[目的]探究ENO1通过NCOA4对胶质母细胞瘤(GBM)细胞铁死亡的调节机制。[方法]qRT-PCR和Western blot检测GBM组织和正常组织中ENO1的表达。人GBM细胞系U251细胞分为对照组、si-ENO1-NC组、si-ENO1-1组、si-ENO1-2组、si-ENO1+si-NCOA4-NC...[目的]探究ENO1通过NCOA4对胶质母细胞瘤(GBM)细胞铁死亡的调节机制。[方法]qRT-PCR和Western blot检测GBM组织和正常组织中ENO1的表达。人GBM细胞系U251细胞分为对照组、si-ENO1-NC组、si-ENO1-1组、si-ENO1-2组、si-ENO1+si-NCOA4-NC组、si-ENO1+si-NCOA4组,分别转染siRNA-ENO1-NC、siRNA-ENO1、siRNA-NCOA4-NC或siRNA-NCOA4序列,qRT-PCR和Western blot验证ENO1或NCOA4的表达;Western blot检测铁蛋白重多肽1(FTH1)蛋白表达;MTT法分析U251细胞增殖能力;试剂盒检测U251细胞ROS、MDA、Fe^(2+)含量及线粒体膜电位;透射电镜观察线粒体形态;PI染色检测U251细胞死亡率。[结果]与正常组织相比,GBM组织中ENO1 mRNA和蛋白表达较高(P<0.05)。与对照组和si-ENO1-NC组相比,转染si-ENO1可降低ENO1 mRNA和蛋白表达、FTH1蛋白表达以及24、48、72 h的细胞增殖活力(24 h OD值:0.35±0.05 vs 0.48±0.09,0.35±0.05 vs 0.50±0.08;48 h OD值:0.56±0.07 vs0.98±0.13,0.56±0.07 vs 1.05±0.10;72 h OD值:0.69±0.08 vs 1.35±0.14,0.69±0.08 vs 1.38±0.11)、红/绿荧光比值(3.46±0.79 vs 11.14±1.53,3.46±0.79 vs 10.97±1.82)(P<0.05),增加ROS(7.13±0.69 vs 1.00±0.12,7.13±0.69 vs 0.97±0.16)、MDA(5.61±0.53 vs 1.85±0.26,5.61±0.53 vs 1.83±0.42)、Fe^(2+)含量(6.79±0.78 vs 2.41±0.32,6.79±0.78 vs 2.46±0.47)、细胞死亡率(25.48±3.17 vs 7.31±0.84,25.48±3.17 vs 7.24±1.02)、NCOA4 mRNA和蛋白表达(P均<0.05),si-ENO1的上述作用均可被si-NCOA4逆转。[结论]ENO1缺失可上调NCOA4表达,降低FTH1蛋白水平,进而促进ROS、MDA及铁释放,诱导GBM细胞铁死亡。展开更多
文摘[目的]探究ENO1通过NCOA4对胶质母细胞瘤(GBM)细胞铁死亡的调节机制。[方法]qRT-PCR和Western blot检测GBM组织和正常组织中ENO1的表达。人GBM细胞系U251细胞分为对照组、si-ENO1-NC组、si-ENO1-1组、si-ENO1-2组、si-ENO1+si-NCOA4-NC组、si-ENO1+si-NCOA4组,分别转染siRNA-ENO1-NC、siRNA-ENO1、siRNA-NCOA4-NC或siRNA-NCOA4序列,qRT-PCR和Western blot验证ENO1或NCOA4的表达;Western blot检测铁蛋白重多肽1(FTH1)蛋白表达;MTT法分析U251细胞增殖能力;试剂盒检测U251细胞ROS、MDA、Fe^(2+)含量及线粒体膜电位;透射电镜观察线粒体形态;PI染色检测U251细胞死亡率。[结果]与正常组织相比,GBM组织中ENO1 mRNA和蛋白表达较高(P<0.05)。与对照组和si-ENO1-NC组相比,转染si-ENO1可降低ENO1 mRNA和蛋白表达、FTH1蛋白表达以及24、48、72 h的细胞增殖活力(24 h OD值:0.35±0.05 vs 0.48±0.09,0.35±0.05 vs 0.50±0.08;48 h OD值:0.56±0.07 vs0.98±0.13,0.56±0.07 vs 1.05±0.10;72 h OD值:0.69±0.08 vs 1.35±0.14,0.69±0.08 vs 1.38±0.11)、红/绿荧光比值(3.46±0.79 vs 11.14±1.53,3.46±0.79 vs 10.97±1.82)(P<0.05),增加ROS(7.13±0.69 vs 1.00±0.12,7.13±0.69 vs 0.97±0.16)、MDA(5.61±0.53 vs 1.85±0.26,5.61±0.53 vs 1.83±0.42)、Fe^(2+)含量(6.79±0.78 vs 2.41±0.32,6.79±0.78 vs 2.46±0.47)、细胞死亡率(25.48±3.17 vs 7.31±0.84,25.48±3.17 vs 7.24±1.02)、NCOA4 mRNA和蛋白表达(P均<0.05),si-ENO1的上述作用均可被si-NCOA4逆转。[结论]ENO1缺失可上调NCOA4表达,降低FTH1蛋白水平,进而促进ROS、MDA及铁释放,诱导GBM细胞铁死亡。
