.01);RAP1B表达下调后,MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力均明显减弱(均P<0.05)。结论RAP1B具有促进RA-FLS增殖、迁移及炎症因子分泌的能力。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 RAP1B
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芒果苷抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移及炎性因子的表达 被引量：1
10
作者 胡梦凡 颜秋慧 +5 位作者 邓梦然 梁美美 梁亮 易思思 邓家刚 运晨霞 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第11期1690-1695,共6页
背景:芒果苷是一种从芒果叶、树皮、根中提取的双苯吡酮类化合物,前期研究表明芒果苷可以通过NF-κB、JAK/STAT等转录因子的活化发挥抗全身性炎症作用。目的:探讨芒果苷对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast... 背景:芒果苷是一种从芒果叶、树皮、根中提取的双苯吡酮类化合物,前期研究表明芒果苷可以通过NF-κB、JAK/STAT等转录因子的活化发挥抗全身性炎症作用。目的:探讨芒果苷对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synovial cells,RA-FLS)增殖、迁移和炎症因子表达的影响及机制。方法:RA-FLS分为空白组、R848(TLR7/8激动剂)刺激组、芒果苷低、中、高浓度组(2,4,8μg/mL)、阳性对照组(Cu-CPT8,TLR8通路抑制剂)。CCK-8法检测不同质量浓度芒果苷对RA-FLS毒性的影响并筛选最终细胞用药质量浓度,细胞克隆形成实验检测RA-FLS的增殖能力,划痕实验及Transwell迁移实验检测RA-FLS的迁移能力,qRT-PCR检测RA-FLS中白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果与结论:①与空白组比较,2-10μg/mL的芒果苷干预组对RA-FLS活力有抑制趋势,但差异不显著(P>0.05),说明对RA-FLS的毒性影响很小;②与R848刺激组比较,芒果苷低、中、高浓度组RA-FLS克隆数、划痕愈合率及迁移细胞数均降低(P<0.01);芒果苷中浓度和高浓度组白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子αmRNA的表达降低(P<0.01);③与R848刺激组比较,阳性对照组细胞克隆数、划痕愈合率及迁移细胞数以及白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);白细胞介素1βmRNA表达水平无明显差异;④结果表明,芒果苷可能通过TLR7/8信号通路抑制RA-FLS增殖、迁移以及炎症因子表达发挥抗类风湿关节炎的作用。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 芒果苷 细胞因子 增殖 迁移
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兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞分离培养方法的研究 被引量：1
11
作者 陈芳 朱以良 +4 位作者 张传成 刘琴 喻晶 杨丽君 张宜 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2024年第1期14-18,25,共6页
目的在传统细胞组织块培养方法的基础上进行改进,建立一种简单、可重复性操作的兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞分离培养方法。方法通过手术诱导建立兔膝骨关节炎模型,在无菌条件下,快速取出兔膝骨关节炎的滑膜组织,经过冲洗处理后剪成一... 目的在传统细胞组织块培养方法的基础上进行改进,建立一种简单、可重复性操作的兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞分离培养方法。方法通过手术诱导建立兔膝骨关节炎模型,在无菌条件下,快速取出兔膝骨关节炎的滑膜组织,经过冲洗处理后剪成一定大小碎片,用无菌滤纸吸净组织上附着的水分,接种在培养皿后,进行观察、换液、传代、拍照。将原代培养的细胞传至第三代细胞接种于96孔板中,采用噻唑蓝(MTT)法分别在不同时间梯度检测各孔对应吸光度,制作生长曲线;采用免疫荧光染色法观察细胞中波形蛋白的表达情况。结果培养的细胞为典型的梭形,符合成纤维样滑膜细胞的生长形态特征,免疫荧光染色显示波形蛋白强表达。结论改进后的组织块培养方法简单、操作可重复性强,可以获得大量兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞,为后续膝骨关节炎的机理研究提供了大量细胞支持。 展开更多
关键词 膝骨关节炎 兔 成纤维样滑膜细胞 改良组织块法
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lncRNA SNHG16通过miR-182-5p/PPARG轴调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和侵袭
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作者 周文煜 陈文莉 +1 位作者 甘文渊 申江曼 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1147-1152,共6页
目的:确定小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)在类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及其在RA发展中的作用。方法:RT-qPCR用于测量SNHG16、miR-182-5p和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG) mRNA表达;双荧光素酶实验用于检测... 目的:确定小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)在类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及其在RA发展中的作用。方法:RT-qPCR用于测量SNHG16、miR-182-5p和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG) mRNA表达;双荧光素酶实验用于检测SNHG16、miR-182-5p和PPARG mRNA的相互作用关系;EdU和Transwell用于检测细胞增殖、侵袭;Western blot用于检测PPARG蛋白水平。结果:RA滑膜组织和人RA-FLS系(HFLS-RA)中SNHG16和PPARG mRNA表达上调,miR-182-5p表达下调。SNHG16负靶向调节miR-182-5p表达,正调节PPARG(miR-182-5p靶标)表达。沉默SNHG16抑制HFLS-RA增殖、侵袭;下调miR-182-5p部分逆转SNHG16沉默对细胞增殖、侵袭的抑制作用;过表达PPARG部分逆转miR-182-5p上调对HFLS-RA增殖、侵袭的抑制作用。结论:沉默SNHG16靶向miR-182-5p/PPARG轴抑制HFLS-RA的增殖、侵袭。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 lncRNA SNHG16 miR-182-5p PPARG
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人参皂苷CK对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡/自噬的调控作用
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作者 王颖 张韩梦 +6 位作者 鲍秀蓉 王亚婷 江婷婷 温婧依 刘勤伟 宋宜宁 魏芳 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第3期332-339,共8页
目的基于PKM2/mTOR信号通路探讨人参皂苷CK(ginsenoside compound K,CK)对大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡/自噬的调控作用和机制。方法将SD大鼠分为正常组(n=10)、模型组(n=10),CK组(n=10)和甲氨蝶呤(meth... 目的基于PKM2/mTOR信号通路探讨人参皂苷CK(ginsenoside compound K,CK)对大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡/自噬的调控作用和机制。方法将SD大鼠分为正常组(n=10)、模型组(n=10),CK组(n=10)和甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)组(n=10)。大鼠右后足跖皮内注射10 mg/mL弗氏完全佐剂(complete Freund adjuvant,CFA)0.1 mL,制备大鼠AA模型。注射免疫后第15天开始,CK组每天灌胃给药80 mg/kg CK,连续18 d;MTX组每天灌胃给药0.5 mg/kg MTX,每3 d给药一次。每3 d记录大鼠体质量,全身关节炎评分,关节炎指数和足爪肿胀度;计算脾脏和胸腺指数;Western blot检测FLS凋亡和自噬相关蛋白及PKM2和mTOR通路相关蛋白的表达;过表达质粒试剂盒检测FLS自噬流;流式细胞术检测FLS凋亡。结果与AA组比较,CK组和MTX组全身炎症评分、关节炎指数、足爪肿胀度和脾脏指数明显降低(P<0.05),Bax、p62和p-mTOR/mTOR的蛋白水平显著上调(P<0.05),Beclin1、Bcl-2和PKM2的蛋白水平显著下调(P<0.05),FLS凋亡率升高(P<0.05),自噬小体减少。MTX组和CK组全身炎症评分、关节炎指数、足爪肿胀度和脾脏指数的差异无统计学意义(P>0.05)。结论CK可能通过PKM2/mTOR信号通路调节大鼠FLS凋亡/自噬缓解AA大鼠关节炎症。 展开更多
关键词 人参皂苷CK 成纤维样滑膜细胞 佐剂性关节炎 PKM2/mTOR信号通路 自噬 凋亡
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骆驼蓬草的化学成分及抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性
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作者 展俊平 王慧莲 +4 位作者 黄硕 谷慧敏 孟庆良 苗喜云 周子朋 《中药材》 北大核心 2024年第8期1975-1980,共6页
目的:研究骆驼蓬草的化学成分及体外抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶对骆驼蓬草提取物进行分离鉴定。通过MTT法测试化合物体外抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性。结果:从骆驼蓬草中分... 目的:研究骆驼蓬草的化学成分及体外抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶对骆驼蓬草提取物进行分离鉴定。通过MTT法测试化合物体外抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性。结果:从骆驼蓬草中分离得到21个化合物,分别鉴定为:刺芒柄花素(1)、异香草酸(2)、香草酸(3)、香草醛(4)、dihydroisoquinolone(5)、草夹竹桃苷(6)、schizandriside(7)、三裂鼠尾草素(8)、脱氢双没食子酸(9)、lysidicichin(10)、木香内酯(11)、去氢木香内酯(12)、puberulin(13)、4-甲氧基桂皮酸(14)、3,4-二甲氧基桂皮酸(15)、meridinol(16)、neroplomacrol(17)、isoshonanin(18)、fraxidin(19)、calanthoside(20)、digiferruginol(21)。化合物5、17、20对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞具有抑制作用。结论:以上化合物均为首次从该植物中分离得到。化合物5、17、20具有体外抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性。 展开更多
关键词 骆驼蓬草 化学成分 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞
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青藤碱联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响 被引量：18
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作者 孙玥 丁从珠 +3 位作者 姚瑶 冯学兵 孙凌云 汪悦 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1107-1111,共5页
目的观察青藤碱(sinomenine,SIN)联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)对体外培养类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖、凋亡及其破骨细胞分化因子表达的影响。方法从RA患者... 目的观察青藤碱(sinomenine,SIN)联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)对体外培养类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖、凋亡及其破骨细胞分化因子表达的影响。方法从RA患者滑膜组织分离培养FLS,分为SIN1、2、3、4组,MTX1、2、3、4组,联合1、2、3、4组,分别加入0.001、0.010、0.100、1.000mg/mLSIN,0.001、0.010、0.100、1.000mg/mLMTX,0.001mg/mLSIN+0.001mg/mLMTX,0.010mg/mLSIN+0.010mg/mLMTX,0.100mg/mLSIN+0.100mg/mLMTX,1.000mg/mLSIN+1.000mg/mLMTX的含药培养基,并以未加药物的培养基作为对照组,共13组,每组设3个复孔。采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;半定量RT-PCR检测FLSNF-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA表达水平。结果与对照组比较,各药物组RAFLS增殖OD值均降低,联合3组RAFLS凋亡OD值、OPGmRNA表达升高,RANKLmRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与联合3组比较,SIN3组及MTX3组RAFLS增殖OD值升高(P<0.05)。结论 SIN与MTX联合对RAFLS具有协同抑制效应,这可能是二者联用抑制RA骨破坏的机制之一。 展开更多
关键词 青藤碱 甲氨蝶呤 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 增殖 凋亡
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青藤碱对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MyD88、TRAF-6表达的影响 被引量：24
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作者 张洪长 刘明昕 +3 位作者 张莹 王恩鹏 陈港 姜鸿远 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期485-489,共5页
目的:探讨青藤碱(Sinomenine,SIN)对TLR信号转导通路及髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor88,My D88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumor necrosis factor receptor associated factor-6,TRAF-6)表达的影响,阐明SIN抑制类... 目的:探讨青藤碱(Sinomenine,SIN)对TLR信号转导通路及髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor88,My D88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumor necrosis factor receptor associated factor-6,TRAF-6)表达的影响,阐明SIN抑制类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)增生导致RA软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形的作用机制。方法:体外培养RA-FLS细胞,分为对照组与(0.125、0.25、0.5、1 mmol/L)SIN组,通过检测各组细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,确定体外用药最佳药物浓度;CCK-8法检测0.5 mmol/L SIN组的细胞增殖率;荧光定量PCR法测定对照组与0.5 mmol/L SIN组My D88和TRAF-6基因表达;Western blot法检测对照组与0.5 mmol/L SIN组My D88和TRAF-6蛋白表达。结果:SIN各组ALP活性均低于对照组,其中以0.5 mmol/L SIN组的ALP活性为最低(P<0.01)。CCK-8法检测,0.5 mmol/L SIN组RA-FLS细胞增殖率明显低于对照组(P<0.01),SIN诱导第4天细胞增殖率最高,进入平台期,之后细胞的增殖率开始下降。荧光定量PCR和Western blot法检测,0.5 mmol/L SIN组的My D88和TRAF-6基因及蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:SIN通过对TLR信号转导通路的影响有效地抑制RA-FLS细胞内My D88和TRAF-6的表达,这可能是其治疗RA防止软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形发生的重要分子机制之一。 展开更多
关键词 青藤碱 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 髓样分化因子88 肿瘤坏死因子受体相关因子6
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白芍总苷对IL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞功能的影响 被引量：25
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作者 常艳 魏伟 +1 位作者 张磊 徐红梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期185-188,共4页
目的研究白芍总苷(TGP)对rIL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并探讨其部分机制。方法鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)诱导大鼠胶原性关节炎(CIA);MTT法检测FLS的增殖反应;放射免疫法(RIA)测定FLS产生PGE2和cAMP的水平。结果在rI... 目的研究白芍总苷(TGP)对rIL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并探讨其部分机制。方法鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)诱导大鼠胶原性关节炎(CIA);MTT法检测FLS的增殖反应;放射免疫法(RIA)测定FLS产生PGE2和cAMP的水平。结果在rIL-1α(0.01、0.1、1、10μg.L-1)和1μg.L-1rIL-1α(3、6、12、24h)体外刺激下,CIA大鼠FLS产生的PGE2和cAMP水平均升高;TGP(2.5、12.5、62.5、125、250mg.L-1)体外给药可不同程度地抑制FLS的增殖反应和PGE2产生,而进一步升高cAMP水平。结论在不同浓度同一时间和同一浓度不同时间的rIL-1α体外刺激下,FLS产生PGE2和cAMP水平均升高;TGP体外作用FLS可抑制其增殖和产生PGE2,进一步升高cAMP的水平。 展开更多
关键词 胶原性关节炎 成纤维样滑膜细胞 白芍总苷 rIL-1α cAMP
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苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响 被引量：22
18
作者 王霞 杨健 +5 位作者 宋菲 董莉 刘亭 郑林 马雪 李勇军 《中国药房》 CAS 北大核心 2017年第28期3949-3952,共4页
目的:研究苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位(CADF)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响,探讨CADF抗RA的作用机制。方法:将MH7A细胞分为空白组、TNF-α模型组、甲氨蝶呤组... 目的:研究苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位(CADF)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响,探讨CADF抗RA的作用机制。方法:将MH7A细胞分为空白组、TNF-α模型组、甲氨蝶呤组(阳性对照,20 mg/L)和CADF不同质量浓度组(50、100、200、400 mg/L),除空白组外,其余各组均以50μg/L TNF-α刺激活化MH7A细胞。以TNF-α与相应药物的混合液共同作用24 h后,检测细胞的增殖情况和培养液中一氧化氮(NO)、前列腺素E_2(PGE_2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的含量。结果:与空白组比较,TNF-α模型组细胞增殖活性显著增强(P<0.01),培养液中NO、PGE2、IL-1β、IL-6含量显著增加(P<0.01);与TNF-α模型组比较,各给药组细胞的增殖均受到显著抑制(P<0.05或P<0.01),培养液中NO、PGE2、IL-1β、IL-6含量均显著减少(P<0.01),且与CADF具有一定的量效关系。结论:CADF可通过抑制TNF-α诱导的MH7A细胞增殖,减少炎症因子NO、PGE2、IL-1β、IL-6的分泌,从而发挥其抗RA的作用。 展开更多
关键词 苗药 黑骨藤 咖啡酰基奎宁酸类部位 人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞MH7A 炎症因子
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汉黄芩素通过激活活性氧簇介导的p38MAPK信号通路诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡 被引量：26
19
作者 王慧莲 孟庆良 +1 位作者 李松伟 王济华 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期890-895,共6页
目的探讨汉黄芩素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)凋亡的影响以及作用机制。方法类风湿关节炎患者关节滑液经原代培养,应用3~5代传代的成纤维样滑膜细胞。按照不同方法处理... 目的探讨汉黄芩素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)凋亡的影响以及作用机制。方法类风湿关节炎患者关节滑液经原代培养,应用3~5代传代的成纤维样滑膜细胞。按照不同方法处理分为6组:空白对照组、低剂量汉黄芩素组(终浓度为20μg/mL)、中剂量汉黄芩素组(终浓度为50μg/mL)、高剂量汉黄芩素组(终浓度为100μg/mL)、100μg/mL汉黄芩素+NAC组、100μg/mL汉黄芩素+SB203580组。MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),DCFH-DA染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot法检测p38MAPK通路相关蛋白的表达。结果与正常对照组相比,各剂量汉黄芩素均能够抑制RA-FLS细胞的增殖,增加其凋亡,降低MMP以及增加ROS水平,激活p38MAPK信号通路,并且呈现剂量依赖性关系。ROS清除剂NAC和p38抑制剂SB203580可以明显降低汉黄芩素诱导的RA-FLS细胞的凋亡,并且5 mmol/L NAC下调汉黄芩素引起的p38MAPK磷酸化。结论汉黄芩素能够诱导RA-FLS细胞凋亡,ROS/p38MAPK信号通路参与了其凋亡的过程。 展开更多
关键词 汉黄芩素 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 细胞凋亡 中医中药
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TWEAK诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞合成MMP-3的实验研究 被引量：10
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作者 夏丽萍 肖卫国 +2 位作者 李俊松 丁爽 鲁静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期46-48,共3页
目的:通过观察TWEAK在不同浓度下对RAFLS诱导合成MMP-3的影响,探讨TWEAK参与类风湿关节炎(RA)关节骨及软骨破坏的相关机制,进而寻求治疗RA的新途径。方法:将rhTWEAK与成纤维样滑膜细胞(FLS)共培养,应用ELISA法检测细胞培养液中MMP-3水平... 目的:通过观察TWEAK在不同浓度下对RAFLS诱导合成MMP-3的影响,探讨TWEAK参与类风湿关节炎(RA)关节骨及软骨破坏的相关机制,进而寻求治疗RA的新途径。方法:将rhTWEAK与成纤维样滑膜细胞(FLS)共培养,应用ELISA法检测细胞培养液中MMP-3水平;用反转录-聚合酶反应(RT-PCR)检测FLS中MMP-3mRNA的表达水平。结果:TWEAK终浓度为50、100μg/L组诱导RAFLS合成MMP-3的水平明显高于对照组,具有显著的统计学意义(P<0.05);TWEAK终浓度为100μg/L诱导RAFLS的MMP-3mRNA表达水平为对照组的1.26倍,具有显著的统计学意义(P<0.05);TNF-α和IL-1β对TWEAK诱导RAFLS合成MMP-3及MMP-3mRNA表达具有协同作用,协同作用组MMP-3的水平及MMP-3mRNA表达水平明显高于单纯TWEAK组,具有显著的统计学意义(P<0.05)。结论:TWEAK通过诱导RAFLS合成MMP-3,直接参与RA的关节损伤,TNF-α和IL-1β在此过程中发挥协同作用。 展开更多
关键词 关节炎 类风湿 TWEAK 成纤维样滑膜细胞 基质金属蛋白酶3
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