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改良明胶酶谱测定明胶酶活性 被引量：12
1
作者 骞爱荣 商澎 陈志南 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期282-283,共2页
关键词 明胶酶谱 基质金属蛋白酶 电泳 聚丙烯酰胺凝胶
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免疫组化、明胶酶谱、Western Blot检测涎腺肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的比较与评价 被引量：10
2
作者 田鲲 彭敏 +1 位作者 陈宇 耿宁 《实用医院临床杂志》 2010年第5期17-21,共5页
目的评价免疫组化、明胶酶谱、Western blot检测涎腺良恶性肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的优点与局限性。方法分别运用免疫组化、明胶酶谱、Western blot对34例涎腺良恶性肿瘤进行MMP-2、MMP-9定位、半定量、定量检测和活性酶... 目的评价免疫组化、明胶酶谱、Western blot检测涎腺良恶性肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的优点与局限性。方法分别运用免疫组化、明胶酶谱、Western blot对34例涎腺良恶性肿瘤进行MMP-2、MMP-9定位、半定量、定量检测和活性酶含量的分析,比较各方法检测结果的差异。结果免疫组化方法能定位、半定量检测出基质金属蛋白酶在良恶性肿瘤间的差异;Western blot能定量说明基质金属蛋白酶在良恶性肿瘤间的差异;明胶酶谱法能检测出MMP-2、MMP-9酶原和活性酶在良恶性肿瘤间的差异。结论免疫组化、Western blot、明胶酶谱三种方法结合,既发挥免疫组化细胞定位的优势,又克服了免疫组化法非精确定量的弱点,并打破其不能辨别酶原与活性酶的局限性,更加客观准确反映各型肿瘤组织中MMP-2、MMP-9的实际表达。 展开更多
关键词 免疫组化 明胶酶谱 WESTERNBLOT 涎腺肿瘤 基质金属蛋白酶
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优化明胶酶谱法检测自发性高血压大鼠血浆MMP-2和MMP-9活性 被引量：2
3
作者 李炳蔚 苑晓晨 +4 位作者 王冰 秦伟伟 李宏伟 刘淑英 修瑞娟 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第7期845-848,共4页
目的以优化明胶酶谱法检测自发性高血压大鼠(SHR)血浆基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与-9(MMP-9)的活性。方法以含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳酶谱法为基础,改变孵育时间、工作液成份,采用不同pH值的孵育液及不同冻融次数的样品,观察对基质... 目的以优化明胶酶谱法检测自发性高血压大鼠(SHR)血浆基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与-9(MMP-9)的活性。方法以含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳酶谱法为基础,改变孵育时间、工作液成份,采用不同pH值的孵育液及不同冻融次数的样品,观察对基质金属蛋白酶(MMPs)活性的影响。并以优化的酶谱法检测Wistar及自发性高血压大鼠血浆MMPs的相对活性。结果凝胶孵育时间由42 h缩短为17 h不影响酶谱法检测结果。省略漂洗步骤及洗脱液仅使用2.5%Triton X-100、孵育液中去除NaN3及NaCl且电泳后步骤将去离子水更换为蒸馏水也不影响实验结果。孵育液pH值在7.2～8.8范围内均可用于酶谱法。血浆样品反复冻融多达6次不影响酶谱法检测结果。用优化的酶谱法检测结果显示,与Wistar大鼠相比,SHR大鼠血浆MMP-2与MMP-9活性显著增高。结论优化酶谱法与常规方法相比更为简便经济,检测大鼠血浆MMP-2与MMP-9活性所得结果一致。 展开更多
关键词 明胶酶谱 基质金属蛋白酶 高血压
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荧光原位明胶酶谱法对肝组织明胶酶活性的检测 被引量：2
4
作者 陈倩 沈丽 +2 位作者 何琦麟 陶艳艳 刘成海 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第15期1607-1611,共5页
目的:建立荧光原位明胶酶谱法,观察纤维化和急性损伤肝组织明胶酶活性表达特点.方法:复制二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化模型与N-乙酰半乳糖胺/脂多糖急性肝损伤模型,取其肝组织冰冻切片,将绿色荧光明胶底物附着于肝组织冰冻切片上,置于酶反... 目的:建立荧光原位明胶酶谱法,观察纤维化和急性损伤肝组织明胶酶活性表达特点.方法:复制二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化模型与N-乙酰半乳糖胺/脂多糖急性肝损伤模型,取其肝组织冰冻切片,将绿色荧光明胶底物附着于肝组织冰冻切片上,置于酶反应缓冲液中避光孵育8-24h;再以Hoechst液复染细胞核,在荧光显微镜下分别以蓝光激发拍摄明胶酶绿色荧光和紫光激发拍摄细胞核蓝色荧光,并将图像重叠.结果:成功建立荧光原位明胶酶谱法.正常大鼠肝组织仅在肝窦周围少量明胶酶表达,纤维化及急性肝损伤肝组织肝窦处明胶酶活性增强,纤维化肝组织纤维间隔处明胶酶活性也较强.结论:荧光原位明胶酶谱法具有灵敏,直观,简便的优点,可较好分析肝组织明胶酶活性水平与表达位置,对研究肝脏病理与药理具有重要意义. 展开更多
关键词 明胶酶活性 荧光原位明胶酶谱法 肝脏
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明胶酶谱实验方法的优化 被引量：1
5
作者 章淑平 骆建民 王俐 《生物技术通讯》 CAS 2014年第1期102-104,共3页
目的:优化明胶酶谱实验方法,并检测不同浓度凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌的明胶酶B(MMP-9)活性的变化。方法:用含明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分开上清中各蛋白条带,经2.5%Triton X-100洗脱、明胶酶缓冲液孵育、考马斯亮蓝染色液染色及... 目的:优化明胶酶谱实验方法,并检测不同浓度凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌的明胶酶B(MMP-9)活性的变化。方法:用含明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分开上清中各蛋白条带,经2.5%Triton X-100洗脱、明胶酶缓冲液孵育、考马斯亮蓝染色液染色及脱色液脱色后,经光密度扫描记录,应用ImageJ软件进行密度计量分析。结果:凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌MMP-9具有浓度依赖性。结论:利用优化的明胶酶谱实验方法可做出高质量的明胶酶谱图片,对检测明胶酶活性有重要意义。 展开更多
关键词 明胶酶谱 基质金属蛋白酶 聚丙烯酰胺凝胶
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原位明胶酶谱法检测胶质瘤18例基质金属蛋白酶活性
6
作者 金曙光 Shin JUNG +1 位作者 石清泉 沈浩员 《中国乡村医药》 2012年第5期67-67,共1页
胶质瘤是常见脑肿瘤之一,具有肿瘤早期就能侵袭周边正常脑组织的特性,尤其是胶质母细胞瘤,恶性度高。基质金属蛋白酶（MMPs）是一组锌依赖性内肽酶,与肿瘤细胞侵袭、转移相关的细胞外基质（ECM）降解过程密切相关[1],目前已知有26种,
关键词 基质金属蛋白酶活性 胶质瘤 明胶酶谱法 肿瘤细胞侵袭 检测 胶质母细胞瘤 正常脑组织 细胞外基质
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不同种属来源明胶及其他因素对明胶酶谱法检测金属蛋白酶的影响 被引量：2
7
作者 骆建民 王俐 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1401-1402,共2页
金属蛋白酶12（MMP-2，明胶酶A）与金属蛋白酶-9（MMP-9，明胶酶B）在多种生理过程中起作用，病理状态下如肿瘤、心血管疾病和呼吸系统疾病，则这些酶的表达和活性增加。明胶酶谱法多用于检测血浆、细胞培养上清及组织中的金属蛋白酶-2... 金属蛋白酶12（MMP-2，明胶酶A）与金属蛋白酶-9（MMP-9，明胶酶B）在多种生理过程中起作用，病理状态下如肿瘤、心血管疾病和呼吸系统疾病，则这些酶的表达和活性增加。明胶酶谱法多用于检测血浆、细胞培养上清及组织中的金属蛋白酶-2和9的活性，我们先前的实验发现不同来源的明胶直接影响明胶酶谱法结果，不同方式处理样本对酶的活性检测有影响，本研究就明胶的来源（自猪、牛皮肤提取）是否影响金属蛋白酶活性的检测，以及不同样本量、样本储存温度、反复冻融等因素对明胶酶谱法检测金属蛋白酶活性的影响进行探讨。 展开更多
关键词 金属蛋白酶-2 明胶酶谱法 活性检测 种属来源 蛋白酶活性 呼吸系统疾病 心血管疾病 样本量
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紫癜性肾炎患儿血清、尿液明胶酶活性变化的意义 被引量：6
8
作者 李茜 郭晓清 +3 位作者 蒲秀红 安涛 邱萌 裘晓霞 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期536-537,共2页
目的研究紫癜性肾炎患儿血清与尿液明胶酶A(MMP-2)与B(MMP-9)活性变化及意义。方法将过敏性紫癜患儿分为紫癜性肾炎组23例与单纯紫癜组12例,以健康16例儿童作对照组,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)明胶酶谱法检测其... 目的研究紫癜性肾炎患儿血清与尿液明胶酶A(MMP-2)与B(MMP-9)活性变化及意义。方法将过敏性紫癜患儿分为紫癜性肾炎组23例与单纯紫癜组12例,以健康16例儿童作对照组,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)明胶酶谱法检测其血清与尿液明胶酶活性。结果与健康对照组比较,紫癜性肾炎组与单纯紫癜组血清除检测到非活化态明胶酶A与B活性外,还检测到活化态明胶酶B活性;与正常组与单纯紫癜组比较,紫癜性肾炎组尿液活化态明胶酶A与B表达明显增多,24 h蛋白尿>1 g组活性分别是<1 g组的2.9与2.5倍。结论紫癜性肾炎患儿尿液明胶酶A、B活性明显增加,其活性变化与尿蛋白程度密切相关。 展开更多
关键词 肾炎 紫癜性 明胶酶A 明胶酶B 明胶酶谱法
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MRL/lpr小鼠血清与尿液中明胶酶活性的增龄变化及意义 被引量：3
9
作者 蔡广研 陈香美 +2 位作者 吕扬 师锁柱 王兆霞 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1485-1487,共3页
目的检测不同周龄MRL/lpr小鼠血清与尿液中明胶酶A(MMP-2)与B(MMP-9)的活性,观察其随增龄的变化及在肾脏病变中的意义。方法留取8、16与24周龄MRL/lpr小鼠的血清、尿液与肾脏组织标本,SDS-PAGE明胶酶谱法检测明胶酶活性,检测不同周龄小... 目的检测不同周龄MRL/lpr小鼠血清与尿液中明胶酶A(MMP-2)与B(MMP-9)的活性,观察其随增龄的变化及在肾脏病变中的意义。方法留取8、16与24周龄MRL/lpr小鼠的血清、尿液与肾脏组织标本,SDS-PAGE明胶酶谱法检测明胶酶活性,检测不同周龄小鼠尿蛋白含量,并对肾组织进行病理学分级;对尿液中明胶酶的活性与尿蛋白进行相关性分析。结果8,16与24周龄MRL/lpr小鼠血清中仅检测到非活化态MMP-2与MMP-9的活性及微弱的活化态MMP-9,其表达随增龄无明显变化;8周龄小鼠尿液中可以检测到较弱的MMP-2与MMP-9活性,以非活化态为主;16与24周龄小鼠尿液中活化态的MMP-2、MMP-9的表达明显增加,肾组织明胶酶的活性亦随增龄明显增加,变化趋势与尿液相似。尿液中明胶酶的活性与尿蛋白的含量及肾脏组织学改变呈正相关。结论MRL/lpr小鼠尿液中MMP-2、MMP-9活性随增龄明显增加,其活性变化与尿蛋白的发生密切相关,可以反映肾组织增龄性病变程度。 展开更多
关键词 MRL/LPR小鼠 MMP-2 MMP-9 明胶酶谱法
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藤茶活性成分二氢杨梅素对明胶酶的影响 被引量：2
10
作者 晏和娟 伍莉娟 +1 位作者 郑小江 周防震 《中国酿造》 CAS 2014年第10期81-83,共3页
该文探讨藤茶活性成分二氢杨梅素（DMY）对明胶酶酶活性和酶蛋白表达量的影响。通过收集不同质量浓度DMY处理的人乳腺癌细胞的条件化培养液上清液,取等蛋白质含量各处理组样本液,进行相同条件的明胶酶谱实验,以此检测DMY对明胶酶蛋白表... 该文探讨藤茶活性成分二氢杨梅素（DMY）对明胶酶酶活性和酶蛋白表达量的影响。通过收集不同质量浓度DMY处理的人乳腺癌细胞的条件化培养液上清液,取等蛋白质含量各处理组样本液,进行相同条件的明胶酶谱实验,以此检测DMY对明胶酶蛋白表达量的影响;收集未经过DMY处理的细胞培养液上清液,等量体积上样进行明胶酶谱实验的SDS-PAGE电泳部分,移除凝胶中SDS后置于含有不同质量浓度DMY的孵育液中进行孵育,以此检测DMY对明胶酶活性的影响。结果表明,20-80μg/mL的DMY对明胶酶活性未见明显影响,但以剂量依赖方式抑制明胶酶蛋白的表达。这表明DMY抑制肿瘤转移的作用机制可能是通过抑制明胶酶酶蛋白的表达量,而不是通过抑制该酶活性来完成的。 展开更多
关键词 二氢杨梅素 明胶酶 明胶酶谱
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鲤鱼红色肉中金属蛋白酶的分离纯化与性质分析 被引量：6
11
作者 伍久林 卢宝驹 +3 位作者 杜明华 刘光明 苏文金 曹敏杰 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第4期289-294,共6页
通过硫酸铵盐析、DEAE—Sephacel离子交换、Sephacryl S-200凝胶过滤、High-Q离子交换和Gelatin—Sepharose亲和层析等方法，从鲤鱼红色肉中纯化得到分子量为75ku的金属蛋白酶．该酶在碱性条件下显示活性，活性温度范围为30～50℃．金... 通过硫酸铵盐析、DEAE—Sephacel离子交换、Sephacryl S-200凝胶过滤、High-Q离子交换和Gelatin—Sepharose亲和层析等方法，从鲤鱼红色肉中纯化得到分子量为75ku的金属蛋白酶．该酶在碱性条件下显示活性，活性温度范围为30～50℃．金属蛋白酶抑制剂EDTA和EGTA能够完全抑制该酶的活性，而其他蛋白酶类抑制剂则不起抑制作用．进一步研究发现，该酶能够有效分解Ⅰ型胶原蛋白和明胶，说明其在鱼体死后肌肉软化过程中起着重要作用． 展开更多
关键词 鲤鱼 明胶酶谱 金属蛋白酶 纯化 性质分析 胶原蛋白
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组织因子促进人类大肠癌细胞的侵袭及与基质金属蛋白酶类的相关性研究 被引量：13
12
作者 汤坚强 万远廉 +7 位作者 刘玉村 戎龙 汪欣 吴涛 潘义生 叶京明 姚宏伟 朱静 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期265-268,共4页
目的:探讨组织因子促进人类大肠癌细胞侵袭的机制,研究其与MMP 2和MMP 9的相关性。方法:获取转染正义/反义TFcDNA的人类大肠癌HT 29细胞系/LoVo细胞系裸鼠皮下种植瘤标本,应用Westernblot和RT PCR技术,检测转染组和对照组肿瘤组织中MMP ... 目的:探讨组织因子促进人类大肠癌细胞侵袭的机制,研究其与MMP 2和MMP 9的相关性。方法:获取转染正义/反义TFcDNA的人类大肠癌HT 29细胞系/LoVo细胞系裸鼠皮下种植瘤标本,应用Westernblot和RT PCR技术,检测转染组和对照组肿瘤组织中MMP 2和MMP 9的蛋白和mRNA表达水平;同时采用明胶酶谱法检测转染反义LoVo细胞系培养上清中的MMP 2和MMP 9活性的变化。结果:与对照组相比较,转染正义TFcDNA的HT 29细胞系成瘤标本TF表达升高,其所对应的MMP 9和MMP 2蛋白水平和mRNA水平表达也明显升高; 转染反义TFcDNA的LoVo细胞系成瘤标本中的TF,MMP 9和MMP 2蛋白和mRNA水平表达明显低于对照组,转染反义TFcDNA的LoVo细胞系培养上清液中的MMP 9和MMP 2活性较对照组低;MMP 9和MMP 2表达与组织因子表达具有相关性。结论:组织因子促进人类大肠癌细胞的侵袭,其部分机制可能与组织因子上调MMP 9和MMP 2的表达有关,组织因子可能是大肠癌细胞分泌MMPs的内在激动剂。 展开更多
关键词 组织因子 大肠癌细胞 基质金属蛋白酶类 相关性研究 人类 HT-29细胞系 mRNA水平 Western MMP-9活性 MMP-2蛋白 MMP-2表达 LoVo mRNA表达 转染反义 癌细胞侵袭 皮下种植瘤 PCR技术 明胶酶谱法 培养上清液 对照组 blot 肿瘤组织
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左-甲状腺素诱导的大鼠肥大心肌中基质金属蛋白酶的变化及新内皮素受体拮抗剂CPU-0213的作用 被引量：10
13
作者 刘青 吉民 戴德哉 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期150-155,共6页
目的 :通过新内皮素受体拮抗剂CPU 0 2 13对左 甲状腺素 (L thy)诱导的大鼠肥大心肌中基质金属蛋白酶 (MMPs)的改变 ,探讨内皮素参与诱导心肌肥大和细胞外基质改变的机制。方法 :雄性SD大鼠随机分成 3组 ,除对照组外 ,大鼠每日给予L th... 目的 :通过新内皮素受体拮抗剂CPU 0 2 13对左 甲状腺素 (L thy)诱导的大鼠肥大心肌中基质金属蛋白酶 (MMPs)的改变 ,探讨内皮素参与诱导心肌肥大和细胞外基质改变的机制。方法 :雄性SD大鼠随机分成 3组 ,除对照组外 ,大鼠每日给予L thy (sc ,0 .4mg/kg)共 10d ,药物干预组在第 7天时给新型内皮素受体拮抗剂CPU 0 2 13(po ,10 0mg/kg) ,连续 3d。动物处死后取大鼠心脏测定心肌组织中总胶原含量、MDA的含量及SOD活性。大鼠左心室的MMPs的活性由明胶酶谱法测定 ,Ⅰ型胶原基因 (proα2 (Ⅰ )collagen)的基因表达由半定量RT PCR方法确定。结果 :L thy心肌病组大鼠心肌中的总胶原含量减少 ,SOD活性下降 ,MDA含量增多 ,MMPs的活性被抑制。RT PCR结果显示L thy组的大鼠左心室proα2 (Ⅰ )collagen的基因表达下调。给予CPU 0 2 13干预后大鼠心肌总胶原含量及SOD活性上升 ,MDA含量减少 ,大鼠左心室中MMPs活性被抑制 ,左心室中proα2 (Ⅰ )collagen的基因表达上调。结论 :L thy诱导的大鼠心肌肥大是一种缺少纤维化的肥大 ,肥大心肌中自由基增多且脂质膜受损。内皮素 1(ET 1)参与介导心肌MMPs活性的调节 ,新内皮素受体拮抗剂CPU 0 2 13能明显上调proα2(Ⅰ ) 展开更多
关键词 左-甲状腺素 心肌肥大 基质金属蛋白酶 内皮素受体拮抗剂 明胶酶谱法 CPU-0213
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地塞米松和吲哚美辛对基质金属蛋白酶-9的抑制作用及其机制研究 被引量：6
14
作者 李怡棠 刘柏合 +2 位作者 张成义 沈放 程桂芳 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期1-4,共4页
目的　研究地塞米松和吲哚美辛对U937细胞中基质金属蛋白酶 9(MMP 9)活性的影响及抗炎作用机理。方法　明胶酶谱法测定MMP 9的活性 ;Westernblot法测定细胞培养上清液中MMP 9蛋白 ;RT PCR法测定MMP 9mRNA的表达。结果　地塞米松和吲哚... 目的　研究地塞米松和吲哚美辛对U937细胞中基质金属蛋白酶 9(MMP 9)活性的影响及抗炎作用机理。方法　明胶酶谱法测定MMP 9的活性 ;Westernblot法测定细胞培养上清液中MMP 9蛋白 ;RT PCR法测定MMP 9mRNA的表达。结果　地塞米松和吲哚美辛可显著抑制PMA诱导的U937细胞培养上清液中MMP 9的活性 ,且抑制强度随浓度的增大而增加 ;地塞米松和吲哚美辛可显著抑制PMA诱导的的U937细胞MMP 9蛋白分泌及mRNA表达 ,且变化趋势与活性变化一致。结论　对MMP 9活性的抑制作用可能是地塞米松和吲哚美辛抗炎作用的机理之一。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶-9 地塞米松 吲哚美辛 抗炎作用 明胶酶谱法
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基质金属蛋白酶-2、9在根尖周炎中的表达 被引量：10
15
作者 李汉玲 胡晓春 隋晓光 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期414-416,共3页
目的:探讨基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、9)在根尖周炎发病机制中的作用。方法:采用免疫组化和明胶酶谱法,检测18例根尖肉芽肿、15例根尖囊肿及10例正常根尖组织基质金属蛋白酶-2、9的蛋白表达及酶活性。结果:MMP-2、9在炎症根尖周组织中... 目的:探讨基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、9)在根尖周炎发病机制中的作用。方法:采用免疫组化和明胶酶谱法,检测18例根尖肉芽肿、15例根尖囊肿及10例正常根尖组织基质金属蛋白酶-2、9的蛋白表达及酶活性。结果:MMP-2、9在炎症根尖周组织中均有阳性表达,定位于浆细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和中性粒细胞。明胶酶谱分析,炎症组MMP-2酶原及活性蛋白表达均高于正常组(P<0.01)。炎症组MMP-9酶原及活性的蛋白表达强阳性。根尖肉芽肿组与根尖囊肿组MMP-2、9的蛋白表达及活性比较,差异无统计学意义。结论:MMP-2、9可能参与根尖周炎的发病过程,并在骨破坏中发挥作用。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶 根尖周炎 免疫组化 明胶酶谱
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CD147抗体对破骨细胞中基质金属蛋白酶活性影响的体外研究 被引量：3
16
作者 余世明 初同伟 +3 位作者 廖通权 胡旭 刘栓得 周跃 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期205-209,216,共6页
目的:建立人破骨细胞(Osteoclast,OCs)体外诱导分化模型,研究CD147单克隆抗体对OCs分化过程中基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases 9,MMP-9)和基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases 2,MMP-2)表达及活性的影响。方法:通... 目的:建立人破骨细胞(Osteoclast,OCs)体外诱导分化模型,研究CD147单克隆抗体对OCs分化过程中基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases 9,MMP-9)和基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases 2,MMP-2)表达及活性的影响。方法:通过采集健康成年志愿者外周血所分离的单个核细胞贴壁培养,应用NF-κB配体激活因子(Receptor or Activator ofNF-KB Ligand,RANKL)与巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导单个核细胞向OCs分化。本实验分为抗体组(RANKL+M-CSF+CD147单克隆抗体)与对照组(RANKL+M-CSF)。抗酒石酸酸性磷酸酶染色(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)与骨吸收实验检测鉴定OCs分化及活性情况,Real-Time PCR技术检测CD147、MMP-9和MMP-2 mRNA在破骨前体细胞(Osteoclast precursor cells,OPCs)中表达情况,明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMP-9、MMP-2酶蛋白的活性变化情况。结果:①对照组经TRAP染色和骨吸收实验检测到破骨样细胞形成并具有骨吸收功能,而抗体组OCs分化及活性均受到抑制;②在24、48小时时相点上抗体组CD147、MMP-2及MMP-9 mRNA的相对表达量均低于相应的对照组(P<0.05),且MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量与CD147 mRNA的表达量呈正相关。③明胶酶谱检测细胞培养上清,可见在24、48小时两时相点上抗体组OCs细胞中MMP-2、MMP-9酶原及活性酶的酶解量均较相应对照组明显降低(P<0.05)。结论:CD147单克隆抗体可以抑制OCs分化成熟过程中MMP-9及MMP-2的表达与活性;CD147对MMP-2、MMP-9活性的调节,可能是其对OCs活化调节的机制之一。 展开更多
关键词 破骨细胞 CD147 基质金属蛋白酶 明胶酶谱
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类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞中膜联蛋白A2磷酸化修饰增强基质金属蛋白酶9的活性 被引量：3
17
作者 赵薇 穆楠 +2 位作者 舒震 张昭 张伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1363-1366,1371,共5页
目的研究膜联蛋白A2(ANXA2)磷酸化修饰对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RAFLS)基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9水平及活性的影响。方法原代培养RAFLS,构建包装ANXA2干涉慢病毒,制备ANXA2显著下调的FLS(si ANXA2/FLS)及同型对照作... 目的研究膜联蛋白A2(ANXA2)磷酸化修饰对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RAFLS)基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9水平及活性的影响。方法原代培养RAFLS,构建包装ANXA2干涉慢病毒,制备ANXA2显著下调的FLS(si ANXA2/FLS)及同型对照作为细胞模型,采用2型胶原蛋白刺激法间接磷酸化RAFLS中的ANXA2。实时定量PCR(qRT-PCR)分析ANXA2磷酸化对RAFLS细胞中MMP-2和MMP-9表达的影响,明胶酶谱实验观察ANXA2活化对RAFLS中MMP-2和MMP-9活性的影响。结果 qRT-PCR结果提示ANXA2磷酸化修饰对RAFLS中MMP-2和MMP-9的水平无显著影响,明胶酶谱实验显示ANXA2磷酸化修饰能够增强MMP-9的活性。结论通过胶原蛋白刺激法间接促进RAFLS中ANXA2的磷酸化修饰,显著增强MMP-9的活性。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 膜联蛋白A2 基质金属蛋白酶9 明胶酶谱
原文传递
膀胱癌分子标志物基质金属蛋白酶1的可溶性表达和尿液中的活性分析 被引量：2
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作者 晋学飞 孔祥波 +2 位作者 张丹 刘婷婷 王凯臣 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第4期582-587,共6页
通过分离人胚胎肾细胞(HEK293)中基质金属蛋白酶1(MMP1)基因序列,利用基因工程技术在大肠杆菌中表达并纯化了包涵体复性的MMP1;采用融合表达硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx A)的方法获得了可溶性的MMP1-Trx A复合蛋白,在Trx A蛋白和MMP1活... 通过分离人胚胎肾细胞(HEK293)中基质金属蛋白酶1(MMP1)基因序列,利用基因工程技术在大肠杆菌中表达并纯化了包涵体复性的MMP1;采用融合表达硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx A)的方法获得了可溶性的MMP1-Trx A复合蛋白,在Trx A蛋白和MMP1活性中心之间引入了一个肠激酶切割位点,通过酶切作用获得可溶性MMP1。明胶酶谱分析法对体外表达的MMP1和体内(尿液中)MMP1进行了分析比较。结果表明,Trx A蛋白能够显著提高MMP1的可溶性,且可溶性MMP1的明胶降解活性是复性的MMP1降解活性的1.54倍,与尿液中的MMP1的明胶酶降解活性相当。因此,明胶酶谱法是一种有效的、高灵敏的MMP1检测方法,所表达的可溶性MMP1为小分子探针筛选提供了更可靠的分子靶点。 展开更多
关键词 膀胱癌生物标志物 基质金属蛋白酶 分子探针筛选 明胶酶谱
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难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层金属基质蛋白酶-9的表达 被引量：2
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作者 李松 余思逊 +6 位作者 贺教江 张春青 树海峰 阴金波 刘仕勇 安宁 杨辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期492-495,共4页
目的研究成人难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层中金属基质蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨其在难治性癫痫发病中的作用机制。方法收集新桥医院神经外科手术切除的成人难治性颞叶癫痫颞叶皮层标本24例,与15例正常对照皮层比较,运用RT-PCR、明胶酶... 目的研究成人难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层中金属基质蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨其在难治性癫痫发病中的作用机制。方法收集新桥医院神经外科手术切除的成人难治性颞叶癫痫颞叶皮层标本24例,与15例正常对照皮层比较,运用RT-PCR、明胶酶谱法和免疫组织化学方法检测MMP-9在致痫灶中的表达分布。结果在难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层中,MMP-9在mRNA、酶活性较对照组明显升高(P<0.05)。免疫组化结果显示,在正常皮层中MMP-9弱至中等强度表达于神经元上,偶见胶质细胞表达,而在致痫灶中强表达于锥体神经元和星形胶质细胞上,免疫染色强度明显高于正常皮层[染色强度值:(2.13±0.56)vs(1.52±0.69);相对光密度值:(55.60±7.20)vs(37.10±8.70);P<0.05]。结论难治性颞叶癫痫患者颞叶致痫皮层中MMP-9表达增高可能与癫痫发病密切相关,有可能成为新的难治性癫痫的药物靶点。 展开更多
关键词 难治性颞叶癫痫 金属基质蛋白酶9 RT-PCR 明胶酶谱法 免疫组织化学
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高温蛋白酶生产菌BY25不同培养基下产酶差异研究 被引量：3
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作者 朱泓 王一明 +1 位作者 林先贵 高云才 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期899-904,共6页
枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤中的产酶细菌,在环境领域也具有广阔的应用前景。本文以一株产高温蛋白酶枯草芽孢杆菌BY25为研究对象,比较添加不同有机氮源的产酶培养基进行发酵时,各处理中枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶的组成和产量的差异... 枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤中的产酶细菌,在环境领域也具有广阔的应用前景。本文以一株产高温蛋白酶枯草芽孢杆菌BY25为研究对象,比较添加不同有机氮源的产酶培养基进行发酵时,各处理中枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶的组成和产量的差异;并对不同培养基发酵液的粗酶液组分进行酶学性质分析和明胶酶谱检测。结果表明,枯草芽孢杆菌BY25在不同培养基条件下会出现差异性产酶,产酶培养基中添加麸皮有利于中性金属蛋白酶(Npr)的产生,而添加豆饼粉则有利于枯草菌素(Apr)的产生。 展开更多
关键词 明胶酶谱 产酶培养基 酶学性质 丝氨酸蛋白酶
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