小麦ent-柯巴基焦磷酸合酶基因TaCPS1的克隆与荧光定量分析

1

作者 郭庆东 李全权 +5 位作者 田秋菊 钱艳丽 许田 杨艳林 王洪刚 封德顺 《山东农业科学》 2016年第7期1-9,共9页

ent-柯巴基焦磷酸合酶(ent-copalyl diphosphate synthase,CPS)是植保素合成途径中的关键酶。本研究利用mRNA差异显示技术,从小偃麦异附加系种质SN6306中得到一个与抗白粉病相关的Ta CPS1基因。该基因ORF长2 394 bp,编码797个氨基酸。... ent-柯巴基焦磷酸合酶(ent-copalyl diphosphate synthase,CPS)是植保素合成途径中的关键酶。本研究利用mRNA差异显示技术,从小偃麦异附加系种质SN6306中得到一个与抗白粉病相关的Ta CPS1基因。该基因ORF长2 394 bp,编码797个氨基酸。对其进行生物信息学分析表明,该序列推导的蛋白无信号肽,主要由亲水性氨基酸组成,可能存在于细胞质中;其具有类异戊二烯合成酶超家族的保守结构域。荧光定量分析结果表明,SN6306中的Ta CPS1基因在白粉病菌E09诱导处理72 h时,表达量上调了大约45倍,但感病亲本烟农15(YN15)基本不受诱导。在茉莉酸甲酯诱导下,Ta CPS1基因表达量升高将近15倍;在水杨酸诱导下,Ta CPS1基因表达量升高将近2.4倍。推测Ta CPS1基因可能参与小麦抗白粉病机制中的水杨酸和茉莉酸激素调节途径。 展开更多

关键词 小麦 ent-柯巴基焦磷酸合酶 Tacps1 基因克隆 生物信息学分析 荧光定量PCR 白粉病抗性

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转外源法呢基焦磷酸合酶基因烟草抗赤星病研究 被引量：15

2

作者 崔红 刘海礁 李雪君 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期817-820,I0001,共5页

将已克隆的薄荷(Mentha spicataL.)法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,fps)的cDNA插入载体,构建CaMV35S启动子驱动下的植物表达载体pBinARfps。用捕获该质粒的根癌农杆菌菌株LBA4404与烟草叶片外植体共培养,并在附加30 mg... 将已克隆的薄荷(Mentha spicataL.)法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,fps)的cDNA插入载体,构建CaMV35S启动子驱动下的植物表达载体pBinARfps。用捕获该质粒的根癌农杆菌菌株LBA4404与烟草叶片外植体共培养,并在附加30 mg/L Kan的MS+0.1 mg/L IAA+1.5 mg/L BA培养基上诱导植株分化,再生芽在附加30 mg/L Kan的MS培养基上生根,再生植株。Kan阳性植株经PCR-Southern检测筛选,得到5株PCR阳性植株(K-4,K-6,K-17,K-19,K-35),证明外源fps基因在烟草基因组中的整合;Northern blot检测证明外源fps基因在转录水平进行了表达;离体叶片接种实验表明,转基因植株(T1代)对赤星病抗性明显提高。这表明fps基因在植物抗病基因工程中具有潜在应用价值。 展开更多

关键词 烟草 法呢基焦磷酸合酶 基因转导 赤星病

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烟草法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及序列分析 被引量：8

3

作者 段娜娜 岳彩鹏 +1 位作者 苗红梅 朱大恒 《烟草科技》 EI CAS 北大核心 2010年第1期56-59,共4页

采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以烟草品种K326叶片总RNA为模板扩增出烟草法呢基焦磷酸合酶基因fps,克隆至载体PMD19-T中。序列分析表明,所克隆的cDNA序列全长702 bp,共编码234个氨基酸残基,其核酸序列与玉米、杜仲、拟南芥... 采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以烟草品种K326叶片总RNA为模板扩增出烟草法呢基焦磷酸合酶基因fps,克隆至载体PMD19-T中。序列分析表明,所克隆的cDNA序列全长702 bp,共编码234个氨基酸残基,其核酸序列与玉米、杜仲、拟南芥、青蒿、Nicotiana sanderae×Nicotiana langa-dorffii杂交种的法呢基焦磷酸合酶基因的核酸序列同源性分别为74%,76%,77%,80%和97%。 展开更多

关键词 烟草 法呢基焦磷酸合酶 基因克隆

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法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及双元载体的构建 被引量：7

4

作者 崔红 郭小玲 +1 位作者 时向东 刘国顺 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期253-255,共3页

以留兰香(MenthaspicataL)为材料,利用RT PCR方法克隆法呢基焦磷酸合酶基因(fps)的cDNA,核酸序列分析表明,该基因的编码区长1050bp,编码349个氨基酸.进一步将fps基因插入植物表达载体BinAR,酶切鉴定及测序结果都证明fps的植物双元表达... 以留兰香(MenthaspicataL)为材料,利用RT PCR方法克隆法呢基焦磷酸合酶基因(fps)的cDNA,核酸序列分析表明,该基因的编码区长1050bp,编码349个氨基酸.进一步将fps基因插入植物表达载体BinAR,酶切鉴定及测序结果都证明fps的植物双元表达载体构建成功,为fps基因在烟草中的异源表达奠定了基础. 展开更多

关键词 法呢基焦磷酸合酶基因 克隆 双元载体 载体构建 留兰香 RT-CR方法 异戊二烯途径 烟草

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刺五加法呢基焦磷酸合酶基因的表达及其与皂苷含量的相关性分析 被引量：6

5

作者 周秘 柴丽花 +1 位作者 修乐山 邢朝斌 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第12期106-109,共4页

根据刺五加法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的cDNA序列信息,设计特异性引物,利用半定量RT-PCR技术,对刺五加FPS基因在不同产地、不同器官、不同发育时期及茉莉酸甲酯(MeJA)处理后的表达情况进行分析。结果表明... 根据刺五加法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的cDNA序列信息,设计特异性引物,利用半定量RT-PCR技术,对刺五加FPS基因在不同产地、不同器官、不同发育时期及茉莉酸甲酯(MeJA)处理后的表达情况进行分析。结果表明,FPS基因在不同产地、时期、器官及MeJA处理后的刺五加中均有表达,但表达量存在显著差异。FPS在萌芽期的表达量最高,盛花期的表达量最低,两者比值为4.19且差异显著;本溪、珲春、鸡西、雾灵山、穆棱、梅河口、伊通产地刺五加的FPS相对表达量依次降低;在不同器官中以叶的表达量最高;MeJA处理后FPS的表达量比用蒸馏水处理的对照组均有显著提高。FPS的相对表达量与刺五加叶器官的皂苷含量存在显著的正相关关系。 展开更多

关键词 刺五加 法呢基焦磷酸合酶基因 表达分析 皂苷

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普通烟草茄尼基焦磷酸合酶基因NtSPS的克隆和表达分析 被引量：2

6

作者 闫宁 赵韬智 +6 位作者 向德虎 龚达平 张洪博 杜咏梅 刘新民 张忠锋 刘艳华 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2016年第3期45-51,共7页

为揭示烟草茄尼基焦磷酸合酶(Nicotiana tabacum solanesyl diphosphate synthase,NtSPS)在烟草茄尼醇生物合成中的作用,分离了烟草品种红花大金元茄尼醇生物合成关键基因NtSPS1和NtSPS2,并对其进行了序列比对、进化分析和亚细胞定位分... 为揭示烟草茄尼基焦磷酸合酶(Nicotiana tabacum solanesyl diphosphate synthase,NtSPS)在烟草茄尼醇生物合成中的作用,分离了烟草品种红花大金元茄尼醇生物合成关键基因NtSPS1和NtSPS2,并对其进行了序列比对、进化分析和亚细胞定位分析,研究了其在烟草植株不同器官的表达水平以及烟草植株不同器官的茄尼醇、叶绿素含量与NtSPS表达水平的相关性。结果表明,NtSPS1和NtSPS2开放读码框(ORF)大小分别为1209、1206 bp,分别编码402、401个氨基酸;NtSPS1和NtSPS2均存在2个保守的DDxxD结构域,这与NtSPS功能发挥相关;NtSPS1、NtSPS2与番茄SPS同源性较高,这与烟草、番茄均为茄科作物有关;NtSPS1、NtSPS2均定位于叶绿体中;烟草植株不同器官NtSPS1和NtSPS2表达水平排序为:叶>茎>根,这与茄尼醇、叶绿素在烟草植株中的分布规律一致。本研究可为NtSPS调控烟草茄尼醇生物合成机制的深入研究奠定基础。 展开更多

关键词 烟草 茄尼醇 茄尼基焦磷酸合酶 基因表达 叶绿素

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青蒿高产株系001法呢基焦磷酸合酶基因的克隆、原核表达及酶活性测定 被引量：2

7

作者 韩军丽 李振秋 +1 位作者 叶和春 李国凤 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期71-75,共5页

法呢基焦磷酸合酶(FPS)是治疗疟疾的特效药物——青蒿素生物合成途径的关键酶。运用RT-PCR方法从青蒿高产株系001中克隆法呢基焦磷酸合酶基因;构建His标签融合蛋白FPS表达载体,进行原核诱导表达、蛋白纯化及酶活性测定的研究。结果表明... 法呢基焦磷酸合酶(FPS)是治疗疟疾的特效药物——青蒿素生物合成途径的关键酶。运用RT-PCR方法从青蒿高产株系001中克隆法呢基焦磷酸合酶基因;构建His标签融合蛋白FPS表达载体,进行原核诱导表达、蛋白纯化及酶活性测定的研究。结果表明:克隆的FPS基因和文献已报道的2个青蒿FPS基因编码的氨基酸序列的同源性分别为98.83%和99.42%;原核诱导表达的His标签融合蛋白FPS的表达量高、可溶性好,具有FPS酶活性。 展开更多

关键词 法呢基焦磷酸合酶(FPS) 青蒿(Artemisia annua L.) 基因克隆 原核表达 蛋白纯化

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绞股蓝法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及其序列分析 被引量：8

8

作者 蒋东 唐银琳 +1 位作者 陶晨陈 吴耀生 《生物技术通讯》 CAS 2014年第2期198-202,共5页

目的：克隆并分析绞股蓝法呢基焦磷酸合酶（FPS）基因的全长序列。方法：参照罗汉果法呢基焦磷酸合酶基因，设计扩增绞股蓝FPS基因的3’RACE引物，采用3＇RACE和5＇RACE法克隆绞股蓝FPS基因全长eDNA。结果：获得绞股蓝FPS基因全长eDNA... 目的：克隆并分析绞股蓝法呢基焦磷酸合酶（FPS）基因的全长序列。方法：参照罗汉果法呢基焦磷酸合酶基因，设计扩增绞股蓝FPS基因的3’RACE引物，采用3＇RACE和5＇RACE法克隆绞股蓝FPS基因全长eDNA。结果：获得绞股蓝FPS基因全长eDNA序列共1288个核苷酸，包含一个1026核苷酸的开放读框，编码342个氨基酸残基，推断该蛋白的相对分子质量为3．94x10^4。NCBIBlast结果显示绞股蓝FPS基因编码蛋白的氨基酸序列与已知的植物FPS氨基酸序列的同源性为91％～74％，核酸序列的同源性为88％-78％。结论：克隆了绞股蓝FPS基因全长eDNA序列，为进一步研究绞股蓝FPS基因的表达及三萜皂苷合成通路关键酶分子的进化奠定了基础。 展开更多

关键词 绞股蓝 法呢基焦磷酸合酶 基因克隆 序列分析

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独行菜法尼基焦磷酸合酶基因的克隆与原核表达 被引量：1

9

作者 马利刚 赵乐 +3 位作者 付小蝶 冯卫生 匡海学 郑晓珂 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第9期92-97,共6页

从独行菜(Lepidium apetalum)中克隆强心苷合成途径的法尼基焦磷酸合酶(FPS)基因,并在大肠杆菌中表达,为进一步研究独行菜强心苷的合成途径提供参考。分析前期获得的独行菜幼苗转录组数据,选择其中注释为FPS且具有完整开放阅读框的序列... 从独行菜(Lepidium apetalum)中克隆强心苷合成途径的法尼基焦磷酸合酶(FPS)基因,并在大肠杆菌中表达,为进一步研究独行菜强心苷的合成途径提供参考。分析前期获得的独行菜幼苗转录组数据,选择其中注释为FPS且具有完整开放阅读框的序列,从独行菜叶片c DNA中通过PCR克隆该序列,并进行序列分析。结果表明,克隆得到独行菜FPS基因的cDNA序列,Gen Bank登录号KY366218,命名为La FPS。序列长度为1 332 bp,含有1 161 bp的开放阅读框,推测编码386个氨基酸。La FPS蛋白可能不含跨膜结构,定位于线粒体中,含有聚异戊二烯合成酶结构域。La FPS蛋白氨基酸序列与拟南芥(Arabidopsis thaliana)FPS1蛋白相似性高达92%,进化树分析结果表明,La FPS与同为十字花科的拟南芥FPS1、遏蓝菜(Noccaea caerulescens)FPS1、高山南芥(Arabis alpina)FPS亲缘关系最近。构建的载体p ET-32a-La FPS可在大肠杆菌中成功诱导表达。表明成功克隆了独行菜FPS基因,并建立了其原核表达体系。 展开更多

关键词 独行菜 法尼基焦磷酸合酶 基因克隆 序列分析 原核表达

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龙脑樟法呢基焦磷酸合酶基因克隆及表达模式分析 被引量：1

10

作者 杨琳 张杭颖 +3 位作者 杨帆 朱泽榕 李秋妹 张君诚 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2022年第10期1998-2005,共8页

法呢基焦磷酸合酶(farnesyl pyrophosphate synthetase,FPS)是萜类及其衍生物合成的关键限速酶。本研究以龙脑樟为材料,基于转录组测序,克隆CcFPS基因,利用生物信息学软件分析该基因编码的氨基酸序列特征,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)检... 法呢基焦磷酸合酶(farnesyl pyrophosphate synthetase,FPS)是萜类及其衍生物合成的关键限速酶。本研究以龙脑樟为材料,基于转录组测序,克隆CcFPS基因,利用生物信息学软件分析该基因编码的氨基酸序列特征,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测CcFPS基因的表达,分析龙脑樟根、茎、叶中该基因的表达与总萜含量的关系。结果表明:CcFPS基因的开放阅读框为1053bp,编码350个氨基酸,分子量为40.4kDa,等电点pI为5.25,亲水性平均值(GRAVY)为-0.299。氨基酸同源性与沉水樟最高(98.86%),含有7个相同的保守结构域和2个富含天冬氨酸的基序[DDXX(XX)D]。二级结构α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲的比例分别为61.14%、6.57%、2.86%和29.43%,三级结构预测与沉水樟极其相似。系统发育树(NJ树)结果显示,CcFPS蛋白与同为樟科的沉水樟、山苍子的FPS处于同一个分支上。CcFPS基因在龙脑樟的根、茎、叶中均有表达,且表达具有组织特异性,在叶中的相对表达量最高,根中次之,茎中最低。在CcFPS蛋白调控的萜类物质代谢通路中,茎中的总萜含量最高,根中次之,叶中最低。龙脑樟FPS基因表达与总萜含量具有相关性,为进一步解析FPS基因在龙脑樟萜类化合物合成过程中的作用提供参考。 展开更多

关键词 龙脑樟 法呢基焦磷酸合酶(FPS) 基因表达 总萜

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杜仲2-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合酶基因全长cDNA克隆与序列分析

11

作者 刘攀峰 乌云塔娜 +3 位作者 杜兰英 吴敏 黄海燕 杜红岩 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期410-416,共7页

2-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合酶（MDS）基因曾被认为是调控植物2-甲基-D-赤藓糖醇4-磷酸（MEP）途径的一个关键节点.为解析杜仲MDS基因序列信息和预测基因功能,以叶片cDNA为模板,采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）及cDNA末端快... 2-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合酶（MDS）基因曾被认为是调控植物2-甲基-D-赤藓糖醇4-磷酸（MEP）途径的一个关键节点.为解析杜仲MDS基因序列信息和预测基因功能,以叶片cDNA为模板,采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）及cDNA末端快速扩增（RACE）技术分离出杜仲MDS基因的cDNA克隆,并通过一系列生物信息学方法进行序列分析.结果表明：EuMDS基因cDNA全长976 bp,5＇端非编码区长119 bp,3＇端非编码区长146bp,编码236个氨基酸.推导EuMDS氨基酸序列中包含转运肽序列（A1～A56）以及多个植物MDS蛋白保守的功能位点（A84,A87,A89,A121,A213,A217,A221,A223,A228）.推导EuMDS蛋白二级结构中α-螺旋占40.3％,β-折叠占13.6％,螺环结构占46.2％.推导EuMDS蛋白三级结构由3个亚单位组成,并相互围绕形成1个分子内腔.系统进化分析表明EuMDS蛋白与啤酒花MDS蛋白亲缘关系最为接近.预测所克隆的EuMDS基因在杜仲萜类生物合成中发挥重要功能. 展开更多

关键词 林木育种学 杜仲 2-甲基-D-赤藓醇-2 4-环焦磷酸合酶(MDS) 基因 序列分析

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甘草酸合成生物学元件初探：甘草法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及序列分析

12

作者 李滢 牛云云 +3 位作者 宋经元 罗红梅 李秋实 孙超 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2013年第3期355-359,共5页

甘草酸是中药甘草的主要有效成分,法呢基焦磷酸合酶(FPS)是甘草酸合成途径中关键酶之一。根据甘草转录组数据设计引物,对FPS基因进行克隆,获得甘草FPS基因的全长编码序列。甘草FPS基因编码区全长1 029 bp,编码342个氨基酸残基。将甘草FP... 甘草酸是中药甘草的主要有效成分,法呢基焦磷酸合酶(FPS)是甘草酸合成途径中关键酶之一。根据甘草转录组数据设计引物,对FPS基因进行克隆,获得甘草FPS基因的全长编码序列。甘草FPS基因编码区全长1 029 bp,编码342个氨基酸残基。将甘草FPS基因与GenBank中其他植物FPS基因序列进行比对分析,发现其核酸序列与鹰嘴豆、苜蓿、蒺藜苜蓿、大豆、百脉根的序列相似度最高,分别达到94%、94%、93%、93%、92%。进一步的系统进化分析表明FPS基因具有较高的保守性,其序列进化树与植物分类一致。 展开更多

关键词 甘草 法呢基焦磷酸合酶 甘草酸 基因克隆

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病毒诱导基因沉默鉴定穿心莲内酯生物合成关键酶ApCPS功能 被引量：4

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作者 谌琴琴 刘琴 +2 位作者 李聪聪 付羽萍 王强 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期17-22,共6页

该研究采用病毒诱导基因沉默技术(VIGS),以生长到第8片真叶期的穿心莲植株为实验材料,沉默参与穿心莲内酯生物合成的ent-柯巴基焦磷酸合酶基因(ApCPS),用半定量和荧光定量PCR检测病毒诱导沉默后ApCPS及其上游基因的表达,用HPLC法检测Ap... 该研究采用病毒诱导基因沉默技术(VIGS),以生长到第8片真叶期的穿心莲植株为实验材料,沉默参与穿心莲内酯生物合成的ent-柯巴基焦磷酸合酶基因(ApCPS),用半定量和荧光定量PCR检测病毒诱导沉默后ApCPS及其上游基因的表达,用HPLC法检测ApCPS沉默后穿心莲内酯的积累变化,同时检测茉莉酸甲酯(MeJA)处理后ApCPS及上游基因的表达,以全面分析穿心莲内酯代谢以及ApCPS在穿心莲内酯生物合成中的作用机制,验证其在植物体内的功能。结果显示:(1)ApCPS基因被成功沉默,基因表达显著下调,进而引起上游牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因(GGPS)的表达下调,而3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因(HMGR)和1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因(DXS)的表达未受影响。(2)ApCPS基因沉默15d后穿心莲内酯积累量显著下降,表明ApCPS是穿心莲内酯生物合成关键酶基因,且能够负反馈影响上游基因表达。(3)茉莉酸甲酯(MeJA)显著诱导ApCPS及上游基因HMGR、DXS和GGPS的表达,表明穿心莲内酯生物合成基因受到MeJA的广泛调控。该研究首次使用VIGS证明ApCPS参与到穿心莲内酯生物合成,为利用该技术鉴定穿心莲内酯生物合成途径中其他基因功能奠定了基础。 展开更多

关键词 VIGS ent-柯巴基焦磷酸合酶 穿心莲内酯 生物合成 基因表达

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卷叶贝母法尼基焦磷酸合酶基因的克隆及表达分析 被引量：3

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作者 李锐 陈晓仪 +2 位作者 张阳 张甜甜 赵琦 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1111-1116,共6页

为了探究卷叶贝母(Fritillaria cirrhosa)法尼基焦磷酸合酶基因(FcFPPS)是否参与甾类生物碱合成、萜类合成等代谢过程,该研究基于转录组测序结果,通过PCR技术克隆卷叶贝母FPPS基因(FcFPPS)开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)序列,运用... 为了探究卷叶贝母(Fritillaria cirrhosa)法尼基焦磷酸合酶基因(FcFPPS)是否参与甾类生物碱合成、萜类合成等代谢过程,该研究基于转录组测序结果,通过PCR技术克隆卷叶贝母FPPS基因(FcFPPS)开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)序列,运用生物信息学方法对该基因进行分析,预测其编码蛋白的结构与功能,并通过qRT-PCR检测FcFPPS基因在野生鳞茎和再生鳞茎(通过激素组合刺激获得的组织培养物)中的表达情况,以及利用煎煮法测定野生鳞茎和再生鳞茎的总生物碱含量。结果表明:获得了1 059bp的FcFPPS ORF片段,编码352个氨基酸,并与NCBI上公布的麝香百合、虎眼万年青、春兰等植物FPPS蛋白的相似性在85%以上;对FcFPPS蛋白的二级、三级结构预测发现FcFPPS蛋白主要由α螺旋构成;qRT-PCR与总生物碱含量测定结果显示FcFPPS基因的表达水平与总生物碱含量的变化趋势一致,都是再生鳞茎高于野生鳞茎。FcFPPS蛋白质特征区及同源性等生物信息学分析结合qRT-PCR的测定结果证明FcFPPS可能是一个有生物学功能的蛋白质,这为后续利用基因工程手段提高卷叶贝母中生物碱含量奠定了理论基础。 展开更多

关键词 卷叶贝母 法尼基焦磷酸合酶 克隆 生物信息学 基因表达

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苹果MdCPS基因的克隆、定位及其在柱型/普通型间的表达差异分析 被引量：1

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作者 田义轲 白牡丹 +2 位作者 王彩虹 刘云龙 陈宝印 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期21-27,共7页

为研究赤霉素合成途径关键酶基因,了解果树的矮化机理。以苹果品种富士当年生新梢的茎尖为试材,以苹果基因组数据库为依据,克隆了编码苹果CPS的基因Md CPS（Gen Ban K登录号：KC433942.1）。该基因g DNA序列含有15个外显子和14个内含子... 为研究赤霉素合成途径关键酶基因,了解果树的矮化机理。以苹果品种富士当年生新梢的茎尖为试材,以苹果基因组数据库为依据,克隆了编码苹果CPS的基因Md CPS（Gen Ban K登录号：KC433942.1）。该基因g DNA序列含有15个外显子和14个内含子,其编码序列（Coding sequence,CDS）长度为2 400 bp,共编码799个氨基酸。在已发表的金冠苹果基因组中,与该基因相对应的转录本是MDP0000147908,它的定位区间为chr11：32433834-32439214。同源性分析表明,Md CPS与其他植物的CPS间有较高的相似性（49%-67%）。以杂交组合富士（普通型）×舞姿（柱型）的亲本品种及F1后代当年生新梢的茎尖组织为试材,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析表明,尽管该基因在柱型亲本中的表达水平显著低于普通型亲本,但在其后代的柱型与普通型群体间差异并不明显。同时,在柱型杂种及其普通型突变体间的分析结果也表明,Md CPS的表达水平与柱型性状没有明显的相关性。可见,柱型苹果茎尖组织中活性赤霉素含量偏低受其合成早期步骤关键酶基因Md CPS的影响不大。 展开更多

关键词 苹果 赤霉素 柯巴焦磷酸合酶基因(cps) 柱型性状

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棉花基因组数据库中CPS&KS基因的查找与分析

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作者 赵亮 狄佳春 陈旭升 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期27-33,共7页

为了探究赤霉素合成关键酶CPS&KS类基因在棉花中的分布情况,分析了已发表的拟南芥CPS&KS基因编码的蛋白质氨基酸序列,发现该类基因存在2个保守结构域,Terpene_synth和Terpene_synth_C,其在Pfam数据库中的种子文件分别为PF01397... 为了探究赤霉素合成关键酶CPS&KS类基因在棉花中的分布情况,分析了已发表的拟南芥CPS&KS基因编码的蛋白质氨基酸序列,发现该类基因存在2个保守结构域,Terpene_synth和Terpene_synth_C,其在Pfam数据库中的种子文件分别为PF01397和PF03936。利用软件HMMER中的Hmmsearch程序在雷蒙德氏棉蛋白质数据库中调取72条序列,通过与拟南芥中的CPS&KS基因序列进行比对,最终在雷蒙德氏棉基因组中筛选到5个CPS&KS候选基因,这5个基因与四倍体棉花TM-1基因组At和Dt亚组的10个基因具有同源关系。通过对赤霉素敏感的棉花超矮杆突变体赤霉素处理前后转录组数据库分析比对,最终确定2个KS候选基因在转录组中表现为上调作用。 展开更多

关键词 棉花 赤霉素合成酶 柯巴基焦磷酸合酶(cps) 内根-贝壳杉烯合酶(KS)

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热处理对转基因秸秆中重组蛋白和重组DNA的降解作用

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作者 颜晶莹 倪亮 +1 位作者 沈星宇 李玉 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2079-2088,共10页

随着转基因作物种植面积的不断扩大,如何高效处理转基因秸秆成为了一个重要的科学问题。未经处理的转基因秸秆中的重组蛋白和重组DNA可以在土壤中存在很长时间,并对土壤生物多样性产生潜在负面影响。因此寻找一个既节约成本又对环境无... 随着转基因作物种植面积的不断扩大,如何高效处理转基因秸秆成为了一个重要的科学问题。未经处理的转基因秸秆中的重组蛋白和重组DNA可以在土壤中存在很长时间,并对土壤生物多样性产生潜在负面影响。因此寻找一个既节约成本又对环境无害的秸秆处理方法非常重要。高温处理是降解转基因秸秆重组蛋白和重组DNA的有效手段,但目前对处理温度和处理时间的选择还缺乏系统的研究。本研究通过试纸条、聚合酶链反应(PCR)等方法检测不同温度和时间处理的转基因作物秸秆中重组蛋白和重组DNA的水平。结果表明,转基因大豆、棉花、玉米、水稻的秸秆在50℃处理3 h后,其体内的抗除草剂蛋白草胺膦乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase, PAT)等重组蛋白基本降解;但相同温度下,重组DNA的降解则需要4 d时间;提高处理温度可以在一定程度上缩短重组蛋白和重组DNA降解所需的时间。50℃处理4 d的条件在实际生产中通过堆肥就能实现。本研究从分子生物学的角度为转基因秸秆处理提供了依据。 展开更多

关键词 转基因秸秆 重组蛋白 重组DNA 草胺膦乙酰转移酶(PAT) 5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因(cp4-EPSPS) BT基因

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杜仲法呢基焦磷酸合酶EuFPS1互作蛋白筛选及分析

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作者 曾琴 梁青 赵丹 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期585-595,共11页

法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)是杜仲胶生物合成途径中的关键酶之一,EuFPS1基因对杜仲胶积累有促进作用,但对其调控的分子机制尚不清楚。本研究采用SMART同源重组技术构建了杜仲酵母cDNA表达文库,以EuFPS1基因... 法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)是杜仲胶生物合成途径中的关键酶之一,EuFPS1基因对杜仲胶积累有促进作用,但对其调控的分子机制尚不清楚。本研究采用SMART同源重组技术构建了杜仲酵母cDNA表达文库,以EuFPS1基因为诱饵筛选互作蛋白,经测序和BLAST比对初步筛选出41个互作蛋白。GO和KEGG分析结果显示,互作蛋白主要参与卟啉化合物代谢调控、紫外线与冷响应、叶片发育等生物进程,MEP代谢、卟啉代谢、泛素介导的蛋白质水解等代谢途径。选取3个互作蛋白(EuUFM1、EuLHC1、EuKS1)进一步验证互作关系,qRT-PCR分析发现EuFPS1与EuUFM1、EuLHC1、EuKS1基因在杜仲不同组织中均表达,其中EuFPS1与EuKS1的表达呈负相关。本研究为解析杜仲EuFPS1及其与互作蛋白的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 杜仲 法呢基焦磷酸合酶 酵母双杂交 互作蛋白 基因表达

原文传递

杜仲胶合成相关基因EuFPS的克隆及序列分析 被引量：12

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作者 周明兵 肖月华 +2 位作者 朱冬雪 裴炎 赵德刚 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第1期66-71,共6页

本文采用逆转录—聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,以杜仲树叶总RNA为模板扩增出杜仲法呢基焦磷酸合酶基因EuFPS ,克隆至质粒 pUCm T中。序列分析表明 ,所克隆的cDNA序列全长 12 71bp ,开放阅读框共编码 32 0个氨基酸残基 ,其核酸序列与... 本文采用逆转录—聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,以杜仲树叶总RNA为模板扩增出杜仲法呢基焦磷酸合酶基因EuFPS ,克隆至质粒 pUCm T中。序列分析表明 ,所克隆的cDNA序列全长 12 71bp ,开放阅读框共编码 32 0个氨基酸残基 ,其核酸序列与拟南芥菜、银胶菊和巴西橡胶树FPP合酶的序列同源性分别为 81% ,87% ,82 %。 展开更多

关键词 杜仲胶 合成基因 EuFPS 基因克隆 序列分析 RT-PCR 法呢基焦磷酸合酶

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fps基因过量表达对烟叶类胡萝卜素生物合成的影响 被引量：7

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作者 王冰莹 杨永霞 +3 位作者 闫鼎 滑夏华 冯琦 崔红 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第2期44-48,共5页

为探索法呢基焦磷酸合酶(FPS)基因过量表达对烤烟叶片类胡萝卜素生物合成的影响,利用RT-PCR技术,比较了4个fps转基因株系(K-4、K-6、K-17、K-35)及其非转基因对照中参与类胡萝卜素生物合成的关键酶基因的表达强度,并利用LC/MS技术,分析... 为探索法呢基焦磷酸合酶(FPS)基因过量表达对烤烟叶片类胡萝卜素生物合成的影响,利用RT-PCR技术,比较了4个fps转基因株系(K-4、K-6、K-17、K-35)及其非转基因对照中参与类胡萝卜素生物合成的关键酶基因的表达强度,并利用LC/MS技术,分析了叶片发育过程中类胡萝卜素及其各组分含量的变化规律。结果表明:外源fps在烟草中的过量表达,对烟叶类胡萝卜素合成相关基因Psy、Lycb皆有正向调节作用,但对Zds的表达影响不大;化学分析表明,fps转基因烤烟株系中,总类胡萝卜素及其各组分的含量在叶片不同发育期均高于未转基因K326对照株系。说明外源fps基因在烟草中的过表达,对类胡萝卜素生物合成具有促进作用。 展开更多

关键词 烟草 法呢基焦磷酸合酶 转基因 类胡萝卜素

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