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鳜弹状病毒糖蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
1
作者 张彦冰 叶加鑫 +2 位作者 孙威 刘晓丹 林强 《水产科学》 CAS CSCD 2024年第2期281-288,共8页
近年来,鳜弹状病毒引起的病害频发,该病毒传播快,致病性强,是引起鳜病害的主要病原之一。鳜弹状病毒基因组编码5个结构蛋白,其中糖蛋白G是病毒表面的主要抗原,为实现该抗原蛋白的大量表达,利用分子克隆技术将鳜弹状病毒糖蛋白G片段插入... 近年来,鳜弹状病毒引起的病害频发,该病毒传播快,致病性强,是引起鳜病害的主要病原之一。鳜弹状病毒基因组编码5个结构蛋白,其中糖蛋白G是病毒表面的主要抗原,为实现该抗原蛋白的大量表达,利用分子克隆技术将鳜弹状病毒糖蛋白G片段插入杆状病毒穿梭载体pFastBac1中转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后,筛选阳性克隆获得重组转移载体pFastBac-G,再将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑与抗性筛选后获取重组杆粒rBacmid-G,随后利用脂质体转染法将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒。将获取到的P3代重组病毒感染Sf9昆虫细胞进行重组蛋白的SDS-PAGE检测,成功表达后利用镍离子亲和层析柱纯化目的蛋白,随后对重组蛋白进行Western blot鉴定,结果显示在大于50 ku处有一条特异性条带,而对照组无条带,表明制备的抗原能与抗体特异性结合。结果表明,鳜弹状病毒糖蛋白G在杆状病毒表达系统成功表达。本试验结果可为鳜弹状病毒糖蛋白G疫苗的研发和大规模生产提供技术支撑。 展开更多
关键词 鳜弹状病毒 糖蛋白 杆状病毒表达系统 重组杆状病毒
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密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析
2
作者 于吉锋 谢晶 +8 位作者 黄勇 肖璐 林毅 曹冶 叶勇刚 魏勇 吴学婧 李江凌 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 2024年第2期668-677,共10页
[目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据... [目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据昆虫细胞的密码子偏好性优化合成RHDV2 VP60全基因,将双VP60基因插入真核载体pFastBacTMDual,转化携带Bacmid质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,构建含双VP60基因的重组杆粒Bacmid-VP60-VP60,转染Sf9昆虫细胞,通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)及透射电镜对重组杆状病毒Bacmid-VP60-VP60进行表达验证;将优化策略制备的重组蛋白抗原与氢氧化铝佐剂按照9∶1比例制备VLP灭活疫苗,通过安全性检验、最小免疫剂量、免疫持续期等评估优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗的保护效果。[结果]试验成功构建重组杆粒Bacmid-VP60-VP60。Western blotting鉴定结果显示,重组杆状病毒转染Sf9细胞表达出大小约60 ku的RHDV2 VP60蛋白。IFA鉴定结果显示,感染重组杆状病毒的Sf9细胞产生了大量的黄绿色荧光,表明重组杆状病毒在Sf9细胞中大量表达VP60蛋白。透射电镜观察结果显示,VP60蛋白折叠成VLP,大小为40 nm左右,呈现球形结构,表面光滑。优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫原性,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫持续期可达210 d以上。[结论]试验构建了含有密码子优化的双VP60基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中成功表达RHDV2 VP60蛋白,该蛋白制备的VLP疫苗对家兔具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 兔出血症病毒2型(RHDV2) 病毒样颗粒(VLP) 密码子偏好性 重组杆状病毒 免疫原性
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非洲马瘟病毒VP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其抗体制备
3
作者 范亚亚 王轩莹 +6 位作者 户鑫兵 田占成 关贵全 罗建勋 殷宏 郑玉姝 独军政 《中国兽医科学》 CAS CSCD 2024年第3期357-363,共7页
为了确定非洲马瘟病毒(AHSV)VP5蛋白的免疫学特性,通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列,经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AH... 为了确定非洲马瘟病毒(AHSV)VP5蛋白的免疫学特性,通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列,经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AHSVS6,转染Sf9昆虫细胞;构建了重组质粒pFastBac-AHSVS6,拯救获得含有AHSV S6基因的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明,在Sf9昆虫细胞中成功表达分子质量大小为60 ku的AHSV VP5重组蛋白。采用组氨酸标签纯化树脂对重组VP5蛋白进行纯化,将其与弗氏佐剂乳化后3次免疫新西兰大白兔收集血清,获得了针对AHSV VP5蛋白的多克隆抗体,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验验证了该抗体的特异性。本试验利用杆状病毒表达系统成功表达了AHSV全长VP5重组蛋白,成功制备出特异的VP5蛋白多克隆抗体,这为进一步研究AHSV VP5蛋白的功能及研制亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 VP5蛋白 杆状病毒表达系统 多克隆抗体 免疫荧光
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弓形虫MIC1蛋白在杆状病毒系统中的表达及活性分析
4
作者 李响 张小涵 +5 位作者 李美琪 陈冉 冯颖 李林 桑晓宇 杨娜 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 2024年第1期210-218,共9页
为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性,通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中,将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,转染Sf9细胞后连续培养... 为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性,通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中,将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,转染Sf9细胞后连续培养3代获得重组杆状病毒株。结果显示,Sf9细胞在感染后的第3天出现典型的细胞病变;间接免疫荧光和Western blot试验结果表明MIC1重组蛋白质在感染的Sf9细胞中成功可溶性表达;纯化的MIC1重组蛋白质不仅具有结合唾液酸乳糖的能力,同时能够刺激Balb/c小鼠产生较高水平的特异性抗体(>1∶25600)。以上结果表明,通过杆状病毒表达系统可获得具有生物学活性的弓形虫MIC1重组蛋白质。 展开更多
关键词 弓形虫 MIC1蛋白 杆状病毒系统 活性分析
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杆状病毒表达系统表达BCoV纤突蛋白及其对小鼠的免疫原性
5
作者 喻琦胜 朱庆 +6 位作者 周群 宋鑫 张家祺 陈涛云 徐林 张朝辉 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 2024年第2期640-648,共9页
旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH1... 旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒rpFastBac-S,利用基因组PCR、免疫印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验对其进行鉴定,测定杆状病毒滴度。优化和筛选感染剂量对蛋白表达的影响,超速离心纯化蛋白,免疫小鼠和评估其免疫效果。结果显示:优化后全长4108 bp的BCoV S基因CAI(密码子适应指数)从0.39调整为0.87,平均GC含量从35.8%调整为50.6%。经双酶切、PCR验证,重组质粒与重组杆粒均构建成功。用5μg重组杆粒Bacmid-S转染Sf9细胞并传代至第四代后细胞病变趋于稳定,感染杆状病毒约20 h后产生典型病变,收获重组杆状病毒进行鉴定。PCR电泳结果显示重组杆粒携带S目的蛋白基因;间接免疫荧光试验显示,试验组观察到特异性绿色荧光;Western blot结果显示重组杆状病毒rpFastBac-S所表达的蛋白为S目的蛋白,目的条带位于250 ku左右,感染剂量MOI=0.5时蛋白表达量最高。将50μg蛋白、20μg CpG免疫增强剂与等体积MF59佐剂充分混合乳化后,肌肉注射免疫小鼠,间接ELISA试验结果显示,小鼠免疫蛋白后产生了IgG特异性抗体,且抗体水平高于佐剂对照组(P<0.001),最高抗体效价达1∶12800;微量中和试验结果显示,小鼠血清中和效价最高达1∶224,试验组中和效价平均值高于灭活病毒组,但统计学差异不显著(P>0.05)。本研究利用杆状病毒表达系统表达了牛冠状病毒S蛋白,并对S蛋白免疫保护效果做了进一步评价,为后续牛冠状病毒疫苗研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 S蛋白 杆状病毒表达系统 免疫原性
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昆虫杆状病毒多角体蛋白基因超高水平表达的分子机制研究进展
6
作者 陈官平 李跃东 +1 位作者 李佳乐 吴小锋 《蚕业科学》 CAS CSCD 2024年第1期73-84,共12页
昆虫杆状病毒的生活史中令人惊奇的现象之一是其极晚期基因多角体蛋白(polyhedrin,polh)基因的超高水平表达,表达产生的多角体蛋白将病毒粒子包埋到内部形成包涵体。本文根据已有的研究结果,从3个方面概括了polh基因超高水平表达的机制,... 昆虫杆状病毒的生活史中令人惊奇的现象之一是其极晚期基因多角体蛋白(polyhedrin,polh)基因的超高水平表达,表达产生的多角体蛋白将病毒粒子包埋到内部形成包涵体。本文根据已有的研究结果,从3个方面概括了polh基因超高水平表达的机制,即polh启动子的结构特征和转录调控、polh mRNA的结构和翻译调控以及影响polh基因表达的蛋白调控因子,期望有助于更好地理解polh超高水平表达调控的分子机制,为提高杆状病毒表达载体系统表达外源蛋白效率提供理论指导。 展开更多
关键词 杆状病毒 多角体蛋白 超高水平表达 分子机制
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表达鸡RSAD2蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定
7
作者 张婕 柴家前 苏帅 《中国家禽》 2024年第1期62-69,共8页
为研究鸡S-腺苷甲硫氨酸基区域蛋白2(RSAD2)生物学功能,试验构建原核表达重组质粒pGEX-RSAD2,采用SDS-PAGE、Western blot验证RSAD2融合蛋白的表达,将融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。扩增RSAD2基因克隆至pFsatBac dual真核表达载体,... 为研究鸡S-腺苷甲硫氨酸基区域蛋白2(RSAD2)生物学功能,试验构建原核表达重组质粒pGEX-RSAD2,采用SDS-PAGE、Western blot验证RSAD2融合蛋白的表达,将融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。扩增RSAD2基因克隆至pFsatBac dual真核表达载体,重组质粒经转座、蓝白斑筛选后,获得重组杆状病毒质粒pFastBac-RSAD2,重组杆粒转染至sf9昆虫细胞后收获重组杆状病毒rBac-RSAD2。用鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染孵育RSAD2蛋白的MDCC-MSB1细胞,通过荧光定量PCR检测病毒在细胞中的增殖情况。结果显示:成功构建原核表达质粒pGEX-RSAD2,诱导表达了69 ku的RSAD2融合蛋白,制备的多克隆抗体能够与表达RSAD2蛋白的DF-1细胞特异性结合;重组杆状病毒rBac-RSAD2能够引起sf9细胞病变,且感染后的sf9细胞与制备的RSAD2多克隆抗体能够特异性结合,rBac-RSAD2表达了43 ku的RSAD2蛋白;相较对照组,孵育蛋白后的MDCC-MSB1细胞中的病毒载量降低。研究表明,成功构建了表达鸡RSAD2蛋白的重组杆状病毒rBac-RSAD2,其表达的RSAD2蛋白能够抑制CIAV增殖。 展开更多
关键词 鸡 RSAD2 多克隆抗体 杆状病毒 真核表达
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水貂病毒性肠炎杆状病毒载体灭活疫苗与水貂犬瘟热活疫苗混合免疫效果评价
8
作者 吴洪超 霍宁宁 +6 位作者 丁航天 曹玉姣 陈亚磊 陈云豫 王璐璐 刘玉秀 田克恭 《畜牧与兽医》 CAS 2024年第3期106-112,共7页
为评价水貂病毒性肠炎杆状病毒载体灭活疫苗(简称MEV亚单位疫苗)与水貂犬瘟热活疫苗(简称CDV活疫苗)混合免疫的效果,本研究将两种疫苗混合后在室温静置不同时间测定犬瘟热病毒(CDV)含量,并选用30只健康水貂随机分为6组进行比对试验,其... 为评价水貂病毒性肠炎杆状病毒载体灭活疫苗(简称MEV亚单位疫苗)与水貂犬瘟热活疫苗(简称CDV活疫苗)混合免疫的效果,本研究将两种疫苗混合后在室温静置不同时间测定犬瘟热病毒(CDV)含量,并选用30只健康水貂随机分为6组进行比对试验,其中G1和G2组免疫MEV亚单位疫苗稀释CDV活疫苗的混合疫苗,G3组为CDV活疫苗单独免疫组,G4组为MEV亚单位疫苗单独免疫组,G5和G6组分别为CDV攻毒组和MEV攻毒组。免疫后21 d采血检测CDV中和抗体,同时对G1、G3、G5组进行CDV攻毒;免疫后14 d采血检测MEV血凝抑制(HI)抗体,同时对G2、G4、G6组进行MEV攻毒。结果:两种疫苗混合后在室温静置2 h, CDV含量无明显下降。免疫后21 d, G1和G3组CDV中和抗体效价达到1∶64.6~1∶128.8,CDV攻毒后混合疫苗和CDV活疫苗免疫组的保护率均为100%。免疫后14 d, G2和G4组的MEV HI抗体效价达到1∶128~1∶1 024,MEV攻毒后混合疫苗和MEV亚单位疫苗免疫组的保护率均为100%。研究表明,MEV亚单位疫苗稀释CDV活疫苗,混合免疫后各疫苗的免疫效力均不受影响。 展开更多
关键词 水貂病毒性肠炎杆状病毒载体灭活疫苗 水貂犬瘟热活疫苗 混合免疫 免疫效力
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免疫染色法检测杆状病毒滴度方法的建立和优化
9
作者 李静 李媛媛 《临床合理用药杂志》 2024年第2期153-155,共3页
目的建立并优化杆状病毒滴度的检测方法。方法按照免疫染色法建立杆状病毒滴度检测方法,并对该方法的适用参数进行优化,通过筛选细胞接种浓度、病毒接种浓度、最适抗体稀释倍数,选择最佳反应条件优化检测方法,通过重复性、适用性实验验... 目的建立并优化杆状病毒滴度的检测方法。方法按照免疫染色法建立杆状病毒滴度检测方法,并对该方法的适用参数进行优化,通过筛选细胞接种浓度、病毒接种浓度、最适抗体稀释倍数,选择最佳反应条件优化检测方法,通过重复性、适用性实验验证该方法的准确性和特异性。结果细胞接种浓度选择0.65×10^(6)个/ml、病毒接种浓度选择104、抗体稀释倍数选择1∶500时检测结果最佳,应用最适检测参数进行重复验证,检测不同样品,仅杆状病毒组出现特异性病毒噬斑。结论建立并优化了重组杆状病毒滴度免疫染色方法,该方法具有良好的重复性、特异性和准确性,可用于生产中病毒滴度的检测。 展开更多
关键词 免疫染色法 杆状病毒 滴度检测
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昆虫杆状病毒的研究与应用 被引量：4
10
作者 王晓玲 魏美才 夏春兰 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第6期61-65,共5页
杆状病毒是鳞翅目昆虫的重要病原微生物,在重要农业害虫的生物防治中具有很大的应用前景。同时,杆状病毒—昆虫细胞表达系统是一类重要的真核表达系统,现已成为目前基因工程四大表达系统之一。另外,杆状病毒是非复制型载体,能高效表达... 杆状病毒是鳞翅目昆虫的重要病原微生物,在重要农业害虫的生物防治中具有很大的应用前景。同时,杆状病毒—昆虫细胞表达系统是一类重要的真核表达系统,现已成为目前基因工程四大表达系统之一。另外,杆状病毒是非复制型载体,能高效表达目的蛋白,其作为基因转移载体在基因治疗中已显示出良好的应用前景。文中综述了杆状病毒在以上方面应用的最新进展。 展开更多
关键词 杆状病毒 杆状病毒载体 重组杆状病毒 基因治疗 杆状病毒杀虫剂
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昆虫杆状病毒及其应用研究进展
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作者 梁振普 陈阳光 +5 位作者 杜俊阳 曹瀚文 张小霞 代金平 杨新平 苏萍 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第6期916-923,共8页
杆状病毒是一类具有双链、环状DNA的病毒,因其在生物防治方面具有宿主专一性强、对人畜无害、对环境安全和可自然传播等特点,而得到人们广泛的关注。本文概述了昆虫杆状病毒特征和作为表达系统的应用。野生型昆虫杆状病毒具有杀虫速度... 杆状病毒是一类具有双链、环状DNA的病毒,因其在生物防治方面具有宿主专一性强、对人畜无害、对环境安全和可自然传播等特点,而得到人们广泛的关注。本文概述了昆虫杆状病毒特征和作为表达系统的应用。野生型昆虫杆状病毒具有杀虫速度慢、稳定性差和宿主域窄等缺点,因此本文还介绍了通过基因工程改造野生型昆虫杆状病毒,以提高其作用效率和扩大杀虫谱的方法,同时对杆状病毒的应用前景做出了展望。 展开更多
关键词 杆状病毒 表达系统 杀虫剂 基因工程
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杆状病毒miRNA研究进展
12
作者 方正 《农业与技术》 2023年第1期22-24,共3页
MicroRNAs(miRNAs)是一类由内源基因编码的非编码单链小RNA分子,在转录后水平调控靶基因的表达。MiRNA在生物发育、病毒感染、细胞周期、宿主免疫及代谢等多种生命活动过程中有着重要的调控作用。杆状病毒miRNA的研究起步较晚,近10a来... MicroRNAs(miRNAs)是一类由内源基因编码的非编码单链小RNA分子,在转录后水平调控靶基因的表达。MiRNA在生物发育、病毒感染、细胞周期、宿主免疫及代谢等多种生命活动过程中有着重要的调控作用。杆状病毒miRNA的研究起步较晚,近10a来的研究表明,杆状病毒miRNA在促进病毒感染方面具有重要作用。本文从杆状病毒miRNA的鉴定、生物合成途径、生物学功能和持续性感染等方面进行了概述,并对杆状病毒miRNA的研究前景进行了展望。 展开更多
关键词 MIRNA 昆虫 杆状病毒 调控 靶基因
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稻纵卷叶螟转录因子CncC对杆状病毒CnmeGV感染的响应及功能
13
作者 张楠 韩光杰 +5 位作者 刘琴 李传明 祁建杭 陆玉荣 夏杨 徐健 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第13期2491-2503,共13页
【目的】研究稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)转录因子CncC(Cap‘n’Collar Isoform C)及其调控的抗氧化酶基因在抗稻纵卷叶螟颗粒体病毒(Cnaphalocrocis medinalis granulovirus,CnmeGV)感染中的作用,进一步丰富昆虫抗杆状病毒... 【目的】研究稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)转录因子CncC(Cap‘n’Collar Isoform C)及其调控的抗氧化酶基因在抗稻纵卷叶螟颗粒体病毒(Cnaphalocrocis medinalis granulovirus,CnmeGV)感染中的作用,进一步丰富昆虫抗杆状病毒感染的免疫调控机制研究。【方法】使用RT-PCR克隆得到稻纵卷叶螟CncC(CmCncC)cDNA全长序列并分析其蛋白结构;以106 OB/mL浓度的CnmeGV或同浓度的CnmeGV和1 mmol·L^(-1)CncC抑制剂——ML385混合液饲喂稻纵卷叶螟3龄幼虫,感染后6—48 h取样,分析ML385对CnmeGV诱导的稻纵卷叶螟丙二醛(MDA)含量变化的影响,同时采用RT-qPCR分析病毒DNA复制水平、稻纵卷叶螟CmCncC、谷胱甘肽过氧化物酶-3(glutathione peroxidase-3,GPx-3)、锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn-SOD)和硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase,TPx)等基因的表达水平,并每隔24 h统计幼虫死亡数,绘制10 d内幼虫的Kaplan-Meier生存曲线。使用1 mmol·L^(-1)ML385或1 mmol·L^(-1)ML385和200μg·mL^(-1)抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)混合液饲喂感染的幼虫,使用RT-qPCR分析不同时间病毒DNA复制水平。【结果】CmCncC cDNA全长为3404 bp,包括321 bp的5′-UTR,847 bp的3′-UTR和2211 bp的ORF,编码一个长度为736 aa的蛋白,预测蛋白质分子质量为75.8 kDa。稻纵卷叶螟感染CnmeGV后丙二醛含量在感染的前12 h内显著上调,随后在24 h恢复到正常水平,而在48 h低于对照组。病毒感染导致CmCncC在12、24和48 h显著上调表达,分别为对照组的1.56、2.16和2.63倍,NAC处理显著降低了CnmeGV诱导的CmCncC表达上调的倍数,分别降低至对照组的48.12%、59.83%和56.32%。ML385处理导致病毒基因拷贝数在12和24 h分别增至对照组的1.79和1.76倍,同时导致稻纵卷叶螟感染CnmeGV 10 d后的死亡率显著升高,从单CnmeGV处理组的73.33%升至94.14%,而NAC处理能够减轻由于CncC抑制导致的病毒基因拷贝数的上调。CnmeGV感染分别导致GPx-3表达量在感染后48 h上调至对照组的3.68倍,Mn-SOD表达量在12、24和48 h分别上调至对照组的1.73、2.62和2.77倍,TPx表达量在12和24 h分别上调至对照组的1.76和2.10倍,但48 h恢复至对照组水平。使用NAC或CncC抑制剂处理感病幼虫发现,GPx-3、Mn-SOD和TPx对CnmeGV感染的响应被显著削弱。【结论】CmCncC介导了CnmeGV感染诱导的GPx-3、Mn-SOD和TPx上调表达,降低CnmeGV感染导致的氧化应激,从而限制病毒在其体内的复制并降低氧化损伤。 展开更多
关键词 稻纵卷叶螟 稻纵卷叶螟颗粒体病毒 CncC转录因子 氧化应激 抗氧化基因 杆状病毒
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非洲猪瘟病毒EP364R蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定
14
作者 杨扬 张妍 +10 位作者 张俊杰 管志欣 李昱昊 孙卿 李宗杰 李蓓蓓 刘珂 邵东华 邱亚峰 魏建超 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期146-150,共5页
非洲猪瘟病毒(ASFV)EP364R蛋白是ASFV的ERCC4核酸酶结构域。为了获得具有免疫原性的EP364R蛋白,本研究将ASFV EP364R基因构建到杆状病毒表达载体上,将重组质粒转座DH10Bac感受态中,经过3次蓝白斑筛选,获得重组BacmidEP364R质粒,将Bacmid... 非洲猪瘟病毒(ASFV)EP364R蛋白是ASFV的ERCC4核酸酶结构域。为了获得具有免疫原性的EP364R蛋白,本研究将ASFV EP364R基因构建到杆状病毒表达载体上,将重组质粒转座DH10Bac感受态中,经过3次蓝白斑筛选,获得重组BacmidEP364R质粒,将Bacmid-EP364R质粒转染至细胞中,收获上清,在正常细胞中传三代,以获得重组杆状病毒rBac-EP364R。使用Western blot和间接免疫荧光(IFA)实验鉴定重组蛋白得到表达及其免疫原性。本研究结果显示,在感染的细胞可检测到EP364R蛋白的表达,并可被His单克隆抗体特异性识别。结果表明杆状病毒系统成功表达EP364R蛋白并具有良好的反应活性,为后续开展ASFV血清学诊断和亚单位疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 EP364R 杆状病毒表达 免疫原性
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非洲猪瘟病毒p30蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与免疫检测
15
作者 廖欣欣 钟秋萍 +7 位作者 史馨瑾 魏常青 孙海伟 刘英楠 敖清莹 谢振华 邬静 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第4期170-175,共6页
p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)免疫原性最强的结构蛋白之一,由CP204L基因编码。本研究利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒真核表达系统将ASFV中CP204L插入p Fast Bac1载体下游,将形成的重组质粒p Fast Bac-p30以转座子的形式插入到DH10Bac中的... p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)免疫原性最强的结构蛋白之一,由CP204L基因编码。本研究利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒真核表达系统将ASFV中CP204L插入p Fast Bac1载体下游,将形成的重组质粒p Fast Bac-p30以转座子的形式插入到DH10Bac中的杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)中,筛选出重组Bacmid-p30后,将Bacmid-p30转染Sf9细胞,并继续传代3次,获得重组杆状病毒,命名为r Bac-p30。分别通过间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)鉴定了ASFV阳性血清可特异性识别Sf9细胞中表达的p30。以此真核表达p30蛋白包被ELISA板,可区分ASFV阴阳性血清。以上结果表明,本研究初步建立了检测ASFV血清抗体的间接ELISA方法,为后续建立非洲猪瘟抗体检测方法和p30亚单位疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p30蛋白 杆状病毒表达系统
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2019-nCoV N蛋白在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及纯化
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作者 海毕瑞 杨扬 +2 位作者 刘世火 吴峻 徐家萍 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期333-339,共7页
核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白是新型冠状病毒的结构蛋白,与病毒RNA的转录和复制有关。目前,N蛋白已被广泛应用于新型冠状病毒肺炎的检测诊断及治疗。本研究克隆的2019-nCoV-n基因CDS由1257个碱基构成,编码419个氨基酸。将该基因连接到昆... 核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白是新型冠状病毒的结构蛋白,与病毒RNA的转录和复制有关。目前,N蛋白已被广泛应用于新型冠状病毒肺炎的检测诊断及治疗。本研究克隆的2019-nCoV-n基因CDS由1257个碱基构成,编码419个氨基酸。将该基因连接到昆虫表达载体pFastBacTMHTB构建重组Bacmid,转染至BmN细胞中获得重组病毒,将重组病毒注射家蚕蛹体内,收集发病家蚕蛹血淋巴,通过镍柱亲和纯化,SDS-PAGE和Western blot检测表明获得一定纯度具有活性的重组2019-nCoV-N蛋白,为后期进一步开发抗体检测试剂盒鉴定了基础。 展开更多
关键词 杆状病毒表达系统 家蚕蛹 2019-nCoV 核衣壳蛋白 蛋白质纯化
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昆虫杆状病毒分子生物学及其应用研究的新进展 被引量：4
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作者 刘高强 余晓丹 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第9期1748-1750,共3页
杆状病毒是昆虫专一性的病原病毒，具有重要的应用价值。首先，杆状病毒是昆虫杆状病毒表达系统的核心部分，该系统已在药物研发、疫苗生产等方面得到广泛应用。随着杆状病毒载体的不断改进，杆状病毒表达系统获得重组病毒的几率已从最... 杆状病毒是昆虫专一性的病原病毒，具有重要的应用价值。首先，杆状病毒是昆虫杆状病毒表达系统的核心部分，该系统已在药物研发、疫苗生产等方面得到广泛应用。随着杆状病毒载体的不断改进，杆状病毒表达系统获得重组病毒的几率已从最初的0．1％～1％提高到现在的80％～90％，并且出现了一些新的宿主域扩大的杆状病毒载体。其次，杆状病毒是非复制型载体，且能高效表达目的蛋白，目前杆状病毒作为基因转移载体在基因治疗中已显示出良好的应用前景。此外，杆状病毒还是一类重要的微生物杀虫剂。重组杆状病毒杀虫剂及其安全性也是目前人们关注的焦点。综述了杆状病毒分子生物学及其最新应用进展。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒 杆状病毒载体 基因治疗 杆状病毒杀虫剂
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赤羽病病毒Gc aa465~704的杆状病毒表达和单克隆抗体制备
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作者 魏方 陈冬杰 +2 位作者 邓俊花 王晶晶 吴绍强 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第12期49-53,共5页
为制备针对赤羽病病毒(AKAV)糖蛋白Gc的单克隆抗体(mAb),本试验选取AKAV Gc蛋白第465~704位氨基酸的基因序列进行密码子优化并合成至pFastBac HTB载体;通过蓝白斑筛选和昆虫细胞杆状病毒表达系统制备重组AKAV Gc aa465~704蛋白,纯化后... 为制备针对赤羽病病毒(AKAV)糖蛋白Gc的单克隆抗体(mAb),本试验选取AKAV Gc蛋白第465~704位氨基酸的基因序列进行密码子优化并合成至pFastBac HTB载体;通过蓝白斑筛选和昆虫细胞杆状病毒表达系统制备重组AKAV Gc aa465~704蛋白,纯化后免疫小鼠;通过细胞融合和亚克隆筛选阳性杂交瘤细胞,利用Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)对mAb特性进行鉴定。结果显示,本试验成功筛选出1株可稳定分泌抗AKAV Gc aa465~704蛋白mAb的杂交瘤细胞株4D1,Western blot结果显示,mAb 4D1可特异性识别AKAV Gc aa465~704蛋白;IFA结果显示,mAb 4D1能够与AKAV感染的BHK21细胞发生反应。结果表明,本试验成功制备抗AKAV Gc aa465~704蛋白mAb,为进一步研究AKAV Gc蛋白生物学功能和建立AKAV检测方法提供技术支持。 展开更多
关键词 赤羽病病毒 Gc蛋白 杆状病毒表达 单克隆抗体
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重组非洲马瘟VP7抗原在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
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作者 田国宁 李晓霞 +3 位作者 孙航 王润清 孙雨 宋晓晖 《中国草食动物科学》 CAS 2023年第4期1-6,共6页
为重组合成具有类似天然结构的非洲马瘟病毒VP7抗原,通过优化抗原的密码子序列并使用杆状病毒表达系统表达与鉴定了真核重组非洲马瘟病毒的VP7抗原。结果表明,通过化学合成与扩增非洲马瘟病毒VP7基因,将合成后的核酸序列插入相应真核表... 为重组合成具有类似天然结构的非洲马瘟病毒VP7抗原,通过优化抗原的密码子序列并使用杆状病毒表达系统表达与鉴定了真核重组非洲马瘟病毒的VP7抗原。结果表明,通过化学合成与扩增非洲马瘟病毒VP7基因,将合成后的核酸序列插入相应真核表达载体中并转座构建穿梭质粒,然后通过瞬时转染方式转染至昆虫细胞成功构建杆状病毒并表达获得相应目的抗原。表达的抗原经过标签纯化及相应免疫印迹试验验证后表现出较好的免疫原性与反应原性。 展开更多
关键词 非洲马瘟 重组VP7蛋白 杆状病毒 真核表达 蛋白纯化
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杆状病毒IAP重复序列蛋白6对胃癌细胞生物学行为的影响
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作者 高雯宇 江涛 陈丰霖 《福建医科大学学报》 2023年第6期393-404,共12页
目的 探讨杆状病毒凋亡抑制蛋白(IAP)重复序列蛋白6(BIRC6)在胃癌细胞的表达情况及其对胃癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 采用Western-blot和qRT-PCR检测BIRC6在不同胃癌细胞株中的蛋白和mRNA水平;采用慢病毒载体构建稳定敲减BIRC6... 目的 探讨杆状病毒凋亡抑制蛋白(IAP)重复序列蛋白6(BIRC6)在胃癌细胞的表达情况及其对胃癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 采用Western-blot和qRT-PCR检测BIRC6在不同胃癌细胞株中的蛋白和mRNA水平;采用慢病毒载体构建稳定敲减BIRC6的胃癌细胞株BGC823-shRNA-BIRC6和MGC803-shRNA-BIRC6;采用CCK-8法和Edu实验检测细胞增殖能力;采用流式细胞术检测细胞周期变化;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭水平;采用划痕实验检测细胞迁移能力;采用克隆形成实验检测BIRC6对胃癌细胞克隆形成能力的影响;采用裸鼠皮下成瘤实验检测敲减BIRC6后胃癌细胞在异种移植瘤中的增殖活性。结果 胃癌细胞中BIRC6的蛋白和mRNA水平均呈现高表达。敲减BIRC6可抑制胃癌细胞株BGC823和MGC803的增殖能力,诱导胃癌细胞株BGC823和MGC803阻滞在G2-M期,抑制胃癌细胞增长,同时抑制胃癌细胞株BGC823和MGC803的迁移、侵袭能力,并使胃癌细胞株BGC823的裸鼠皮下成瘤能力明显减弱。结论 BIRC6在促进胃癌发生、发展过程中发挥癌基因的作用,促进胃癌细胞的增殖和远处转移。 展开更多
关键词 杆状病毒IAP重复序列蛋白6 胃癌 细胞增殖 细胞侵袭
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