钴铬颗粒刺激成骨细胞前体细胞可能加重假体周围的炎症反应（英文） 被引量：5

1

作者 姜建浩 李朋 +5 位作者 杜刚强 刘宏智 王辉 张锴 杨上游 杨淑野 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第26期4101-4108,共8页

背景:关节置换已经成为治疗终末期关节炎的最有效措施。然而,无菌性假体松动是关节置换的主要长期并发症。如何减缓假体松动成为研究的热点。目的:研究在假体松动过程中,不同浓度钴铬颗粒刺激成骨细胞前体细胞的生物学反应。方法:(1)体... 背景:关节置换已经成为治疗终末期关节炎的最有效措施。然而,无菌性假体松动是关节置换的主要长期并发症。如何减缓假体松动成为研究的热点。目的:研究在假体松动过程中,不同浓度钴铬颗粒刺激成骨细胞前体细胞的生物学反应。方法:(1)体外实验:成骨细胞前体细胞以成骨细胞诱导液培养后,用0.3或1.25 g/L的钴铬颗粒进行刺激;(2)体内实验:将钛钉置入严重联合免疫缺陷小鼠(n=18)胫骨近端模拟膝关节置换。术后1周,将经过钴铬颗粒刺激的5×10^5个成骨细胞前体细胞注射入膝关节腔内。稳定对照组(n=6):小鼠胫骨仅置入钛钉,无钴铬颗粒和细胞处理;松动对照组(n=6):小鼠置入钛钉前,向胫骨髓腔注入4×10^4个钴铬颗粒;钴铬颗粒处理组(n=6):小鼠置入钛钉前,向胫骨髓腔注入4×10^4个钴铬颗粒,关节腔内注射用钴铬合金颗粒刺激的成骨细胞前体细胞。结果与结论:(1)体外实验:随着钴铬颗粒浓度的增加,碱性磷酸酶和成骨基因表达呈下降趋势;(2)体内实验:与松动组相比,关节腔内注射经过钴铬颗粒刺激的成骨细胞前体细胞导致假体周围炎性假膜的增厚,骨与假体界面剪切力的减少,骨密度和骨体积的降低,抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数量的增加;(3)结果提示钴铬颗粒抑制成骨细胞前体细胞的生长、成熟以及功能的发挥。钴铬颗粒刺激的成骨细胞前体细胞可能加重假体周围的炎症反应,促进破骨细胞的分化。 展开更多

关键词 成骨细胞前体细胞 破骨细胞 无菌性假体松动 磨损颗粒 金属离子 全关节置换 微型计算机断层扫描 拔钉实验

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金枪鱼鱼骨活性钙对鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)活力和凋亡作用 被引量：3

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作者 耿灵鑫 钱琴莲 +10 位作者 申慧婷 杨铭媛 王小凤 芦晨阳 周君 李晔 苏秀榕 李妍妍 陈义芳 王求娟 袁剑 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期311-314,319,共5页

目的:以金枪鱼骨为原料,制备柠檬酸-苹果酸钙剂(CMC),研究其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的细胞活力、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:在小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)培养液中,分别加入高浓度(1μg/m L)CMC和低浓度... 目的:以金枪鱼骨为原料,制备柠檬酸-苹果酸钙剂(CMC),研究其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的细胞活力、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:在小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)培养液中,分别加入高浓度(1μg/m L)CMC和低浓度(0.1μg/m L)CMC,利用MTT法检测对MC3T3-E1细胞活力的影响,流式细胞仪检测血清饥饿诱导的细胞凋亡。结果:高浓度和低浓度的钙对MC3T3-E1细胞活力均有显著的促进作用,24 h的高钙组的细胞增长率(9.67%)优于低钙组(8.95%);36 h和48 h后低钙组的增长率分别为14.96%和20.33%,明显优于36 h和48 h作用后的高钙组(6.23%和1.73%),两组细胞凋亡率与空白组比较差异较小,且均显著低于对照组(p<0.01)。结论:CMC高钙组和CMC低钙组在一定浓度范围内,能促进MC3T3-E1细胞活力显著增强,并且改善血清饥饿诱导的成骨前体细胞凋亡。 展开更多

关键词 金枪鱼鱼骨 鼠胚胎成骨细胞前体细胞 活性钙 细胞活力和凋亡

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二甲基乙二酰基甘氨酸对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞增殖和分化的影响

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作者 周亮亮 翁土军 +5 位作者 钱隆 聂振国 何莹 张春丽 王自强 李利 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期262-269,共8页

目的 :探讨低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的增殖、成骨分化及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:将MC3T3-E1细胞接种到... 目的 :探讨低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的增殖、成骨分化及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:将MC3T3-E1细胞接种到培养板24h后,实验组培养基中分别加入50μM(50μM组)和200μM(200μM组)的DMOG,对照组加入完全培养液。分别于培养1、3、5d时采用MTT法检测MC3T3-E1细胞增殖情况,5、10d行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及ALP活性检测成骨细胞分化,21d用茜素红染色检测MC3T3-E1细胞钙结节的形成并进行定量分析,采用ELISA法检测MC3T3-E1培养3d情况时上清液中的VEGF蛋白含量,并用实时荧光定量PCR法检测MC3T3-E1细胞VEGF mRNA的相对表达量。结果:培养1d时对照组、50μM组和200μM组的MC3T3-E1的光密度(optical density,OD)值分别为0.041±0.009、0.074±0.019、0.086±0.044,3d时分别为0.123±0.027、0.148±0.020、0.224±0.061,5d时分别为0.297±0.044、0.325±0.084、0.354±0.038,1d、3d时50μM组和200μM组与同时间点对照组比较均有显著性差异(P<0.05),3d时50μM组与200μM组有显著性差异(P<0.05)。培养5d和10d时对照组ALP染色颜色较深,50μM组颜色中等,200μM组颜色较浅;5d时对照组ALP活性为1.943±0.072,50μM组为1.632±0.051,200μM组为1.319±0.065;10d时对照组ALP活性为3.734±0.067,50μM组为3.381±0.070,200μM组为2.831±0.086。三组间同时间点比较均有统计学差异(P<0.05),同组10d时与5d时比较均有统计学差异(P<0.05)。茜素红染色200μM组可见少量红色结节,50μM组可见中等量红色结节,对照组可见大量红色结节;对照组茜素红含量(μg/ml)为56.178±7.940,50μM组为41.922±2.438,200μM组为31.929±1.922,三组间比较均有统计学差异(P<0.05)。培养3d时对照组细胞培养上清液中VEGF蛋白含量(ng/孔)为9.063±0.603,50μM组为12.123±0.870,200μM组为15.540±0.581,三组间比较均有统计学差异(P<0.05);50μM组VEGF mRNA表达量为对照组的1.792±0.067,200μM组为对照组的3.963±0.092,三组间比较均有统计学差异(P<0.05)。结论 :低氧模拟剂DMOG可促进MC3T3-E1细胞增殖和VEGF表达,抑制其成骨分化。 展开更多

关键词 二甲基乙二酰基甘氨酸 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 碱性磷酸酶 血管内皮生长因子 成骨分化

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培哚普利对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1增殖分化的影响

4

作者 薛青 钟奕 周奕 《中国临床药学杂志》 CAS 2019年第4期254-258,共5页

目的研究不同浓度培哚普利对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1增殖、分化的影响,从而探讨培哚普利对成骨细胞的作用。方法体外培养MC3T3-E1细胞,构建细胞实验模型;采用CCK-8法检测不同浓度(0、1×10^(-3)、1×10^(-4)、1×... 目的研究不同浓度培哚普利对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1增殖、分化的影响,从而探讨培哚普利对成骨细胞的作用。方法体外培养MC3T3-E1细胞,构建细胞实验模型;采用CCK-8法检测不同浓度(0、1×10^(-3)、1×10^(-4)、1×10^(-5)、1×10^(-6) mol·L^(-1))培哚普利干预下MC3T3-E1细胞的增殖变化;分别用不同浓度培哚普利干预MC3T3-E1细胞3、5及7 d,用碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测其活性。结果培养的MC3T3-E1细胞生长活跃,状态良好。细胞经培养48 h后,1×10^(-5) mol·L^(-1)培哚普利产生促细胞增殖作用(P<0.05),1×10^(-6) mol·L^(-1)培哚普利促细胞增殖作用明显(P<0.01);细胞经不同浓度培哚普利作用3、5及7 d后,与溶媒对照组相比,培哚普利各组细胞ALP活性之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论一定时间内,一定浓度的培哚普利对体外培养的MC3T3-E1细胞具有促增殖作用,但对其早期分化没有影响。 展开更多

关键词 培哚普利 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1 骨质疏松 增殖 分化

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一氧化氮对成骨细胞样细胞系MC3T3-E1的矿化调控 被引量：1

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作者 黄湛 刘洪臣 +1 位作者 王东胜 贾静 《中华老年口腔医学杂志》 2007年第2期96-99,共4页

目的:探讨一氧化氮NO(Nitric Oxide,NO)对成骨细胞前体细胞系MC3T3-E1的增殖和矿化调控作用。方法:给于成骨细胞样细胞浓度为1×10-3mmol/L的NO外源性供体S亚硝基N乙酰基青霉胺(S-nitroso-N-acetyl-dl-penicillamine,SNAP)3w,通过... 目的:探讨一氧化氮NO(Nitric Oxide,NO)对成骨细胞前体细胞系MC3T3-E1的增殖和矿化调控作用。方法:给于成骨细胞样细胞浓度为1×10-3mmol/L的NO外源性供体S亚硝基N乙酰基青霉胺(S-nitroso-N-acetyl-dl-penicillamine,SNAP)3w,通过成骨细胞DNA含量及碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性变化,以检测NO对细胞生长影响,通过Von Kossa染色和骨钙素免疫组化方法,以观察成骨细胞合成钙盐情况;通过Western Blot方法检测细胞骨唾液酸蛋白(Bone Sialoprotein,BSP)表达变化。结果:和对照组相比,SNAP可明显增加成骨细胞DNA含量和碱性磷酸酶活性;SNAP可刺激成骨细胞于培养2w时生成明显钙化结节,骨钙素蛋白表达,并显著上调骨唾液酸蛋白表达。结论:一定浓度一氧化氮,可加速成骨细胞前体细胞MC3T3-E1增殖,并可能通过调控骨唾液酸蛋白表达刺激成骨细胞进一步分化和矿化。 展开更多

关键词 一氧化氮 成骨细胞前体细胞 骨唾液酸蛋白 矿化

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Zfp260对MC3T3-E1细胞体外成骨分化及增殖、迁移影响的实验研究

6

作者 吴军 王佐林 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2024年第6期421-426,共6页

目的:探究锌指蛋白260(zinc-finger protein 260,Zfp260)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1 cells)体外成骨分化及增殖、迁移的影响。方法:体外培养并诱导MC3T3-E1细胞成骨分化,实时定量聚... 目的:探究锌指蛋白260(zinc-finger protein 260,Zfp260)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1 cells)体外成骨分化及增殖、迁移的影响。方法:体外培养并诱导MC3T3-E1细胞成骨分化,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测诱导7、14 d后Zfp260的表达量变化。用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染MC3T3-E1细胞,并通过RT-qPCR测定Zfp260的敲降效率及敲降组与对照组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、人骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)等成骨生物标志物表达量的变化。通过Transwell、细胞划痕实验检测敲降Zfp260后MC3T3-E1细胞迁移能力的变化。通过CCK8实验检测敲降Zfp260后MC3T3-E1细胞增殖能力的变化。结果:体外诱导MC3T3-E1细胞成骨分化后,Zfp260的表达量明显上调(P<0.05)。使用siRNA敲降Zfp260后,ALP及BMP2的表达量明显下调(P<0.05)。Transwell及细胞划痕实验证明敲降Zfp260后,MC3T3-E1细胞的迁移能力受到抑制。CCK8实验证明敲降Zfp260后,MC3T3-E1细胞的增殖能力增加。结论:Zfp260可促进MC3T3-E1细胞的成骨分化。 展开更多

关键词 锌指蛋白260 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 成骨分化

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miR-363在脆性骨折患者血中的表达及对MC3T3-E1细胞成骨分化及增殖的影响 被引量：2

7

作者 张爱新 张卓 张杰 《中南医学科学杂志》 CAS 2022年第2期206-210,共5页

目的研究miR-363在脆性骨折患者血中的表达及对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化与增殖的影响。方法收集脆性骨折患者外周血,采用荧光定量PCR检测患者miR-363、矮小相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)、细胞周期蛋白D1(CCND1... 目的研究miR-363在脆性骨折患者血中的表达及对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化与增殖的影响。方法收集脆性骨折患者外周血,采用荧光定量PCR检测患者miR-363、矮小相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、连环蛋白β1(CTNNB1)和骨髓细胞瘤癌基因(MYC)表达。采用茜素红S染色与噻唑蓝检测过表达miR-363对细胞成骨分化及增殖的影响。采用双荧光素酶报告基因与Western blotting检测miR-363对Dickkopf相关蛋白1(DKK1)的调控作用。结果miR-363在脆性骨折患者外周血中的表达水平低于正常健康者,而术后1周、2周及4周外周血中的表达水平高于术前并呈上调趋势(P<0.05);模拟物组MC3T3-E1细胞中miR-363表达水平高于阴性对照组(P<0.05);模拟物组MC3T3-E1细胞矿化程度、RUNX2及OCN mRNA表达水平及1天、2天、3天光密度(OD)值高于阴性对照组(P<0.05);DKK1是miR-363的靶基因,模拟物组MC3T3-E1细胞中DKK1蛋白表达水平低于阴性对照组,而CCND1、CTNNB1及MYC mRNA表达水平高于阴性对照组(P<0.05)。结论miR-363可能通过调控靶基因DKK1与Wnt/β-catenin信号通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化与增殖。 展开更多

关键词 miR-363 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 成骨分化 Dickkopf相关蛋白1 WNT/Β-CATENIN

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黄瓜籽总黄酮对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

8

作者 孙银玲 陈丽艳 +4 位作者 张蕾 丁纯洁 郑宏宇 綦菲 王伟明 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2022年第4期362-369,共8页

目的探讨黄瓜籽总黄酮提取物(cucumber seed flavonoids,CSF)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1)增殖、分化和矿化的影响,以及对富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and r... 目的探讨黄瓜籽总黄酮提取物(cucumber seed flavonoids,CSF)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1)增殖、分化和矿化的影响,以及对富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)/核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor kappa B,RANK)信号通路的作用。方法通过噻唑蓝(MTT)实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测、茜素红染色,考察不同浓度CSF对MC3T3-E1细胞增殖、分化及矿化的影响;采用RT-PCR方法检测SPARC、OPG/RANKL mRNA表达水平;Western blot检测OPG/RANKL的蛋白表达量。结果CSF高、中剂量组能够明显提高细胞增殖率(P<0.05),分别为阳性对照组的1.92和1.77倍;CSF高、中剂量组ALP活性为(2.756±0.073)和(1.961±0.107)U/mL,明显高于阳性对照组(0.453±0.029)U/mL(P<0.05);CSF高、中剂量组钙化结节面积为(34.899±0.811)和(22.112±0.914)mm 2/10个视野,与阳性对照组(16.577±0.649)mm 2/10个视野相比明显增加(P<0.05);与空白组相比,CSF高、中剂量组在不同时间点均明显上调SPARC、OPG/RANKL mRNA表达量,并促进OPG/RANKL蛋白表达水平(P<0.05)。结论黄瓜籽总黄酮类成分能够促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖、分化及矿化能力,并通过上调SPARC、OPG/RANKL的表达水平提高MC3T3-E1细胞的成骨能力。 展开更多

关键词 黄瓜籽总黄酮 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白 骨保护素/核因子κB受体活化因子配体

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杜仲中松脂素二葡萄糖苷和松脂素对成骨细胞中OPG和RANKL表达的影响 被引量：29

9

作者 胡倩影 尹瑞林 +2 位作者 王一飞 刘雪睛 丁艳霞 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期181-186,共6页

目的：观察杜仲中松脂素二葡萄糖苷及其苷元松脂素对体外培养的小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的影响。方法：采用质量浓度为1×10^-7-1×10^3μg·L^-1的松脂素二葡萄糖苷与松脂素体外干预MC3T3-E1成骨细胞48,72 h,采... 目的：观察杜仲中松脂素二葡萄糖苷及其苷元松脂素对体外培养的小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的影响。方法：采用质量浓度为1×10^-7-1×10^3μg·L^-1的松脂素二葡萄糖苷与松脂素体外干预MC3T3-E1成骨细胞48,72 h,采用噻唑蓝法检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测细胞分化情况,酶联免疫吸附测定法（ELISA）和蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测细胞骨保护素（OPG）与核转录因子-κB受体活化因子配体（RANKL）蛋白表达的水平。结果：与空白组相比,培养48 h,1×10^-4-100μg·L^-1松脂素二葡萄糖苷及1×10^-4-1μg·L^-1松脂素均能促进成骨细胞增殖（P〈0.05,P〈0.01）;培养72 h,1×10^-3-100μg·L^-1松脂素二葡萄糖苷及0.1μg·L^-1松脂素能促进成骨细胞增殖（P〈0.05,P〈0.01）。与空白组相比,培养48 h时,质量浓度为1×10^-4-1×10^3μg·L^-1的松脂素二葡萄糖苷、松脂素均能够显著促进成骨细胞ALP分泌（P〈0.01）;培养72 h时,质量浓度为0.1-1×10^3μg·L^-1的松脂素二葡萄糖苷和1×10^-4-1×10^3μg·L^-1松脂素均能显著促进成骨细胞ALP分泌（P〈0.05,P〈0.01）。与空白组相比,培养48 h,1×10^-5-10μg·L^-1的松脂素二葡萄糖苷和松脂素均能促进细OPG蛋白分泌（P〈0.05,P〈0.01）;只有松脂素在1×10^-5,1×10^-3μg·L^-1时能明显抑制RANKL蛋白的分泌（P〈0.01）,在1×10^-5-0.1μg·L^-1时提高OPG/RANKL（P〈0.01）。结论：松脂素二葡萄糖苷与松脂素均能通过促进成骨细胞的增殖和分化达到抗骨质疏松作用,但其作用机制不同,松脂素二葡萄糖苷主要通过促进OPG分泌来发挥,而松脂素则既能通过促进OPG分泌又能通过抑制RANKL表达来发挥作用。 展开更多

关键词 杜仲 松脂素二葡萄糖苷 松脂素 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 增殖分化 骨保护素 核转录因子-κB受体活化因子配体

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生长停滞特异性基因6对成骨前体细胞辐射损伤后增殖作用的研究

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作者 郁锦程 张静 +5 位作者 范增 何丽娟 岳文 裴雪涛 蒋少云 李艳华 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第10期727-732,共6页

目的研究生长停滞特异性基因6(growth arrest-specific gene 6,gas6)在成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)辐射损伤后凋亡及增殖中的作用。方法体外建立MC3T3-E1细胞辐照损伤模型,通过流式细胞术检测辐照对该细胞凋亡和增殖的影响;通过qRT-PCR... 目的研究生长停滞特异性基因6(growth arrest-specific gene 6,gas6)在成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)辐射损伤后凋亡及增殖中的作用。方法体外建立MC3T3-E1细胞辐照损伤模型,通过流式细胞术检测辐照对该细胞凋亡和增殖的影响;通过qRT-PCR和ELISA方法检测该细胞在辐照后gas6基因表达及蛋白分泌变化;使用gas6小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对MC3T3-E1辐照损伤模型进行处理,通过BrdU掺入实验结合流式细胞术分析其对该细胞增殖的影响;使用AXL抑制剂R428对其辐照损伤模型进行处理,通过BrdU掺入实验检测GAS6作用受体阻断后对该细胞增殖的影响,以探究潜在的分子机制。结果成功建立MC3T3-E1辐照损伤模型,流式分析结果表明,9 Gyγ射线照射能引起MC3T3-E1的凋亡;qRT-PCR以及ELISA实验结果显示,9 Gyγ射线照射导致其gas6基因表达及蛋白分泌显著增加;流式分析结果表明,gas6的沉默表达会显著抑制辐照损伤的MC3T3-E1的增殖,AXL受体抑制剂R428能显著抑制辐射损伤MC3T3-E1的增殖,提示GAS6/AXL轴在MC3T3-E1辐射损伤再生中发挥正性调控作用。结论GAS6具有促进MC3T3-E1辐射损伤后再生的作用。 展开更多

关键词 成骨细胞前体细胞 生长停滞特异性基因6 辐射损伤 细胞凋亡 细胞增殖

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积雪草酸促进成骨细胞分化的机制 被引量：4

11

作者 许燕 肖明 +4 位作者 李涛 彭明政 强磊 王金武 翁杰 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2019年第4期347-351,共5页

目的研究积雪草酸在体外对成骨细胞分化的影响,并初步探讨其作用机制。方法使用小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)进行成骨分化相关实验,将积雪草酸作为成骨诱导条件下的附加刺激,用CCK8法检测药物对成骨细胞活力的影响;采用碱性磷酸... 目的研究积雪草酸在体外对成骨细胞分化的影响,并初步探讨其作用机制。方法使用小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)进行成骨分化相关实验,将积雪草酸作为成骨诱导条件下的附加刺激,用CCK8法检测药物对成骨细胞活力的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)染色评价成骨细胞的早期分化能力;采用茜素红染色观察钙结节的形成数量,评估成骨细胞的矿化能力;用实时荧光定量PCR法检测成骨细胞标志物的水平;采用蛋白免疫印迹法检测MAPKAKT信号通路及凋亡相关蛋白的表达。结果1~40μmol·L^-1积雪草酸对细胞无毒性作用;随着积雪草酸刺激浓度的增加,ALP和茜素红的染色强度也随之增加。经积雪草酸刺激3d后,Ⅰ型胶原蛋白基因的表达水平出现明显变化;第7天时,ALP、骨形态发生蛋白2、转录因子、核心结核因子α1和骨钙素的表达水平显著增加。经积雪草酸刺激后,MC3T3-E1细胞内MAK-AKT信号通路激活;同时,抗凋亡蛋白的表达上调,促凋亡蛋白的表达下降。结论积雪草酸以浓度依赖的方式促进成骨细胞分化,抑制成骨细胞凋亡,该效应可能是通过激活MAPK-AKT信号介导。 展开更多

关键词 积雪草酸 成骨分化 小鼠 胚胎成骨细胞前体细胞 碱性磷酸酶 茜素红 实时荧光定量PCR 蛋白免疫印迹法 MAPK-AKT Ⅰ型胶原蛋白 骨形态发生蛋白2 转录因子 核心结核因子α1 骨钙素

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罗非鱼鱼鳞胶原蛋白水解物对成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响 被引量：3

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作者 吴谦 申铉日 +2 位作者 武林贺 张培 苏玥 《食品科技》 CAS 北大核心 2016年第8期120-124,共5页

目的:研究罗非鱼鱼鳞胶原蛋白水解物(tilapia fish scale collagen hydrolysate,FH)对小鼠成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的增殖和分化的影响。方法:采用噻唑蓝法测定MC3T3-E1细胞的增殖率,用p-nitrophenyl phosphate(p-NPP)法测碱性磷酸酶(A... 目的:研究罗非鱼鱼鳞胶原蛋白水解物(tilapia fish scale collagen hydrolysate,FH)对小鼠成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的增殖和分化的影响。方法:采用噻唑蓝法测定MC3T3-E1细胞的增殖率,用p-nitrophenyl phosphate(p-NPP)法测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)的活性,Elisa酶联免疫法检测Ⅰ型胶原蛋白(Collagen type Ⅰ,Col Ⅰ)和骨钙素(Osteocalcin,OCN)的分泌量,茜素红染色法测定细胞外基质矿化结节的数量。结果:与空白对照组相比,FH对细胞的增殖性没有显著的促进作用,但是可以显著提高细胞ALP活性,促进Col Ⅰ和OCN的分泌。此外,FH可以促进细胞矿化结节的生成。结论:FH通过促进成骨细胞MC3T3-E1分化和矿化来提高骨的形成,对开发抗骨质疏松症和骨关节炎等疾病的功能性食品有重要的意义。 展开更多

关键词 罗非鱼鱼鳞胶原蛋白水解物 成骨细胞前体细胞MC3T3-E1 增殖 分化

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载槲皮素明胶微球对MC3T3-E1增殖和分化的影响

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作者 董伟杰 苏庭舒 忻贤贞 《口腔医学》 CAS 2024年第7期494-499,共6页

目的研究负载槲皮素的明胶三维多孔(G-quercetin)微球作为骨组织材料的可行性。方法利用乳化法制备负载槲皮素的多孔明胶微球,扫描电镜观察微球形态,通过免疫荧光染色、活死细胞染色和CCK-8、碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色检测微球... 目的研究负载槲皮素的明胶三维多孔(G-quercetin)微球作为骨组织材料的可行性。方法利用乳化法制备负载槲皮素的多孔明胶微球,扫描电镜观察微球形态,通过免疫荧光染色、活死细胞染色和CCK-8、碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色检测微球的细胞毒性及其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)黏附、增殖及分化的影响,RT-PCR检测成骨相关基因Runx-2、ALP、OPN、OCN表达。结果扫描电镜结果显示制备的载槲皮素明胶三维微孔材料具有多孔结构。细胞黏附检测显示细胞能够在微球表面铺展良好。与对照组相比,活死细胞染色、CCK-8结果显示该微球无明显细胞毒性(P>0.05);与G-quercetin微球共培养的MC3T3-E1 ALP表达和体外矿化增加;PCR结果显示Runx-2、ALP、OCN、OPN表达明显增高(P<0.05)。结论载槲皮素明胶微球具有良好的生物相容性,能够促进MC3T3-E1体外成骨分化,有望作为新型骨组织工程生物材料应用于临床。 展开更多

关键词 明胶 槲皮素 微球 成骨分化 骨组织工程 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞

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明胶改性聚醚醚酮微载体的制备、表征及性能 被引量：1

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作者 焦自学 高承哲 +2 位作者 孙硕 武振旭 章培标 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期390-397,共8页

微载体因其具有较高的表面积/体积比等优点可以大大提高哺乳动物细胞培养效率,被广泛应用于生物制药和组织工程等领域。但微载体多为一次性使用,不耐高温,且主要依赖进口,价格昂贵,因而限制了其国内的应用和推广。聚醚醚酮(PEEK)材料具... 微载体因其具有较高的表面积/体积比等优点可以大大提高哺乳动物细胞培养效率,被广泛应用于生物制药和组织工程等领域。但微载体多为一次性使用,不耐高温,且主要依赖进口,价格昂贵,因而限制了其国内的应用和推广。聚醚醚酮(PEEK)材料具有良好的生物相容性、化学稳定性及耐高温等特性,是一种优异的微载体材料,但存在熔点高,加工方法单一和生物惰性等缺陷。本文以浓硫酸为溶剂,乙醇溶液为萃取剂,采用气流辅助滴注/相分离法,将PEEK制备成448μm左右,尺寸均匀的微球;经氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)处理,获得表面氨基化修饰的PEEK微球(PEEK-N);进一步,以N,N′-羰基二咪唑(CDI)为活性中间体,将明胶分子接枝到PEEK-N微球表面,获得表面明胶修饰的PEEK微载体(PEEK-G)。对材料的物理化学性质、表面接枝量进行表征;并通过体外细胞实验评估其细胞毒性、细胞粘附效率和细胞增殖能力。结果显示,通过该方法制备成功了3种不同明胶接枝含量的PEEK细胞微载体(PEEK-G1,PEEK-G2,PEEK-G3),其中明胶含量较高的PEEK-G3毒性最低,细胞粘附和增殖效果最理想。 展开更多

关键词 微载体 聚醚醚酮 明胶修饰 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 细胞增殖与粘附

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