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金荞麦查尔酮合成酶基因CHS的克隆及序列分析 被引量：16
1
作者 蒙华 李成磊 +2 位作者 吴琦 邵继荣 陈惠 《草业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期162-169,共8页
采用同源克隆的方法获得金荞麦查尔酮合成酶基因(CHS)的保守片段554bp,进一步采用染色体步移法(genome-walking)和RT-PCR技术克隆到CHS基因的全长DNA序列和cDNA开放阅读框(ORF)序列。序列分析结果表明,金荞麦CHS基因DNA全长1650bp,含一... 采用同源克隆的方法获得金荞麦查尔酮合成酶基因(CHS)的保守片段554bp,进一步采用染色体步移法(genome-walking)和RT-PCR技术克隆到CHS基因的全长DNA序列和cDNA开放阅读框(ORF)序列。序列分析结果表明,金荞麦CHS基因DNA全长1650bp,含一个462bp的内含子;其cDNA编码区全长1188bp,编码395个氨基酸,命名为FdCHS,NCBI登录号为GU169470。该氨基酸序列与同为蓼科的掌叶大黄、虎杖CHS的氨基酸序列同源率分别达到94%和93%,且含有CHS活性位点和底物结合口袋位点等保守位点。 展开更多
关键词 金荞麦 查尔酮合成酶基因 克隆 序列分析
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黄秋葵查尔酮合成酶基因AeCHS的克隆与表达分析 被引量：17
2
作者 王旭 韩春乐 +3 位作者 周亚楠 王春国 宋文芹 陈成彬 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期561-567,共7页
采用同源序列克隆和RT-PCR技术,首次克隆得到黄秋葵查尔酮合成酶基因(CHS)cDNA全长序列。序列分析表明,该序列全长1175 bp,包括一个1170 bp的完整ORF,编码389个氨基酸,命名为AeCHS。生物信息学分析表明,本研究所获得的AeCHS氨基酸序列... 采用同源序列克隆和RT-PCR技术,首次克隆得到黄秋葵查尔酮合成酶基因(CHS)cDNA全长序列。序列分析表明,该序列全长1175 bp,包括一个1170 bp的完整ORF,编码389个氨基酸,命名为AeCHS。生物信息学分析表明,本研究所获得的AeCHS氨基酸序列与同科植物黄蜀葵和陆地棉的同源性较高,分别达99.23%和97.44%,AeCHS推断的氨基酸序列含有CHS蛋白的标签序列GFGPG以及4个保守活性位点Cys164、Phe215、His303、Asn336。实时荧光定量PCR分析黄秋葵果实、花、叶片不同发育时期AeCHS基因的表达量,结果表明AeCHS基因在上述植物材料中表现出不同的表达模式:花>果实>叶片,具体到不同植物组织,AeCHS基因在生长6 d的果实、盛开的花朵以及植株顶端第4片叶子中的表达量较高。 展开更多
关键词 黄秋葵 查尔酮合成酶 基因克隆 荧光定量PCR
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大豆查尔酮合成酶(CHS)基因的克隆、表达及其在雪莲提取液中的代谢产物分析 被引量：19
3
作者 牛天敏 马会勤 陈尚武 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期58-63,共6页
以栽培大豆北丰12为材料,利用PCR方法克隆查尔酮合成酶(Chalcone synthase,CHS)全基因,采用SOE法克隆得到去掉内含子的查尔酮合成酶基因,核酸序列分析表明,该基因编码区长1170bp,编码390个氨基酸,与已报道的GMCHS8(GenBank:AY237728)的c... 以栽培大豆北丰12为材料,利用PCR方法克隆查尔酮合成酶(Chalcone synthase,CHS)全基因,采用SOE法克隆得到去掉内含子的查尔酮合成酶基因,核酸序列分析表明,该基因编码区长1170bp,编码390个氨基酸,与已报道的GMCHS8(GenBank:AY237728)的cDNA序列相似率达到97%。构建pET-GMCHS工程表达质粒,通过大肠杆菌E.coliBL21(DE3)高效表达系统表达大豆CHS。通过12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,获得了分子量在42.9kDa的一条蛋白质特异表达带。液相色谱分析大肠杆菌E.coliBL21(DE3)高效表达系统在雪莲提取液中的代谢产物,样品和空白对照样对比,样品在273nm,3.0min出现新的吸收峰,质谱分析结果表明CHS利用雪莲提取液中代谢中间产物合成了新的黄酮类物质。 展开更多
关键词 GLYCINE MAX L.Merr. 查尔酮合成酶 基因克隆 表达E.coli 雪莲
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草地早熟禾查尔酮合成酶基因PpCHS1克隆、功能与表达分析 被引量：9
4
作者 何春艳 甘露 +3 位作者 闫蒙举 张兰 苏浩天 尹淑霞 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期8-15,共8页
以草地早熟禾转录组数据为基础,克隆得到PpCHS1基因cDNA序列。其包含查尔酮合成酶基因(CHS)家族保守区域,与山羊草、大麦等植物的查尔酮合成酶基因相似度高;属于疏水性蛋白,Ⅲ型聚酮合酶,具有同源二聚体结构,亚细胞定位结果显示基因编... 以草地早熟禾转录组数据为基础,克隆得到PpCHS1基因cDNA序列。其包含查尔酮合成酶基因(CHS)家族保守区域,与山羊草、大麦等植物的查尔酮合成酶基因相似度高;属于疏水性蛋白,Ⅲ型聚酮合酶,具有同源二聚体结构,亚细胞定位结果显示基因编码的蛋白定位于细胞质。通过对PpCHS1进化和表达分析表明,其功能可能与花发育相关并能促进黄酮类物质的合成,受紫外线和高盐的诱导,同时在外施MeJA下持续高表达,推断PpCHS1可能参与非生物胁迫与生物胁迫的防御。 展开更多
关键词 草地早熟禾 查尔酮合成酶基因 克隆 亚细胞定位 功能 表达分析
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金花茶查尔酮合成酶基因CnCHS的克隆及遗传转化研究 被引量：5
5
作者 周兴文 李纪元 朱宇林 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期327-332,共6页
根据已发表的金花茶查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因(CnCHS)序列设计全长扩增引物,以金花茶花瓣总cDNA为模板进行PCR扩增,成功获得了该基因cDNA全长。将扩增所得全长产物连接PMD18-T载体后转化大肠杆菌E.coli DH5α,提取质粒... 根据已发表的金花茶查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因(CnCHS)序列设计全长扩增引物,以金花茶花瓣总cDNA为模板进行PCR扩增,成功获得了该基因cDNA全长。将扩增所得全长产物连接PMD18-T载体后转化大肠杆菌E.coli DH5α,提取质粒后经酶切、测序鉴定后,将其与双元表达载体pCAMBIA1300连接,成功构建了CnCHS基因的正义表达载体pCAM-CnCHS。将该重组表达载体转化农杆菌EHA105后,利用农杆菌介导法将CnCHS基因转入烟草,获得转基因烟草18株。利用PCR法及Southern blotting对所获得的转基因植株进行鉴定,结果显示CnCHS基因成功整合到烟草基因组中,阳性率达67%,并获得了单拷贝转基因植株。这些结果表明本研究成功构建了金花茶CnCHS基因对烟草的遗传转化体系,为深入研究CnCHS基因的功能及其对花色的调控效应奠定了基础。 展开更多
关键词 金花茶 查尔酮合成酶 表达载体 转基因植株
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七彩红竹查尔酮合成酶IhCHS1基因的克隆与分析 被引量：6
6
作者 周旭 王晨晨 +3 位作者 毕玮 王娟 杨宇明 王毅 《竹子研究汇刊》 北大核心 2014年第3期11-16,共6页
通过已报道查尔酮合成酶基因的保守序列设计特异引物,扩增得到七彩红竹(Indosasa hispida cv.rainbow)查尔酮合成酶(Chalcone Synthase,CHS)基因片段,再以RACE法获得CHS基因全长cDNA序列。该cDNA全长1953 bp,含1542 bp的开放阅读框,编码... 通过已报道查尔酮合成酶基因的保守序列设计特异引物,扩增得到七彩红竹(Indosasa hispida cv.rainbow)查尔酮合成酶(Chalcone Synthase,CHS)基因片段,再以RACE法获得CHS基因全长cDNA序列。该cDNA全长1953 bp,含1542 bp的开放阅读框,编码含513个氨基酸残基的蛋白质。多序列比对结果表明IhCHS1推断的蛋白与节节麦(Aegilops tauschii)等禾本科植物的CHS相似性在87%以上,临位法构建系统发生树显示IhCHS1与禾本科植物CHS亲缘关系较近。RT-PCR结果显示IhCHS1在幼嫩红秆中大量表达。 展开更多
关键词 七彩红竹 查尔酮合成酶 基因克隆 表达分析
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青花菜查尔酮合成酶基因BoCHS的克隆、表达及序列分析 被引量：4
7
作者 彭礼琼 蒋明 +2 位作者 郭志平 章鲤静 张徐俞 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第8期1796-1800,共5页
根据NCBI数据库中发布的查尔酮合成酶基因序列设计PCR简并引物,以青花菜(Brassica oler-acea var.italica)子叶cDNA为材料,克隆到了青花菜查尔酮合成酶基因,基因命名为BoCHS,序列已提交到NCBI数据库,登录号为GU266209。该基因的编码区... 根据NCBI数据库中发布的查尔酮合成酶基因序列设计PCR简并引物,以青花菜(Brassica oler-acea var.italica)子叶cDNA为材料,克隆到了青花菜查尔酮合成酶基因,基因命名为BoCHS,序列已提交到NCBI数据库,登录号为GU266209。该基因的编码区全长为1182bp,编码393个氨基酸。序列比对结果表明,BoCHS基因编码的氨基酸序列与其他十字花科植物之间的同源性很高,仅存在个别氨基酸残基的差别。RT-PCR检测表明,经霜霉病菌(Hyaloperonospora parasitica)侵染后,子叶中BoCHS的表达量增加,其中以72h和96h的表达量最大。 展开更多
关键词 青花菜 查尔酮合成酶基因 序列分析 基因表达
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苦荞中查尔酮合成酶基因(CHS)的克隆 被引量：3
8
作者 高帆 张宗文 +2 位作者 李艳琴 吴斌 宋韡 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第21期207-214,共8页
获得完整的苦荞查尔酮合成酶基因(CHS)信息并评价其进化地位,对分子辅助选育高黄酮含量的苦荞品种具有重要的指导意义。用RACE法克隆苦荞CHS基因,用生物信息学手段分析预测苦荞CHS基本理化性质和同源性,用临接法构建了该酶的系统发生树... 获得完整的苦荞查尔酮合成酶基因(CHS)信息并评价其进化地位,对分子辅助选育高黄酮含量的苦荞品种具有重要的指导意义。用RACE法克隆苦荞CHS基因,用生物信息学手段分析预测苦荞CHS基本理化性质和同源性,用临接法构建了该酶的系统发生树。获得1250bp的CHScDNA全长,含241bp的3’UTR和185bp的5’UTR;等电点(pI)和分子量(Mr)分别为5.33和35340.75Da;克隆获得975bp的开放性阅读框(ORF)。预测该基因编码含325个氨基酸残基的蛋白,氨基酸同源比对结果表明,苦荞CHS与蓼科的虎杖相似性很高;临接法构建的系统发生树结果表明,苦荞CHS与其他双子叶植物有共同的起源,与蓼科的金荞麦、甜荞、虎杖及石竹科的满天星亲缘关系较近。成功获得苦荞CHS基因的cDNA全长,克隆出完整的ORF,并确定了苦荞中该酶的进化地位和方向。 展开更多
关键词 苦荞 查尔酮合成酶 基因克隆
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矮牵牛中查尔酮合成酶基因A (chsA)2个启动子的克隆和分析(英文) 被引量：2
9
作者 向太和 徐纪明 +1 位作者 王琳 林磊 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第1期75-83,共9页
查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是类黄酮类物质生物合成途径中的第一个关键酶,其控制基因chs为超家族基因.根据前人报道的矮牵牛查尔酮合成酶基因A(chsA)启动子的保守序列设计1对特异性引物,从矮牵牛基因组DNA中通过1次PCR同时扩... 查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是类黄酮类物质生物合成途径中的第一个关键酶,其控制基因chs为超家族基因.根据前人报道的矮牵牛查尔酮合成酶基因A(chsA)启动子的保守序列设计1对特异性引物,从矮牵牛基因组DNA中通过1次PCR同时扩增出长为550 bp和354 bp的启动子(分别命名为PchsA-L和PchsA-S,GenBank登录号:EF199747和EF199748),其中PchsA-L与PchsA-S相比,除个别碱基有差异外,在88～269 bp多出一段182 bp的序列,其中103～201 bp含有典型的内含子特征.应用DNAStar软件分析表明2条序列均含有普通启动子的保守序列TATA box、CCAAT box、capsite(CCATAA),并含有花中特异表达启动子的特征序列TACPyAT box、anther box(TAGAAGTGACAGAAAT)、G-box(CACGTG)、box1元件(ATGTCACGTGCCATC)和box2元件(TGTGTTGAAGGTTTGCTA).对克隆启动子所用的矮牵牛后代群体进行分析,130个单株中只含有PchsA-S的有13株,只含有PchsA-L的有20株,同时含有2个启动子的有97株.2个启动子在后代中发生了分离,但其分离比并不符合1∶2∶1.克隆启动子所用的矮牵牛有14条染色体,为二倍体.DNA印迹表明2个启动子在基因组中均是多拷贝.qRT-PCR分析显示:未经过紫外光处理的花中以及经过紫外光处理的花中,PchsA-L启动子驱动的chsA基因与PchsA-S启动子驱动的chsA基因表达都未见明显差异;在紫外光处理的幼苗叶片中表达量相应地比紫外光处理的花中的表达量增高;在紫外光处理的幼苗叶片中,PchsA-L启动子驱动的chsA基因比PchsA-S启动子驱动的chsA基因表达量显著增高;而未经过紫外光处理的幼苗叶片中,PchsA-L启动子驱动的chsA基因、PchsA-S启动子驱动的chsA基因都没有检测到明显的表达信号.结果表明:在矮牵牛中chsA基因存在2个独立的启动子PchsA-L和PchsA-S;启动子PchsA-L中182 bp类内含子特征的序列具有显著提高chsA基因在紫外光处理的幼苗叶片中表达量的功能. 展开更多
关键词 矮牵牛 查尔酮合成酶基因 启动子 克隆
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多花黄精查尔酮合酶PcCHS的原核表达、亚细胞定位及表达分析
10
作者 潘萍萍 徐志浩 +2 位作者 张怡雯 李青 王忠华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期280-289,共10页
【目的】探究查尔酮合酶(chalcone synthase,PcCHS)基因在多花黄精类黄酮合成中的作用,为后续解析PcCHS功能以及多花黄精新品种选育提供可靠的理论依据。【方法】以多花黄精为cDNA模板,克隆多花黄精PcCHS基因的编码序列,对该基因进行生... 【目的】探究查尔酮合酶(chalcone synthase,PcCHS)基因在多花黄精类黄酮合成中的作用,为后续解析PcCHS功能以及多花黄精新品种选育提供可靠的理论依据。【方法】以多花黄精为cDNA模板,克隆多花黄精PcCHS基因的编码序列,对该基因进行生物信息学分析。通过构建PcCHS的原核表达载体,纯化目的重组蛋白,验证该酶的体外表达活性。利用瞬时超表达体系探究该基因过表达后总黄酮的含量变化。利用Gateway技术构建亚细胞定位载体35S::PcCHS-GFP,通过本氏烟草表达系统确定目的蛋白亚细胞定位情况。【结果】PcCHS基因的开放阅读框为1 251 bp,理论分子量为44.63 kD,等电点为5.89,属于亲水蛋白,与石刁柏(Asparagus officinalis)CHS亲缘关系较近。原核表达实验表明,pET28a-PcCHS经IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达可溶性重组蛋白,Western-blot显示大小约为45 kD,与预期大小一致,且纯化的目的蛋白具有一定的酶活性,能催化对香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A转化为柚皮素查尔酮。此外,PcCHS瞬时超表达中,PcCHS组的表达量显著高于空载K组,总黄酮含量也显著高于空载K组,最高可达1.83倍。亚细胞定位结果显示,该基因在细胞膜和细胞核中发挥作用。【结论】PcCHS基因原核表达的酶具有体外酶活性,其亚细胞定位于细胞膜和细胞核,且瞬时超表达能够显著提高多花黄精叶片总黄酮含量。 展开更多
关键词 多花黄精 查尔酮合酶基因(chs) 原核表达 瞬时超表达 蛋白纯化 体外酶活 亚细胞定位
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诸葛菜(Orychophragmus violaceus)查尔酮合成酶基因OvCHS的克隆与序列分析 被引量：1
11
作者 倪雪莉 黄余磊 +2 位作者 梁刚良 鲍笑笑 蒋明 《台州学院学报》 2010年第3期42-48,共7页
根据GenBank发布的基因序列,设计PCR引物,分别从诸葛菜(Orychophragmus violaceus)的花瓣基因组DNA和cDNA克隆到查尔酮合成酶基因,并定名为OvCHS,序列已上传至NCBI数据库,登陆号为EF408918。序列分析表明,OvCHS基因的基因组全长为1263 ... 根据GenBank发布的基因序列,设计PCR引物,分别从诸葛菜(Orychophragmus violaceus)的花瓣基因组DNA和cDNA克隆到查尔酮合成酶基因,并定名为OvCHS,序列已上传至NCBI数据库,登陆号为EF408918。序列分析表明,OvCHS基因的基因组全长为1263 bp,具一个75 bp的内含子,编码区全长为1188 bp,编码395个氨基酸。与模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)查尔酮合成酶基因AtCHS比较发现,两基因编码区有135个碱基不同,相似性为88.64%,氨基酸序列中仅16个氨基酸残基的差异,相似性达95.95%。 展开更多
关键词 诸葛菜 查尔酮合成酶基因 克隆 表达分析
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柳杉属3个查尔酮合成酶(CHS)新基因的克隆及其序列特异性分析(英文)
12
作者 卢泳全 贾庆 +1 位作者 童再康 陈见阳 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期246-252,共7页
查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是黄酮类物质合成的第一关键酶。为了获得CHS基因,我们在ACGM标记所扩增的PCR片段内设计锚定引物,并结合RACE技术首次克隆了柳杉属3种植物的CHS基因,包括柳杉(Cryptomeria japonica var.sinensis,Cj... 查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是黄酮类物质合成的第一关键酶。为了获得CHS基因,我们在ACGM标记所扩增的PCR片段内设计锚定引物,并结合RACE技术首次克隆了柳杉属3种植物的CHS基因,包括柳杉(Cryptomeria japonica var.sinensis,CjsCHS)、短茸柳杉(C.japonicacv.Araucarioides,CjaCHS)和日本柳杉(C.japonica,CjCHS),并对其进行分析。结果表明:3个基因长都为1 176bp,编码391个氨基酸,它们都含有CHS高度保守活性位点以及CHS标签序列GFGPG,其编码蛋白的相似度达99%,与其他植物相似度在79%以上,表明CHS基因在进化上具有相对保守性。 展开更多
关键词 基因克隆 查尔酮合成酶(chs) 柳杉 短茸柳杉 日本柳杉
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菘蓝查尔酮合成酶基因(IiCHS)的克隆及其生物信息学分析
13
作者 韩立敏 周宏骏 王喆之 《陕西农业科学》 2014年第7期8-11,21,共5页
类黄酮是植物体内一类重要的次生代谢产物,对植物的生长发育有着重要的调节作用。查尔酮合成酶是植物类黄酮合成途径的第一个关键酶,在调控类黄酮的生物合成中起着决定作用。本研究采用RTPCR方法扩增得到一条菘蓝查尔酮合成酶家族蛋白基... 类黄酮是植物体内一类重要的次生代谢产物,对植物的生长发育有着重要的调节作用。查尔酮合成酶是植物类黄酮合成途径的第一个关键酶,在调控类黄酮的生物合成中起着决定作用。本研究采用RTPCR方法扩增得到一条菘蓝查尔酮合成酶家族蛋白基因,命名为IiCHS,全长1 273 bp,包含一个1 194 bp的ORF,编码397个氨基酸,分析其编码的蛋白质序列显示其属于查尔酮合成酶家族蛋白,定位于胞质中。该研究不仅有助于分析查尔酮合酶基因的功能,而且还为进一步利用该基因资源改良菘蓝品质奠定了理论基础。 展开更多
关键词 菘蓝 查尔酮合成酶 基因克隆 生物信息学分析
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刺葡萄查尔酮合成酶基因CHS对不同光质的响应及转录因子调控分析 被引量：4
14
作者 赖恭梯 阙秋霞 +5 位作者 潘若 刘雨轩 王琦 赖谱富 高慧颖 赖呈纯 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期129-139,共11页
查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是花青素合成途径的第一个关键酶,为探明CHS在不同光质下的表达模式及转录因子调控特征,以刺葡萄愈伤组织为材料,克隆了2个CHS基因(VdCHS2和VdCHS3),进行生物信息学分析和8种不同光质培养处理下的... 查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是花青素合成途径的第一个关键酶,为探明CHS在不同光质下的表达模式及转录因子调控特征,以刺葡萄愈伤组织为材料,克隆了2个CHS基因(VdCHS2和VdCHS3),进行生物信息学分析和8种不同光质培养处理下的表达分析,并对CHS启动子顺式作用元件和转录因子结合位点进行预测。结果显示,VdCHS2和VdCHS3基因长度分别为1 382 bp和1 398 bp,均由2个外显子和1个内含子组成,编码蛋白均为无信号肽、定位于细胞质的亲水性蛋白。光照促进VdCHS的表达,VdCHS在短波光诱导下,先呈上调表达,当表达量达到一定水平后则呈现下调作用,而长波光抑制VdCHS的表达。靶向CHS的转录因子预测得到13个MYB成员,2个CHS启动子上存在23个MYB转录因子识别和结合元件。研究结果表明,不同光质的波长对VdCHS表达影响显著,13个MYB转录因子可能在刺葡萄花青素合成中参与CHS的转录调控。 展开更多
关键词 刺葡萄 查尔酮合成酶 chs 光质 转录因子 MYB 花青素
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苦蘵查尔酮合成酶编码基因(PaCHS1)的克隆及表达谱分析 被引量：3
15
作者 朱宇佳 郭宏 +7 位作者 孙涛 卢江杰 冯尚国 展晓日 应奇才 孟一君 沈晨佳 王慧中 《浙江农业科学》 2018年第5期757-762,764,共7页
对苦蘵(Physalis angulata L.)成分药理研究的结果表明,苦蘵果实内存在有效抑制肿瘤细胞生长的活性成分。查尔酮合成酶(CHS)在植物黄酮类物质次生代谢过程中起到了重要作用。本研究利用同源克隆的方法获得了苦蘵CHS基因的全长c DNA序列... 对苦蘵(Physalis angulata L.)成分药理研究的结果表明,苦蘵果实内存在有效抑制肿瘤细胞生长的活性成分。查尔酮合成酶(CHS)在植物黄酮类物质次生代谢过程中起到了重要作用。本研究利用同源克隆的方法获得了苦蘵CHS基因的全长c DNA序列,命名为Pa CHS1。序列分析表明,克隆得到的苦蘵Pa CHS1基因全长为1 170 bp,编码389个氨基酸。生物信息学分析表明,Pa CHS1是一个不含核定位序列且定位于细胞质和细胞膜为主的蛋白。实验数据也证实了Pa CHS1是一个细胞膜和细胞质定位的蛋白。序列对比显示其与多种植物的CHS蛋白序列高度同源,尤其与小金鱼草的Mo CHS1亲缘关系最近。实时定量RT-PCR结果表明,在不同组织器官中,Pa CHS1均有表达且表达水平有差异。Pa CHS1在果实中表达水平最高,而在茎中的表达水平最低。我们又分析了Pa CHS1基因在不同激素处理下的表达变化,结果表明,Pa CHS1基因的表达水平受到不同激素的调控,茉莉酸(JA)对Pa CHS1有强烈的诱导作用,而赤霉素(GA)、乙烯(ethylene)和细胞分裂素(cytokinin)对Pa CHS1有强烈抑制作用。对苦蘵Pa CHS1基因的克隆和表达图谱研究,可为研究苦蘵以黄酮类物质为代表的次生代谢途径打下基础。 展开更多
关键词 苦蘵 查尔酮合成酶 黄酮类物质 基因表达 植物激素
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非洲菊苯基苯乙烯酮合成酶CHS基因表达模式的初步研究 被引量：6
16
作者 张玉进 孟祥春 +1 位作者 潘瑞炽 王小菁 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期89-90,共2页
关键词 苯基苯乙烯酮合成酶 chs 基因表达 非洲菊 花冠 花色素苷
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百合查尔酮合成酶基因克隆及其转化烟草的花色表达分析 被引量：18
17
作者 陈洁 安利清 +3 位作者 王涛 姚娜 李潞滨 杨凯 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1511-1517,共7页
以‘西伯利亚’百合为试材,利用PCR技术克隆了查尔酮合成酶基因(CHS),构建了CHS基因的正义和反义植物表达载体,采用农杆菌介导法转化烟草叶盘,获得了转正义CHS基因的本明烟草18株,转反义CHS基因的普通烟草21株,总转化率为26.0%。高效液... 以‘西伯利亚’百合为试材,利用PCR技术克隆了查尔酮合成酶基因(CHS),构建了CHS基因的正义和反义植物表达载体,采用农杆菌介导法转化烟草叶盘,获得了转正义CHS基因的本明烟草18株,转反义CHS基因的普通烟草21株,总转化率为26.0%。高效液相色谱法(HPLC)检测结果显示,正义CHS转基因的本明烟草类黄酮含量升高14.0%～59.7%,反义CHS转基因的普通烟草类黄酮含量降低44.5%～76.4%。花色观察结果显示,正义转基因烟草的花瓣颜色未见变化,反义转基因烟草部分植株的花瓣颜色变浅。研究表明,CHS基因遗传转化是进行花色调控的有效手段之一。 展开更多
关键词 查尔酮合成酶基因(chs) 载体构建 烟草转化 类黄酮 花色改变
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TAIL-PCR方法快速克隆银杏查尔酮合成酶基因及序列分析(英文) 被引量：20
18
作者 许锋 程水源 +2 位作者 王燕 李琳玲 程述汉 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期237-243,共7页
热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL-PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL-PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种... 热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL-PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL-PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种家佛手的叶基因组DNA为模板,利用简并引物克隆到银杏查尔酮合成酶基因(CHS)片段序列Gbchs1,以此序列设计3条特异引物,利用改良的热不对称交错PCR方法克隆到CHS基因Gbchs2。结果表明,Gbchs2长1238bp,编码304个氨基酸并包含3’末端序列。GbCHS2蛋白质序列与其他植物的CHS蛋白质序列高度同源,包含CHS蛋白质保守的环化作用活性位点,催化活性位点、香豆素活性位点、及催化活性基序。改良后的TAIL-PCR方法为基因全长的克隆提供了一种简单快速高效的新方法。 展开更多
关键词 银杏 热不对称交错PCR 查尔酮合成酶基因 克隆 序列分析
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百合查尔酮合成酶基因的克隆与分析 被引量：10
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作者 安利清 杨凯 +4 位作者 张克 赵祥云 王文和 杨柳 王建立 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期492-498,共7页
以西伯利亚百合为试材,通过半巢式PCR和RT-PCR技术分别克隆了查尔酮合成酶基因(CHS)的DNA和cDNA.生物信息学分析显示,CHS的DNA序列全长1 397 bp(登录号HM622754),包含2个外显子和1个内含子;cDNA序列编码区全长1 182 bp(登录号HQ161731)... 以西伯利亚百合为试材,通过半巢式PCR和RT-PCR技术分别克隆了查尔酮合成酶基因(CHS)的DNA和cDNA.生物信息学分析显示,CHS的DNA序列全长1 397 bp(登录号HM622754),包含2个外显子和1个内含子;cDNA序列编码区全长1 182 bp(登录号HQ161731),编码393个氨基酸,具有3个典型的CHS蛋白结构域:N-末端结构域(Lys3-Pro229)、C-末端结构域(Gln239-Pro389)和聚合酶Ⅲ结构域(Met1-Thr391);不同百合品种的CHS基因编码的氨基酸序列相似性高达98%,表明百合CHS基因在进化上呈现出十分保守的趋势;不同植物CHS基因序列的系统进化邻接树结果表明:百合与单子叶植物鸢尾及禾本科的水稻、大麦、玉米等亲缘关系更为接近. 展开更多
关键词 百合 查尔酮合成酶基因 半巢式PCR RT-PCR 克隆
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巨峰葡萄查尔酮合成酶基因4的克隆及表达特性的RT-PCR分析 被引量：11
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作者 周军 陶建敏 +9 位作者 彭日荷 熊爱生 蔡斌 徐锦涛 金晓芬 张斌 高峰 高建杰 章镇 姚泉洪 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期39-44,共6页
克隆了葡萄查尔酮合成酶基因4(CHS4),并采用半定量RT-PCR技术,以actin为内参,分析了CHS4在巨峰葡萄果实发育阶段不同组织的表达。对CHS4的序列分析表明:CHS4含有1个内含子,2个外显子;与CHS1、CHS2、CHS3在核苷酸水平的同源性分别为99.3%... 克隆了葡萄查尔酮合成酶基因4(CHS4),并采用半定量RT-PCR技术,以actin为内参,分析了CHS4在巨峰葡萄果实发育阶段不同组织的表达。对CHS4的序列分析表明:CHS4含有1个内含子,2个外显子;与CHS1、CHS2、CHS3在核苷酸水平的同源性分别为99.3%、92.6%和76.0%。半定量RT-PCR分析结果表明:CHS4在果皮、果肉、种子、叶片和根系中均有表达,在花后30d的果皮中表达强烈,随后迅速降低,到花后70d表达又增强;CHS4在花后30～45d的果肉中表达强烈,随后迅速降低;在花后45d的种子中也表达强烈,随果实发育,其表达逐渐下降。高温处理抑制CHS4在巨峰葡萄幼叶中的表达,但诱导CHS4在幼根的表达。 展开更多
关键词 查尔酮合成酶基因4 巨峰葡萄 克隆 RT-PCR
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