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3种对虾病毒囊膜蛋白对假型昆虫杆状病毒的包装与对虾组织亲嗜性的影响
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作者 马振龙 陶奕文 +2 位作者 赵亚琦 宋柳 郭华荣 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期65-78,共14页
为探究对虾白斑综合征病毒(WSSV)3种囊膜蛋白VP19、VP24和VP28对其假型昆虫杆状病毒的包装与对虾组织亲嗜性的影响,本研究首先分析了过表达的上述3种囊膜蛋白在包装细胞(Sf9)中的亚细胞定位,然后通过共转染的方法分别构建了其假型杆状病... 为探究对虾白斑综合征病毒(WSSV)3种囊膜蛋白VP19、VP24和VP28对其假型昆虫杆状病毒的包装与对虾组织亲嗜性的影响,本研究首先分析了过表达的上述3种囊膜蛋白在包装细胞(Sf9)中的亚细胞定位,然后通过共转染的方法分别构建了其假型杆状病毒:Bacmid-GUS/VP19、Bacmid-GUS/VP24和Bacmid-GUS/VP28,比较了上述3种假型杆状病毒的包装效率及其在感染对虾组织上的特异性。结果表明,过表达的VP19、VP24和VP28均可定位于包装细胞的细胞膜上,均能促进假型病毒的包装效率,并分别提高了14.1%、11.5%和11.7%,且携带不同囊膜蛋白的假型病毒在感染对虾成体时具有不同的最低感染剂量和不同的组织特异性。其中,假型病毒Bacmid-GUS/VP19和Bacmid-GUS/VP24仅能感染对虾成体的心脏和肌肉组织,且在单个对虾肌肉组织中两者的最低感染剂量分别为1×1011、1×108个具有生物活性的病毒颗粒数。而假型病毒Bacmid-GUS/VP28不仅能感染对虾的心脏和肌肉组织,还能感染对虾的鳃组织,且其在单个对虾鳃组织中的最低感染剂量为1×108个转导单位,在单个对虾肌肉组织中的最低感染剂量为1×109个转导单位。病毒感染对虾的成体组织的电镜分析结果提示,同哺乳动物细胞中的感染结果相似,假型昆虫杆状病毒在对虾成体组织中的感染也是复制缺陷的。本研究成果拓展了人们对于对虾WSSV病毒囊膜蛋白的生物学功能的认知,为假型昆虫杆状病毒介导的基因转移与表达系统的构建及其在对虾活体基因转移中的应用提供指导。 展开更多
关键词 对虾 假型昆虫杆状病毒 包装 白斑综合征病毒 囊膜蛋白 组织特异性
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昆虫杆状病毒杀虫剂研究与应用综述 被引量:4
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作者 高博 邓柳红 +2 位作者 易小平 肖苏生 张春发 《现代农业科技》 2008年第8期66-67,共2页
综述了对野生型昆虫杆状病毒和重组昆虫杆状病毒杀虫剂的研究进展,以及我国昆虫杆状病毒杀虫剂的应用研究现状。
关键词 昆虫杆状病毒 重组昆虫杆状病毒 昆虫杆状病毒杀虫剂
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昆虫杆状病毒表达载体系统的研究及应用 被引量:22
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作者 刘永平 王方海 +2 位作者 苏志坚 李广宏 庞义 《昆虫知识》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-5,共5页
昆虫杆状病毒表达载体系统具有表达水平高、表达产物可进行翻译后加工,并可通过感染昆虫幼虫而实现大规模低成本生产基因工程产品,该系统的建立和发展,被誉为20世纪80年代真核表达研究领域的一个重大进展。文章介绍了该系统的产生、发... 昆虫杆状病毒表达载体系统具有表达水平高、表达产物可进行翻译后加工,并可通过感染昆虫幼虫而实现大规模低成本生产基因工程产品,该系统的建立和发展,被誉为20世纪80年代真核表达研究领域的一个重大进展。文章介绍了该系统的产生、发展和技术原理,同时概述了该系统在基础研究、医药和农林业等领域的应用情况。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒表达载体系统 基础研究 医药 农林业
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昆虫杆状病毒表达系统的研究与应用进展 被引量:20
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作者 刘高强 章克昌 +1 位作者 王晓玲 魏美才 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第7期40-44,共5页
昆虫杆状病毒表达系统 (BEVS)因具有完备的翻译后加工修饰系统和高效表达外源基因的能力等特点 ,现已成功表达了近千种高价值蛋白。随着杆状病毒载体的不断改进 ,该系统获得重组病毒的几率已从最初的 0 1 %~ 1 %提高到现在的 80 %~ 9... 昆虫杆状病毒表达系统 (BEVS)因具有完备的翻译后加工修饰系统和高效表达外源基因的能力等特点 ,现已成功表达了近千种高价值蛋白。随着杆状病毒载体的不断改进 ,该系统获得重组病毒的几率已从最初的 0 1 %~ 1 %提高到现在的 80 %~ 90 %以上 ,并且出现了一些新的宿主域扩大的昆虫杆状病毒载体和高水平表达重组蛋白的昆虫细胞系。杆状病毒载体将在未来药物研发、疫苗生产、基因治疗、重组杆状病毒杀虫剂等领域得到广泛应用。但存在的一些问题如杆状病毒的基因组学研究相对薄弱 ,有关病毒晚期基因的高表达和调控机制等还不十分清楚 ,表达产物的纯化比较困难 ,多元表达等方面的技术还不够成熟等 ,均有待进一步解决。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒 杆状病毒载体 表达系统 外源基因 基因工程
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昆虫杆状病毒杀虫剂研制与应用进展 被引量:11
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作者 刘永平 王方海 +1 位作者 苏志坚 李广宏 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2006年第1期1-5,共5页
本文对野生型昆虫杆状病毒和重组昆虫杆状病毒杀虫剂的研制与应用进展进行了综述,同时阐述了昆虫病毒杀虫剂的生产及其存在的问题。
关键词 野生型昆虫杆状病毒 重组杆状病毒 杀虫剂 生产
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昆虫杆状病毒杀虫剂的研究与应用进展 被引量:8
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作者 薛贵收 肖娱玉 +1 位作者 朱江 浦冠勤 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第2期8-11,共4页
昆虫杆状病毒由于寄主专一性强、与环境相容性好等特点而受到人们广泛关注,成为生物防治害虫的重要内容之一。本文介绍了野生型昆虫杆状病毒的筛选和开发,高效、安全的基因工程重组杆状病毒杀虫剂的研究与应用,并对重组病毒的安全性进... 昆虫杆状病毒由于寄主专一性强、与环境相容性好等特点而受到人们广泛关注,成为生物防治害虫的重要内容之一。本文介绍了野生型昆虫杆状病毒的筛选和开发,高效、安全的基因工程重组杆状病毒杀虫剂的研究与应用,并对重组病毒的安全性进行了客观的分析和评价,对病毒杀虫剂的发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒 野生型NPV 基因工程重组杆状病毒 杀虫剂 安全性评价
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昆虫杆状病毒的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶 被引量:7
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作者 闫庆生 欧阳晓光 +1 位作者 李充璧 庞义 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第3期241-242,共2页
昆虫杆状病毒的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶(ecdysteroidUDPglucosyltransferase,EGT)能催化UDP糖基连接到蜕皮甾体上,使之失活,从而阻止或推迟蜕皮,有利于病毒复制,所以缺失eg... 昆虫杆状病毒的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶(ecdysteroidUDPglucosyltransferase,EGT)能催化UDP糖基连接到蜕皮甾体上,使之失活,从而阻止或推迟蜕皮,有利于病毒复制,所以缺失egt基因的病毒能改良杀虫效果,如加速死亡和减少摄食量等.最近几年的研究进展主要集中在基因和蛋白质的一级结构、酶催化反应。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒 EGT基因 EGT
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宿主域扩大的重组救活昆虫杆状病毒表达载体的构建及外源基因的表达 被引量:4
8
作者 易咏竹 陈寅 +2 位作者 张志芳 何家禄 秦俭 《蚕业科学》 CAS CSCD 2002年第4期304-307,共4页
通过克隆的家蚕核多角体病毒解旋酶基因DNA与重组救活可线性化的苜蓿尺蠖核多角体病毒基因工程载体病毒 (BacPAK6 )DNA在昆虫细胞中发生重组 ,经累代筛选获得了既可感染家蚕又可感染秋粘虫细胞Sf 2 1的宿主域扩大的昆虫杆状病毒表达载体... 通过克隆的家蚕核多角体病毒解旋酶基因DNA与重组救活可线性化的苜蓿尺蠖核多角体病毒基因工程载体病毒 (BacPAK6 )DNA在昆虫细胞中发生重组 ,经累代筛选获得了既可感染家蚕又可感染秋粘虫细胞Sf 2 1的宿主域扩大的昆虫杆状病毒表达载体 (HyBacPAK6 )。HyBacPAK6DNA经Bsu36Ⅰ酶切后与含植酸酶基因的转移载体pVL1393 phy在家蚕细胞中重组后 ,通过蓝白斑筛选发现重组率可达 90 %以上。然而以杂交病毒为载体的外源基因表达量仅为以BmNPV为载体病毒的表达量的 2 0 %左右。分析认为HyBacPAK6可用于表达一些对蚕体有害的外源基因。 展开更多
关键词 表达载体 宿主域 外源基因表达 家蚕 昆虫杆状病毒表达系统 HyBacPAK6
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昆虫杆状病毒表达系统研究进展及其应用展望 被引量:17
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作者 朱江 吴祥甫 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第2期114-119,共6页
昆虫杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一,已广泛应用于重组蛋白的合成。该系统具有如多角体启动子控制下的高效表达,比较完善的转译后加工修饰,容易从无血清培养上清中纯化,无内毒素污染等特点。杆状病毒表达载体系统研究的最新进展... 昆虫杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一,已广泛应用于重组蛋白的合成。该系统具有如多角体启动子控制下的高效表达,比较完善的转译后加工修饰,容易从无血清培养上清中纯化,无内毒素污染等特点。杆状病毒表达载体系统研究的最新进展:高强度早期启动子群杆状病毒转移载体的成功合成,以扩大寄主范围和增进重组蛋白稳定性为目的的亲本病毒的改造;通用的昆虫细胞培养基配方的不断优化,特定昆虫细胞株培养基的研制和适用于大规模悬浮培养的无血清培养基的商品化;旨在进行复杂糖基化及提供相对稳定细胞环境的宿主细胞工程;以新标记物(tag)载体和相关亲和层析方法为代表的蛋白质高效纯化方法的进步。昆虫杆状病毒表达载体系统在基础研究、医药卫生和农业上具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒表达系统 研究进展 应用 改进 蛋白质 昆虫细胞培养 纯化
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羊口疮病毒榆林株B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统的表达 被引量:4
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作者 冯平 李云章 +2 位作者 孙丰廷 屈雷 闫海龙 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第6期1-8,共8页
【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r ... 【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r B2L)和F1L融合基因(c F1L),利用碱基linker连接,通过重叠PCR方法扩增获得ORFV r B2L-linker-c F1L重组基因(r B2Lc F1L),将其与昆虫杆状病毒表达载体pBac5连接构建表达载体pBac-rB2LcF1L。将pBac-rB2LcF1L包装出杆状病毒,侵染sf9细胞,通过SDS-PAGE、Western-blotting以及质谱鉴定等方法验证目的基因r B2Lc F1L的表达。【结果】克隆获得了1 029bp的F1L全长基因,该基因高度保守,与FJ-MH2015株的序列相似性最高,核苷酸和氨基酸的相似性分别为99.0%和99.4%。系统进化分析表明,ORFV-Yulin株与XP(KU199840.1)、FJ-MH2015(KM675409.1)以及Shanxi(HQ221964.1)株同处于一个分支。PCR扩增获得了855bp的c F1L基因、1 180bp的r B2L基因及1 983bp的r B2Lc F1L基因,成功构建了pBacrB2LcF1L载体,并包装出相应的杆状病毒。B2L和F1L串联基因通过昆虫杆状病毒表达系统获得成功表达,表达产物的分子质量为80ku,且有部分重组蛋白能分泌到细胞培养基中。【结论】ORFV-Yulin株的B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统表达成功。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 F1L+B2L串联表达 昆虫杆状病毒 基因表达
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含弓形虫P30基因插入昆虫杆状病毒的研究 被引量:6
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作者 陈晓光 刘国章 江静波 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期270-273,共4页
目的:将弓形虫ZS1株主要表膜抗原(P30)基因插入到昆虫杆状病毒基因组中,为在昆虫细胞或昆虫体内表达及生产P30作准备。方法:先将P30基因亚克隆到转移载体质粒pSX-IVVI+X3中,然后用此重组载体质粒DNA与... 目的:将弓形虫ZS1株主要表膜抗原(P30)基因插入到昆虫杆状病毒基因组中,为在昆虫细胞或昆虫体内表达及生产P30作准备。方法:先将P30基因亚克隆到转移载体质粒pSX-IVVI+X3中,然后用此重组载体质粒DNA与亲本株病毒DNA共转染培养的草地夜蛾细胞,经空斑纯化筛选出重组病毒株。结果:已得到含P30基因的重组杆状病毒TnNPV-P30。结论:本文已将弓形虫ZS1株P30基因亚克隆到昆虫杆状病毒TnNPV中。 展开更多
关键词 弓形虫 P30基因 昆虫杆状病毒
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弓形虫P30基因在昆虫杆状病毒载体体系中的初步表达 被引量:15
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作者 陈晓光 刘国章 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 1996年第1期19-23,共5页
将弓形虫主要表面抗原(P30)基因插入转移载体质粒pSXIVVI+X3中,然后将重组质粒pSXIVVI+X3-P30DNA与粉纹夜蛾核形多角体病毒TnNPVDNA共转染培养的草地夜蛾细胞(Sf),通过同源重组和空斑纯... 将弓形虫主要表面抗原(P30)基因插入转移载体质粒pSXIVVI+X3中,然后将重组质粒pSXIVVI+X3-P30DNA与粉纹夜蛾核形多角体病毒TnNPVDNA共转染培养的草地夜蛾细胞(Sf),通过同源重组和空斑纯化,得到重组病毒TnNPV-P30.对重组病毒感染的Sf细胞及银纹夜蛾幼虫进行SDS-PAGE和Westernblot分析。结果显示:P30基因在Sf细胞及虫体中得到了表达,表达产物具有特异的免疫反应性。 展开更多
关键词 弓形体 昆虫病毒 昆虫杆状病毒 载体 基因表达
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昆虫杆状病毒表达系统在病毒性家禽疾病研究中的应用进展 被引量:3
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作者 孙新宽 宋丽丽 +2 位作者 韦平 韦天超 磨美兰 《中国家禽》 北大核心 2014年第1期39-43,共5页
昆虫杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一,具有安全性高、对外源基因克隆容量大、重组病毒易于筛选、具有完备的翻译后加工修饰系统和高效表达外源基因的能力等特点,已成功表达了近千种高价值蛋白,在很多领域都得到较广泛的应用。本... 昆虫杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一,具有安全性高、对外源基因克隆容量大、重组病毒易于筛选、具有完备的翻译后加工修饰系统和高效表达外源基因的能力等特点,已成功表达了近千种高价值蛋白,在很多领域都得到较广泛的应用。本文对该表达系统在主要病毒性家禽疾病方面的相关应用研究进展进行综述,旨在为相关研究提供参考。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒 表达 家禽病毒 应用
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昆虫杆状病毒基因组学研究进展 被引量:2
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作者 梁振普 刘雅静 +3 位作者 张小霞 李鹏娟 王亮 张俊庆 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第9期1-7,共7页
杆状病毒(Baculoviruses)是一类在自然界中专一性感染节肢动物的共价闭合双链环状DNA病原微生物。由于杆状病毒的宿主特异性高,其作为无公害生物杀虫剂在生物防治方面发挥重大作用。此外,杆状病毒已被开发成为高效的真核表达载体,广泛... 杆状病毒(Baculoviruses)是一类在自然界中专一性感染节肢动物的共价闭合双链环状DNA病原微生物。由于杆状病毒的宿主特异性高,其作为无公害生物杀虫剂在生物防治方面发挥重大作用。此外,杆状病毒已被开发成为高效的真核表达载体,广泛应用于药物研发、疫苗生产等领域,并作为基因治疗载体用于疾病的基因治疗。综述了获得全基因组序列的昆虫杆状病毒类别及其序列特征,以及昆虫杆状病毒基因组中的主要功能基因,包括RNA转录相关基因、DNA复制相关基因、结构蛋白基因等,也对其应用做了较为详尽的阐述。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒 基因组学 功能基因 应用
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ORFV-Yulin株的分离鉴定及其B2L基因在昆虫杆状病毒系统中的表达 被引量:3
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作者 冯平 李云章 +2 位作者 孙丰廷 屈雷 闫海龙 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第9期32-38,共7页
【目的】从榆林市具有典型羊口疮症状的陕北白绒山羊唇结痂病料中分离羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通过昆虫杆状病毒表达B2L基因。【方法】利用牛肾传代细胞进行ORFV的分离培养,通过PCR的方法从分离到的病毒中... 【目的】从榆林市具有典型羊口疮症状的陕北白绒山羊唇结痂病料中分离羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通过昆虫杆状病毒表达B2L基因。【方法】利用牛肾传代细胞进行ORFV的分离培养,通过PCR的方法从分离到的病毒中扩增出B2L全长基因,测序后进行序列及遗传进化分析。利用扩增所得的B2L基因构建昆虫杆状病毒表达载体,包装出杆状病毒后侵染sf9细胞,并通过SDS-PAGE、Western-blot以及质谱鉴定等方法验证目的基因的表达情况。【结果】成功分离出1株羊口疮病毒,命名为ORFV-Yulin株;扩增的B2L全长基因长度为1 137bp,与Hub13和GY-AHF10株亲缘关系最近,核苷酸序列和氨基酸序列的相似性分别为99%和99.2%。通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达了B2L基因,获得了47ku的重组蛋白。【结论】从榆林市陕北白绒山羊中获得了羊口疮病毒分离株(ORFV-Yulin);通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达了ORFV-Yulin株的B2L基因。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L基因 昆虫杆状病毒表达系统
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昆虫杆状病毒多角体形态异常的突变研究进展 被引量:2
16
作者 曹阳 葛慈斌 +2 位作者 肖巧学 黄亚东 黄自然 《蚕业科学》 CAS CSCD 2000年第z1期79-85,共7页
综述了昆虫杆状病毒多角体形态异常的突变研究进展 ,结合作者等近年的研究结果 。
关键词 昆虫杆状病毒 多角体 突变
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神经营养素-4(NT-4)在昆虫杆状病毒表达系统中的克隆与表达 被引量:4
17
作者 马晓骊 黄秉仁 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期141-144,共4页
目的 通过昆虫杆状病毒表达系统的优势,表达出具有生物学活性的神经营养素-4( hNT-4)蛋白。方法 通过 PCR方法获得 hNT-4成熟肽的基因,将其连接到昆虫表达载体 pAcGP67B上,在昆虫细胞 Sf9中进行表达。对表达产物进行免疫原性和生... 目的 通过昆虫杆状病毒表达系统的优势,表达出具有生物学活性的神经营养素-4( hNT-4)蛋白。方法 通过 PCR方法获得 hNT-4成熟肽的基因,将其连接到昆虫表达载体 pAcGP67B上,在昆虫细胞 Sf9中进行表达。对表达产物进行免疫原性和生物学活性测定。结果 获得 hNT-4蛋白的表达产物, SDS-PAGE电泳显示表达产物相对分子质量为 15 000。 经 Western-blot验证,表达上清及细胞全蛋白均有一条能与抗人 NT-4抗体发生特异性免疫反应的条带。经 PC12细胞测定,表达上清中的 rNT-4蛋白具有明确的生物学活性。结论 hNT-4在昆虫杆状病毒表达系统中的表达为今后进一步深入研究 hNT-4的功能及其在临床中的应用提供了条件。 展开更多
关键词 神经营养素-4 载体PacGP67B Sf 细胞 昆虫杆状病毒 表达系统 克隆表达
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重组昆虫杆状病毒构建和筛选技术进展 被引量:4
18
作者 曹翠平 吴小锋 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期837-843,共7页
昆虫杆状病毒作为高效的真核表达载体 ,现已广泛应用于各种外源目的基因的表达。但由于重组病毒产生的比例很低(通常只有 0 1 %~ 1 % ) ,成为制约该系统应用的技术瓶颈。本文概括了近年来发展的重组病毒的构建和筛选方法 。
关键词 重组昆虫杆状病毒 空斑纯化 线性化技术 BAC-TO-BAC
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重组昆虫杆状病毒杀虫剂研究进展 被引量:4
19
作者 袁哲明 游兰韶 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期494-498,共5页
从亲本病毒及其启动子的选择 ,外源毒素基因、昆虫专性激素和酶基因、增效基因、标记基因、宿主反义RNA基因的引入 ,病毒自身基因的修饰以及重组病毒的安全性等方面综述了该领域的最新研究进展 .
关键词 昆虫杆状病毒 重组病毒 基因工程 病毒杀虫剂
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昆虫杆状病毒表达系统的研究及其新进展 被引量:8
20
作者 孙阳 张淑颖 《江西农业学报》 CAS 2006年第5期96-99,共4页
就昆虫杆状病毒转移载体的优化、细胞株的优化、病毒滴度测定方法的改进及其将在未来农业、分子生物学、医学等领域得到广泛应用等方面进行了综述。
关键词 昆虫杆状病毒 表达系统 研究进展
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