BRD7的亚细胞定位及其假定核输出信号序列的分离与鉴定 被引量：3

1

作者 周鸣 徐晓杰 +5 位作者 彭聪 何佳瑾 彭淑平 李小玲 卢建红 李桂源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期373-378,共6页

BRD7被鉴定为一个鼻咽癌密切相关新基因和潜在的核转录调节因子.通过绿色荧光蛋白(GFP)介导的亚细胞定位方法,系统研究BRD7在非洲绿猴肾COS7细胞、人宫颈癌HeLa细胞以及人鼻咽癌HNE1细胞中的亚细胞定位,发现BRD7主要定位在细胞核,呈细... BRD7被鉴定为一个鼻咽癌密切相关新基因和潜在的核转录调节因子.通过绿色荧光蛋白(GFP)介导的亚细胞定位方法,系统研究BRD7在非洲绿猴肾COS7细胞、人宫颈癌HeLa细胞以及人鼻咽癌HNE1细胞中的亚细胞定位,发现BRD7主要定位在细胞核,呈细点状或条梭状分布,3株细胞中没有明显的细胞类型差异.通过对BRD7编码蛋白氨基酸序列进行比对分析,发现了1个具有亮氨酸富集特征的假定核输出信号序列pNES,该区域具有类似核输出信号特征序列“Lx(2,3)[LIVFM]x(2,3)Lx[LI]”(X代表任意氨基酸)的结构;通过功能分析,发现它不具有介导异源蛋白GFP胞浆定位的功能,且其亚细胞定位或胞浆胞核分布比例不受细霉素B(leptomycinB)干预的影响,说明这个pNES不具核输出信号结构域的功能,不是BRD7的核输出信号. 展开更多

关键词 BRD7 转录因子 亚细胞定位 核输出信号

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BRD7核输出信号序列的定位与功能鉴定 被引量：1

2

作者 周鸣 郭驰 +7 位作者 李夏雨 何佳瑾 徐晓杰 王贺冉 唐珂 曹利 李小玲 李桂源 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期634-639,共6页

目的:定位和鉴定BRD7核输出信号序列所在区域,探讨其在介导异源蛋白核输出功能中的作用。方法:以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)做为研究模型,通过步移法对BRD7进行区段分析,探讨BRD7的不同区段对GFP核输出功能的影响,... 目的:定位和鉴定BRD7核输出信号序列所在区域,探讨其在介导异源蛋白核输出功能中的作用。方法:以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)做为研究模型,通过步移法对BRD7进行区段分析,探讨BRD7的不同区段对GFP核输出功能的影响,初步确定BRD7核输出信号序列所在的区域;进一步通过氨基酸序列的比对分析,确定该序列中氨基酸的含量特征及核输出信号潜在的位置。结果:BRD7的B7C1(219-450)具有介导异源蛋白GFP胞浆定位的功能,且其核输出功能在核输出信号阻滞剂Leptomycin B(LMB)的诱导下受到阻滞。该区段疏水氨基酸残基含量比较丰富,但没有发现具有典型亮氨酸聚集特征的核输出信号。结论:初步确定了BRD7核输出信号序列所在的区域为aa219-450。 展开更多

关键词 BRD7 核输出信号 亚细胞定位

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BS69的亚细胞定位及其核输出信号序列的分析鉴定 被引量：1

3

作者 张超 于波 +3 位作者 邵勇 杨虹 张伟 万峻 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2145-2149,共5页

目的:分析腺病毒E1A相关蛋白BS69不同亚型的DNA序列,寻找新的核输出信号序列,并在Cos7细胞中表达确定其亚细胞定位。方法:分析数据库中不同BS69亚型DNA序列,与传统和输出信号序列比对,寻找可能的新的核输出信号序列。采用DNA重组技术把B... 目的:分析腺病毒E1A相关蛋白BS69不同亚型的DNA序列,寻找新的核输出信号序列,并在Cos7细胞中表达确定其亚细胞定位。方法:分析数据库中不同BS69亚型DNA序列,与传统和输出信号序列比对,寻找可能的新的核输出信号序列。采用DNA重组技术把BS69不同亚型片段的cDNA插入到真核表达载体pcDNA3.1上,转染Cos7细胞,用免疫荧光染色方法确定其亚细胞定位,用Western blotting方法验证不同亚型BS69在细胞中的功能。结果:在BS69亚型2上面发现1段富含亮氨酸的基因序列,与核输出信号序列极为相似。免疫荧光染色方法显示BS69亚型2定位于细胞浆中,而BS69亚型1和2个亚型共同序列编码的蛋白质则定位于细胞核中。BS69亚型2参与了EB病毒潜伏膜蛋白1(Epstein-Barrvirus latent membrane protein1,LMP1)介导的信号转导途径。结论:BS69不同亚型具有不同的亚细胞定位,因此具有不同的生物学功能,其中核蛋白是转录调控因子,细胞浆蛋白则可能参与鼻咽癌发生发展的调控。 展开更多

关键词 腺病毒EIA相关蛋白BS69 核输出信号序列 亚细胞定位 转录因子

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新加坡石斑鱼虹彩病毒ICP46核输出信号序列的定位与功能鉴定 被引量：1

4

作者 夏立群 张红莲 秦启伟 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1763-1769,共7页

新加坡石斑鱼虹彩病毒(SGIV)是一种重要的鱼类传染性病毒,可导致石斑鱼死亡率达90%以上,给石斑鱼的养殖造成巨大的经济损失。SGIV ICP46(infected cell polypeptides 46)是一个立即早期基因,可能参与细胞的生长调控,并对病毒复制有重要... 新加坡石斑鱼虹彩病毒(SGIV)是一种重要的鱼类传染性病毒,可导致石斑鱼死亡率达90%以上,给石斑鱼的养殖造成巨大的经济损失。SGIV ICP46(infected cell polypeptides 46)是一个立即早期基因,可能参与细胞的生长调控,并对病毒复制有重要作用。在SGIV ICP46序列中存在一段富含亮氨酸(Leucine,L)的潜在核输出信号(nuclear export signal,NES)。为了深入研究该段NES序列在SGIV ICP46核转运过程中的作用,实验构建了3个NES缺失的突变体:仅含NES之前片段的突变体(ΔNESa)、仅含NES之后片段的突变体(ΔNESb)和不含NES的全长片段(ΔNESc),并在真核细胞中表达,观察这些突变体在细胞内的定位情况。转染细胞实验结果表明,野生型EGFP-ICP46重组蛋白可以有效地被输出细胞核,荧光信号主要分布在胞质区;相反,NES缺失的EGFP-ICP46-ΔNES重组蛋白不能被有效地输出细胞核,呈现与EGFP对照相同的泛细胞分布特征。突变实验证明,NES对SGIV ICP46输出细胞核具有决定性作用。 展开更多

关键词 新加坡石斑鱼虹彩病毒 ICP46 核输出信号 绿色荧光蛋白

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突变A53Tα-synuclein基因核输入信号和核输出信号真核载体的构建及表达分析

5

作者 王颖 钱进军 +4 位作者 赵康仁 马瑞 徐敏芳 熊御云 高静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期618-620,共3页

目的:构建真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES,瞬时转染SH-SY5Y细胞。方法:PCR扩增法获得含有SalI和NotI的目的片段A53T-SNCA-NLS、A53T-SNCA-NES,SalI、NotI双酶切载体pRK5,线性pRK5与目的片段经ligation high连接,... 目的:构建真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES,瞬时转染SH-SY5Y细胞。方法:PCR扩增法获得含有SalI和NotI的目的片段A53T-SNCA-NLS、A53T-SNCA-NES,SalI、NotI双酶切载体pRK5,线性pRK5与目的片段经ligation high连接,酶切、PCR鉴定重组质粒pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES。重组质粒通过Lipofactamine2000转染SH-SY5H细胞,免疫荧光法鉴定瞬转细胞。结果:真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES构建成功,NLS、NES能介导突变基因A53T-SNCA翻译的α-synuclein蛋白在核内表达或胞质表达。结论:基因A53T-SNCA翻译的突变α-synuclein蛋白核内高表达或胞质高表达可能是家族性帕金森氏病发病机制中关键因素之一。 展开更多

关键词 pRK5 核输入信号 核输出信号

原文传递

昆虫中的核输出现象

6

作者 吴一弘 陈国庆 +1 位作者 王文凯 冯国忠 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2021年第5期1095-1106,共12页

核质转运是真核细胞生命活动重要的组成部分,细胞核内蛋白的平衡及转录出的RNA出核成熟过程都依赖于核输出,核输出与真核生物的生命活动密切相关;病原物在侵染昆虫时也会利用宿主的核输出机制干扰宿主的免疫反应或劫持宿主的核输出蛋白... 核质转运是真核细胞生命活动重要的组成部分,细胞核内蛋白的平衡及转录出的RNA出核成熟过程都依赖于核输出,核输出与真核生物的生命活动密切相关;病原物在侵染昆虫时也会利用宿主的核输出机制干扰宿主的免疫反应或劫持宿主的核输出蛋白以利于病毒的组装及复制。本文主要介绍真核细胞中核输出的基本机制、蚊子和果蝇等模式昆虫中核输出通路;简述核输出机制在昆虫胚胎发育及免疫等生理活动及信号通路中的影响,以及与昆虫相关的病毒蛋白对昆虫等宿主核输出机制的利用和破坏情况。 展开更多

关键词 昆虫 核孔复合体 核质转运 核输出信号 核输出受体

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几种核受体核浆穿梭与调控机制 被引量：5

7

作者 林晓峰 吴乔 《细胞生物学杂志》 CSCD 2005年第4期363-368,共6页

许多核受体属于核转录因子,它们在胞浆合成后快速地转运入核,同时还能够在核浆之间穿梭以行使其特定的生物学功能。核受体的核浆转运主要通过核膜上的核孔复合体,依靠运输载体Importins和Exportins介导以及Ran-GDP提供能量。现对糖皮质... 许多核受体属于核转录因子,它们在胞浆合成后快速地转运入核,同时还能够在核浆之间穿梭以行使其特定的生物学功能。核受体的核浆转运主要通过核膜上的核孔复合体,依靠运输载体Importins和Exportins介导以及Ran-GDP提供能量。现对糖皮质激素受体(GR)、雄激素受体(AR)和雌激素受体(ER)等核受体在核浆穿梭转运和调控机制等方面的研究进展进行综述,同时也介绍我们实验室最近发现的视黄素X受体(RXR)核浆穿梭转运的新功能。 展开更多

关键词 核受体 配体 核浆穿梭 核定位信号 核输出信号 调控机制 穿梭 糖皮质激素受体 核浆转运 核转录因子

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Caspase-3细胞定位信号的检测与分析 被引量：1

8

作者 卢智勇 卢智刚 曾昭淳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期543-548,共6页

Caspase-3是调节细胞凋亡的关键蛋白质.凋亡过程中,胞质定位的caspase-3被酶解激活,进入细胞核中执行功能.这一定位变化的分子机制至今仍不清楚.分析caspase-3分子中所含的细胞定位信号,可以为深入了解其移位机制提供重要的线索.构建一... Caspase-3是调节细胞凋亡的关键蛋白质.凋亡过程中,胞质定位的caspase-3被酶解激活,进入细胞核中执行功能.这一定位变化的分子机制至今仍不清楚.分析caspase-3分子中所含的细胞定位信号,可以为深入了解其移位机制提供重要的线索.构建一系列含caspase-3不同区段的截短突变体,与GFP融合表达,观察它们在细胞中的定位,以鉴定caspase-3分子中所含的核输出信号（nuclear export signal,NES）和核定位信号NLS（nuclear localization signal,NLS）.结果发现,caspase-3分子中不存在明显的NLS,但存在一个明显的NES,该NES定位在caspase-3小亚基的C端,包括220-245位氨基酸残基. 展开更多

关键词 胱天蛋白酶3 核输出信号 核定位信号

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Hic-5/ARA55蛋白的研究进展 被引量：2

9

作者 李波 雷小峰 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第1期65-68,共4页

Hic-5/ARA55基因最早是作为转化生长因子β1诱导基因（TGF-β1）和过氧化氢诱导的克隆从小鼠成骨细胞MC3T3中分离出来,属于LIM结构域蛋白家族,与桩蛋白具有高度同源性。Hic-5/ARA55蛋白主要位于细胞黏着斑,可以穿梭于细胞质和细胞核的... Hic-5/ARA55基因最早是作为转化生长因子β1诱导基因（TGF-β1）和过氧化氢诱导的克隆从小鼠成骨细胞MC3T3中分离出来,属于LIM结构域蛋白家族,与桩蛋白具有高度同源性。Hic-5/ARA55蛋白主要位于细胞黏着斑,可以穿梭于细胞质和细胞核的蛋白质, 展开更多

关键词 Hic-5 ARA55蛋白 黏着斑 核输出信号

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P62蛋白的研究 被引量：12

10

作者 张坤西 张洁 郭艳苏 《脑与神经疾病杂志》 2016年第1期59-61,共3页

P62蛋白（sequestosome 1）是自噬选择性底物,在形成细胞质蛋白包涵体的过程中起到关键的作用,是阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）、帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）和许多慢性退行性疾病的标志物[1]。本综述讨论p62蛋白... P62蛋白（sequestosome 1）是自噬选择性底物,在形成细胞质蛋白包涵体的过程中起到关键的作用,是阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）、帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）和许多慢性退行性疾病的标志物[1]。本综述讨论p62蛋白的生理作用及其分子机制。 展开更多

关键词 P62 阿尔茨海默病 包涵体 慢性退行性疾病 帕金森病 自噬 CASPASE 锌指结构域 氧化应激 核输出信号

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植物病毒蛋白核质转运的研究进展

11

作者 瞿思宜 户海燕 +1 位作者 沈洋洋 施曼玲 《生命科学》 CSCD 2016年第3期391-398,共8页

植物病毒编码一些含有核定位信号(nuclear localization signal,NLS)或者核输出信号(nuclear export signal,NES)的核质转运蛋白,这些已被验证的转运蛋白有三种类型:核输入蛋白、核输出蛋白和核质穿梭蛋白。它们通过识别寄主核质转运受... 植物病毒编码一些含有核定位信号(nuclear localization signal,NLS)或者核输出信号(nuclear export signal,NES)的核质转运蛋白,这些已被验证的转运蛋白有三种类型:核输入蛋白、核输出蛋白和核质穿梭蛋白。它们通过识别寄主核质转运受体Importinα和Importinβ,介导含有经典核定位信号的蛋白质入核过程,以及寄主蛋白Ran参与,由XPO1介导的富含亮氨酸核输出信号的蛋白质出核过程。植物病毒核质转运蛋白利用寄主的转运机制,进出细胞核发挥相应功能,如介导病毒基因组的核输入和核输出、介导病毒长距离运输及系统侵染、抵抗寄主细胞启动的RNA沉默、调节寄主细胞转录活性、调控病毒的复制及表达和参与病毒症状的形成等。对植物病毒蛋白核质转运的相关研究进展进行综述,着重介绍植物病毒蛋白核质转运类型、核输入和输出信号、转运机制和生物学意义,以及寄主蛋白介导的互作等研究的最新成果。 展开更多

关键词 植物病毒 核质转运 核定位信号 核输出信号

原文传递

一株H5N1 NS1蛋白第101位点的甲硫氨酸决定该蛋白抗干扰素能力及亚细胞定位

12

作者 孟晋 张振锋 +2 位作者 郑振华 刘艳 王汉中 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2012年第10期787-794,共8页

A型流感病毒NS1蛋白有两种抗干扰素（IFN）机制,一种通过抑制RIG-Ⅰ信号转导完成,另一种通过与CPSF30结合,阻断细胞前体mRNA剪切和加工.目前,NS1拮抗Ⅰ型IFN生成的具体机制还不是十分清楚.本文结果显示,PR/8/34NS1蛋白部分定位于细胞质... A型流感病毒NS1蛋白有两种抗干扰素（IFN）机制,一种通过抑制RIG-Ⅰ信号转导完成,另一种通过与CPSF30结合,阻断细胞前体mRNA剪切和加工.目前,NS1拮抗Ⅰ型IFN生成的具体机制还不是十分清楚.本文结果显示,PR/8/34NS1蛋白部分定位于细胞质,并且表现出很强的、特异性抑制IFN-β启动子活性的能力,而H5N1NS1则明显不同.H5N1NS1主要定位细胞核,它抑制IFN的能力相对较弱,是通过抑制细胞基因整体表达水平实现的.本研究通过构建H5N1NS1的一系列突变后发现,仅将H5N1NS1的101位点的甲硫氨酸突变为PR/8/34NS1相应位点的异亮氨酸（命名为H5-M101I）即可获得了特异性抑制IFN-β启动子活性的能力,并且使该蛋白向细胞质定位,同时失去与CPSF30结合的能力.本研究还发现,之前报道的定位于138~147氨基酸位点的核输出信号（NES）并没有发挥功能.这表明,很可能存在尚未发现的其他氨基酸具有NES功能.结果表明,101位点的甲硫氨酸（Met-101）可能与其临近的第100位亮氨酸（Leu-100）共同增强了此区域的NES;除此之外,Met-101也是NS1与CPSF30结合的关键氨基酸.综上所述,本文揭示了Met-101在H5N1流感病毒生活周期中的重要性,同时为抗病毒工作提供了有价值的信息. 展开更多

关键词 A型流感病毒 H5N1 NS1 干扰素Β CPSF30 核输出信号

原文传递