小反刍兽疫病毒非结构蛋白C单克隆抗体的制备与鉴定

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作者 李菊 毕冬琳 +5 位作者 杨晓莉 杨东亮 张潇文 刘方程 李琼毅 柏家林 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第5期1047-1054,共8页

为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与... 为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)和生物素羧基蛋白(biotin carboxyl carrier protein, Biotin)交联,制备获得免疫原和筛选抗原。用免疫原肌肉注射5只8~12周龄、体重约20 g的无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级BALB/c雌性小鼠,第1次免疫后分别间隔7 d进行第2次免疫和第3次免疫,三免后21 d进行冲击免疫,冲击免疫后第3天采集血液分离血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测得1只免疫小鼠血清抗体效价为1∶312 500,2只为1∶62 500。取3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经聚乙二醇(PEG)融合制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出26株阳性淋巴杂交瘤细胞,进一步经克隆化培养筛选出46株单克隆细胞株。通过Western blot(WB)筛选获得2株能稳定分泌特异性抗PPRV C蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WB、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定显示,制备的单克隆抗体具有较好的灵敏性和病毒反应性。研究结果为进一步阐明C蛋白在PPRV生命周期中的作用奠定了基础,也为小反刍兽疫(PPR)诊断提供了有效的诊断试剂。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 非结构蛋白C 杂交瘤细胞技术 单克隆抗体

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中美单克隆抗体技术专利情况对比分析

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作者 崔胜男 田玲 《中国医药生物技术》 CSCD 2012年第5期389-395,共7页

单克隆抗体（McAb）是由单一B淋巴细胞株分泌的只能识别一种表位的高纯度抗体。1975年Kohler和Milstein首次建立了B淋巴细胞杂交瘤技术，但由于鼠源单抗会使机体产生人抗鼠抗体（HAMA）反应，阻碍了其在临床上的应用。20世纪80年代，DN... 单克隆抗体（McAb）是由单一B淋巴细胞株分泌的只能识别一种表位的高纯度抗体。1975年Kohler和Milstein首次建立了B淋巴细胞杂交瘤技术，但由于鼠源单抗会使机体产生人抗鼠抗体（HAMA）反应，阻碍了其在临床上的应用。20世纪80年代，DNA重组技术应用于抗体改造，先后出现嵌合抗体和人源化抗体，虽在一定程度上解决了鼠源单抗的问题，但仍可引起不同程度的HAMA反应。随着PCR技术、抗体库技术、转基因技术的发展，1989年第一个全人源单抗Adalimumab研制成功，实现全人源抗体的制备，同时抗体衍生物出现，这些成果使单抗对人类的作用充分发挥。 展开更多

关键词 单克隆抗体技术 B淋巴细胞杂交瘤技术 ADALIMUMAB DNA重组技术 专利 B淋巴细胞株 鼠源单抗 人抗鼠抗体

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应用杂交瘤技术产生抗甲型肝炎病毒单克隆抗体

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作者 孟强骅 王亚南 +7 位作者 高小梅 曾向实 贾克明 吕炳俊 于维芬 康素芳 马德兰 董翰廷 《中华传染病杂志》 CAS 1986年第1期5-8,前插1,共5页

1975年Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术[1],杂交瘤能在体外连续增殖并分泌大量均一的、高特异性的单克隆抗体,为免疫学技术开创了新纪元,这一技术得到迅速发展和广泛应用.国内外对抗乙型肝炎(乙肝)病毒各种抗原的单克隆抗体... 1975年Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术[1],杂交瘤能在体外连续增殖并分泌大量均一的、高特异性的单克隆抗体,为免疫学技术开创了新纪元,这一技术得到迅速发展和广泛应用.国内外对抗乙型肝炎(乙肝)病毒各种抗原的单克隆抗体研究较多[2～6],最近国外也建立了抗甲型肝炎病毒(HAV)单克隆细胞株[9,10],但国内尚无报告. 展开更多

关键词 应用 淋巴细胞杂交瘤技术 甲型肝炎病毒 单克隆抗体 抗乙型肝炎 国内 高特异性 学技术 细胞株 增殖 乙肝 免疫 抗原 分泌 报告

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IL-6免疫放射检测方法的建立及其应用 被引量：4

4

作者 邱玉华 苏成海 +1 位作者 谢炜 张学光 《现代检验医学杂志》 CAS 2003年第2期14-16,共3页

采用B淋巴细胞杂交瘤技术,建立分泌抗人IL-6单抗的杂交瘤细胞株;诱生腹水法制备单抗;Protein G免疫亲合层析法纯化单抗;改良的氯胺T法进行单抗的^(125)Ⅰ标记;在对单抗识别抗原位点鉴定的基础上,建立了稳定、可靠的IL-6免疫放射检测方法... 采用B淋巴细胞杂交瘤技术,建立分泌抗人IL-6单抗的杂交瘤细胞株;诱生腹水法制备单抗;Protein G免疫亲合层析法纯化单抗;改良的氯胺T法进行单抗的^(125)Ⅰ标记;在对单抗识别抗原位点鉴定的基础上,建立了稳定、可靠的IL-6免疫放射检测方法(Immunoradio assay,IRA)。其灵敏度为5 pg/ml,检测范围为5～200 pg/ml。采用该法分析的多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者血清中IL-6的含量平均为356 pg/ml,明显高于正常对照组的16.9 pg/ml(P<0.01)。 展开更多

关键词 IL-6 免疫放射检测 应用 B淋巴细胞杂交瘤技术

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血红蛋白单克隆抗体的制备及其特性研究 被引量：1

5

作者 钱江龙 郭秋萍 +2 位作者 张晶 玉慧贞 严和平 《单克隆抗体通讯》 CAS CSCD 1989年第4期37-38,共2页

本文报告应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了抗人血红蛋白单克隆抗体(Hb-McAb)。经实验证明，Hb—McAb局有特异性强，效价高、使用简便，安全等优点，可作为大肠癌早期诊断的初筛指标。

关键词 单克隆抗体 特性研究 制备 淋巴细胞杂交瘤技术 大肠癌早期诊断 人血红蛋白 McAb 特异性

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抗ICAM-5单克隆抗体的制备及实验研究 被引量：1

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作者 宋凤丽 张玉林 +4 位作者 丁渭 乔录新 徐树莹 陈德喜 袁霖 《北京医学》 CAS 2013年第3期207-209,158,共3页

目的制备抗细胞间黏附分子5(intercellular adhesion molecule-5,ICAM-5)单克隆抗体(McAb)并进行实验研究。方法采用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性单克隆抗体。采用ELISA法测定腹水ICAM-5McAb的效价,通过免疫荧光技术及Western blott... 目的制备抗细胞间黏附分子5(intercellular adhesion molecule-5,ICAM-5)单克隆抗体(McAb)并进行实验研究。方法采用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性单克隆抗体。采用ELISA法测定腹水ICAM-5McAb的效价,通过免疫荧光技术及Western blotting检测McAb的抗体特异性。结果获得3株分泌ICAM-5McAb的杂交瘤细胞株。ELISA检测效价可达1∶(4×105),免疫荧光与Western blotting显示3株McAb与ICAM-5分子具有良好的结合活性。结论成功制备了抗ICAM-5的McAb,为其进一步研究和应用奠定了基础。 展开更多

关键词 细胞间黏附分子5 淋巴细胞杂交瘤技术 单克隆抗体

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抗人ILT-4单克隆抗体制备及初步鉴定

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作者 王春艳 李德敏 +3 位作者 宋朝君 李娜 王东琳 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期238-239,共2页

目的:制备抗人ILT4分子单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备小鼠源性抗人ILT4 mAb。用间接ELISA法测定腹水mAb的效价。以Western blot测定mAb的抗原结合活性。通过流式细胞术(FCM)对mAb结合转染细胞表面... 目的:制备抗人ILT4分子单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备小鼠源性抗人ILT4 mAb。用间接ELISA法测定腹水mAb的效价。以Western blot测定mAb的抗原结合活性。通过流式细胞术(FCM)对mAb结合转染细胞表面及天然细胞表面ILT4分子的活性进行鉴定。结果:获得7株分泌抗ILT4 mAb的杂交瘤细胞株。ELISA法测定腹水mAb的效价均达1×10-6,7株mAb均为IgG1(κ)。Western blot结果显示,3株mAb与人ILT4有良好的结合活性。用转染细胞及U937细胞做FCM分析发现另外4株mAb可结合真核表达的及天然的ILT4分子。结论:获得7株能特异性识别ILT4分子的mAb,为研究ILT4分子的组织分布和功能研究提供了可靠的实验手段。 展开更多

关键词 ILT4 淋巴细胞杂交瘤技术 单克隆抗体

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抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的研制

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作者 段薇 张健 +2 位作者 郑剑玲 苏丹 王美慧 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期102-102,共1页

关键词 淋巴细胞杂交瘤技术 呼吸道合胞病毒 单克隆抗体 生物学活性

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鼻气管鸟杆菌单克隆抗体的防治效果 被引量：2

9

作者 周花艳 王安妮 +4 位作者 黄亚奇 周淑婷 姜勇 魏若瑶 徐建生 《中国家禽》 北大核心 2019年第11期58-61,共4页

利用单克隆制备技术制备了两株稳定分泌针对鼻气管鸟杆菌外膜蛋白OMA87的单克隆抗体的杂交瘤细胞系,并对其进行株特异性鉴定、效价鉴定、Western-blot、中和试验及防治效果鉴定,选择其中2株高沉淀效价及中和效价的单克隆抗体(2C4和5G9)... 利用单克隆制备技术制备了两株稳定分泌针对鼻气管鸟杆菌外膜蛋白OMA87的单克隆抗体的杂交瘤细胞系,并对其进行株特异性鉴定、效价鉴定、Western-blot、中和试验及防治效果鉴定,选择其中2株高沉淀效价及中和效价的单克隆抗体(2C4和5G9)进行了鼻气管鸟杆菌引起的呼吸道疾病防治试验,抗体治愈率分别达到95%和80%,具有良好的防治效果,在临床应用上具有较高的实用价值。 展开更多

关键词 鼻气管鸟杆菌 淋巴细胞杂交瘤技术 单克隆抗体 存活率

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抗大鼠Nogo分子单克隆抗体的制备与初步鉴定

10

作者 宋朝君 程希平 +5 位作者 刘雪松 朱勇 张萍 许晓光 刘莹 金伯泉 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第3期254-254,共1页

关键词 大鼠 Nogo分子 单克隆抗体 鉴定 免疫荧光组织化学 淋巴细胞杂交瘤技术

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评单克隆抗体

11

作者 谢蜀生 《医学与哲学（A）》 1983年第1期11-13,55,共4页

淋巴细胞杂交瘤技术,是近年来生物科学领域内的一项具有突破性的新技术。它是细胞水平的遗传工程,技术上的要求比基因工程相对少得多,而其产生的单克隆抗体,在生物学、医学领域内具有广泛的使用潜力,因此对单克隆抗体的研究正成为生物... 淋巴细胞杂交瘤技术,是近年来生物科学领域内的一项具有突破性的新技术。它是细胞水平的遗传工程,技术上的要求比基因工程相对少得多,而其产生的单克隆抗体,在生物学、医学领域内具有广泛的使用潜力,因此对单克隆抗体的研究正成为生物学与医学领域中一个非常热门的课题。本文拟对淋巴细胞杂交瘤技术的建立、单克隆抗体的应用及其存在的问题作一简单的评论,以求救于国内同道。 展开更多

关键词 单克隆抗体 淋巴细胞杂交瘤技术 免疫学家

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抗iLRP单克隆抗体的制备和鉴定

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作者 刘白南 鄢玲利 +1 位作者 孔倩倩 张冬 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1444-1449,共6页

为了研究抗iLRP (Immature laminin receptor protein)单克隆抗体在免疫治疗中的应用,本研究采用重组iLRP对6~8周龄BALB/c雌性小鼠进行免疫,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0进行细胞融合,在HAT (Hypoxanthine aminopterin thymid... 为了研究抗iLRP (Immature laminin receptor protein)单克隆抗体在免疫治疗中的应用,本研究采用重组iLRP对6~8周龄BALB/c雌性小鼠进行免疫,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0进行细胞融合,在HAT (Hypoxanthine aminopterin thymidine)半固体培养基上挑选分离明显的细胞克隆于96孔板培养后,取上清液通过ELISA法进行克隆筛选,初次筛选得到23株阳性克隆,复筛后得到13株稳定分泌抗体的细胞株。抗体类别鉴定显示,其中9株为IgM,3株为Ig G1,1株为IgG2a,轻链类型都为κ型。其中1株IgG1和IgG2a用于制备小鼠腹水,经Protein-G柱纯化,SDS-PAGE检测抗体纯度,Western blotting验证抗体特异性。结果表明,抗体纯度均大于90%,并与i LRP有明显的特异性结合。此结果为后续的深入研究提供了一套完整有效的抗iLRP单克隆抗体生产和鉴定的程序,对以iLRP为治疗靶点的单克隆药物研究以及最近兴起的CAR-T (Chimeric antigen receptor modified T cell)免疫治疗具有积极的意义。 展开更多

关键词 杂交瘤细胞技术 单克隆抗体 抗体亚类 肿瘤免疫治疗

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抗生素研发新方向:抗菌抗体药物 被引量：3

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作者 王志明 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第19期2199-2204,共6页

致病菌对抗生素持续增长的耐药性与抗生素广谱杀菌对人类健康带来的长久负面影响,使开发不同治疗机制的抗菌药物成为人类维护健康的一个紧迫话题,而抗体类药物以其靶向性与高效性进入了人们的视野。目前全球抗菌抗体药物既有已经上市的... 致病菌对抗生素持续增长的耐药性与抗生素广谱杀菌对人类健康带来的长久负面影响,使开发不同治疗机制的抗菌药物成为人类维护健康的一个紧迫话题,而抗体类药物以其靶向性与高效性进入了人们的视野。目前全球抗菌抗体药物既有已经上市的治疗吸入性炭疽病的瑞西巴库,也有众多的以治疗金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌感染为代表的处于临床阶段或临床前阶段的抗体药物。在研抗菌抗体药物通常的作用靶点是致病菌侵袭力物质基础与相关毒素,抗体工程技术的发展,如基因工程小鼠、抗体库、人杂交瘤细胞及单个B细胞抗体制备技术等在抗菌抗体药物的研发中也发挥着重要的促进作用。抗菌抗体药物或将成为精准治疗细菌感染的靶向药物,为人类健康事业贡献力量。 展开更多

关键词 抗生素耐药性 广谱抗生素 抗体药物 靶向治疗 基因工程小鼠 人B细胞杂交瘤技术

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全人单克隆抗核抗体的制备和鉴定

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作者 吴静 李洋 +9 位作者 韩秋媛 于鑫 考文萍 宋武琦 翟爱霞 李玉军 李爱梅 张庆猛 潘超 张凤民 《国际免疫学杂志》 CAS 2017年第1期11-15,共5页

目的本研究旨在从系统性红斑狼疮（systemmiclupuserythematosus，SLE）患者外周血淋巴细胞中获得自身抗体，并从中鉴定筛选出抗核抗体。方法利用人B细胞杂交瘤技术制备SLE患者来源的全人单克隆自身抗体，采用酶联免疫吸附实验（enzyme-... 目的本研究旨在从系统性红斑狼疮（systemmiclupuserythematosus，SLE）患者外周血淋巴细胞中获得自身抗体，并从中鉴定筛选出抗核抗体。方法利用人B细胞杂交瘤技术制备SLE患者来源的全人单克隆自身抗体，采用酶联免疫吸附实验（enzyme-linkedimmunosorbenkassay，ELISA）方法测定阳性杂交瘤细胞上清抗体浓度，并以HEp-2细胞为底物，采用间接免疫荧光法鉴定筛选出抗核抗体。结果共获得48株稳定分泌IgG型全人单克隆自身抗体的杂交瘤细胞株，其中12种细胞上清抗体浓度大于1500ng／mL，占25％，通过免疫荧光鉴定从中筛选出3种抗核抗体，荧光核型分别为周边型、斑点型和核仁型。结论全人单克隆自身抗体的制备及抗核抗体的筛选鉴定，为开发新型单克隆抗体药物以及研究SLE的致病机制奠定了良好的实验基础。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 自身抗体 抗核抗体 人B细胞杂交瘤技术

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小鼠抗人CD160分子单克隆抗体制备及其生物学功能初步分析 被引量：1

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作者 侯爵 邵联波 +1 位作者 张宁 顾宗江 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期155-159,159,共5页

CD160分子是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白,是免疫超家族新成员,与其特异性配体HVEM分子结合所提供的共刺激信号在T细胞的增殖,活化,细胞因子产生和B细胞增殖,活化,分泌抗体产生等方面发挥着重要的调节作用。目前,市面上效果较好的IgG亚... CD160分子是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白,是免疫超家族新成员,与其特异性配体HVEM分子结合所提供的共刺激信号在T细胞的增殖,活化,细胞因子产生和B细胞增殖,活化,分泌抗体产生等方面发挥着重要的调节作用。目前,市面上效果较好的IgG亚型的CD160抗体并不多,通过常规的基因克隆技术,基因重组技术,小鼠免疫技术以及经典的B淋巴细胞杂交瘤技术,获得能持续稳定分泌特异性鼠抗人CD160分子的IgG亚型单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用westen blot和竞争结合抑制实验,对获得的杂交瘤细胞进行生物特性方面的鉴定;采用间接免疫荧光法和流式细胞术分析CD160在健康人PBMC中T细胞表面的表达;T细胞增殖实验表明,此株单抗对于T细胞的体外增殖具有抑制作用。为进一步研究CD160分子的生物学效应提供了新的工具。 展开更多

关键词 单克隆抗体 抗体制备 生物学功能 分子 小鼠 B淋巴细胞杂交瘤技术 杂交瘤细胞株 T细胞增殖

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MICA-α3和NKG2D蛋白的表达及其抗体结合功能检测

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作者 陆瑾 梁红远 +1 位作者 吴丽娜 瞿爱东 《国际生物制品学杂志》 CAS 2022年第1期47-51,共5页

目的重组表达人MHCⅠ类链相关蛋白Aα3结构域(MHCⅠchain related protein Aα3 domain,MICA-α3)蛋白及自然杀伤细胞受体2D(natural killer group 2D,NKG2D)蛋白,制备抗MICA-α3单克隆抗体,并检测其结合功能。方法构建MICA-α3及NKG2D... 目的重组表达人MHCⅠ类链相关蛋白Aα3结构域(MHCⅠchain related protein Aα3 domain,MICA-α3)蛋白及自然杀伤细胞受体2D(natural killer group 2D,NKG2D)蛋白,制备抗MICA-α3单克隆抗体,并检测其结合功能。方法构建MICA-α3及NKG2D蛋白表达载体,经转化大肠埃希菌BL21菌株表达重组蛋白,通过分子筛、组氨酸标签蛋白层析纯化。用重组MICA-α3蛋白免疫小鼠,采用杂交瘤技术筛选单克隆抗体,用细胞ELISA检测单克隆抗体功能。结果重组蛋白在大肠埃希菌BL21菌株中以包涵体形式表达。筛选得到5株能和表达MICA-α3的MDA-MB-453细胞结合的单克隆抗体,且不影响MDA-MB-453细胞与NKG2D结合。结论制备的抗MICA-α3单克隆抗体能与肿瘤细胞结合,同时不影响肿瘤细胞与NKG2D结合。 展开更多

关键词 受体 自然杀伤细胞 抗体 单克隆 主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关蛋白A 细胞杂交瘤技术

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