抑制抗增殖蛋白2增强非小细胞肺癌细胞系A549对厄洛替尼敏感性

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作者 张婧 杨自更 +4 位作者 蔡文琴 曹维维 韦红梅 薛茜茜 吴宾 《基础医学与临床》 2024年第3期325-332,共8页

目的探讨抗增殖蛋白2(PHB2)在非小细胞肺癌细胞系A549对厄洛替尼(Erl)敏感性中的作用及其机制。方法在A549细胞中转染PHB2小干扰RNA(siPHB2),观察抑制PHB2表达对Erl诱导的细胞增殖和凋亡的影响。利用MitoTracker染色和感染绿色荧光蛋白... 目的探讨抗增殖蛋白2(PHB2)在非小细胞肺癌细胞系A549对厄洛替尼(Erl)敏感性中的作用及其机制。方法在A549细胞中转染PHB2小干扰RNA(siPHB2),观察抑制PHB2表达对Erl诱导的细胞增殖和凋亡的影响。利用MitoTracker染色和感染绿色荧光蛋白-微管相关蛋白(GFP-LC3)观察微管相关蛋白(LC3)和线粒体共定位,EdU实验检测细胞增殖,平板集落检测细胞集落形成能力,TUNEL实验检测细胞凋亡,Western blot检测PHB2和LC3Ⅱ蛋白表达水平,用相应试剂盒检测线粒体膜电位、细胞色素c含量和呼吸链复合物Ⅰ/Ⅱ/Ⅴ活性。结果与siPHB2组和siCtrl+Erl组相比,siPHB2+Erl组EdU阳性的细胞数显著减少(P<0.05),集落形成数显著减少(P<0.05),TUNEL阳性的细胞数显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著降低(P<0.05),线粒体呼吸链复合物Ⅰ/Ⅱ/Ⅴ活性均显著降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05),而细胞质内细胞色素c的增加(P<0.05)。结论抑制PHB2改善A549细胞对Erl的敏感性,其机制可能与抑制PHB2介导的线粒体自噬有关。 展开更多

关键词 抗增殖蛋白2 厄洛替尼 非小细胞肺癌 增殖 凋亡

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敲减抗增殖蛋白2促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡 被引量：1

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作者 张婧 杨自更 +4 位作者 韦红梅 宁海虹 薛茜茜 金玲 吴宾 《基础医学与临床》 2023年第10期1522-1529,共8页

目的探讨抑制抗增殖蛋白2(PHB2)表达对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的影响及机制。方法慢病毒感染非小细胞肺癌细胞系A549,建立敲减PHB2的稳转细胞株,用动力相关蛋白1(DRP1)抑制剂Mdivi-1处理敲减PHB2的A549细胞。Western blot检测PHB2、... 目的探讨抑制抗增殖蛋白2(PHB2)表达对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的影响及机制。方法慢病毒感染非小细胞肺癌细胞系A549,建立敲减PHB2的稳转细胞株,用动力相关蛋白1(DRP1)抑制剂Mdivi-1处理敲减PHB2的A549细胞。Western blot检测PHB2、p-DRP1(Ser616)和DRP1蛋白表达水平;TUNEL染色和annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡;MitoTracker染色评估线粒体分裂情况;用相应试剂盒检测线粒体含量、柠檬酸合酶活性和细胞色素c含量。结果与shCtrl组相比,shPHB2组A549细胞凋亡率增加(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂增加(P<0.05),ATP含量减少(P<0.05),柠檬酸合酶活性降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05)。与shPHB2组相比,shPHB2+Mdivi-1组A549细胞凋亡率减少(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂减少(P<0.05),ATP含量增加(P<0.05),柠檬酸合酶活性增加(P<0.05),线粒体内细胞色素c增加(P<0.05)。结论抑制PHB2促进A549细胞凋亡,其机制可能与促进DRP1介导的线粒体分裂有关。 展开更多

关键词 抗增殖蛋白2 线粒体分裂 非小细胞肺癌 动力相关蛋白1 凋亡

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抗增殖蛋白2在线粒体中的功能研究进展

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作者 李志杰 王瑞 +3 位作者 刘蕾 于莎莉 江俊康 赵新元 《交通医学》 2022年第4期340-343,346,共5页

线粒体为机体提供正常生命活动所需能量,在生长发育、细胞周期、细胞凋亡及细胞分裂分化中发挥重要作用,线粒体功能发生障碍可介导多种疾病的发生发展。抗增殖蛋白2(prohibitin 2,PHB2)结构高度保守,定位于细胞膜、细胞核、线粒体等细... 线粒体为机体提供正常生命活动所需能量,在生长发育、细胞周期、细胞凋亡及细胞分裂分化中发挥重要作用,线粒体功能发生障碍可介导多种疾病的发生发展。抗增殖蛋白2(prohibitin 2,PHB2)结构高度保守,定位于细胞膜、细胞核、线粒体等细胞结构。最近关于PHB2在线粒体功能中作用的研究不断增多,本文主要从线粒体自噬、线粒体动力学、线粒体凋亡以及氧化磷酸化过程四个方面进行阐述,旨在提高对PHB2功能作用的认识,为相关机制进一步研究提供理论基础。 展开更多

关键词 抗增殖蛋白2 线粒体 自噬 动力学 凋亡 氧化磷酸化

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抗增殖蛋白2在皮肤鳞状细胞癌中的表达及其对A431细胞增殖的影响

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作者 孔晓芸 缪旭 +3 位作者 张冬梅 崔恒祥 施健 刘念念 《中国麻风皮肤病杂志》 2021年第8期499-505,共7页

目的:观察抗增殖蛋白2在皮肤鳞状细胞癌、鲍温病、日光性角化病组织中的表达情况及其对A431细胞增殖作用的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测抗增殖蛋白2在40例皮肤鳞状细胞癌、18例鲍温病、17例日光性角化病组织以及9例正常皮肤组... 目的:观察抗增殖蛋白2在皮肤鳞状细胞癌、鲍温病、日光性角化病组织中的表达情况及其对A431细胞增殖作用的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测抗增殖蛋白2在40例皮肤鳞状细胞癌、18例鲍温病、17例日光性角化病组织以及9例正常皮肤组织中的表达水平。采用CRISPR-Cas9法构建两组靶向敲除抗增殖蛋白2的皮肤鳞状细胞癌A431细胞模型(KO299组及KO320组),使用Western印迹法证实其敲除效果,通过CCK8法及细胞克隆形成实验分析其对细胞增殖的影响。使用Western印迹法对AKT蛋白表达及其ser473位点磷酸化产物水平进行分析。结果:抗增殖蛋白2在皮肤鳞状细胞癌(90.00%)、鲍温病(66.70%)、日光性角化病(41.18%)的表达高于正常组织(0.00%)(均P<0.05),皮肤鳞状细胞癌抗增殖蛋白2表达高于日光性角化病(P<0.05)。在不同性别、年龄、部位、病程、肿瘤直径、浸润深度、分化、Broder分级的皮肤鳞状细胞癌组织中抗增殖蛋白2的表达差异无统计学意义(均P>0.05)。两组抗增殖蛋白2敲除组A431细胞的蛋白表达水平、细胞活力、克隆形成数显著低于对照组(均P<0.05)。p-AKT表达随抗增殖蛋白2表达水平的降低而显著下调(均P<0.01)。结论:抗增殖蛋白2的表达可能促进了皮肤鳞状细胞癌的发生,并且其机制可能与促癌基因AKT蛋白活化相关。 展开更多

关键词 抗增殖蛋白2 皮肤鳞状细胞癌 细胞增殖 蛋白激酶B

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抗增殖蛋白2在帕金森病发病线粒体机制中的作用

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作者 张泰瑜 冯红 《自然杂志》 2020年第6期471-474,共4页

帕金森病是第二大神经退行性疾病,目前发病机制尚不明确且无法治愈。抗增殖蛋白2参与维持线粒体形态和功能的稳定、凋亡等多种生物学进程。文章主要阐述抗增殖蛋白2与帕金森病之间的联系,进而探讨抗增殖蛋白2在帕金森病发病线粒体机制... 帕金森病是第二大神经退行性疾病,目前发病机制尚不明确且无法治愈。抗增殖蛋白2参与维持线粒体形态和功能的稳定、凋亡等多种生物学进程。文章主要阐述抗增殖蛋白2与帕金森病之间的联系,进而探讨抗增殖蛋白2在帕金森病发病线粒体机制中的作用。 展开更多

关键词 抗增殖蛋白2 帕金森病 线粒体机制

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抗增殖蛋白2：一种线粒体和细胞核之间的重要媒介 被引量：3

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作者 时颖 李铁松 李庆伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期32-37,共6页

抗增殖蛋白2(prohibitin2,PHB2)是抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)家族中的重要成员,是主要定位于线粒体内膜的多功能蛋白质,对维持线粒体形态和功能的稳定具有重要作用,同时也是细胞内稳态和细胞分化的重要调节因子。随着对PHB2的深入研究... 抗增殖蛋白2(prohibitin2,PHB2)是抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)家族中的重要成员,是主要定位于线粒体内膜的多功能蛋白质,对维持线粒体形态和功能的稳定具有重要作用,同时也是细胞内稳态和细胞分化的重要调节因子。随着对PHB2的深入研究,已发现PHB2是一种线粒体和细胞核之间重要的媒介。PHB2是细胞中必不可少的,它直接参与多种细胞进程并发挥重要作用,如调节转录因子的转录活性、调节细胞的分化与凋亡、维持线粒体形态和功能的稳定、调节姐妹染色单体的结合、神经细胞的修复和再生、轴突的发育形成和增强细胞氧化应激耐受性。近年来,PHB2在病理生理学中的作用及其在疾病治疗中的药靶地位受到高度重视。本文对PHB2研究的最新进展进行综述。 展开更多

关键词 抗增殖蛋白2 线粒体 细胞核 功能蛋白 细胞进程

原文传递

系膜细胞缺氧损伤后抗增殖蛋白、转化生长因子-β_1、α-平滑肌肌动蛋白表达变化 被引量：3

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作者 宋坤岭 覃远汉 +3 位作者 蒋玲 龚玲 江星伯 余雪云 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第47期28-30,共3页

目的观察系膜细胞(MCs)缺氧损伤后抗增殖蛋白(PHB)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化。方法将体外培养的大鼠MCs随机分为模型组和正常组。正常组在常规条件下培养,不做任何处理;模型组置于缺氧小室中(... 目的观察系膜细胞(MCs)缺氧损伤后抗增殖蛋白(PHB)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化。方法将体外培养的大鼠MCs随机分为模型组和正常组。正常组在常规条件下培养,不做任何处理;模型组置于缺氧小室中(充缺氧气体950 m L/L N2和50 m L/L CO2)密封48 h建立MCs缺氧损伤模型。RT-PCR法检测两组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA mRNA,Western blotting法检测PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)蛋白。结果模型组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA mRNA相对表达量分别为0.56±0.04、0.51±0.06、1.45±0.11、7.39±1.72,正常组分别为1.0±0.00、1.0±0.00、1.0±0.00、1.0±0.00,两组比较,P均<0.05。模型组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白相对表达量分别为0.47±0.04、0.25±0.02、1.12±0.06、1.35±0.12、0.89±0.07,正常组分别为0.91±0.04、0.56±0.07、0.75±0.05、0.79±0.09、0.52±0.03,两组比较,P均<0.05。模型组PHB1蛋白与TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白表达均呈负相关(r=-0.924、-0.871、-0.840,P均<0.05),PHB2蛋白与TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白表达均呈负相关(r=-0.928、-0.901、-0.821,P均<0.05)。结论系膜细胞缺氧损伤后PHB表达降低,TGF-β_1、α-SMA表达升高,PHB1表达与TGF-β_1、α-SMA表达均呈负相关。 展开更多

关键词 系膜细胞损伤 抗增殖蛋白1 抗增殖蛋白2 转化生长因子-β1 Α-平滑肌肌动蛋白 Ⅳ型胶原

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日本血吸虫PROHIBITIN 2克隆和表达及免疫保护效果评估

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作者 杨珊珊 杨静云 +7 位作者 张旻 张倩 何静 黄明月 窦记晨 洪炀 林矫矫 傅志强 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第6期83-90,共8页

为研究日本血吸虫PROHIBITIN的生物特性,利用PCR和3’RACE扩增到日本血吸虫抗增殖蛋白2(Schistosoma japonicum Prohibitin 2,Sj PHB2)基因,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-SjPHB2,并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,用Western blot检测其免... 为研究日本血吸虫PROHIBITIN的生物特性,利用PCR和3’RACE扩增到日本血吸虫抗增殖蛋白2(Schistosoma japonicum Prohibitin 2,Sj PHB2)基因,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-SjPHB2,并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,用Western blot检测其免疫原性。将重组蛋白免疫小鼠评估其免疫保护效果,ELISA检测其特异性抗体水平。结果显示:日本血吸虫Sj PHB2基因编码299个氨基酸,含PHB结构域;含GST标签的r Sj PHB2融合蛋白的分子量为59 kDa;r Sj PHB2能被GST单克隆抗体抗和免疫血清识别,表明其具有较好的免疫原性;将r Sj PHB2结合ISA206佐剂免疫BALB/c小鼠可诱导较高水平的特异性IgG抗体,但未能诱导显著的减虫率和减卵率。本文结果为开展日本血吸虫Sj PHB2的表达特性和生物学功能提供了基础。 展开更多

关键词 日本血吸虫 抗增殖蛋白2 克隆 表达

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基于基因表达谱芯片杂交分析Lamprey-PHB2转染前后Chang liver细胞的基因表达差异

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作者 时颖 李晴 +2 位作者 郭思呈 李庆伟 李铁松 《上海师范大学学报（自然科学版）》 2018年第5期558-564,共7页

选取了10个物种与本课题组前期克隆得到的东北七鳃鳗抗增殖蛋白2(Lm-PHB2)进行氨基酸序列相似性对比,检测PHB2基因进化水平,结果表明各物种的PHB2氨基酸序列在PHB结构域处高度保守,但在N-端和C-端氨基酸序列保守性较低.将重组质粒pEGFP-... 选取了10个物种与本课题组前期克隆得到的东北七鳃鳗抗增殖蛋白2(Lm-PHB2)进行氨基酸序列相似性对比,检测PHB2基因进化水平,结果表明各物种的PHB2氨基酸序列在PHB结构域处高度保守,但在N-端和C-端氨基酸序列保守性较低.将重组质粒pEGFP-N1-Lm-PHB2瞬时转染入张氏肝(CHL)细胞后,利用基因表达谱芯片技术分析基因的表达差异.结果显示CHL细胞中共有270条显著差异表达基因,其中显著上调基因共141条,显著下调基因共129条,涉及细胞信号转导、细胞周期调节、细胞增殖、细胞代谢和细胞凋亡等多个方面.通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)对基因表达谱芯片分析结果进行验证,结果显示转染pEGFP-N1-Lm-PHB2质粒后,细胞周期基因CDC25C、氧化应激相关基因(CAT,SOD,GST)和抗细胞凋亡基因HAX1均有显著性差异. 展开更多

关键词 七鳃鳗 抗增殖蛋白2(PHB2) 基因表达谱芯片 基因表达

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曼氏无针乌贼Phb2基因的克隆和其在不同生长阶段的表达分析 被引量：2

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作者 毋玉婷 郭宝英 +4 位作者 祁鹏志 吕振明 吴常文 史会来 平洪领 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期9-17,共9页

Phb2是抗增殖蛋白(Prohibitin)的一个亚型。本研究利用RACE技术首次获得了曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)Phb2基因的全长序列,该序列全长为1283 bp,其中5′非编码区(5′-UTR)150 bp,3′非编码区(3′-UTR)236 bp,开放阅读框(ORF)897 bp... Phb2是抗增殖蛋白(Prohibitin)的一个亚型。本研究利用RACE技术首次获得了曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)Phb2基因的全长序列,该序列全长为1283 bp,其中5′非编码区(5′-UTR)150 bp,3′非编码区(3′-UTR)236 bp,开放阅读框(ORF)897 bp,预测编码298个氨基酸。序列分析表明,曼氏无针乌贼Phb2基因编码的蛋白无信号肽,第20~42位氨基酸为跨膜结构,包含1个PHB家族的结构域。采用荧光定量PCR技术检测其在曼氏无针乌贼不同生长时期(幼体、产卵前、产卵中、产卵后濒死前)各组织中的表达情况,结果显示,Phb2在4个时期的各组织中均有表达,其中,幼体和濒死前表达量较低,产卵前和产卵中的表达量则相对较高,在各时期中脑、肝表达较多。视腺作为与生殖调控有关的内分泌器官,其Phb2基因表达具有时期差异性,在产卵后的表达量由产卵时期的高表达大幅下降,说明Phb2具有周期调节、控制细胞衰老和凋亡的多效性功能。本研究结果可为进一步了解抗增殖蛋白对曼氏无针乌贼的抗衰老作用提供参考。 展开更多

关键词 抗增殖蛋白Phb2 表达分析 曼氏无针乌贼 抗衰老

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PHB2抑制低氧性肺动脉高压小鼠右心室重塑的作用

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作者 吴宾 张婧 +4 位作者 卫玮 蔡冰冰 张阳 袁铭 杨自更 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第1期25-30,共6页

目的:探讨抗增殖蛋白2(PHB2)在低氧性肺动脉高压(HPH)诱导的右心室重塑中的作用及可能机制。方法:将普通8周龄的C57BL/6小鼠随机分为:对照组(Control)、HPH组、HPH+空病毒(HPH+vector)组、HPH+过表达PHB2(HPH+PHB2)组。HPH组、HPH+空病... 目的:探讨抗增殖蛋白2(PHB2)在低氧性肺动脉高压(HPH)诱导的右心室重塑中的作用及可能机制。方法:将普通8周龄的C57BL/6小鼠随机分为:对照组(Control)、HPH组、HPH+空病毒(HPH+vector)组、HPH+过表达PHB2(HPH+PHB2)组。HPH组、HPH+空病毒组、HPH+过表达PHB2组置于低压低氧人工舱内维持4 w,对照组置于常压常氧环境中维持4 w。实验开始3 w前,尾静脉注射平滑肌特异性PHB2过表达的AAV9腺相关病毒及其对照病毒。评估小鼠右室血流动力学、右室重塑指标、炎症、氧化应激、血管活性物质水平以及肺组织PHB2和p-Stat3蛋白表达。结果:与对照组相比,HPH组和HPH+空病毒组RVSP、RVAW、RVHI显著增加(P<0.05),而RVID显著降低(P<0.05),右室CVF显著增加(P<0.05),血浆ET-1和BNP显著增加(P<0.05),血浆NO、总NOS和iNOS显著降低(P<0.05),右心IL-1β、IL-6及TNF-α显著增加(P<0.05),SOD和GSH-Px显著降低(P<0.05),肺组织PHB2表达降低(P<0.05),p-STAT3表达增加(P<0.05)。与HPH组和HPH+空病毒组相比,HPH+过表达PHB2组RVSP、RVAW、RVHI显著降低(P<0.05),而RVID显著增加(P<0.05),右室CVF显著降低(P<0.05),血浆ET-1和BNP显著降低(P<0.05),血浆NO、总NOS和iNOS显著增加(P<0.05),右心IL-1β、IL-6及TNF-α显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px显著增加(P<0.05),肺组织PHB2表达增加(P<0.05),p-STAT3表达降低(P<0.05)。结论:PHB2可减轻HPH诱发的右心室重塑,其机制可能与PHB2抑制STAT3的磷酸化水平有关。 展开更多

关键词 抗增殖蛋白2 低氧性肺动脉高压 心室重塑 信号转导与转录激活子3

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运动对高脂膳食诱导的IR小鼠骨骼肌线粒体内膜蛋白PHB2表达和线粒体自噬的影响 被引量：2

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作者 齐洁 牛书妍 +1 位作者 李纯 张钧 《北京体育大学学报》 CSSCI 北大核心 2022年第7期104-112,共9页

目的:探讨长期规律运动对预防高脂膳食引起的IR小鼠骨骼肌线粒体中抗增殖蛋白2(PHB2)的影响。方法:6周龄雄性C57BL/6N小鼠,随机分为正常饮食安静组(ND-Con)、正常饮食运动组(ND-Ex)、高脂膳食安静组(HFD-Con)和高脂膳食运动组(HFD-Ex),... 目的:探讨长期规律运动对预防高脂膳食引起的IR小鼠骨骼肌线粒体中抗增殖蛋白2(PHB2)的影响。方法:6周龄雄性C57BL/6N小鼠,随机分为正常饮食安静组(ND-Con)、正常饮食运动组(ND-Ex)、高脂膳食安静组(HFD-Con)和高脂膳食运动组(HFD-Ex),每组10只。通过10周高脂饲料喂养建立IR小鼠动物模型,同时对小鼠实施中等强度跑台干预。利用IGTT和IITT试验评价IR动物模型及运动预防IR的效果。通过DHE染色观察骨骼肌ROS水平,DCFH-DA试剂盒检测骨骼肌线粒体ROS生成速率,试剂盒检测骨骼肌线粒体CAT和T-AOC水平,western blot检测骨骼肌线粒体自噬相关基因PHB2、PINK1、Parkin、LC3蛋白表达水平。结果:1)与ND-Con组比较,IGTT和IITT试验结果表明HFD-Con组血糖曲线下面积(AUC)显著增加(P<0.01);与HFD-Con组相比,HFD-Ex组AUC显著下降(P<0.01,P<0.05)。2)与ND-Con组比较,HFDCon组骨骼肌ROS水平和线粒体ROS生成速率均显著增加(P<0.01),骨骼肌线粒体CAT、T-AOC水平均显著下降(P<0.01);与HFD-Con组比较,HFD-Ex组骨骼肌及线粒体氧化应激指标均显著改善(P<0.01)。3)与ND-Con组比较,HFD-Con组骨骼肌线粒体相关基因PHB2、PINK1、Parkin蛋白表达量以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均显著下降(P<0.01);与HFD-Con组比较,HFD-Ex组骨骼肌线粒体自噬相关蛋白表达水平均显著增加(P<0.01)。结论:10周跑台运动可抑制由高脂膳食引起的骨骼肌线粒体过度氧化应激,并上调骨骼肌线粒体自噬标志物PHB2表达水平,同时增强线粒体自噬途径PINK1/Parkin信号转导,预防高脂膳食诱发小鼠形成胰岛素抵抗。 展开更多

关键词 长期规律运动 骨骼肌 线粒体胰岛素抵抗 活性氧 抗增殖蛋白2 PINK1/Parkin信号通路

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肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的机制研究 被引量：2

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作者 徐一凡 周勇 +2 位作者 秦呈林 张业鹏 查文章 《解剖学研究》 CAS 2022年第6期532-538,共7页

目的探讨缺氧环境下肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的潜在机制。方法缺氧环境下,正常肝细胞LO2外泌体或肝癌细胞HepG2外泌体处理,检测单核细胞代谢关键指标葡萄糖摄取和乳酸产生水平。miRNA-seq检测miRNA表达水平并筛选以鉴定诱... 目的探讨缺氧环境下肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的潜在机制。方法缺氧环境下,正常肝细胞LO2外泌体或肝癌细胞HepG2外泌体处理,检测单核细胞代谢关键指标葡萄糖摄取和乳酸产生水平。miRNA-seq检测miRNA表达水平并筛选以鉴定诱导单核细胞代谢重编程的关键miRNA。通过HumanTargetScan在线分析预测以及遗传学筛选鉴定miRNA的靶标。结果缺氧环境下,肝癌细胞外泌体单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生(分别为34856±2944、174±16)高于正常肝细胞外泌体(分别为23454±2194、135±12)(P<0.05)。过表达miR-34b-3p、OMA1及敲低PHB2能够促进单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生(分别为22287±2207与36399±3123;121±10与158±17;22972±2330与32099±2017;121±11与161±16;24020±2156与37901±3084;110±10与151±16,均P<0.05);敲低miR-34b-3p、OMA1及过表达PHB2能够抑制单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生(分别为22287±2207与17541±1716;121±10与92±9;23827±2184与18891±1623;113±10与84±8;22469±2361与18801±1595;132±11与88±8,均P<0.05)。过表达miR-34b-3p能够降低PHB2的mRNA和蛋白表达水平(分别为0.22±0.03与0.05±0.01,P<0.05);敲低miR-34b-3p能够提升PHB2的mRNA和蛋白表达水平(分别为0.22±0.03与0.49±0.05,P<0.05)。敲低PHB2及过表达miR-34b-3p后,发现OMA1的表达水平上升(P<0.05);过表达PHB2及敲低miR-34b-3p后,发现OMA1的表达水平下降(P<0.05)。结论肝癌细胞外泌体中miR-34b-3p通过PHB2/OMA1轴促进单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生,诱导了单核细胞代谢重编程。 展开更多

关键词 肝癌 外泌体 单核细胞 代谢 miR-34b-3p 抗增殖蛋白2 与m-AAA蛋白酶1同源物重叠

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