目的:提高重组抗菌蛋白BPI23在E.coli D H 5α中的表达水平及提纯后蛋白的复性率。方法:通过降低目的基因5'端序列中G C含量和构建双拷贝重组表达载体pBV 220-(synBPI6002),减少低频密码子数目和增加目的基因拷贝数,并采用不同复性...目的:提高重组抗菌蛋白BPI23在E.coli D H 5α中的表达水平及提纯后蛋白的复性率。方法:通过降低目的基因5'端序列中G C含量和构建双拷贝重组表达载体pBV 220-(synBPI6002),减少低频密码子数目和增加目的基因拷贝数,并采用不同复性方法对提纯后的蛋白进行复性。结果:降低目的基因5'端序列中GC含量后,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的14.3%;单双拷贝重组表达载体转化E.coli DH 5α后,目的蛋白的表达水平无明显差异;在复性液中加入PEG 4000后,目的蛋白产生聚集沉淀较少。结论:减少目的基因中GC含量可显著提高BPI23的表达水平,增加表达载体中目的基因的拷贝数对其表达水平无影响,在蛋白复性液中加入PEG 4000可明显抑制蛋白聚集沉淀。展开更多
文摘目的:提高重组抗菌蛋白BPI23在E.coli D H 5α中的表达水平及提纯后蛋白的复性率。方法:通过降低目的基因5'端序列中G C含量和构建双拷贝重组表达载体pBV 220-(synBPI6002),减少低频密码子数目和增加目的基因拷贝数,并采用不同复性方法对提纯后的蛋白进行复性。结果:降低目的基因5'端序列中GC含量后,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的14.3%;单双拷贝重组表达载体转化E.coli DH 5α后,目的蛋白的表达水平无明显差异;在复性液中加入PEG 4000后,目的蛋白产生聚集沉淀较少。结论:减少目的基因中GC含量可显著提高BPI23的表达水平,增加表达载体中目的基因的拷贝数对其表达水平无影响,在蛋白复性液中加入PEG 4000可明显抑制蛋白聚集沉淀。
