荧光定量PCR探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用研究

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作者 张东浩 《中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生》 2024年第3期0185-0188,共4页

探讨在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,观察分析应用价值。方法 本研究的时长段在2022年6月到2023年6月,统共1000例结核患者接受治疗,所有病患都拓展了抗结核药物的测验,且每一位患者的标本均予以荧光定... 探讨在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,观察分析应用价值。方法 本研究的时长段在2022年6月到2023年6月,统共1000例结核患者接受治疗,所有病患都拓展了抗结核药物的测验,且每一位患者的标本均予以荧光定量PCR探针熔解曲线法检测,药物敏感性测定结果为黄金基准,考察判辨荧光定量PCR探针熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的诊断效能。结果 针对1000例的标本中,经过液体药敏试验检测显示对利福平药物耐药例数250例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者;对异烟肼医药有耐药性的液体药敏试验500例,应用溶解曲线检测耐药性包含了470例;经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数170例,予以熔解曲线法显示耐药140例。经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数300例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者。熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的灵敏度分别为84.00%、84.00%、47.06%、66.67%;特异度分别为96.00%、90.00%、84.34%、94.29%;准确度分别为93.00%、97.00%、91.00%、86.00%。结论 在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,可得到较高的应用价值,灵敏度、特异度、准确度较高,可筛查结核病患者对利福平、异烟肼、乙胺丁醇等药物的耐药性,为临床治疗疾病提供可靠的依据。 展开更多

关键词 结核病 结核分枝杆菌 耐药基因检测 荧光定量PCR探针熔解曲线法 应用价值

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探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用研究

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作者 宋戎 缪家文 +2 位作者 孙春红 朱亮 王捷婷 《系统医学》 2024年第1期87-90,共4页

目的研究探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用价值。方法选取2020年1月—2021年3月镇江市第三人民医院收治的378例肺结核患者为研究对象,依次完成传统罗氏固体药物敏感性检测(比例法)、探针熔解曲线技术检测常用的6种药物耐... 目的研究探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用价值。方法选取2020年1月—2021年3月镇江市第三人民医院收治的378例肺结核患者为研究对象,依次完成传统罗氏固体药物敏感性检测(比例法)、探针熔解曲线技术检测常用的6种药物耐药结果,包含利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星、阿米卡星,和比例法进行对比,计算探针熔解曲线技术检测6种药物的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率与约登指数。结果与比例法作比较,熔解曲线技术检测利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、约登指数分别为91.70%、98.10%、61.10%、99.70%、97.90%、0.898;异烟肼是87.90%、94.20%、59.20%、98.80%、93.65%、0.821;乙胺丁醇是87.50%、97.03%、38.89%、99.72%、96.83%、0.845;链霉素是91.30%、98.19%、87.50%、98.79%、97.35%、0.895;氧氟沙星是94.74%、98.89%、81.82%、99.72%、98.68%、0.936;阿米卡星是80.00%、99.46%、66.67%、99.73%、99.21%、0.795。结论探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中应用,具有较高敏感度及特异度,有利于临床早期识别耐药现象。 展开更多

关键词 耐药结核病 探针熔解曲线 利福平 异烟肼 乙胺丁醇 链霉素 氧氟沙星 阿米卡星

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荧光PCR探针熔解曲线技术检测痰标本中结核分枝杆菌异烟肼耐药性的研究

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作者 王嫩寒 赵琰枫 +5 位作者 田丽丽 陈双双 陈昊 任怡宣 李传友 代小伟 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第20期2664-2670,共7页

目的评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescence polymerase chain reaction probe melting curve,Melt Pro)技术检测痰标本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)异烟肼耐药性的应用价值。方法收集2021年5月至2022年5月在北京市疾... 目的评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescence polymerase chain reaction probe melting curve,Melt Pro)技术检测痰标本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)异烟肼耐药性的应用价值。方法收集2021年5月至2022年5月在北京市疾病预防控制中心结核病门诊Gene Xpert MTB/RIF检测为MTB的(简称MTB阳性)患者痰标本,对每份标本同时进行涂片镜检、分枝杆菌分离培养、Melt Pro技术和线性探针技术(Geno Type MTBDRplus,简称Hain试验)异烟肼耐药检测。分析Melt Pro技术检测痰标本MTB异烟肼的耐药性,痰标本荷菌量对检测结果的影响;以培养阳性菌株异烟肼比例法药敏结果为参考标准,评价Melt Pro技术耐药检测效能。结果收集MTB阳性的合格痰标本157例,经分枝杆菌分离培养获得阳性菌株130株。Melt Pro技术痰标本MTB异烟肼耐药性检测成功率为84.1%(132/157)。不同痰涂片结果等级间,Melt Pro技术检测异烟肼耐药成功的比例差异存在有统计学意义(H=24.169,P=0.000),随痰涂片结果等级的升高,检测成功率由“阴性”标本的64.8%(35/54)升高到“3+”“4+”标本的100%(17/17,6/6);该比例也随Gene Xpert MTB/RIF检测MTB等级的升高而升高,由“极低”标本的54.8%(17/31),到“高”标本的96.4%(27/28),各等级间差异有统计学意义(H=27.763,P=0.000)。Melt Pro技术、Hain试验和药敏试验的异烟肼耐药检出率分别为22.0%(29/132),15.3%(19/124),和14.6%(19/130),三者差异无统计学意义(χ^(2)=2.997,P=0.223)。以培养阳性菌株比例法药敏试验结果为参考标准,Melt Pro技术检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:84.6%(11/13)、91.2%(93/102)、55%(11/20)、97.9%(93/95),Kappa值为0.614;Hain试验检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:55.6%(10/18)、92.3%(84/91)、58.8%(10/17)、91.3%(84/92),Kappa值为0.490。结论Melt Pro技术可直接检测痰标本MTB耐药性,快速准确筛查患者耐药情况,缩短耐药筛查时间。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 荧光PCR探针熔解曲线 耐药性检测 痰

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荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC对利福平、异烟肼耐药性的价值分析 被引量：1

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作者 温晓萍 《基层医学论坛》 2023年第16期101-103,共3页

目的 探讨荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合菌群(MTBC)对利福平、异烟肼耐药性的价值。方法 回顾性分析2018年6月-2021年4月惠州市职业病防治院收治的528例肺结核与耐多药结核病患者的临床资料。所有患者均进行痰液标本采集,... 目的 探讨荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合菌群(MTBC)对利福平、异烟肼耐药性的价值。方法 回顾性分析2018年6月-2021年4月惠州市职业病防治院收治的528例肺结核与耐多药结核病患者的临床资料。所有患者均进行痰液标本采集,采集后进行送检,之后进行分离培养和药敏试验,采用荧光PCR探针熔解曲线法对MTBC对利福平、异烟肼的耐药性进行测定分析,最终获得211份阳性菌株,再经鉴定为MTBC 208份,3份为非结核分枝杆菌。对荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC耐药性的效能进行分析。结果 经比例法进行的药敏试验结果显示,208份MTBC菌种标本中,120份对利福平具有耐药性,146例对异烟肼具有耐药性;经荧光PCR探针熔解曲线法检查后,135份对利福平耐药,敏感73份,其中仅有114份确定对利福平具有耐药性;经荧光PCR探针熔解曲线法检查后,134份对异烟肼耐药,敏感74份,其中有131份确定对异烟肼具有耐药性。荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC对利福平、异烟肼耐药性的特异度分别为76.14%,95.16%,对异烟肼耐药性的检测特异度高于利福平,差异具备统计学意义(P<0.05);对异烟肼耐药性的检测灵敏度低于利福平,准确度高于利福平,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC耐药性的效能较高,可应用于快速发现耐药基因位点突变,筛查耐多药肺结核,并在治疗中进行动态监测,进而可指导临床调整治疗方案。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌复合菌群 荧光聚合酶链式反应 探针熔解曲线法 利福平 异烟肼 耐药性

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多色探针熔解曲线分析法评估结核分枝杆菌阳性患者对不同抗结核药物耐药性的诊断效能

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作者 陈李晓 《中外医学研究》 2023年第35期82-85,共4页

目的:分析多色探针熔解曲线分析法(MMCA)评估结核分枝杆菌阳性患者对利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼、喹诺酮耐药性的诊断效能。方法:选取2023年1—6月泉州市各县(市)区结核定点医院收治的100例结核分枝杆菌阳性患者的痰培养标本,经... 目的:分析多色探针熔解曲线分析法(MMCA)评估结核分枝杆菌阳性患者对利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼、喹诺酮耐药性的诊断效能。方法:选取2023年1—6月泉州市各县(市)区结核定点医院收治的100例结核分枝杆菌阳性患者的痰培养标本,经过培养与分离获取100例结核分枝杆菌株,以改良罗氏比例法药敏试验为金标准,通过MMCA检测结核分枝杆菌对利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼、喹诺酮的耐药性,记录其符合率、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果:MMCA检测利福平耐药性的符合率为94.00%,敏感度为83.33%,特异度为95.45%,阳性预测值为71.42%,阴性预测值为97.67%。MMCA检测乙胺丁醇耐药性的符合率为97.00%,敏感度为87.50%,特异度为97.83%,阳性预测值为77.78%,阴性预测值为98.90%。MMCA检测链霉素耐药性的符合率为98.00%,敏感度为85.71%,特异度为98.92%,阳性预测值为85.71%,阴性预测值为98.92%。MMCA检测异烟肼耐药性的符合率为90.00%,敏感度为76.47%,特异度为92.77%,阳性预测值为68.42%,阴性预测值为95.06%。MMCA检测喹诺酮耐药性的符合率为94.00%,敏感度为81.82%,特异度为95.51%,阳性预测值为69.23%,阴性预测值为97.70%。结论:MMCA评价结核分枝杆菌对利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼、喹诺酮的耐药性具有较好的特异度与敏感度,且便于检测,有助于对耐药结核杆菌的快速筛查。 展开更多

关键词 多色探针熔解曲线分析法 结核分枝杆菌 耐药性 利福平 乙胺丁醇 链霉素 异烟肼 喹诺酮

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荧光定量PCR探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用 被引量：32

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作者 胡春梅 郭晶 +2 位作者 严虹 施旭东 张侠 《中国防痨杂志》 CAS 2016年第1期38-41,共4页

目的应用荧光定量PCR探针熔解曲线法检测耐多药结核病患者的临床分离菌株对一线抗结核药物的耐药基因突变。方法于2009年1月1日至2012年12月31日留取南京市胸科医院结核科门诊部或住院的所有肺结核患者痰液标本，每人3～5ml，均进行痰... 目的应用荧光定量PCR探针熔解曲线法检测耐多药结核病患者的临床分离菌株对一线抗结核药物的耐药基因突变。方法于2009年1月1日至2012年12月31日留取南京市胸科医院结核科门诊部或住院的所有肺结核患者痰液标本，每人3～5ml，均进行痰结核分枝杆菌培养、鉴定和药物敏感性试验（简称“药敏试验”），分离出结核分枝杆菌菌株67株。应用荧光定量PCR探针熔解曲线法，根据靶序列熔点变化，实时PCR检测结核病患者的临床分离标本对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素的耐药情况；通过与传统药敏试验进行对比，对2种结果不一致的菌株进行基因测序分析，探讨其发生突变的位点差异，并观察在治疗中的变化。结果利福平和异烟肼的表型和基因型检测具有较高的一致性，分别为99％（66／67）和97％（65／67），不一致的菌株都是表型检测法为耐药，而基因型检测为敏感，测序未检测到突变。乙胺丁醇和链霉素的表型和基因型检测一致性较低，分别为60％（40／67）和75％（50／67）。测序发现，乙胺丁醇的突变发生在embB306和embB406位点上；链霉素突变发生在rrs基因517位点和907位点，以及rpsL43耐药密码子。结论应用荧光定量PCR探针熔解曲线法，能快速筛查结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药情况。 展开更多

关键词 探针熔解曲线法 结核 肺 抗药性 多种 细菌 耐药基因 突变

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探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变 被引量：7

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作者 张婷 付军 +5 位作者 王国治 陈保文 杨蕾 卢锦标 许晔 李庆阁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期412-417,共6页

目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以... 目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以及含常见耐药突变的质粒以不同突变比例混合考察试剂盒检测不均一耐药样本的能力,并使用23株非结核分枝杆菌标准株考察试剂盒的分析特异性,最后使用241份临床分离株对试剂盒进行临床评价。结果该试剂盒可以将9种耐药相关突变与1种野生型多态性与野生型进行区分。可以检测到低至5个拷贝的野生型基因组DNA。当突变比例为30%或更高时,试剂盒可以将其与野生型进行区分。23种非结核分枝杆菌的结果显示该试剂盒有良好的特异性。和比例法药敏试验进行对比,该试剂盒的临床灵敏度为卡那霉素90.0%(9/10),阿米卡星80.0%(8/10),卷曲霉素85.7%(6/7);特异性为卡那霉素98.8%(85/86),阿米卡星98.8%(85/86),卷曲霉素96.6%(86/89)。试剂盒检测结果与测序结果一致。结论该试剂盒灵敏度高、特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌注射类二线药常见的耐药突变,有望应用于临床。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 注射类二线药 耐药突变 探针熔解曲线法

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探针熔解曲线技术检测结核杆菌耐药的研究 被引量：5

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作者 孙炳奇 张娟 +1 位作者 孙娇 张婷 《中国医药指南》 2014年第13期76-77,共2页

目的评价探针熔解曲线技术检测结核杆菌耐药效果。方法利用探针熔解曲线技术对46例涂阳肺结核患者的痰标本进行异烟肼和利福平耐药检测,以传统罗氏药敏试验为金标准,对探针熔解曲线技术的检测效果进行评价。结果在46例菌株中,用探针熔... 目的评价探针熔解曲线技术检测结核杆菌耐药效果。方法利用探针熔解曲线技术对46例涂阳肺结核患者的痰标本进行异烟肼和利福平耐药检测,以传统罗氏药敏试验为金标准,对探针熔解曲线技术的检测效果进行评价。结果在46例菌株中,用探针熔解曲线进行异烟肼耐药基因检测,与罗氏药敏的符合率为91.3%,进行利福平耐药基因检测,符合率为84.8%。结论探针熔解曲线检测异烟肼和利福平的耐药性与罗氏药敏方法具有很好的一致性,具有简便快速,灵敏度高,特异性好的优点,对临床及时准确进行抗结核治疗具有重要意义。 展开更多

关键词 探针熔解曲线 异烟肼 利福平 耐药

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应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法快速鉴定分枝杆菌菌种方法的建立及初步评价 被引量：2

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作者 张俊仙 王杰 +5 位作者 孙伟民 梁艳 阳幼荣 王兰 殷铭俊 吴雪琼 《中国医刊》 CAS 2016年第4期74-78,共5页

目的应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法建立一种快速、简便、高效的分枝杆菌菌种鉴定新方法,为临床医师正确诊断提供理论依据。方法以DNA直接测序法为对照,通过荧光定量PCR技术-探针熔解曲线法(包括反应A、B、C)分析22种分枝杆菌标准株、1... 目的应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法建立一种快速、简便、高效的分枝杆菌菌种鉴定新方法,为临床医师正确诊断提供理论依据。方法以DNA直接测序法为对照,通过荧光定量PCR技术-探针熔解曲线法(包括反应A、B、C)分析22种分枝杆菌标准株、11种非分枝杆菌标准株和32株分枝杆菌临床分离株的菌种。结果应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法分析22种分枝杆菌标准株和11种非分枝杆菌标准株,结果与标准株DNA测序一致,成功地建立鉴定方法。32株分枝杆菌临床分离株中,经DNA测序和荧光定量PCR-探针熔解曲线法分析显示,4株为结核分枝杆菌复合群(mycobacterium tuberculosis complex,MTC),7株为胞内分枝杆菌,6株为龟分枝杆菌脓肿亚种,4株为瘰疬分枝杆菌,4株为偶然分枝杆菌,3株为堪萨斯和胃分枝杆菌,2株为戈登分枝杆菌;另有2株分离株反应A的熔解曲线显示为分枝杆菌属的熔解温度(melting temperature,Tm)值,反应B和C的熔解曲线Tm值与22株分枝杆菌标准株的Tm值均不同,经DNA测序证实与戈登分枝杆菌标准株序列不同,与报道的戈登分枝杆菌分离株一致。结论用荧光定量PCR-探针熔解曲线法可简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种,提高分枝杆菌病的正确诊断率,指导临床合理用药。 展开更多

关键词 分枝杆菌 菌种鉴定 荧光定量PCR 探针熔解曲线 DNA测序

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应用多色探针熔解曲线法检测G6PD缺乏症杂合子的基因突变 被引量：7

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作者 胡韦维 李进 +5 位作者 刘益 刘之岱 张娟 余朝文 邹琳 张鹏辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期830-835,共6页

目的应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者... 目的应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者外周血,采用G6PD/6PGD定量比值法和MMCA法分别检测男性和女性G6PD酶活性和基因突变,以金标准Sanger测序来评价两种方法。同时收集重庆地区进行G6PD缺乏症新生儿疾病筛查的1 754份女性末梢血滤纸片,采用MMCA法筛查G6PD基因突变。结果 429例疑似病例中,G6PD/6PGD定量比值法诊断男性的灵敏度96.8%、特异性100%,与Sanger测序法一致性好(Kappa=0.917,P<0.05);但女性的灵敏度仅10%,特异性100%,与Sanger测序法一致性差(Kappa=0.127,P<0.05)。MMCA法诊断男性的灵敏度95.7%,特异性100%,与Sanger测序法一致性较好(Kappa=0.891,P<0.05);女性的灵敏度100%,特异性100%,与Sanger测序法结果完全吻合(Kappa=1.000,P<0.05)。1 754例女性中杂合子占1.14%(20/1 754),G6PD酶活性均正常。结论与传统的G6PD/6PGD定量比值法比较,MMCA法检测杂合子灵敏度更高,可用于G6PD缺乏症杂合子筛查,为一种简便、准确的诊断新方法。 展开更多

关键词 多色探针熔解曲线分析法 G6PD缺乏症 杂合子 基因诊断

原文传递

多色探针熔解曲线法应用于别嘌呤醇不良反应相关基因HLA-B* 58∶01的检测 被引量：2

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作者 裴斌 郭晓彤 +4 位作者 冉鹏 黄秋英 洪素云 钟雪婷 李庆阁 《中国输血杂志》 CAS 2018年第1期37-40,共4页

目的评价多色探针熔解曲线法（MMCA）在别嘌呤醇不良反应相关的HLA-B＊ 58∶01基因检测中的应用。方法收集1147（人）份厦门地区无偿献血者的外周静脉血标本,提取全基因组DNA后,按双盲对照试验,分别应用HLA序列分型（HLA-SBT）测序法和M... 目的评价多色探针熔解曲线法（MMCA）在别嘌呤醇不良反应相关的HLA-B＊ 58∶01基因检测中的应用。方法收集1147（人）份厦门地区无偿献血者的外周静脉血标本,提取全基因组DNA后,按双盲对照试验,分别应用HLA序列分型（HLA-SBT）测序法和MMCA法检测各标本的HLA-B＊ 58∶01基因,比较2种检测方法的符合率。结果采用HLA-SBT测序法与MMCA法在1 147人份献血者标本中检出的HLA-B＊ 58∶01阳性及阴性标本均相同,分别为213和934例,符合率为100%（1 147/1 147）;本组厦门地区献血人群的HLA-B＊ 58∶01携带率为18.57%（213/1147）。结论 MMCA法用于HLA-B＊ 58∶01基因检测简便、快速、灵敏度高、特异性强。 展开更多

关键词 多色探针熔解曲线法 别嘌呤醇不良反应 HLA-B＊ 58∶01基因 痛风

原文传递

应用多色探针熔解曲线分析法检测湘潭地区G6PD缺乏症基因突变 被引量：2

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作者 李晨辉 王淑媛 +2 位作者 袁海斌 殷伟 刘春梅 《检验医学与临床》 CAS 2021年第19期2795-2798,2802,共5页

目的探讨多色探针熔解曲线分析(MMCA)法检测湘潭地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变的性能,为临床诊断提供参考。方法纳入2017年1月至2020年9月于该院进行G6PD缺乏症筛查的90221例新生儿,以其中454例同时进行G6PD酶活性法检... 目的探讨多色探针熔解曲线分析(MMCA)法检测湘潭地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变的性能,为临床诊断提供参考。方法纳入2017年1月至2020年9月于该院进行G6PD缺乏症筛查的90221例新生儿,以其中454例同时进行G6PD酶活性法检测和基因检测[MMCA法、外显子基因测序(Sanger测序)法]的G6PD缺乏症初筛阳性新生儿作为研究对象,以Sanger测序法的检测结果为“金标准”,对酶活性法和MMCA法进行方法学比较。结果酶活性法诊断男性新生儿G6PD缺乏症的灵敏度为97.6%,特异度为100.0%;诊断女性新生儿G6PD缺乏症的灵敏度为59.5%,特异度为100.0%。酶活性法与Sanger测序法诊断男性新生儿G6PD缺乏症的结果一致性较好(Kappa=0.974,P<0.05),诊断女性新生儿G6PD缺乏症的结果一致性一般(Kappa=0.676,P<0.05)。MMCA法诊断男性新生儿G6PD缺乏症的灵敏度为97.0%,特异度为100.0%;诊断女性新生儿G6PD缺乏症的灵敏度、特异度均为100.0%。MMCA法与Sanger测序法诊断男性新生儿G6PD缺乏症的结果一致性较好(Kappa=0.967,P<0.05),诊断女性新生儿G6PD缺乏症的结果完全吻合(Kappa=1.000,P<0.05)。结论与传统的酶活性法比较,MMCA法具有灵敏度、特异度高的优点,是一种快速、准确、适用于临床诊断G6PD缺乏症的方法。 展开更多

关键词 多色探针熔解曲线分析法 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 基因突变 酶活性

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PCR探针熔解曲线法在对肺结核患者进行结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用效果 被引量：3

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作者 常凤霞 《当代医药论丛》 2018年第19期171-172,共2页

目的 :探讨PCR探针熔解曲线法在对肺结核患者进行结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用效果。方法 :将2018年1月至2018年3月期间在青海省第四人民医院门诊或住院部接受治疗的20例肺结核患者作为研究对象。使用PCR探针熔解曲线法对这20例患... 目的 :探讨PCR探针熔解曲线法在对肺结核患者进行结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用效果。方法 :将2018年1月至2018年3月期间在青海省第四人民医院门诊或住院部接受治疗的20例肺结核患者作为研究对象。使用PCR探针熔解曲线法对这20例患者体内结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素的耐药性进行耐药基因检测。然后,以药敏试验的结果为金标准,观察这些患者体内结核分枝杆菌的耐药基因检测结果与利福平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素耐药表型的一致性。结果 :这20例患者体内结核分枝杆菌的耐药基因检测结果与利福平、异烟肼耐药表型的一致性较高,其体内结核分枝杆菌的耐药基因检测结果与乙胺丁醇、链霉素耐药表型的一致性较低。结论 :PCR探针熔解曲线法在对肺结核患者进行结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用效果显著,可迅速地筛查出患者体内结核分枝杆菌对利福平等常用一线抗结核药的耐药情况。 展开更多

关键词 PCR探针熔解曲线法 结核分枝杆菌 耐药基因检测 耐药表型 一致性

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荧光PCR探针熔解曲线法评价结核分枝杆菌复合群对利福平和异烟肼耐药性的价值 被引量：2

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作者 郭红革 李佩珠 《深圳中西医结合杂志》 2021年第10期46-48,共3页

目的:探讨使用荧光聚合酶链式反应(PCR)探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)对利福平耐药性、异烟肼耐药性的评价效果。方法:从珠海市慢性病防治中心2019年1月至2021年2月所接收的180例肺结核与耐多药结核病患者中,筛查萋–尼... 目的:探讨使用荧光聚合酶链式反应(PCR)探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)对利福平耐药性、异烟肼耐药性的评价效果。方法:从珠海市慢性病防治中心2019年1月至2021年2月所接收的180例肺结核与耐多药结核病患者中,筛查萋–尼染色结果阳性的80份痰标本,对鉴定结果为MTBC的痰标本做比例法药敏试验与荧光PCR探针熔解曲线法分析,以比例法药敏试验为金标准,观察荧光PCR探针熔解曲线法对利福平耐药性与异烟肼耐药性的检测效能。结果:金标准结果显示71份MTBC痰标本中41份对利福平耐药,50份对异烟肼耐药,荧光PCR探针熔解曲线法对利福平耐药的检测效能上,灵敏度、特异度与准确度分别为95.12 %、76.67 %、87.32 %,一致率Kappa值为0.81;对异烟肼耐药的检测效能上,灵敏度、特异度与准确度分别为90.00 %、95.24 %、91.55 %,一致率Kappa值为0.77。结论:采取荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC对利福平耐药性、异烟肼耐药性的检测效能均较高,检测结果同比例法药敏试验的一致率高。 展开更多

关键词 肺结核 利福平 异烟肼 荧光聚合酶链式反应 探针熔解曲线法 结核分枝杆菌复合群

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多重不对称PCR探针熔解曲线法在一管中检测多个肥胖易感基因方法的建立

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作者 李勇 鲁晶晶 +1 位作者 李炳君 殷佳伟 《江苏预防医学》 CAS 2021年第4期396-399,共4页

目的针对中国人群4个常见的肥胖易感基因位点(FTO基因rs1421085位点、APOA5基因rs662799位点、FABP2基因rs1799883位点、ADRB3基因rs4994位点),建立一种方便、精准、低成本的检测方法。方法结合前期研究中发现的与中国人群肥胖密切相关... 目的针对中国人群4个常见的肥胖易感基因位点(FTO基因rs1421085位点、APOA5基因rs662799位点、FABP2基因rs1799883位点、ADRB3基因rs4994位点),建立一种方便、精准、低成本的检测方法。方法结合前期研究中发现的与中国人群肥胖密切相关的4个基因位点,设计引物对、荧光探针以及对应等位基因的靶序列,通过熔解曲线法,验证荧光探针与对应等位基因的靶序列的工作效果,确认不同基因型的熔解温度。采用PCR-Sanger测序法为金标准,对收集的人唾液样本进行检测,选取12个基因型的样本,开发多重不对称PCR荧光探针熔解曲线法进行检测。随后,使用多重不对称PCR探针熔解曲线法与PCR-Sanger测序法分别对200例志愿者的唾液样本进行基因分型检测,比较两种方法的结果与优缺点。结果多重不对称PCR探针熔解曲线法可以在一管中同时对4个常见的肥胖易感基因位点进行检测,准确度与PCR-Sanger测序法相同,且与PCR-Sanger测序法需有扩增、电泳、纯化、s测序的复杂步骤相比,可在一管中一次完成检测,操作更为便捷,且成本更加节省。结论本研究建立了一种针对4个常见肥胖易感基因位点的方便、精准、低成本的基因分型方法,为人群肥胖易感基因的批量筛查提供了一种有效的检测手段。 展开更多

关键词 多重不对称PCR探针熔解曲线法 肥胖易感基因 一管法

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多色探针熔解曲线分析法对5种抗结核药物的耐药性诊断价值 被引量：1

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作者 常凤霞 纳元春 +4 位作者 郝娟 朋毛措 罗莉渊 马德昭 马明 《中国热带医学》 CAS 2023年第4期409-412,430,共5页

目的探讨多色探针熔解曲线分析法(multicolor melting curve analysis,MMCA)对5种抗结核药物的耐药性诊断效果,明确MMCA检测结核分枝杆菌耐药性的临床应用价值。方法2021年4月—2022年5月选择在本院住院诊治的结核分枝杆菌阳性患者200... 目的探讨多色探针熔解曲线分析法(multicolor melting curve analysis,MMCA)对5种抗结核药物的耐药性诊断效果,明确MMCA检测结核分枝杆菌耐药性的临床应用价值。方法2021年4月—2022年5月选择在本院住院诊治的结核分枝杆菌阳性患者200例作为研究对象,取患者的痰液标本,分别给予传统结核分枝杆菌药敏实验(改良罗氏培养基法)和MMCA检测利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼、左氧氟沙星等5种抗结核药物的耐药性,对两种诊断方法结果不一致的样本进行基因测序验证,对比MMCA对5种抗结核药物的诊断效能。结果以结核分枝杆菌改良罗氏培养基法作为耐药诊断的金标准,MMCA检测利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼、左氧氟沙星耐药的灵敏度分别为95.83%(46/48)、93.75%(15/16)、100.00%(15/15)、100.00%(20/20)、70.00%(7/10),组间比较具有统计学差异(P<0.05),MMCA检测5种抗结核药物的特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。对MMCA与改良罗氏培养基法结果8例不一致的样本进行基因测序,与基因测序结果进行比较后发现,MMCA与基因测序结果符合率为75.00%(6/8)。结论MMCA在结核病患者耐药突变的检测中,对一线抗结核药物具有很高的诊断效能,对于二线抗结核药物左氧氟沙星的敏感度不足,因此在一线抗结核药物的检测上,MMCA技术具有良好的临床应用前景。 展开更多

关键词 多色探针熔解曲线分析法 结核病 结核分枝杆菌 灵敏度 特异性

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多色探针熔解曲线法在卡马西平不良反应相关基因检测中的临床评价

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作者 裴斌 郭晓彤 +4 位作者 冉鹏 黄秋英 洪素云 钟雪婷 李庆阁 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1393-1399,共7页

目的对多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA)用于卡马西平不良反应相关的HLA-B*15:02基因检测进行临床评价。方法收集厦门市中心血站1 147份厦门地区无偿献血者的外周静脉血样本,经基因DNA提取后,按双盲对照试验... 目的对多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA)用于卡马西平不良反应相关的HLA-B*15:02基因检测进行临床评价。方法收集厦门市中心血站1 147份厦门地区无偿献血者的外周静脉血样本,经基因DNA提取后,按双盲对照试验,分别应用MMCA法和HLA-SBT测序法对各样本进行HLA-B*15:02基因检测,比较2种检测方法的符合率。对于检测结果不一致的标本,采用第三方Sanger测序和电泳验证,计算总符合率。结果采用MMCA法共检出77份HLA-B*15:02阳性标本,1 070份HLA-B*15:02阴性标本。采用HLA-SBT测序法共检出74份HLA-B*15:02阳性标本,1 070份HLA-B*15:02阴性标本,以及3份无明确的分型信息的标本(仅显示为B*15:VG-B*15:CYS型)。该3份标本经Sanger测序以及电泳验证,确认为HLA-B*15:02阳性标本。因此,MMCA法检测HLA-B*15:02基因的阳性检出率为100%(77/77),阴性检出率为100%(1 070/1 070),总符合率为100%(1 147/1 147)。此外,在1 147份临床标本中共检出77份阳性结果,HLA-B*15:02的携带率为6.7%(77/1147),这与文献报道的数据基本一致。结论 MMCA法用于HLA-B*15:02基因的检测,具有简便、快速、灵敏度高、特异性强等优点,可应用于卡马西平不良反应相关的HLA-B*15:02基因的临床辅助检测。 展开更多

关键词 卡马西平 基因检测 探针熔解曲线法 HLA-B＊15:02 不良反应

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应用多色探针熔解曲线法筛查苗族妇女MTHFR和MTRR基因多态性位点

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作者 严提珍 陈丽竹 +7 位作者 罗世强 王旭东 梁译天 李静文 唐宁 杨芳华 邱萍 黄秋英 《中国优生与遗传杂志》 2019年第11期1294-1296,共3页

目的探讨多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA)应用于广西苗族妇女MTHFR基因677C>T、1298A>C和MTRR基因66A>G多态性检测的价值。方法以998例广西苗族女性为对象,采集口腔黏膜上皮细胞,提取基因组DNA,... 目的探讨多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA)应用于广西苗族妇女MTHFR基因677C>T、1298A>C和MTRR基因66A>G多态性检测的价值。方法以998例广西苗族女性为对象,采集口腔黏膜上皮细胞,提取基因组DNA,按双盲对照试验,分别采用Sanger测序法和MMCA法对三个多态性位点进行基因分型。比较两种方法的符合率。结果应用MMCA法检出MTHFR基因677C>T、1298A>C和MTRR基因66A>G野生型样本分别为722例、543例和492例;杂合突变型样本分别为254例、386例和434例;纯合突变型样本分别为22例、69例和72例,Sanger测序法与MMCA法基因分型结果完全一致,两种方法的符合率为100%。结论MMCA法用于MTHFR和MTRR基因多态性的检测,具有简便、快速、灵敏度高、特异性强等优点,根据靶序列熔点的变化检测MTHFR和MTRR基因3个位点多态性情况,可用于叶酸缺乏症的临床辅助诊断。 展开更多

关键词 亚甲基四氢叶酸还原酶 甲硫氨酸合成酶还原酶 单核苷酸多态性 多色探针熔解曲线法 Sanger测序法

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MTHFR基因多态性与中国人群特发性卵巢早衰的相关性研究

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作者 陆珊珊 黄丽娟 《中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生》 2024年第2期0161-0164,共4页

研究MTHFR基因多态性位点C677T、A1298C在中国人群特发性POF患者中的分布频率,分析其与中国人群特发性POF患者发病的相关性。方法 选取我院2020年4月~2023年4月特发性POF女性100例为研究组,同期因男方因素或因输卵管因素导致不孕就诊10... 研究MTHFR基因多态性位点C677T、A1298C在中国人群特发性POF患者中的分布频率,分析其与中国人群特发性POF患者发病的相关性。方法 选取我院2020年4月~2023年4月特发性POF女性100例为研究组,同期因男方因素或因输卵管因素导致不孕就诊106例为对照组,收集参与者的外周血,提取基因组DNA,并通过探针熔解曲线法检测MTHFR基因位点C677T和A1298C的基因型分布及频率。利用SPSS软件进行统计分析,P<0.05为统计学意义。结果 通过分析POF患者组和对照组的MTHFR基因多态性位点C677T和A1298C基因型与基因频率,发现二者差异无统计学意义。结论 MTHFR基因多态性位点C677T和A1298C与中国人群特发性卵巢早衰的发生可能不存在相关性。 展开更多

关键词 特发性卵巢早衰 MTHFR 基因多态性 探针熔解曲线

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115462例新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查及基因突变分析

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作者 张禾璇 杨雪 +4 位作者 王侣金 李林洁 张晓怡 刘兴宇 余蕾 《罕少疾病杂志》 2024年第2期115-117,共3页

目的了解贵阳地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症发病情况和基因突变特点,为贵阳地区G6PD缺乏症的防治提供科学参考。方法募集该地区2020年8月至2023年1月出生的新生儿,应用荧光分析法对其血斑样... 目的了解贵阳地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症发病情况和基因突变特点,为贵阳地区G6PD缺乏症的防治提供科学参考。方法募集该地区2020年8月至2023年1月出生的新生儿,应用荧光分析法对其血斑样本进行G6PD酶活性筛查,召回初筛阳性儿,完成G6PD酶活性诊断及多色探针荧光PCR熔解曲线法(Multicolor probe melting curve analysis method,MMCA)基因突变分析。结果共募集115462例新生儿,G6PD酶活性筛查血斑样本共筛出阳性1606例,筛查阳性率为1.39%(1606/115462),其中男性为1.83%(1130/61801)、女性0.89%(476/53661),男女新生儿G6PD酶活性初筛阳性率差异有统计学意义(P<0.01);召回初筛阳性患儿,G6PD基因突变检出率87.07%(909/1044),其中男性为90.09%(764/848),女性为73.98%(145/196),男女间G6PD基因突变检出率差异有统计学意义(P<0.01)。本研究共检出13种类型G6PD基因单一突变型(c.1024 G>T、c.1388 G>A、c.95 A>G、c.1376 G>T、c.592C>T、c.871 G>A、c.519 C>T、c.392G>T、c.493 A>G、c.1004C>A、c.1360C>T、c.383T>C、c.517T>C)和6种复合突变型(c.1376 G>T杂合复合c.95A>G杂合突变、c.1024 G>T杂合复合c.95A>G杂合突变、c.1024 C>T杂合复合c.1388 G>A杂合突变、c.1024 C>T杂合复合c.519C>T杂合突变、c.1376 G>T杂合复合c.1024 C>T杂合突变、c.95A>G杂合复合c.1388 G>A杂合突变)。贵阳地区G6PD缺乏症基因突变类型复杂多样,G6PD突变常见类型为c.1024 C>T、c.1388G>A、c.95 A>G、c.1376G>T这四种类型。结论贵阳地区G6PD基因突变位点具有明显地域性特征,开展G6PD酶活性筛查及相关诊断检测,有利于本地区G6PD缺乏症的筛查、确诊、治疗和防控,有效提高出生人口素质。 展开更多

关键词 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 G6PD基因型 基因突变 多色探针熔解曲线分析法

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