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荧光聚合酶链反应法用于新型冠状病毒核酸检测扩增产物污染治理的相关应用
1
作者 闫晓枫 李庆伟 +1 位作者 孙宇强 荣维娜 《实用检验医师杂志》 2023年第4期372-376,共5页
目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)法用于新型冠状病毒(新冠病毒)核酸检测时扩增产物污染治理的相关应用。方法建立新冠病毒基因检测扩增产物污染模型、物面污染模型以及空间(气溶胶)污染模型,比较不同化学试剂及物理紫外线照射治理方式对... 目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)法用于新型冠状病毒(新冠病毒)核酸检测时扩增产物污染治理的相关应用。方法建立新冠病毒基因检测扩增产物污染模型、物面污染模型以及空间(气溶胶)污染模型,比较不同化学试剂及物理紫外线照射治理方式对物面污染和空间污染的清除效果。结果75%乙醇消毒剂组、核酸清除剂组和不同浓度有效氯制剂组的循环阈值(CT值)均明显高于对照组,其中核酸清除剂组的CT值最高,玻璃、塑料、金属材质的CT值分别为34.74±2.63、34.68±3.25、35.71±3.07。500、1000、1500、2000、2500 mg/L有效氯制剂组对不同材质的CT值均高于75%乙醇消毒剂组,且有效氯的浓度越高,CT值越大,差异均有统计学意义。不同时长紫外线照射各组的CT值均明显高于对照组;其中以紫外线照射120 min组的CT值最高,玻璃、塑料、金属材质的CT值分别为35.51±2.70、35.49±2.63、35.55±2.58,且紫外线照射时长越长,CT值越大,差异均有统计学意义。治理后的通风+紫外线照射120 min+75%乙醇消毒剂+核酸清除剂+2500 mg/L有效氯制剂组的CT值为36.98±3.47,明显高于治理前及其他各组,差异均有统计学意义。结论荧光PCR法用于新冠核酸检测时扩增产物污染的治理方式较多,对物面污染的治理方式可选择核酸清除剂及2500 mg/L有效氯制剂,以及紫外线照射120 min,对空间污染环境的治理方式可选择通风+紫外线照射120 min+75%乙醇消毒剂+核酸清除剂+2500 mg/L有效氯制剂联合应用,值得重视。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 新型冠状病毒 核酸检测 扩增产物 污染治理
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琼脂糖粉的质量对PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳的影响 被引量：1
2
作者 兰柳波 张志珍 +5 位作者 李彩虹 张海涛 林小聪 刘勇军 马卫列 丁航 《科技风》 2023年第23期148-150,共3页
目的:研究琼脂糖粉的质量对聚合酶链式反应(PCR)产物琼脂糖凝胶电泳的影响。方法:PCR产物琼脂糖凝胶电泳中分别使用不同牌子的琼脂糖粉,同时跑胶图像。结果:质量差的琼脂糖粉电泳结果有明显弥散现象,而更换高质量的琼脂糖粉,未见弥散现... 目的:研究琼脂糖粉的质量对聚合酶链式反应(PCR)产物琼脂糖凝胶电泳的影响。方法:PCR产物琼脂糖凝胶电泳中分别使用不同牌子的琼脂糖粉,同时跑胶图像。结果:质量差的琼脂糖粉电泳结果有明显弥散现象,而更换高质量的琼脂糖粉,未见弥散现象。结论:琼脂糖粉质量在分子生物学PCR产物琼脂糖凝胶电泳实验中扮演重要角色,使用高质量的琼脂糖粉对实验的成功至关重要。 展开更多
关键词 琼脂糖粉 PCR 扩增产物 琼脂糖凝胶电泳
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中药材厚朴的DNA扩增产物指纹分析研究 被引量：14
3
作者 王艇 苏应娟 +3 位作者 朱建明 李雪雁 曾庆文 夏念和 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期710-715,共6页
采用DNA扩增产物指纹分析(DNA amplification fingerprinting,DAF)技术鉴别中药材厚朴、凹叶厚朴及其常见的伪品、混淆品,获得了清晰可靠的DNA指纹图谱。根据聚丙烯酰胺凝胶上显示的DNA带型差异可简便地区分出厚朴、凹叶厚朴和其它伪品... 采用DNA扩增产物指纹分析(DNA amplification fingerprinting,DAF)技术鉴别中药材厚朴、凹叶厚朴及其常见的伪品、混淆品,获得了清晰可靠的DNA指纹图谱。根据聚丙烯酰胺凝胶上显示的DNA带型差异可简便地区分出厚朴、凹叶厚朴和其它伪品、混淆品。证明DNF技术可以准确、快速地鉴别出中药材厚朴及其伪、混品,在正确引种方面具有较高的价值。 展开更多
关键词 厚朴 DAF 伪品 混淆品 中药材 DNA扩增产物 指纹分析
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桃SSR-PCR主要因子对扩增产物的影响 被引量：13
4
作者 沈志军 马瑞娟 +1 位作者 俞明亮 许建兰 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2006年第1期76-80,共5页
以寿星桃为试材，通过Mg^2＋和DNA聚合酶、模板DNA和引物用量的两个双因素试验，以及dNTP用量的单因素试验，研究了5个主要因子对SSR扩增结果的影响，并对桃SSR反应体系进行了优化。结果表明，Mg^2＋和DNA聚合酶的用量对SSR扩增结果起... 以寿星桃为试材，通过Mg^2＋和DNA聚合酶、模板DNA和引物用量的两个双因素试验，以及dNTP用量的单因素试验，研究了5个主要因子对SSR扩增结果的影响，并对桃SSR反应体系进行了优化。结果表明，Mg^2＋和DNA聚合酶的用量对SSR扩增结果起着关键作用，且两者之间存在明显的可作效应；dNTP用量也对SSR的扩增结果起着重要作用，当浓度在200～300μmol／L时效果较好；模板DNA与引物用量之阃没有很明显的互作效应，适当增加引物用量可以提高SSR的正确扩增；优化的桃SSR反应体系为：25μl的总反应体积中含1×PCR Buffe、Mg^2＋ 3mmol／L、DNA聚合酶1．5U、SSR引物各0．4μmol／L、模板DNA 50ng、dNTP 200 μmol／L。 展开更多
关键词 桃 简单序列重复 PCR扩增 扩增产物
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RAPD扩增中商品酶体系对扩增产物的影响 被引量：6
5
作者 何礼 袁水全 +4 位作者 莫邦辉 姚光贵 林宏辉 陈放 郭骁才 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2002年第3期308-313,共6页
随机选用了 10条RAPD引物 ,采用 3种商品TaqDNA聚合酶体系 ,以 5个不同物种的动植物总DNA为模板 ,进行RAPD扩增 .实验发现 ,在对同一模板、采用同一引物进行的RAPD扩增中 ,仅仅因为使用了不同的商品TaqDNA聚合酶 ,获得的扩增产物差别极... 随机选用了 10条RAPD引物 ,采用 3种商品TaqDNA聚合酶体系 ,以 5个不同物种的动植物总DNA为模板 ,进行RAPD扩增 .实验发现 ,在对同一模板、采用同一引物进行的RAPD扩增中 ,仅仅因为使用了不同的商品TaqDNA聚合酶 ,获得的扩增产物差别极大 ;不同商品来源的PCR反应缓冲体系 ,对扩增产物也有一定影响 ,但相对较小 .这说明 ,不同的商品酶体系对RAPD扩增产物影响很大 .因此 ,影响RAPD扩增产物稳定性的一个关键因素是商品TaqDNA聚合酶本身 ;研究中前后一致地使用同一商品TaqDNA聚合酶体系 ,是成功进行RAPD分析的基础 .图 3参 展开更多
关键词 RAPD扩增 商品酶体系 扩增产物
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琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测肠道菌群基因扩增产物的方法学比较研究 被引量：6
6
作者 王霞 王烨 +5 位作者 李琳琳 李桂荣 谢自敬 李惠武 毛新民 冉新建 《新疆医学》 2008年第5期136-138,共3页
关键词 聚丙烯酰胺凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳 肠道菌群 基因扩增产物 凝胶电泳检测 方法学 PCR扩增产物 16SrDNA
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中国对虾杆状病毒PCR扩增产物的DNA序列测定及分析 被引量：3
7
作者 汪岷 马洪明 +3 位作者 戴继勋 包振民 苏冬梅 邵济钧 《海洋水产研究》 CSCD 1998年第2期5-9,共5页
采用台湾报道的白点综合征相关杆状病毒（WSBV）的一对特异引物；对中国对虾的杆状病毒进行PCR扩增，获得了预期的1447bp的扩增产物，将PCR产物用QIAEXII（玻璃奶）纯化；直接进行序列测定。部分序列测定及分析结果表明，中国对虾的杆... 采用台湾报道的白点综合征相关杆状病毒（WSBV）的一对特异引物；对中国对虾的杆状病毒进行PCR扩增，获得了预期的1447bp的扩增产物，将PCR产物用QIAEXII（玻璃奶）纯化；直接进行序列测定。部分序列测定及分析结果表明，中国对虾的杆状病毒的部分DNA序列与台湾WSBV的相关序列的同源性为98．7％，经计算机分析该段基因序列有6个ORF（开放读框）。该PCR引物可以用于中国对虾杆状病毒及其相关病毒的检测与比较研究。 展开更多
关键词 中国对虾 杆状病毒 DNA序列 PCR扩增产物 测定
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甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快速银染方法 被引量：2
8
作者 靳容 后猛 +2 位作者 马代夫 谢世清 李强 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第2期30-32,共3页
对目前6种常用的PAGE银染方法的成本、时间及染色效果等进行比较。结合笔者所在实验室的具体情况,用简易强碱法对甘薯AFLP扩增产物进行银染,分析银染过程中漂洗时间、次数,银染用水对银染效果的影响,建立了甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快... 对目前6种常用的PAGE银染方法的成本、时间及染色效果等进行比较。结合笔者所在实验室的具体情况,用简易强碱法对甘薯AFLP扩增产物进行银染,分析银染过程中漂洗时间、次数,银染用水对银染效果的影响,建立了甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快速银染方法,可以批量生产银染AFLP扩增产物,银染效果较好。 展开更多
关键词 甘薯 AFLP扩增产物 聚丙烯酰胺凝胶 银染
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山蛭基因组DNA的提取及其PCR扩增产物的分析 被引量：2
9
作者 谭琳 康由发 +1 位作者 施江 郑学勤 《生物技术》 CAS CSCD 2003年第3期8-9,共2页
利用PCR技术从海南山蛭体内分离山蛭素 (抗凝血蛋白 )基因 ,首先需获得不带有山蛭体表色素且完整的山蛭基因组DNA ,本试验通过结合使用SDS-蛋白酶裂解法和CTAB法 ,有效的去除了山蛭基因组DNA提取过程中难以去除的色素 ,得到的基因组DNA... 利用PCR技术从海南山蛭体内分离山蛭素 (抗凝血蛋白 )基因 ,首先需获得不带有山蛭体表色素且完整的山蛭基因组DNA ,本试验通过结合使用SDS-蛋白酶裂解法和CTAB法 ,有效的去除了山蛭基因组DNA提取过程中难以去除的色素 ,得到的基因组DNA保持完整 ,无降解。以之作为模板 ,进行PCR扩增 ,获得一个长度约为 2 37bp的特异性片段 ,此片段与印度山蛭蛭素的cDNA大小几乎一致。初步表明 ,这个序列没有内含子 。 展开更多
关键词 山蛭 基因组DNA 提取 PCR扩增产物 山蛭素
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杉木单染色体扩增产物的RAPD分析 被引量：3
10
作者 李湘阳 周坚 +1 位作者 袁汉升 张再良 《南京林业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期55-58,共4页
在显微操作器上微分离杉木(Cunninghamialanceolata(Lamb.)Hook)的4条单染色体,以简并寡核苷酸为引物进行PCR扩增(DOP PCR),并将其DOP PCR产物进行RAPD分析。结果表明,不同染色体扩增产物间有明显多态性;用RAPD PCR的方式可反应出不同... 在显微操作器上微分离杉木(Cunninghamialanceolata(Lamb.)Hook)的4条单染色体,以简并寡核苷酸为引物进行PCR扩增(DOP PCR),并将其DOP PCR产物进行RAPD分析。结果表明,不同染色体扩增产物间有明显多态性;用RAPD PCR的方式可反应出不同染色体遗传信息的差异,从这些差异中可能找到属于某单染色体的特异信息,进而在分子水平上对染色体进行编号。 展开更多
关键词 杉木 染色体 扩增产物 RAPD分析 显微分离
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马铃薯金线虫和白线虫DNA特异扩增产物的克隆与鉴定 被引量：3
11
作者 钟国强 卓侃 +1 位作者 冯黎霞 赵立荣 《植物检疫》 2007年第4期198-200,共3页
通过采用Fullaondo(1999)研究的特异引物检测方法,对来自英国和比利时的两个马铃薯金线虫(Globodera rostochiensis)种群和英国的一个马铃薯白线虫(G.pallida)种群的DNA进行扩增,其产物以大肠杆菌(Eschetichia coli)为受体菌,经过连接... 通过采用Fullaondo(1999)研究的特异引物检测方法,对来自英国和比利时的两个马铃薯金线虫(Globodera rostochiensis)种群和英国的一个马铃薯白线虫(G.pallida)种群的DNA进行扩增,其产物以大肠杆菌(Eschetichia coli)为受体菌,经过连接、转化和克隆纯化,筛选获得阳性克隆。经PCR鉴定和测序,英国和比利时的马铃薯金线虫种群的特异性谱带分别是357bp和350bp,而英国的马铃薯白线虫的谱带是782bp,与Fullaondo等人研究报道结果基本相符,从而鉴别出来自不同地理种群的马铃薯金线虫和白线虫。 展开更多
关键词 马铃薯金线虫 马铃薯白线虫 克隆 DNA 特异扩增产物
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中华绒螯蟹微卫星单引物扩增产物的初步分析 被引量：1
12
作者 张菁 陆仁后 邱涛 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期5-9,共5页
采用人工合成的 6个串联重复寡聚核苷酸单引物 ,以及 2个加锚的二核苷酸引物 ,利用SPAR和ASSR技术 ,对中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)基因组进行PCR扩增 ,结果发现 ,对于GC含量丰富的三、四核苷酸引物如(CGA) 5、(GACA) 4 ,在不同退火... 采用人工合成的 6个串联重复寡聚核苷酸单引物 ,以及 2个加锚的二核苷酸引物 ,利用SPAR和ASSR技术 ,对中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)基因组进行PCR扩增 ,结果发现 ,对于GC含量丰富的三、四核苷酸引物如(CGA) 5、(GACA) 4 ,在不同退火温度的PCR反应中 ,都能扩增出清晰的条带 ,可以作为PCR扩增引物 ;反之 ,GC含量 <5 0 %的 (CATA) 4 和 (GATA) 4 很难检测到扩增产物 ;在基本PCR条件下 ,2个加锚的二核苷酸引物能扩增出可分辨的条带 ,但随着退火温度的升高 ,其中部分条带消失 ;对于不加锚的二核苷酸引物如 (AC) 8、(GA) 8,无论怎样改变退火温度 ,终难形成清晰条带。将不同引物扩增产物分别克隆到T Vector上 ,选取其中 9个阳性克隆进行序列测定 ,发现在 (GACA) 4 引物扩增的 2个片段中 ,序列结构相似 ,除引物序列外 ,都出现了 2～ 3个内部重复序列和高含量的AT ;其余 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 微卫星 单引物扩增产物 SPAR ASSR 基因 核苷酸
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棉花微卫星DNA扩增产物检测方法的优化研究 被引量：1
13
作者 孙志栋 王学德 +2 位作者 倪西源 赵佩欧 黄坚 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第4期593-596,共4页
以棉花两个多标记基因系T582和T586及其后代为材料,对微卫星DNA的PCR扩增产物检测方法进行了优化研究。结果表明:检测微卫星DNA,聚丙烯酰胺银染灵敏度高于琼脂糖EB染色;聚丙烯酰胺凝胶的浓度需随着待测SSR序列的片段大小而作适当调整,... 以棉花两个多标记基因系T582和T586及其后代为材料,对微卫星DNA的PCR扩增产物检测方法进行了优化研究。结果表明:检测微卫星DNA,聚丙烯酰胺银染灵敏度高于琼脂糖EB染色;聚丙烯酰胺凝胶的浓度需随着待测SSR序列的片段大小而作适当调整,一般情况下聚丙烯酰胺凝胶的浓度以6%为宜,但当待检测的DNA片段小到100bp～250bp的区域范围时,凝胶的浓度需提高到8%。胶板样品上样量以3滋l为宜。在显色液预冷(约10℃)的前提下,显色的时间应控制在4min之内,以便得到的胶板DNA条带强度适中、对比度好。 展开更多
关键词 棉花 微卫星 DNA扩增产物 检测方法
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应用生物发光技术定量检测PCR扩增产物 被引量：1
14
作者 姚群峰 宁勇 +1 位作者 徐顺清 周宜开 《临床输血与检验》 CAS 2003年第3期179-182,共4页
目的　建立一种基于生物发光技术的定量检测PCR产物的方法 ,并用于HBV定量PCR检测。方法　首先利用ATP硫酰化酶 (ATPsulfurylase)将焦磷酸 (PPi)定量转化成ATP ,然后利用虫荧光素酶 (luciferase)系统发光检测ATP ,从而确定样品中PPi含... 目的　建立一种基于生物发光技术的定量检测PCR产物的方法 ,并用于HBV定量PCR检测。方法　首先利用ATP硫酰化酶 (ATPsulfurylase)将焦磷酸 (PPi)定量转化成ATP ,然后利用虫荧光素酶 (luciferase)系统发光检测ATP ,从而确定样品中PPi含量。利用 2次PCR法扩增HBVDNA目的片段 ,并进行回收纯化定量 ,以之作为阳性标准模板制作标准曲线。选择适当的循环次数扩增样品中HBVDNA ,利用化学发光法检测扩增产物中PPi的量 ,进而确定样品中HBVDNA模板的量。结果　当起始模板量为 (10～ 5 )× 10 5拷贝 ,循环次数为 2 5 ,发光值与起始模板浓度呈现良好的相关。检测 32份样品血清 ,其中 2 3例HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中HBVDNA平均含量为 1 6× 10 5拷贝 / μl,9例HBsAg(+)、HBeAg(- )、HBcAb(+)标本中HBVDNA平均含量为 5 6× 10 3 拷贝 / μl。结论　本方法是一种操作简便。 展开更多
关键词 应用 生物发光技术 定量检测 PCR扩增产物 聚合酶链反应
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新型核酸染料SYBR-Green在检测基因扩增产物中的应用 被引量：1
15
作者 何敏 杨文敏 +2 位作者 农清清 林红 李秀桂 《广西医科大学学报》 CAS 2003年第1期7-9,共3页
目的 :将核酸 SYBR- Green染料应用于端粒酶活性检测和食物中毒致病菌的 PCR- SSCP分析。方法 :采用 TRAP法检测 A5 4 9肺腺癌细胞株、2 93细胞株、HL- 60白血病细胞株端粒酶活性。金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、福氏... 目的 :将核酸 SYBR- Green染料应用于端粒酶活性检测和食物中毒致病菌的 PCR- SSCP分析。方法 :采用 TRAP法检测 A5 4 9肺腺癌细胞株、2 93细胞株、HL- 60白血病细胞株端粒酶活性。金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、福氏志贺氏菌、腊样芽胞杆菌标准株增菌后 ,进行 PCR- SSCP分析。在上述两种检测方法中 ,扩增产物电泳后均采用 SYBR- Green染色。结果 :TRAP- SYBR- Green染色法检测 HL- 60白血病细胞株端粒酶活性的灵敏度可达 15个细胞左右。PCR- SSCP检测常见食物中毒致病菌的敏感性可达 10～ 15个鼠伤寒沙门氏菌细胞。结论 :SYBR- Green染色法用于端粒酶活性的检测和致病菌的 PCR- SSCP分析 ,具有快速、简便、灵敏度高。 展开更多
关键词 新型核酸染料 SYBR—Green 检测 基因扩增产物 食物中毒 致病菌 端粒酶活性 单链构像多态性 肺腺癌
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凝胶成像系统对核酸扩增产物的定量检测 被引量：2
16
作者 吴晓蔓 郭海波 《上海生物医学工程》 2000年第4期21-24,共4页
目的 建立一种PCR-凝胶成像系统定量分析核酸扩增产物的方法．方法：1．用PCR荧光定量分析仪实时监测PCR扩增曲线，并选择合适的扩增循环次数，2．将梯度标准血清(10^1～10^6拷贝／u1)分别进行40，35及32次循环次数的扩增，在琼脂糖电泳... 目的 建立一种PCR-凝胶成像系统定量分析核酸扩增产物的方法．方法：1．用PCR荧光定量分析仪实时监测PCR扩增曲线，并选择合适的扩增循环次数，2．将梯度标准血清(10^1～10^6拷贝／u1)分别进行40，35及32次循环次数的扩增，在琼脂糖电泳，EB染色后，进行凝胶分析；3．选择凝胶分析软件中能客观反映核酸实际含量的最适参数，制定标准曲线。结果:40及35次循环时，在10^1～10^4拷贝／ul，线性良好，而在10^4，10^5及10^6拷贝／ul三个梯度时直线上升缓慢，趋于平坦；32次循环时，10拷贝／ul未能检出，10^2～10^6拷贝／ul的5个梯度的模板(对数值)与产物(体积)有良好的线性关系(r=0．97)。结论：32次循环线性范围较广，为最适循环次数；在UVIband的光密度定量分析指标中，以体积或体积百分比作为定量指标较好；本法除可用于常规PCR产物定量(HBV-DNA，TB—DNA)，也适用于RT-PCR(HCV-RNA)。 展开更多
关键词 凝胶成像系统 核酸扩增产物 定量检测 PCR 扩增曲线
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PCR扩增产物的量化检测技术 被引量：3
17
作者 顾文莉 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 1999年第1期35-37,共3页
随着分子生物学的日益发展与普及，PCR产物的定量检测受到广泛重视。本文将近年国外报道PCR扩增产物的量化检测技术的某些方法的原理、特点等作简要的介绍。并着重介绍杂交酶免疫测定法的优点及其广阔的应用前景。
关键词 聚合酶链反应 扩增产物 定量检测
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一种快速序列比较方法及其在PCR扩增产物判定中的应用
18
作者 吴加金 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期245-248,共4页
根据影响对序列比较速度的二个重要因素：１．启动硬盘读写时间。２．对盘检索定位和数据译码时间。提出相应的改进措施，达到提高比较速度的目的。并对ＰＣＲ扩增产物的判定为例，说明方法成功地应用于未知序列判定。
关键词 序列比较 同源分析 聚合酶链反应 扩增产物
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用微孔板杂交技术检测聚合酶链反应扩增产物
19
作者 徐芸 《国外医学（微生物学分册）》 1999年第3期13-17,共5页
用微孔板杂交技术检测聚合酶链反应(PCR)扩增产物是将PCR技术和类似ELISA的技术结合起来的一种方法,它使PCR的敏感性提高100倍,通过探针杂交使其更具特异性,并可通过酶联检测系统使结果客观化,同时又具有简便、快速的特点,在基础和临床... 用微孔板杂交技术检测聚合酶链反应(PCR)扩增产物是将PCR技术和类似ELISA的技术结合起来的一种方法,它使PCR的敏感性提高100倍,通过探针杂交使其更具特异性,并可通过酶联检测系统使结果客观化,同时又具有简便、快速的特点,在基础和临床应用上前景看好。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 扩增产物 微孔板杂交技术
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基因扩增产物微孔杂交法检测新城疫病毒致病毒株
20
作者 夏梦岩 张卓然 +1 位作者 秦成 赵静 《中国动物检疫》 CAS 2002年第5期22-25,共4页
目的建立一种快速、简便、敏感、实用的方法以检测新城疫病毒致病性毒株。方法在F蛋白裂解位点的两侧设计引物 ,引物1的5'端用生物素标记 ;按Aus/32强毒株F基因裂解区域设计24个碱基的寡核苷酸探针 ,并对之进行5'端地高辛标记... 目的建立一种快速、简便、敏感、实用的方法以检测新城疫病毒致病性毒株。方法在F蛋白裂解位点的两侧设计引物 ,引物1的5'端用生物素标记 ;按Aus/32强毒株F基因裂解区域设计24个碱基的寡核苷酸探针 ,并对之进行5'端地高辛标记。生物素化的双链扩增产物被固相的链霉亲和素捕获后经变性成为生物素化单链。然后微孔中加入地高辛标记的探针进行杂交 ,并用抗 -地高辛 -碱性磷酸酶显色。结果所建立的方法快速、简便、特异 ,敏感性比琼脂糖电泳法高约3～4倍 ,批内CV为9.88 % ,批间CV为18.31%。结论所建立的方法优化PCR条件后可作为新城疫病毒感染诊断。 展开更多
关键词 基因扩增产物微孔杂交法 检测 新城疫病毒 致病毒株 免疫酶技术 固相杂交
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