结核杆菌抗原85A与GM-CSF诱发抗鼠黑色素瘤效应研究 被引量：1

1

作者 刘春生 吴昀 +5 位作者 窦骏 文萍 赵枫姝 唐权 李金龙 王亚琴 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2010年第1期57-61,共5页

目的:用结核杆菌抗原85A(Ag85A)和细胞因子GM-CSF,作为异种抗原及免疫增强剂,研究其在鼠体内能否有效地诱导抗黑色素瘤免疫应答。方法:用分子生物学法构建重组质粒pRSC-Ag85A/GM-CSF,通过细胞转染获得稳定表达Ag85A和GM-CSF的B16黑色素... 目的:用结核杆菌抗原85A(Ag85A)和细胞因子GM-CSF,作为异种抗原及免疫增强剂,研究其在鼠体内能否有效地诱导抗黑色素瘤免疫应答。方法:用分子生物学法构建重组质粒pRSC-Ag85A/GM-CSF,通过细胞转染获得稳定表达Ag85A和GM-CSF的B16黑色素瘤细胞。48只C57BL/6小鼠随机均分为B16细胞组、B16-pRSC细胞组、B16-Ag85A细胞组和B16-Ag85A/GM-CSF细胞组,分别将上述不同B16细胞经背部皮下接种小鼠。通过观察其致瘤性的强弱、荷瘤鼠生存时间、鼠血清IFN-γ水平以及CTL、NK细胞杀伤活性,分析Ag85A和GM-CSF在抗肿瘤免疫效应中作用。结果:B16-Ag85A/GM-CSF细胞组小鼠肿瘤生长明显受到抑制,生存时间较对照组平均延长40%,血清IFN-γ分泌较对照组高1倍,CTL、NK细胞杀伤活性与其他各组相比也有较大的提高。结论:接种稳定表达Ag85A和GM-CSF的B16细胞能降低对小鼠的致瘤性,诱导有效的抗肿瘤效应。 展开更多

关键词 结核杆菌抗原85a 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 致瘤性 免疫佐剂

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结核杆菌抗原85A与小鼠白细胞介素21共表达DNA疫苗的构建及其免疫效应研究

2

作者 唐权 窦骏 +3 位作者 赵枫姝 曹明刚 褚莉莉 潘猛 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期25-28,共4页

目的:利用真核表达质粒pRSC,构建结核杆菌抗原85A(Ag85A)与小鼠白细胞介素21(mIL21)共表达重组体pRSC-mIL21-Ag85A,为研究新型结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。方法:从质粒pcDNA3.1-mIL21中经PCR扩增出mIL21基因,并插入质粒pRSC中构成pRSC... 目的:利用真核表达质粒pRSC,构建结核杆菌抗原85A(Ag85A)与小鼠白细胞介素21(mIL21)共表达重组体pRSC-mIL21-Ag85A,为研究新型结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。方法:从质粒pcDNA3.1-mIL21中经PCR扩增出mIL21基因,并插入质粒pRSC中构成pRSC-mIL21;再从pIRES-Ag85A质粒中经PCR扩增出Ag85A基因,构建于pRSC-mIL21重组质粒上,成为共表达DNA疫苗pRSC-mIL21-Ag85A。结果:经酶切、基因测序证实,该疫苗构建正确并能成功表达目的基因。共表达DNA疫苗免疫小鼠后,CTL活性、特异性淋巴细胞增殖水平及小鼠血清特异性抗体均呈有意义的提高。结论:结核杆菌Ag85A与mIL21共表达DNA疫苗能诱导小鼠免疫反应,为进一步研究DNA疫苗抗结核杆菌攻击的免疫防护效应奠定了基础。 展开更多

关键词 结核杆菌 抗原85a 小鼠白细胞介素21 DNA疫苗

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卡介苗(BCG)D2株分泌型抗原85A基因的克隆与序列分析(英文) 被引量：1

3

作者 刘凤娟 陈清 +5 位作者 聂军 李建栋 江晓玲 吴敏 朱利 俞守义 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第9期733-736,共4页

目的　分离BCGD2株分泌型抗原 85A基因并测定DNA序列 ,为研制抗结核病新型疫苗奠定基础。方法　PCR法从BCGD2株基因组DNA中分离Ag85A基因 ,PCR产物连接入 pUCm -T载体 ,重组克隆用单菌落PCR法、BamHⅠ和SacⅠ双酶切以及DNA测序进行鉴定... 目的　分离BCGD2株分泌型抗原 85A基因并测定DNA序列 ,为研制抗结核病新型疫苗奠定基础。方法　PCR法从BCGD2株基因组DNA中分离Ag85A基因 ,PCR产物连接入 pUCm -T载体 ,重组克隆用单菌落PCR法、BamHⅠ和SacⅠ双酶切以及DNA测序进行鉴定。结果　分泌型Ag85A基因经过分离和测序后发现 ,它有 10 4 1bp组成 ,与LukDeWit等人测定的来自于BCG1173P2株的同一基因的DNA序列是一致的 ,表明Ag85A基因在分枝杆菌中是高度保守的。 结论　BCGD2株分泌型抗原 85A基因的成功克隆与序列分析将会促进对Ag85A基因深入的研究 。 展开更多

关键词 BCG 抗原85a 克隆 DNA测序

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结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白抗原诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究 被引量：2

4

作者 张灵霞 吴雪琼 +2 位作者 张俊仙 史迎昌 梁建琴 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2002年第6期10-12,共3页

目的 :结核分枝杆菌重组Ag85A抗原诱发豚鼠迟发型超敏 (DTH)反应。Ag85A剂量、观察时间对DTH的影响。方法 :常规皮肤实验法 :灭活H37Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5IUPPD标准品为阳性对照 ,0 .1、0 .2、0 .4、0 .6... 目的 :结核分枝杆菌重组Ag85A抗原诱发豚鼠迟发型超敏 (DTH)反应。Ag85A剂量、观察时间对DTH的影响。方法 :常规皮肤实验法 :灭活H37Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5IUPPD标准品为阳性对照 ,0 .1、0 .2、0 .4、0 .6、0 .8及 1.0 μg重组抗原分别于背部皮内注射 ,注射后 2 4、4 8及 72h分别测量红肿或硬结反应横、纵直径 (mm) ,取两者的平均值。皮肤试验轮圈法 :生理盐水、5IUPPD及 0 .4、0 .6、0 .8、1.0 μgAg85A抗原 ,以轮圈法注射于同一只豚鼠背部一侧 ,每批 6只 ,共 3批。于注射后 2 4、4 8、72h分别测量红肿或硬结反应横、纵直径 (mm) ,取两者的平均值。结果 :常规皮肤试验 0 .1、0 .2 μg重组Ag85A抗原诱发DTH的平均直径与PPD相比有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,而 0 .4、0 .6、0 .8、1.0重组Ag85A抗原诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比 ,无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,2 4h平均直径显著高于 4 8h平均直径 (P <0 .0 5 ) ,2 4h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后结果与常规皮肤试验结果一致。结论 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 重组Ag85a蛋白抗原 DTH

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结核分枝杆菌抗原Ag85B优势诱导活动性结核患者Th1型细胞免疫反应研究 被引量：2

5

作者 王洁玲 唐余燕 +3 位作者 张毅 汤正好 臧国庆 余永胜 《医学研究杂志》 2016年第3期77-82,共6页

目的观察Ag85B抗原在诱导活动性结核患者细胞免疫应答中的作用。方法选取60例活动性结核患者,分离其外周血单个核淋巴细胞(PBMC),加Ag85B抗原刺激培养72h,ELISA法检测上清液中的IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10细胞因子浓度,流式细胞术(FCM)... 目的观察Ag85B抗原在诱导活动性结核患者细胞免疫应答中的作用。方法选取60例活动性结核患者,分离其外周血单个核淋巴细胞(PBMC),加Ag85B抗原刺激培养72h,ELISA法检测上清液中的IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10细胞因子浓度,流式细胞术(FCM)检测CD4^+T淋巴细胞内的细胞因子IFN-γ水平,定量PCR及Western blot法检测PBMC细胞转录因子T-bet、GATA-3的表达。结果检测活动性结核患者外周血单个核淋巴细胞(PBMC)培养上清液,Ag85B蛋白实验组Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2浓度明显高于结核菌素(PPD)组(P<0.05),而Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平与PPD组相比,差异无统计学意义(P>0.05),以上两组细胞因子水平均明显高于空白对照组(P<0.05)。流式细胞法检测CD4+T胞内细胞因子IFN-γ水平,Ag85B蛋白实验组高于PPD组及空白对照组(P<0.05)。定量PCR及Western blot法检测,T-bet水平Ag85B组高于PPD组(P<0.05),而GATA-3水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论结核杆菌抗原Ag85B可以通过上调Th1型转录因子T-bet诱导优势Th1型免疫反应,为结核病的预防及治疗提供理论基础。 展开更多

关键词 活动性结核 Ag85B抗原 Th1型细胞免疫

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单核细胞内Ag85抗原对结核性脑膜炎早期诊断的意义 被引量：2

6

作者 郭旻 杨笑 范学文 《临床合理用药杂志》 2011年第6期21-22,共2页

目的探讨脑脊液(CSF)及外周血(PB)单核细胞中Ag85抗原对结核性脑膜炎(TBM)早期诊断的意义。方法选择98例神经系统感染患者,将其中TBM患者52例作为观察组,非TBM患者46例作为对照组。采用免疫细胞化学方法检测CSF及PB单核细胞中结核杆菌... 目的探讨脑脊液(CSF)及外周血(PB)单核细胞中Ag85抗原对结核性脑膜炎(TBM)早期诊断的意义。方法选择98例神经系统感染患者,将其中TBM患者52例作为观察组,非TBM患者46例作为对照组。采用免疫细胞化学方法检测CSF及PB单核细胞中结核杆菌早期分泌抗原Ag85复合物蛋白和结核菌素纯蛋白衍化物(PPD),比较PPD、Ag85对于检测TBM的敏感度及特异度。结果 PPD在CSF及BP单核细胞中的特异度分别为84.78%、82.61%,敏感度分别为30.77%、26.92%,差异均无统计学意义(P>0.05)。Ag85抗原在CSF及PB单核细胞中的特异度分别为93.48%、78.26%,敏感度分别为90.38%、42.31%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论采用免疫细胞化学方法检测单核细胞内Ag85抗原诊断TBM简便易行,且敏感度、特异度均较满意,可作为诊断TBM的有效方法。 展开更多

关键词 结核性脑膜炎 脑脊液 Ag85抗原

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结核杆菌抗原Ag85A基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：1

7

作者 王庆敏 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期122-125,共4页

目的:将结核分枝杆菌Ag85A抗原基因克隆并在大肠杆菌中表达。方法:用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中扩增Ag85A抗原基因,然后将其插入到原核表达载体pGEX5T中,构建成pGEX5T-Ag85A重组质粒。经IPTG诱导使该基因在E.coli k802菌中表达,亲... 目的:将结核分枝杆菌Ag85A抗原基因克隆并在大肠杆菌中表达。方法:用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中扩增Ag85A抗原基因,然后将其插入到原核表达载体pGEX5T中,构建成pGEX5T-Ag85A重组质粒。经IPTG诱导使该基因在E.coli k802菌中表达,亲和层析法纯化蛋白,Western印迹法验证表达蛋白的抗原性。结果:扩增出了约0.9kb的单一条带,并成功地构建了pGEX5T-Ag85A重组子;经IPTG诱导后,Ag85A蛋白在k802菌中获得了表达,表达的蛋白条带大小约58000,与预期结果相符;纯化后获得了较单一的蛋白条带。蛋白纯化前后均可被结核病患者血清特异地识别。结论:成功地克隆了Ag85A抗原基因,并将其在大肠杆菌中进行了表达、纯化,为将其应用于结核病诊断和防治的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Ag85a抗原 分子克隆 基因表达

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牛结核分枝杆菌抗原蛋白Ag85B的表达及纳米疫苗的制备 被引量：1

8

作者 杜军 邓光存 《湖北农业科学》 2015年第6期1421-1424,1429,共5页

以牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis,MTB)C68001株基因组DNA为模板,克隆免疫优势抗原基因Ag85B,构建重组表达质粒p ET-28a-ag85b,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。以... 以牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis,MTB)C68001株基因组DNA为模板,克隆免疫优势抗原基因Ag85B,构建重组表达质粒p ET-28a-ag85b,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。以明胶为佐剂,Ag85B为目的抗原制备纳米疫苗,并对其进行了相关的工艺检测。以BCA法建立测定蛋白质含量的标准曲线,在此基础上检测纳米疫苗的载药率和包封率。结果显示,明胶佐剂疫苗的载药率为71.83%,包封率为41.03%,符合纳米疫苗的工艺要求。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis MTB) Ag85B抗原 原核表达 纳米疫苗

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结核分支杆菌抗原85复合物的研究及应用前景 被引量：1

9

作者 陆宇 朱莉贞 段连山 《结核病与胸部肿瘤》 2003年第3期171-177,共7页

关键词 结核分支杆菌 抗原85复合物 蛋白 纤维结合素 FN

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结核杆菌抗原85复合物研究进展

10

作者 吴学忠 张爱华 +2 位作者 徐洁 魏海明 田志刚 《中国麻风皮肤病杂志》 2005年第5期383-386,共4页

抗原85复合物是一组具有较强细胞免疫和体液免疫活性的分枝杆菌分泌性蛋白。近几年抗原85复合物在来源、分布、基因结构、同源性、生化特性、免疫学功能及用途等方面的研究,有了长足进展,提示抗原85复合物在结核和麻风病的预防、诊断及... 抗原85复合物是一组具有较强细胞免疫和体液免疫活性的分枝杆菌分泌性蛋白。近几年抗原85复合物在来源、分布、基因结构、同源性、生化特性、免疫学功能及用途等方面的研究,有了长足进展,提示抗原85复合物在结核和麻风病的预防、诊断及肿瘤的治疗方面具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 结核杆菌 抗原85复合物 细胞免疫 体液免疫 基因结构 免疫学功能

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抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原(Ag85B-ESAT-6)亚单位疫苗黏膜免疫对结核分枝杆菌的免疫应答

11

作者 宁唤唤 张芳琳 +7 位作者 康健 王立飞 路延之 任瑞 白鹭 梁璇 谢燕玲 柏银兰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期886-892,共7页

目的评价抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原融合蛋白(AE)亚单位疫苗经黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答及其对结核分枝杆菌(MTB)感染的保护力。方法分别用AE、AE联合环二腺苷酸(c-di-AMP)亚单位疫苗经鼻黏膜免疫小鼠,ELISA检测抗体水平以及1型辅助T... 目的评价抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原融合蛋白(AE)亚单位疫苗经黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答及其对结核分枝杆菌(MTB)感染的保护力。方法分别用AE、AE联合环二腺苷酸(c-di-AMP)亚单位疫苗经鼻黏膜免疫小鼠,ELISA检测抗体水平以及1型辅助T(Th1)细胞的细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)和Th2细胞的IL-10分泌水平,实时荧光定量PCR检测IFN-γ、IL-2、IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。MTB静脉感染免疫小鼠,ELISA检测感染小鼠血清抗体及脾细胞细胞因子分泌水平,HE染色分析肺病理改变,平板法计数菌落形成单位(CFU)检测脾和肺荷菌数。结果AE和AE联合c-di-AMP经鼻黏膜免疫可诱导小鼠产生高水平的特异性抗体,促进脾细胞增殖、脾和肺脏Th1/Th2型细胞因子和TNF-α转录增加、脾Th1/Th2型细胞因子分泌增加。小鼠MTB感染后,与对照组相比,AE和AE联合c-di-AMP免疫小鼠特异性抗体水平仍升高,Th1/Th2型细胞免疫应答增强,肺组织呈炎症反应,肺、脾荷菌数显著降低,且AE联合c-di-AMP免疫小鼠肺、脾荷菌数进一步降低。结论AE亚单位疫苗经黏膜接种可诱导小鼠产生体液与细胞免疫应答,并提供对MTB感染的保护力;c-di-AMP为佐剂可在一定程度上提高AE的免疫原性。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌(MTB) 亚单位疫苗 抗原85B(Ag85B) 6kDa早期分泌靶抗原(ESAT-6) 环二腺苷酸(c-di-AMP) 黏膜免疫

原文传递

结核杆菌Ag85A和mGM-CSF共同表达载体的构建与CTL活性的诱导 被引量：5

12

作者 陈峻崧 窦骏 +4 位作者 赵枫姝 陈国兵 房雪峰 洪晓武 唐权 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期399-403,共5页

构建、鉴定结核杆菌Ag85A和细胞因子GM CSF共同表达质粒 ,为研究新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。先从质粒pBSby5中扩增出结核杆菌Ag85A基因序列并插入到质粒pIRES上成为pI85A ,用PCR方法从pc mGM CSF质粒中扩增出mGM CSF ,构建于pI... 构建、鉴定结核杆菌Ag85A和细胞因子GM CSF共同表达质粒 ,为研究新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。先从质粒pBSby5中扩增出结核杆菌Ag85A基因序列并插入到质粒pIRES上成为pI85A ,用PCR方法从pc mGM CSF质粒中扩增出mGM CSF ,构建于pI85A质粒上 ,成为共同表达质粒pI85AGM。然后转染 772 1细胞 ,进行蛋白的表达和鉴定。结果经酶切鉴定和DNA测序证实重组质粒构建正确。通过RT PCR、SDS PAGE、Westernblot检测证实Ag85A与mGM CSF基因的转录和蛋白表达正确。Ag85A与mGM CSF免疫组小鼠的CTL活性明显增强。表明细胞因子GM CSF和结核杆菌Ag85A共同表达载体构建成功 ,并能诱导小鼠的CTL活性 。 展开更多

关键词 结核杆菌 GM-CSF 抗原85a 重组质粒 基因疫苗

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免疫组织化学染色检测肺结核组织中的Ag85B

13

作者 方诗宇 段绍琪 +3 位作者 陈雪倩 于江 孙杰 刘凤君 《川北医学院学报》 CAS 2023年第9期1165-1168,共4页

目的:探讨结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85B在肺结核组织中的分布特点,初步分析其在肺结核病理学诊断中的应用价值。方法:收集医院病理科手术切除的肺结核组织标本19例,以非肺结核肺组织(肺癌切除标本正常组织断端20例)为阴性对照。通过免... 目的:探讨结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85B在肺结核组织中的分布特点,初步分析其在肺结核病理学诊断中的应用价值。方法:收集医院病理科手术切除的肺结核组织标本19例,以非肺结核肺组织(肺癌切除标本正常组织断端20例)为阴性对照。通过免疫组化检测Ag85B的表达情况,并与抗酸染色进行对比。结果:Ag85B免疫组化阳性信号主要沉积在结核坏死灶及周围,分布与抗酸杆菌相关、范围更广。19例肺结核标本中,10例抗酸染色阳性,抗酸染色敏感度为52.63%(10/19);10例抗酸染色阳性的标本免疫组织化学染色全部阳性,9例抗酸染色阴性的标本中免疫组化阳性的标本有6例,免疫组化敏感度为84.21%(16/19)。20例阴性对照组中,3例免疫组化呈阳性,免疫组化特异度为85.00%(17/20)。结论:Ag85B免疫组化阳性信号表达范围比抗酸杆菌分布更广,较抗酸染色具有更高的敏感性,可作为结核确诊的一种补充手段。 展开更多

关键词 传染病 抗原Ag85B 免疫组织化学染色 肺结核

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卡介苗分泌型Ag85A基因fbpA转化番茄的检测与鉴定 被引量：3

14

作者 刘凤娟 陈清 俞守义 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第4期254-256,共3页

目的了解卡介苗分泌型Ag85A基因fbpA在番茄中转化的情况。方法采用叶片煮沸快速PCR法检测fbpA基因;以番茄总DNA为模板,PCR法扩增目的基因fbpA;采用Southern blot检测目的基因fbpA在番茄染色体DNA中的整合情况,Western blot检测分泌型Ag... 目的了解卡介苗分泌型Ag85A基因fbpA在番茄中转化的情况。方法采用叶片煮沸快速PCR法检测fbpA基因;以番茄总DNA为模板,PCR法扩增目的基因fbpA;采用Southern blot检测目的基因fbpA在番茄染色体DNA中的整合情况,Western blot检测分泌型Ag85A在番茄果实中的表达情况。结果叶片煮沸快速PCR检出21株fbpA阳性转化不定芽,以番茄总DNA为模板的PCR法扩增出其中9株转化植株带有目的基因fbpA。Southern blot证实这9株番茄染色体DNA中整合了外源目的基因fbpA,Western blot检测到其中5株番茄果实中表达的卡介苗分泌型Ag85A与结核病人血清发生特异性免疫反应。结论番茄染色体DNA中整合了外源目的基因fbpA,果实中有该基因产物分泌型Ag85A表达。 展开更多

关键词 抗原85a fbpA基因 番茄 鉴定

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结核分支杆菌Ag85A/hsp70嵌合DNA疫苗的免疫效应研究

15

作者 石庆凤 钟森 +2 位作者 邓存良 史小玲 王明勇 《泸州医学院学报》 2005年第3期216-218,共3页

目的:比较不同疫苗的免疫效应。方法:昆明鼠50只随机分为5组,即生理盐水组,neo组,BCG组,hsp70与Ag85A联合组,Ag85A/hsp70组,每组10只。两次加强免疫后,检测小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)的水平。结果:测得各组IFN-γ依次... 目的:比较不同疫苗的免疫效应。方法:昆明鼠50只随机分为5组,即生理盐水组,neo组,BCG组,hsp70与Ag85A联合组,Ag85A/hsp70组,每组10只。两次加强免疫后,检测小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)的水平。结果:测得各组IFN-γ依次为:471.5±76.8pg/ml、574.4±48.5pg/ml、630.0±60.5pg/ml、815.8±119.4pg/ml、822.8±106.7pg/ml;测得各组IL-2依次为:37.5±5.4pg/ml、39.0±7.9pg/ml、49.3±8.2pg/ml、58.8±14.1pg/ml、73.5±17.6pg/ml。嵌合DNA疫苗组与前4组比较有显著性差异(P<0.01)。联合免疫组与BCG组也有显著性差异(P<0.01)。结论:Ag85A/hsp70嵌合DNA疫苗能刺激更多的免疫活性细胞,免疫效应最强。编码不同抗原基因的多个质粒联合免疫与BCG免疫相比免疫效应更强,也具有较高的免疫保护性。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 疫苗 DNA 抗原85a 热休克蛋白70

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结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力 被引量：11

16

作者 师长宏 范雄林 +3 位作者 柏银兰 薛莹 张海 徐志凯 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第18期1633-1636,共4页

目的 :研究Ag85B与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护力 .方法 :采用皮下包埋的方法 ,将预先转移到硝酸纤维素膜上的表达蛋白免疫小鼠 3次 ,每次间隔 2wk,用MTB培养上清滤液蛋白 (culturefiltrat... 目的 :研究Ag85B与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护力 .方法 :采用皮下包埋的方法 ,将预先转移到硝酸纤维素膜上的表达蛋白免疫小鼠 3次 ,每次间隔 2wk,用MTB培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins,CFP)作为抗原 ,ELASA测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度 .为了检测融合蛋白免疫小鼠引起的细胞免疫应答 ,最后一次免疫完成后 4wk ,取一部分免疫小鼠分离脾淋巴细胞 ,体外用抗原刺激 ,MTT法检测淋巴细胞刺激反应 ,ELISA检测悬液中IFN γ水平 .另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv ,4wk后计数脾脏细菌负荷数 .结果 :Ag85B ESAT6蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶10 0 0 ,ESAT6 Ag85B蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶5 0 0 0 .融合蛋白Ag85B ESAT6和ESAT6 Ag85B免疫组淋巴细胞刺增殖指数分别为 2 .4 0± 0 .17和 2 .6 0± 0 .2 5 ,而生理盐水组只有 0 .90± 0 .2 1;相对应的IFN γ含量分别为 (3.5 1± 0 .30 ) μg/L和 (4 .0 5± 0 .4 1) μg/L ,显著高与生理盐水对照组 (0 .5 0± 0 .2 5 ) μg/L ,P <0 .0 5 ,但不及BCG免疫组 (5 .5 5±0 .31) μg/L .与生理盐水免疫组 (细菌负荷6 .31± 0 .13)相比较 ,融合蛋白免疫的BALB/c小鼠 。 展开更多

关键词 分支杆菌 结核 疫苗 抗原85B ESAT6 重组融合蛋白质类

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Ag85B核酸疫苗的免疫原性和保护性研究 被引量：7

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作者 呼西旦 蔡宏 +2 位作者 李淑霞 田霞 朱玉贤 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第5期365-368,共4页

扩增结核分枝杆菌的Ag85B基因并克隆于真核表达载体 pJW4 30 4 ,转染COS - 7细胞后 ,Westernblot检测表明该基因在细胞内得到了正确表达。用该质粒免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,免疫三次后 ,用纯化的重组蛋白Ag85B检测小鼠血清中的抗体 ,抗体滴... 扩增结核分枝杆菌的Ag85B基因并克隆于真核表达载体 pJW4 30 4 ,转染COS - 7细胞后 ,Westernblot检测表明该基因在细胞内得到了正确表达。用该质粒免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,免疫三次后 ,用纯化的重组蛋白Ag85B检测小鼠血清中的抗体 ,抗体滴度达到 1:10 2 4 0 0 ,(γ -干扰素测定表明 ,免疫动物的干扰素含量达到 116 0 3± 10 4 pg /ml。实验结果说明Ag85B核酸疫苗在实验动物体内引起了较强的免疫应答。三次免疫后经静脉强毒攻击 ,免疫组小鼠肺脏和脾脏的细菌数比对照空载体组分别减少了 1 5和 15倍以上。本研究表明 ,该核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞和体液免疫应答并获得较高的保护效率。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌病 Ag85B分泌蛋白抗原 核酸疫苗 免疫原性 保护效率

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结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗抗结核作用的研究 被引量：7

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作者 梁艳 吴雪琼 +7 位作者 张俊仙 白雪娟 阳幼荣 李宁 余琦 李忠明 王兰 史迎昌 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期181-183,共3页

结核病是由Mtb引起的一种呼吸道传染病,全球结核病疫情仍然十分严峻,而卡介苗预防结核病的效果并不理想,研究新型结核病疫苗已成为国内外结核病研究的热点之一。将本课题组自1998年至今研究MtbAg85ADNA疫苗的免疫原性、治疗效果进行综... 结核病是由Mtb引起的一种呼吸道传染病,全球结核病疫情仍然十分严峻,而卡介苗预防结核病的效果并不理想,研究新型结核病疫苗已成为国内外结核病研究的热点之一。将本课题组自1998年至今研究MtbAg85ADNA疫苗的免疫原性、治疗效果进行综合与概述,结果表明Mtb Ag85ADNA疫苗可诱导小鼠体液免疫和Th1型细胞免疫应答,可减少小鼠组织中的Mtb尤其是耐多药Mtb的数目,该疫苗与常规化疗联合不仅可提高机体免疫力,并可有效地杀灭或抑制Mtb,从而提高化疗效果。 展开更多

关键词 疫苗 DNA 抗原85a 抗原 细菌 结核/治疗

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Ag85B调节小鼠髓样树突状细胞的成熟和TSLP介导下TSLPR和OX40L的表达 被引量：1

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作者 钱江 吴健 +5 位作者 安弘 房祥峰 李东风 杨士芳 孟锦绣 高兴林 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1680-1687,共8页

目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CS... 目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱生C57BL/6小鼠未成熟的m DCs,并运用免疫磁珠分离的方法纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行形态学观察和细胞表型鉴定;分别用0、50、100、200μg/L不同浓度的Ag85B或TSLP作用于纯化并鉴定后的m DCs,培养24 h,流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取最佳的Ag85B或TSLP处理浓度。随后将m DCs随机分为空白对照组、Ag85B处理组、TSLP处理组和Ag85B＋TSLP处理组,培养24 h后检测m DCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达。结果：体外诱导培养7 d,倒置相差显微镜下可见细胞表面呈现不规则树突样突起,扫描电镜下见细胞类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟m DCs的形态学特点;纯化后的m DCs表达表面分子CD11c的细胞较表达共刺激分子CD80和CD86的细胞多,符合未成熟m DCs的表型特征。与空白对照组比较,50~200μg/L的Ag85B处理组m DCs表达CD80和CD86的细胞比率显著增高（P〈0.05）,表达TSLPR和OX40L的细胞比率无显著差异。与空白对照组相比较,50、100和200μg/L浓度的TSLP处理组的m DCs表达CD80和CD86的细胞比率均显著增加（P〈0.05）;与空白对照组和50μg/L TSLP处理组相比较,100μg/L和200μg/L TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率均显著升高（P〈0.05）。选取200μg/L作为Ag85B和TSLP的优化作用浓度,结果发现Ag85B处理组和Ag85B＋TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率较TSLP处理组均显著降低（P〈0.05）,与空白对照组比较差异不显著。结论：Ag85B可通过上调m DCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介导的m DCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L,推测Ag85B可能通过TSLP介导的m DCs途径抑制气道炎症。 展开更多

关键词 抗原85B 胸腺基质淋巴细胞生成素 髓样树突状细胞 胸腺基质淋巴细胞生成素受体 OX40L

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结核分枝杆菌Ag85A真核表达质粒的构建与鉴定 被引量：1

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作者 张帆 赵晔 +3 位作者 钟森 史小玲 陈枫 张建军 《泸州医学院学报》 2003年第3期203-206,共4页

目的 :构建结核分枝杆菌Ag85A重组真核表达质粒 ,为DNA疫苗的研究提供靶基因。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出结核杆菌Ag85A分泌性蛋白的基因 ,应用T -A克隆技术 ,直接与pUCm -T载体连接 ,转化... 目的 :构建结核分枝杆菌Ag85A重组真核表达质粒 ,为DNA疫苗的研究提供靶基因。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出结核杆菌Ag85A分泌性蛋白的基因 ,应用T -A克隆技术 ,直接与pUCm -T载体连接 ,转化大肠杆菌JM1 0 9(E .coliJM1 0 9) ,蓝白筛选 ,阳性克隆经酶切鉴定和DNA测序证实基因碱基无误后 ,用NheⅠ和XbaⅠ双酶消化 ,回收的小片段与用NheⅠ和XbaⅠ消化的真核表达质粒pCI-neo连接 ,转化E .coliJM1 0 9,筛选阳性克隆酶切鉴定。结果 :经酶切鉴定 ,证实结核分枝杆菌重组真核表达质粒pCI-Ag85A构建正确。结论 :结核分枝杆菌真核表达质粒pCI-Ag85A构建成功 。 展开更多

关键词 结核杆菌 抗原85 pCI-neo 克隆

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