PNRC1核定位信号序列的鉴定 被引量：2

1

作者 王元忠 李渝萍 +3 位作者 陈敏 陈彬 陈健 周度金 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期35-39,共5页

为鉴定富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)分子的核定位信号序列(nuclear localization signal sequence ,NLS) ,在生物信息学方法预测的基础上,先构建野生型PNRC1及删除预测NLS的PNRC1突变体的绿色荧光蛋白(GFP)重组表达载体,转染细... 为鉴定富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)分子的核定位信号序列(nuclear localization signal sequence ,NLS) ,在生物信息学方法预测的基础上,先构建野生型PNRC1及删除预测NLS的PNRC1突变体的绿色荧光蛋白(GFP)重组表达载体,转染细胞后通过激光共聚焦显微镜观察PNRC1分子在删除预测NLS后细胞内的定位变化.然后,将预测的NLS编码序列直接连到GFP表达载体上,以及将预测的NLS加到胞浆蛋白上构建其GFP重组表达载体,转染细胞,观察预测的NLS能否把构建的重组体都带到细胞核内.结果显示,删除PNRC1中预测的NLS后,其定位从细胞核中变为主要定位在细胞浆中,而预测的NLS能把GFP或胞浆中的蛋白带到细胞核中.研究表明,预测的NLS为PNRC1分子真正的NLS. 展开更多

关键词 富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1 核定位信号序列 辅活化子 绿色荧光蛋白

下载PDF 职称材料

ZNF219基因核定位信号序列的确定

2

作者 余少文 胡萍 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 2002年第2期19-21,共3页

ZNF2 19是新发现定位在人 14号染色体 q11带上的特异性锌指基因 .本实验对其核定位信号的识别说明其中有两组核定位序列存在 ,因此通过将ZNF2 19的核定位序列(NLS)与N -端增强绿色荧光蛋白载体 (pEGFP N1)构建成质粒 (pEGFP ZNF2 19NLS... ZNF2 19是新发现定位在人 14号染色体 q11带上的特异性锌指基因 .本实验对其核定位信号的识别说明其中有两组核定位序列存在 ,因此通过将ZNF2 19的核定位序列(NLS)与N -端增强绿色荧光蛋白载体 (pEGFP N1)构建成质粒 (pEGFP ZNF2 19NLS) ,然后瞬时转染到COS靶细胞 ,实验结果表明 :绿色荧光蛋白 (GFP) 展开更多

关键词 核定位信号 ZNF219 核定位序列 绿色荧光蛋白 人 睾丸 染色体 特异性锌指基因 细胞核

下载PDF 职称材料

双组分核定位信号介导Apoptin定位于肿瘤细胞核 被引量：2

3

作者 王清明 范国才 +2 位作者 陈吉中 陈惠鹏 贺福初 《生物技术通讯》 CAS 2004年第6期541-545,共5页

Apoptin是一种来源于鸡贫血病毒的小蛋白,在肿瘤细胞中定位于细胞核,而在正常细胞中主要分布于细胞质。根据预测,Apoptin分子中有2段序列(NLS1和NLS2)可能是单组分核定位信号。通过基因突变和缺失构建了Apoptin各种不同的核定位信号突... Apoptin是一种来源于鸡贫血病毒的小蛋白,在肿瘤细胞中定位于细胞核,而在正常细胞中主要分布于细胞质。根据预测,Apoptin分子中有2段序列(NLS1和NLS2)可能是单组分核定位信号。通过基因突变和缺失构建了Apoptin各种不同的核定位信号突变体和磷酸化突变体,利用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作标签,观察了其在肿瘤细胞中亚细胞定位的变化。结果表明,NLS1和NLS2单独均不是有效的单组分核定位信号。Apoptin的核定位信号是由NLS1和NLS2这2段序列共同组成的双组分核定位信号,缺少任何一段序列都会严重影响Apoptin在肿瘤细胞中的核定位。其中,NLS2对于Apoptin的核定位起主要作用。Apoptin的获得型磷酸化突变体并不能转位到正常细胞的细胞核中,而其磷酸化负突变体仍定位于肿瘤细胞的细胞核。另外,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂H7也不影响Apoptin在肿瘤细胞中的核定位。很可能,Apoptin的磷酸化并不参与调控其核定位信号的功能。 展开更多

关键词 肿瘤细胞 磷酸化 正常细胞 细胞核 介导 核定位信号 酶抑制剂 突变体 序列 亚细胞定位

下载PDF 职称材料

植物体内核定位信号介导的蛋白质核转运

4

作者 杨万年 张光华 《湖北民族学院学报（自然科学版）》 CAS 2001年第3期1-6,共6页

介绍了植物体内核定位信号的类型和结构特点及由核定位信号介导的蛋白质核转运机理 .

关键词 核蛋白转运 核定位信号 核孔复合物蛋白 植物 核蛋白定位 转运机理 核定位序列 核胞

下载PDF 职称材料

树突状细胞核蛋白1的核定位信号鉴定

5

作者 陶瑞松 徐忠东 王伟 《黄山学院学报》 2013年第3期36-38,共3页

根据GenBank数据库中树突状细胞核蛋白1(DCNP1)的基因序列,通过PCR体外扩增构建野生型和突变型DCNP1,与GFP结合后转染细胞表达,通过对全长的树突状细胞核蛋白1(DCNP1)及其缺失突变体进行真核表达,分析其117-119aa序列对DCNP1核定位的影... 根据GenBank数据库中树突状细胞核蛋白1(DCNP1)的基因序列,通过PCR体外扩增构建野生型和突变型DCNP1,与GFP结合后转染细胞表达,通过对全长的树突状细胞核蛋白1(DCNP1)及其缺失突变体进行真核表达,分析其117-119aa序列对DCNP1核定位的影响。结果表明117-119位氨基酸对该蛋白的核定位是必须的,缺失该部分的突变体在真核细胞中丧失了核定位的特性。 展开更多

关键词 重性抑郁障碍 树突状细胞核蛋白1 核定位信号序列

下载PDF 职称材料

野生型p27和核定位信号缺失型p27真核表达载体的构建及表达

6

作者 焦鑫艳 张英 +6 位作者 盛秋 张妙 杨泽健 高小倩 赵谦 王博 刘培军 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期516-521,共6页

目的构建人野生型p27(p27WT)和核定位信号缺失型p27(p27△NLS)的真核表达载体,并在HEK293T细胞中进行表达,为细胞中p27核浆定位的变化及其不同的生物学功能研究提供细胞基础。方法提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录cDNA后,分别进行p2... 目的构建人野生型p27(p27WT)和核定位信号缺失型p27(p27△NLS)的真核表达载体,并在HEK293T细胞中进行表达,为细胞中p27核浆定位的变化及其不同的生物学功能研究提供细胞基础。方法提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录cDNA后,分别进行p27全长和非NLS区片段的PCR扩增,获得p27WT全长(CDKN1B,NM_004064.5)和p27△NLS编码区序列,分别将其克隆至真核表达载体pCMV-Blank,经菌液PCR、双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染HEK293T细胞,48 h时分别提取胞核蛋白和胞质蛋白,Western blotting检测p27在细胞质和细胞核中的蛋白表达。结果测序结果显示,真核表达载体pCMV-Blank中插入的p27WT序列和p27△NLS序列均与NM_004064.5序列相一致。pCMV-p27WT转染HEK293T细胞后,细胞总p27蛋白表达显著增加,核浆分离检测发现其在细胞质和细胞核中均表达;而pCMV-p27△NLS转染HEK293T细胞的总p27蛋白表达也显著增加,核浆分离检测发现其主要在细胞质中表达。结论成功构建人p27WT和p27△NLS的真核表达载体,并在HEK293T细胞中成功表达,为p27蛋白在肿瘤细胞周期中的功能研究提供了细胞基础。 展开更多

关键词 P27 CDKN1B 核定位信号序列 真核表达

下载PDF 职称材料

白介素6(IL-6)受体蛋白中核转运定位序列的研究(英文) 被引量：2

7

作者 宋伦 沈倍奋 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第10期1029-1032,共4页

目的:研究gp130胞内区的假定核定位序列(nuclearlocalizationsequence,NLS)是否具有核定位功能。方法:首先将编码SV40大T抗原NLS(阳性对照)和gp130胞内区假定NLS的cDNA分别插入真核表达载体pEGF-PN1,构建成表达质粒pSVNLSGFP和pGPNLSGF... 目的:研究gp130胞内区的假定核定位序列(nuclearlocalizationsequence,NLS)是否具有核定位功能。方法:首先将编码SV40大T抗原NLS(阳性对照)和gp130胞内区假定NLS的cDNA分别插入真核表达载体pEGF-PN1,构建成表达质粒pSVNLSGFP和pGPNLSGFP。然后将这两种表达质粒分别转染HeLa细胞并采用genecitin筛选稳定表达细胞株。以加强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)在细胞内的分布情况作为观察指标确定融合蛋白表达产物在细胞内的定位。结果:稳定转染表达质粒pSVNLSGFP的HeLa细胞中绿色荧光主要集中分布在细胞核内;而转染了pGPNLSGFP的HeLa细胞中绿色荧光在细胞浆和细胞核内呈现出均匀分布状态。结论:gp130胞内区的假定NLS序列不具有核定位功能。 展开更多

关键词 GP130 核定位序列 nls 核定位 白细胞介素6受体

下载PDF 职称材料

进入细胞核之门:核移位机制研究进展

8

作者 罗湘建 曹亚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第9期834-837,共4页

细胞中DNA复制和RNA生物形成发生在细胞核,而蛋白质的合成场所位于细胞质,这些生命活动的整合依赖于功能蛋白等在两个亚空间尺度的选择性穿梭.这是一个信号介导的过程,需要能量和可溶性因子如穿梭载体的参与.通过介绍功能蛋白受控核移... 细胞中DNA复制和RNA生物形成发生在细胞核,而蛋白质的合成场所位于细胞质,这些生命活动的整合依赖于功能蛋白等在两个亚空间尺度的选择性穿梭.这是一个信号介导的过程,需要能量和可溶性因子如穿梭载体的参与.通过介绍功能蛋白受控核移位机制研究进展,拓宽了其潜在的医学应用,该领域的深入研究,将有力推动抗病毒治疗和基因治疗载体的设计研究. 展开更多

关键词 核孔复合物(NPC) GTP酶Ran 核定位信号序列(nls) 核移位

下载PDF 职称材料

细胞因子和生长因子信号转导途径中信号蛋白分子的核转运机制

9

作者 宋伦 黎燕 沈倍奋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第2期189-192,共4页

信号蛋白分子的入核及出核转运是细胞因子和生长因子信号转导途径中的重要环节 .核定位序列 (NLS)是信号蛋白分子上与入核转运相关的氨基酸序列 .核孔复合物 (NPC)、核转运蛋白importin和能量供应体Ran TC4在入核转运过程中也发挥了重... 信号蛋白分子的入核及出核转运是细胞因子和生长因子信号转导途径中的重要环节 .核定位序列 (NLS)是信号蛋白分子上与入核转运相关的氨基酸序列 .核孔复合物 (NPC)、核转运蛋白importin和能量供应体Ran TC4在入核转运过程中也发挥了重要作用 .另外 ,很多细胞因子和生长因子或其受体上所含有的NLS序列也具有核定位功能 ,并可能通过“伴侣机制”参与其他信号蛋白分子的入核转运 . 展开更多

关键词 细胞因子 生长因 信号转导 信号蛋白分子 核转运 核定位序列 核转运蛋白 Ran/TC4 伴侣机制

下载PDF 职称材料

真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG的构建及在HeLa细胞中的表达 被引量：3

10

作者 王洪振 王晓光 翟雷 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期188-192,共5页

为了将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)引入细胞核内,采用两轮PCR方法从原先克隆在pcD-NA3.1(-)+GFP载体中将GFP编码序列扩增出来并引入Kozak序列和核定位信号,使用常规酶切和连接方法将其重组至pUCm-T克隆载体中,再将目... 为了将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)引入细胞核内,采用两轮PCR方法从原先克隆在pcD-NA3.1(-)+GFP载体中将GFP编码序列扩增出来并引入Kozak序列和核定位信号,使用常规酶切和连接方法将其重组至pUCm-T克隆载体中,再将目的片段重组至pcDNA3.1(-)中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定后,构建了带有Kozak序列和核定位信号的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG。真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG被转染试剂Su-perfect转染至HeLa细胞中,绿色荧光蛋白基因在HeLa细胞中得到表达而且在细胞核中观察到绿色荧光。该研究以绿色荧光蛋白为标记初步建立了活体观察真核细胞核动态变化的研究体系。 展开更多

关键词 KOZAK序列 核定位信号 绿色荧光蛋白 真核表达载体

下载PDF 职称材料

STAT3入核分子机制的初步研究 被引量：2

11

作者 叶中德 沈倍奋 宋伦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期299-301,共3页

为了研究Stat3入核的分子机制 ,将SV40大T抗原的经典核定位序列NLS(nuclearlocalizationsequence)分别融合在Stat3 GFP分子和缺失突变体Dstat3 GFP的分子之间 ,构建Stat3 NLS GFP和Dstat3 NLS GFP融合分子。转染2 93T细胞 ,以NLS GF... 为了研究Stat3入核的分子机制 ,将SV40大T抗原的经典核定位序列NLS(nuclearlocalizationsequence)分别融合在Stat3 GFP分子和缺失突变体Dstat3 GFP的分子之间 ,构建Stat3 NLS GFP和Dstat3 NLS GFP融合分子。转染2 93T细胞 ,以NLS GFP为阳性对照 ,通过激光共聚焦显微镜的观察融合分子的亚细胞位置 ,未经白介素 6刺激的Stat3 NLS GFP和经白介素 6刺激的Stat3 GFP呈胞核分布 ,未经白介素 6刺激的Stat3 GFP和Dstat3 NLS GFP呈胞浆分布 . 展开更多

关键词 STAT3 细胞核 入核分子机制 核定位序列 nls 白介素-6 Stat3-nls-GFP Dstat3-nls-GFP 融合分子

下载PDF 职称材料

编码新型转录因子样蛋白的小鼠及人类同源cDNA的克隆(英文) 被引量：1

12

作者 龚顺友 钱晓萍 +1 位作者 付文先 陈慰峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期280-287,共8页

通过检索GenBank的表达序列标签 (EST)数据库并结合cDNA末端快速扩增法 (RACE) ,从小鼠胸腺克隆到一个新的cDNA序列 ,并从人类肝癌组织中克隆出了其同源cDNA .根据读码框架分析 ,这两个cDNA分别编码 541和 555个氨基酸的蛋白质 两个蛋... 通过检索GenBank的表达序列标签 (EST)数据库并结合cDNA末端快速扩增法 (RACE) ,从小鼠胸腺克隆到一个新的cDNA序列 ,并从人类肝癌组织中克隆出了其同源cDNA .根据读码框架分析 ,这两个cDNA分别编码 541和 555个氨基酸的蛋白质 两个蛋白质之间氨基酸序列一致率为77% ,和已知蛋白无显著同源性 .分子生物学软件和网上分析表明 ,两个蛋白质所含功能序列与STAT家族成员极为相似 ,均含有包括酪氨酸蛋白激酶在内的多种蛋白激酶的磷酸化位点和核定位信号 (NLS) ,可能是一种新型转录因子 .RT PCR分析显示 ,两个基因在正常组织中选择性表达 ,其分布相似 ,而且都具有一定程度的与分化或增殖相关的趋势 . 展开更多

关键词 表达序列标签 cDNA末端快速扩增法 蛋白激酶 转录因子 核定位信号 蛋白质

下载PDF 职称材料

MAGE家族新成员Restin入核分子机制的初步探讨 被引量：1

13

作者 王颖 于芳 +3 位作者 付海燕 杨国栋 卢凡 卢兹凡 《科学技术与工程》 2006年第18期2817-2821,共5页

restin是该实验室于1999年从维甲酸诱导分化的白血病细胞HL-60中克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原(MAGE)家族的新基因,初步验证其生物学功能为阻滞细胞周期进程。利用生物学软件预测该基因所编码蛋白的N端含有一非典型二分裂核定位信号序... restin是该实验室于1999年从维甲酸诱导分化的白血病细胞HL-60中克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原(MAGE)家族的新基因,初步验证其生物学功能为阻滞细胞周期进程。利用生物学软件预测该基因所编码蛋白的N端含有一非典型二分裂核定位信号序列(nuclearlocalizationsignal,NLS),且预测结果显示Restin入核可能与核转运蛋白importinαII的作用密切相关。因此克隆并鉴定了针对NLS等结构域的一系列截短体以及pACT-impotinαII,利用细胞双杂交技术对其进行相互作用以及作用部位的检测。结果证明Restin的入核确实与核定位信号序列以及核转运蛋白的相互作用有关。 展开更多

关键词 RESTIN 核定位信号序列 IMPORTIN α Ⅱ

下载PDF 职称材料

HIV-1 Rev蛋白在病毒复制中的功能

14

作者 王宇佳 米泽云 +1 位作者 丁寄葳 岑山 《中国医药生物技术》 2019年第2期178-180,共3页

人获得性免疫缺陷病毒 HIV-1 编码的 Rev 蛋白由116 个氨基酸组成,分子量为 19 kD,主要定位在细胞核中。Rev 具有三个不同的功能区:N 端的第 35 ~ 50 个氨基酸之间编码了一个精氨酸富集区域(arginine-rich-motif,ARM)作为 Rev 的核定位... 人获得性免疫缺陷病毒 HIV-1 编码的 Rev 蛋白由116 个氨基酸组成,分子量为 19 kD,主要定位在细胞核中。Rev 具有三个不同的功能区:N 端的第 35 ~ 50 个氨基酸之间编码了一个精氨酸富集区域(arginine-rich-motif,ARM)作为 Rev 的核定位信号(nuclear localization signal,NLS)。Rev 的 NLS 区域主要负责蛋白的核定位功能以及与 Rev反应元件(Rev response element,RRE)的茎环 RNA 序列特异性相互作用,介导 Rev 单体间聚合[1]。Rev 的第 10 ~24 个氨基酸是核扩散抑制信号(nuclear diffusion inhibitorysignal,NIS),主要维持 Rev 的功能以及 Rev 在细胞核的亚细胞定位。第三个活性区域位于第 73 ~ 84 个氨基酸之间,是异亮氨酸富集的区域,包含一个核输出信号(nuclearexport signal,NES)。该区域直接与细胞染色体维持蛋白 1(chromosomal region maintenance 1,CRM1)相互作用。研究表明在 HIV-1 的复制过程中,Rev 执行了多种生物学功能,其中包括病毒 RNA(vRNA)的核输出、增强病毒蛋白的表达水平,促进 vRNA 基因组的核体化[2],以及负调控 HIV-1 整合[3]。本文主要围绕 Rev 在病毒复制早期和晚期的功能展开论述。 展开更多

关键词 Rev蛋白 HIV-1 病毒复制 人获得性免疫缺陷病毒 氨基酸组成 核定位信号 相互作用 序列特异性

下载PDF 职称材料