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雄烯二酮高产菌新金分枝杆菌MN4的全基因组测序及序列分析 被引量：4
1
作者 徐玲霞 王筱兰 +4 位作者 杨慧林 杨林 施文杰 谢雅雯 林姗 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1358-1367,共10页
【目的】新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)MN4是1株经诱变育种获得的高产雄烯二酮,并且能够耐受高浓度底物植物甾醇的突变菌株。为深入研究MN4菌株耐底物的机制及雄烯二酮的生物合成途径,有必要解析MN4菌株的全基因组序列信息。【... 【目的】新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)MN4是1株经诱变育种获得的高产雄烯二酮,并且能够耐受高浓度底物植物甾醇的突变菌株。为深入研究MN4菌株耐底物的机制及雄烯二酮的生物合成途径,有必要解析MN4菌株的全基因组序列信息。【方法】本研究采用高通量测序技术对MN4进行全基因组测序,然后使用相关软件对测序数据进行基因组装、基因预测与功能注释、COG聚类分析以及次级代谢产物合成基因簇预测等。【结果】新金分枝杆菌MN4基因组装获得33个Contigs,整个基因组大小为5.39 Mb,GC含量为66.9%,编码4920个蛋白基因,序列提交至Gen Bank数据库,登录号为JXYZ00000000。【结论】本研究首次报道了1株高产雄烯二酮菌株MN4的全基因组序列,分析了基因组的基本特征,初步解析了该菌株降解植物甾醇生产雄烯二酮的关键基因,将为MN4的功能基因组学研究及相关次级代谢产物的生物合成途径与异源表达研究提供基础。 展开更多
关键词 雄烯二酮 新金分枝杆菌 甾醇 全基因组测序 生物合成基因簇
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三种非结核分枝杆菌esxB基因的克隆与序列分析
2
作者 管清华 朱世馨 钱爱东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第3期19-23,289,290,共7页
为了探讨非结核分枝杆菌中EsxB蛋白的生物学功能,试验以实验室分离的母牛分枝杆菌、新金分枝杆菌和耻垢分枝杆菌为对象,克隆了esxB基因,应用生物信息学方法进行系统发生分析,对EsxB蛋白进行生物学特性、保守区分析以及抗原表位、可能的... 为了探讨非结核分枝杆菌中EsxB蛋白的生物学功能,试验以实验室分离的母牛分枝杆菌、新金分枝杆菌和耻垢分枝杆菌为对象,克隆了esxB基因,应用生物信息学方法进行系统发生分析,对EsxB蛋白进行生物学特性、保守区分析以及抗原表位、可能的三级结构预测。结果表明:克隆的3种非结核分枝杆菌的esxB基因大小分别为309 bp、303 bp、294 bp,推导的氨基酸序列与Gen Bank中登录的相应菌种的氨基酸序列同源性分别为95%或97%、100%、100%;属于WXG100蛋白超家族中CFP-10亚家族成员,具有该亚家族保守的α-螺旋和Yxxx D/E序列;预测到3条肽链线性B细胞表位各1个,T细胞表位各4个、9个、5个,部分T细胞表位与结核杆菌CFP10的CD8+T细胞表位有5~6个共同氨基酸。 展开更多
关键词 新金分枝杆菌 母牛分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 esxB 表位
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分枝杆菌HGMS2甾醇降解中新C-23代谢产物的鉴定及其代谢途径分析 被引量：1
3
作者 何建新 董新林 +2 位作者 黄永棋 宋士奎 苏正定 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4550-4562,共13页
新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)通过敲除羟酰基辅酶A脱氢酶(hydroxyacyl-CoA dehydrogenase,Hsd4A)或酰基辅酶A硫解酶(acyl-CoAthiolase,FadA5)基因来生产22-羟基-23,24-双降甾-4-烯-3-酮(22-hydroxy-23,24-bisnorchol-4-en-3-on... 新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)通过敲除羟酰基辅酶A脱氢酶(hydroxyacyl-CoA dehydrogenase,Hsd4A)或酰基辅酶A硫解酶(acyl-CoAthiolase,FadA5)基因来生产22-羟基-23,24-双降甾-4-烯-3-酮(22-hydroxy-23,24-bisnorchol-4-en-3-one,BA)甾体类药物中间体来受到广泛关注。本实验室前期发现,敲除fadA5基因后,发酵产物中出现了一种新的代谢产物。本研究通过对该物质的结构鉴定、fadA5基因的蛋白同源序列比对、M.neoaurumHGMS2的系统发育树分析和基因敲除等手段探究该物质的代谢途径。结果表明该物质为C23类代谢中间体,即24-norchol-4-ene-3,22-dione(将其命名为3-OPD)。该物质是通过硫酯酶(thioesterase,TE)催化3,22-dioxo-25,26-bisnorchol-4-ene-24-oylCoA(22-O-BNC-CoA)生成侧链为β-酮酸结构的物质后通过生物体的自动脱羧反应生成的。这些结果对开发新的甾类中间体有重要价值。 展开更多
关键词 甾体药物 fadA5 基因敲除 新金分枝杆菌 C-23代谢中间体
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雄烯二酮耐底物突变株的筛选及生物转化培养基优化 被引量：2
4
作者 孙婉菊 王筱兰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第19期158-163,共6页
采用紫外、硫酸二乙酯复合诱变的方法对能选择性降解植物甾醇侧链的新金分支杆菌MN2进行诱变处理,利用梯度平板技术筛选高底物耐受性突变株,通过摇瓶发酵实验检测其转化性能,以期筛选出具有较高底物耐受性且转化生成雄烯二酮(androst-4-... 采用紫外、硫酸二乙酯复合诱变的方法对能选择性降解植物甾醇侧链的新金分支杆菌MN2进行诱变处理,利用梯度平板技术筛选高底物耐受性突变株,通过摇瓶发酵实验检测其转化性能,以期筛选出具有较高底物耐受性且转化生成雄烯二酮(androst-4-ene-3、17-dione、AD)能力提高的突变株。最终筛选到1株能在含高浓度底物平板上生长的AD突变株MN4。在底物甾醇投料量为20g/L,摇瓶发酵144h时AD生成率为40.9%,较出发菌株提高了15.1%。经斜面接种连续传代5次,MN4突变株遗传性状稳定。对突变株MN4的发酵培养基进行优化,通过正交试验确定的最佳培养基配比为:葡萄糖1g/L,玉米浆25g/L,磷酸二氢钠0.6g/L,硝酸钠6.2g/L,豆油160g/L。根据该配方进行转化,得到AD的生成率为50.6%。 展开更多
关键词 新金分枝杆菌 底物耐受性 诱变育种 雄烯二酮 生物转化
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