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核酸适配体在胰腺癌中的应用研究进展 被引量:5
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作者 韩冬梅 邓堂刚 叶茂 《生命科学研究》 CAS CSCD 2018年第4期332-337,共6页
胰腺癌(pancreatic adenocarcinoma,PAC)是死亡率最高的癌症之一,实现PAC的早期诊断和早期治疗具有重大意义。核酸适配体(aptamer,Apt)是通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SE... 胰腺癌(pancreatic adenocarcinoma,PAC)是死亡率最高的癌症之一,实现PAC的早期诊断和早期治疗具有重大意义。核酸适配体(aptamer,Apt)是通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选得到的具有高亲和性、高特异性识别靶标分子的单链DNA或RNA,被称为化学抗体,其不仅具有类似抗体的特点,同时还有易修饰、生产成本低、无免疫源性、识别范围广等优点,因此在肿瘤诊断和治疗中具有很好的应用前景。目前,已筛选得到的多个识别PAC的核酸适配体被广泛应用在PAC的诊断和靶向治疗中。文中主要综述了与PAC相关的核酸适配体,对这一领域最新的研究进展进行了总结,并对目前存在的问题和挑战进行了深入的讨论。 展开更多
关键词 胰腺癌(PAC) 核酸适配体(Apt) 指数富集的配体系统进化技术(selex) 肿瘤诊断 靶向治疗
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特异性识别草鱼呼肠孤病毒感染细胞的ssDNA核酸适配体筛选与鉴定 被引量:1
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作者 余庆 刘明珠 +5 位作者 李梦梦 肖贺贺 韦信贤 童桂香 吴思婷 李鹏飞 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3057-3065,共9页
【目的】筛选出能高特异性和高亲和性识别草鱼呼肠孤病毒(GCRV)感染细胞的核酸适配体,为研发操作便捷、成本低、耗时短、准确度高的GCRV检测技术打下基础,同时为提高水产疫病检测及防控效率提供技术支持。【方法】以草鱼呼肠孤病毒I型(G... 【目的】筛选出能高特异性和高亲和性识别草鱼呼肠孤病毒(GCRV)感染细胞的核酸适配体,为研发操作便捷、成本低、耗时短、准确度高的GCRV检测技术打下基础,同时为提高水产疫病检测及防控效率提供技术支持。【方法】以草鱼呼肠孤病毒I型(GCRVI)感染的宿主细胞为靶标,采用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)进行特异性核酸适配体筛选,并通过激光共聚焦显微技术和流式细胞术对筛选获得的核酸适配体性质进行系统分析。【结果】筛选获得的核酸适配体GVIK1能特异性识别并结合在GCRVI感染的草鱼肾脏组织细胞系(CIK)表面,但不识别正常的CIK细胞及石斑鱼神经坏死病毒广西株(GNNV)感染的石斑鱼脾细胞(GS);其二级结构具有独特复杂的茎环结构,吉布斯自由能(△G)为-32.93 kJ/mol,无细胞毒性。核酸适配体GVIK1结合靶标细胞的亲和常数(Kd)为148.22 nmol/L,即核酸适配体GVIK1与靶标细胞间的亲和力极强,达纳摩尔级别。核酸适配体GVIK1在靶标细胞表面的结合位点是细胞膜蛋白或膜蛋白相关结构,其在靶标细胞表面的结合位点出现在病毒感染后的第5 h。临床试验结果表明,筛选获得的核酸适配体GVIK1可作为高特异性分子探针用于诊断GCRV感染所致的草鱼出血病。【结论】基于SELEX技术筛选获得能特异性识别GCRVI感染宿主细胞的核酸适配体GVIK1,可作为核酸分子探针用于研发操作便捷、成本低、耗时短、准确度高的GCRV快速检测技术,实现实时监测和有效防控。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒(GCRV) 指数富集的配体系统进化技术(selex) 核酸适配体 靶蛋白
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筛选获得的血型抗原结合黏附素(BabA)适配子可阻断幽门螺杆菌(H.pylori)在小鼠胃内的定植
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作者 袁媛 李卫鹏 +2 位作者 周晓静 孙伟莉 唐晓磊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期793-800,共8页
目的 探索核酸适配子特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)血型抗原结合黏附素(BabA)对H.pylori宿主细胞黏附的阻断作用。方法 培养H.pylori菌株并提取基因组,并设计引物PCR扩增BabA基因,扩增获得的BabA基因克隆、构建至原核表达质粒,异丙基-... 目的 探索核酸适配子特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)血型抗原结合黏附素(BabA)对H.pylori宿主细胞黏附的阻断作用。方法 培养H.pylori菌株并提取基因组,并设计引物PCR扩增BabA基因,扩增获得的BabA基因克隆、构建至原核表达质粒,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化后作为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选能够特异性结合BabA的单链脱氧核苷酸(ssDNA)适配子;酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)法检测并评估候选适配子的特征;随后在体外细胞水平和小鼠感染模型中,分别采用流式细胞术和菌落计数验证ssDNA适配子阻断H.pylori黏附的效果,同时利用ELISA检测小鼠胃黏膜细胞匀浆中白细胞介素6(IL-6)、 IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-10和IL-4的水平。结果提取H.pylori ATCC 43504基因组并构建了pET32a-BabA质粒,诱导后并纯化重组蛋白相对分子质量(Mr)约为39 000;经肽指纹图谱(PMF)分析其与BabA蛋白一致;以此为靶标运用SELEX筛选获得5个候选适配子,经分析鉴定适配子A10、 A30和A42识别相同位点,A3和A16与上述三个适配子各自识别不同的位点。适配子体外能够显著阻断H.pylori的黏附,且动物模型实验证明适配子经灌胃处理后,对胃黏膜的H.pylori定植有阻断效果,且能够减轻诱导的炎症反应,适配子治疗组胃黏膜匀浆中IL-4、 IL-6、 IL-8和TNF-ɑ水平低于模型组。结论 适配子特异性结合BabA封闭H.pylori与胃黏膜上皮细胞的黏附能够阻断H.pylori在胃黏膜的定植。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 血型抗原结合黏附素(BabA) 指数富集的配体系统进化技术(selex) 适配子 定植
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DNA核酶的分类、筛选及主要应用的研究进展
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作者 范云庭 林筱钧 +2 位作者 郑江 薄军 黄将远 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第1期413-419,共7页
DNA核酶是通过指数富集配体的系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)筛选出来的具有催化活性的DNA分子。本文重点综述了DNA核酶的分类、筛选及主要应用。根据其催化作用方式,可将DNA核酶分为... DNA核酶是通过指数富集配体的系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)筛选出来的具有催化活性的DNA分子。本文重点综述了DNA核酶的分类、筛选及主要应用。根据其催化作用方式,可将DNA核酶分为切割类、连接类、磷酸化类和其他类,其中切割类和连接类占的比例较大。目前DNA核酶的底物主要还是以核酸居多。DNA核酶的筛选主要是采用生物素-链霉亲和素法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法来分离有催化活性的DNA分子。目前DNA核酶在金属离子检测、基因治疗和DNA分子加密系统中都呈现出较好的应用前景。 展开更多
关键词 DNA 核酶 分类 筛选 指数富集的配体系统进化技术(selex)
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DNA酶:筛选、生物传感及展望 被引量:2
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作者 佟宗轩 胡沁沁 顾宏周 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2345-2355,共11页
综述了脱氧核糖核酸酶(DNA酶)的起源及分离富集策略,对比了DNA酶与核糖核酸酶(RNA酶)及蛋白酶的相似点和不同之处,并重点讨论了产物捕获和对冲抵消等策略对筛选获得DNA酶的独到之处;同时系统回顾了近年来分离出的可特异感应各种金属离... 综述了脱氧核糖核酸酶(DNA酶)的起源及分离富集策略,对比了DNA酶与核糖核酸酶(RNA酶)及蛋白酶的相似点和不同之处,并重点讨论了产物捕获和对冲抵消等策略对筛选获得DNA酶的独到之处;同时系统回顾了近年来分离出的可特异感应各种金属离子或生物样本(包括细菌、细胞等),从而能在特定位点切割RNA底物的DNA酶探针;阐述了DNA酶领域现存的挑战,总结和展望了新思路和新方向. 展开更多
关键词 DNA酶 DNA催化 指数富集的配体系统进化技术(selex) 筛选策略
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特异性结合幽门螺杆菌黏附蛋白A(HpaA)核酸适配子的筛选及鉴定 被引量:2
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作者 华影 陈丽萍 +2 位作者 李生 周发友 唐晓磊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期533-539,共7页
目的通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)黏附蛋白A(HpaA)的核酸适配子,并鉴定其结合特性。方法构建pET28a/HpaA原核表达质粒并诱导表达纯化重组HpaA蛋白;以重组HpaA蛋白为靶标利用SELEX技术筛选... 目的通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)黏附蛋白A(HpaA)的核酸适配子,并鉴定其结合特性。方法构建pET28a/HpaA原核表达质粒并诱导表达纯化重组HpaA蛋白;以重组HpaA蛋白为靶标利用SELEX技术筛选出能够与HpaA具有高特异性、高亲和力结合的核酸适配子。随后利用筛选所得HpaA适配子通过体外实验验证与H.pylori菌体的结合以及对临床胃黏膜切片中H.pylori的检测效能。结果本研究培养并提取ATCC26695菌株基因组,通过PCR扩增HpaA部分基因长度约699 bp,并成功克隆构建了原核表达质粒pET28a/HpaA。经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达、纯化获得纯度约98%的重组HpaA蛋白作为筛选靶标。利用SELEX技术通过10轮正向筛选和5轮的负向筛选,获得6条与HpaA高亲和力的适配子分别命名为HA1~HA6。其中适配子HA6具有较高的亲和力和特异性,且适配子HA6核心序列在体外仍表现出与H.pylori菌体较高的结合力;利用羟基荧光素(FAM)标记的HA6适配子对166例H.pylori感染的患者胃黏膜中H.pylori进行检测,检出率为94.58%,高于同批次快速脲酶检测法的检出率(87.95%)。结论本研究筛选出的特异性结合H.pylori菌体表面HpaA的适配子,可能作为一种新的方法应用于胃黏膜组织中H.pylori的检测。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌(H.pylori) 幽门螺杆菌黏附蛋白A(HpaA) 指数富集的配体系统进化技术(selex) 适配子
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5⁃羟色胺受体适配子的筛选及其抗抑郁功能
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作者 邵枝定 高雪 +1 位作者 任婧 唐晓磊 《基础医学与临床》 2022年第10期1514-1521,共8页
目的探索通过筛选获得的核酸适配子特异性结合5⁃羟色胺受体(5⁃HTR)从而阻断5⁃羟色胺(5⁃HT)摄取而达到拮抗抑郁的功效。方法小鼠5⁃HT_(1A)R基因被克隆、构建、表达并纯化后作为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选能够特异... 目的探索通过筛选获得的核酸适配子特异性结合5⁃羟色胺受体(5⁃HTR)从而阻断5⁃羟色胺(5⁃HT)摄取而达到拮抗抑郁的功效。方法小鼠5⁃HT_(1A)R基因被克隆、构建、表达并纯化后作为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选能够特异性结合5⁃HT_(1A)R的ssDNA(单链脱氧核苷酸)适配子,并测定ssDNA的结合位点、相对结合力及识别位点;并在体外细胞水平和小鼠抑郁模型中验证ssDNA适配子对5⁃HT摄取的影响及抗抑郁的疗效。结果成功克隆构建了pET28a⁃5⁃HT_(1A)R质粒,质粒被转化入DH5ɑ细菌,IPTG诱导表达后通过6×组氨酸标签纯化5⁃HT_(1A)R蛋白;经肽指纹图谱分析其与小鼠5⁃HT_(1A)R蛋白一致;以此为靶标经过12轮的正向筛选和5轮的负向筛选,获得4个高亲和力和高特异性的适配子,且适配子能够识别相同位点。并在体外验证亲和力最高的18号适配子能够显著影响5⁃HT的摄取,且通过小鼠悬尾实验证明适配子静脉注射后对小鼠抑郁状态的改善。结论5⁃HTR适配子有望成为新型的抗抑郁药物,同时也为小分子拮抗剂的研究提供新思路。 展开更多
关键词 抑郁症 5⁃羟色胺受体 选择性5⁃羟色胺再摄取抑制剂 指数富集的配体系统进化技术(selex) 适配子
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基于氧化石墨烯的磺胺嘧啶核酸适配体的筛选与鉴定 被引量:1
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作者 吴娟 吴平 +5 位作者 寇启明 孙琦 王亚荣 严雪凌 施海星 乐涛 《重庆师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2021年第2期112-120,共9页
【目的】利用GO-SELEX方法对磺胺嘧啶(Sulfadiazine)核酸适配体进行筛选与鉴定。【方法】基于氧化石墨烯(Graphene oxide)与ssDNA的π-π堆积作用,将氧化石墨烯作为结合ssDNA与分离的介质,以磺胺嘧啶为靶标分子,利用指数富集的配体系统... 【目的】利用GO-SELEX方法对磺胺嘧啶(Sulfadiazine)核酸适配体进行筛选与鉴定。【方法】基于氧化石墨烯(Graphene oxide)与ssDNA的π-π堆积作用,将氧化石墨烯作为结合ssDNA与分离的介质,以磺胺嘧啶为靶标分子,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)和磁分离技术建立了基于氧化石墨烯的核酸适配体筛选方法 GO-SELEX,对筛选产物测序所得的核酸序列进行了同源性分析和二级结构预测,亲和力和特异性分析以及方法学考察。【结果】经过9轮筛选,获得了对磺胺嘧啶具有较高亲和力(Kd=411nmol·L^(-1))的核酸适配体Ap-41,且Ap-41对磺胺嘧啶的特异性良好;磺胺嘧啶质量浓度在1.0~40μg·mL^(-1)范围内与荧光强度的线性关系良好,检出限为0.029μg·mL^(-1),水样中加标回收率范围为95.0%~104.0%,相对标准偏差不超过6.1%。【结论】基于核酸适配体Ap-41的检测方法灵敏度较高,可用于后续传感器的构建及实际样品中磺胺嘧啶的检测。 展开更多
关键词 氧化石墨烯 磺胺嘧啶 核酸适配体 指数富集的配体系统进化技术(selex) 筛选 鉴定
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