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高效液相色谱法快速测定鱼类鲜度指标K值及方法学优化 被引量：2
1
作者 周漪波 胡雪玉 +2 位作者 梁洁怡 潘云山 张飞 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2022年第8期189-194,共6页
对行业标准SC/T3048-2014测定鱼类鲜度K值(三磷酸腺苷,二磷酸腺苷,腺苷酸,肌苷酸,肌苷和次黄嘌呤)的分析方法进行优化。优化后的条件:以高氯酸溶液为提取剂,样品经高速均质结合超声波辅助提取后,用氢氧化钠溶液调节pH至6.0~6.4,一级水... 对行业标准SC/T3048-2014测定鱼类鲜度K值(三磷酸腺苷,二磷酸腺苷,腺苷酸,肌苷酸,肌苷和次黄嘌呤)的分析方法进行优化。优化后的条件:以高氯酸溶液为提取剂,样品经高速均质结合超声波辅助提取后,用氢氧化钠溶液调节pH至6.0~6.4,一级水定容。采用C_(4)柱(4.6mm×250mm,5μm)分离,以磷酸二氢钾溶液(0.048mol/L,pH=5.7)~甲醇/磷酸二氢钾溶液(9/1,v/v)为流动相进行梯度洗脱,检测波长254nm,流速1.0mL/min,柱温30℃,外标法定量。优化结果表明:6种化合物的分析时间由行业标准方法的38min减少至11min。该方法的加标回收率(77.2%~112%),相对标准偏差(4.69%~7.81%),检出限(0.648~2.15mg/kg)和定量限(2.16~7.18mg/kg)均优于行业标准方法。结果表明该方法操作简便,分析快速,干扰较小,灵敏度高和重现性好,具有一定的实用价值。 展开更多
关键词 K值 鱼 高效液相色谱法 方法学优化
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乙肝病毒基因组序列扩增的条件优化和结果分析 被引量：4
2
作者 李敏 蒋菲菲 +4 位作者 赵阳 林洪铿 钱榕 王伦善 吕蓉 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期42-45,共4页
目的优化乙型肝炎病毒(HBV)不同长度基因片段PCR扩增条件,为后续机制研究提供实验基础。方法运用PCR或巢式PCR(Nested PCR)方法扩增6例临床乙肝患者HBV DNA,针对特异性目的片段,通过优化Mg2+浓度、引物浓度、Taq酶用量、DMSO浓度等,获... 目的优化乙型肝炎病毒(HBV)不同长度基因片段PCR扩增条件,为后续机制研究提供实验基础。方法运用PCR或巢式PCR(Nested PCR)方法扩增6例临床乙肝患者HBV DNA,针对特异性目的片段,通过优化Mg2+浓度、引物浓度、Taq酶用量、DMSO浓度等,获得特异性扩增条带,PCR产物直接测序并使用CHROMAS、MEGA等生物学软件进行结果分析。结果通过综合分析各种实验条件对PCR扩增结果的影响,最终确认在50μL扩增体系中,2.5 mmol/L Mg2+、200 nmol/L特异性引物、1.5 U Taq酶、56℃退火在本实验室可获得良好的扩增效果,适量二甲基亚砜(DMSO)可减少非特异性干扰,同时建议对短片段可酌量减少Taq酶使用量。生物信息学分析示6例HBV感染标本中1例为B基因型,5例为C基因型,共发现S基因21个核酸变异及9个氨基酸可改变。结论建立了适合本实验室的HBV DNA扩增体系以及后续生物信息学分析方法,明确了不同的扩增体系条件对PCR扩增效果具有重要影响。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 PCR 巢式PCR 方法学优化 生物信息学
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