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核酸等温扩增技术检测动物源食品研究进展
1
作者 肖付刚 张尧轩 +2 位作者 谷蒙林 王德国 张国治 《粮食与油脂》 北大核心 2023年第12期22-28,共7页
综述了依赖核酸序列的扩增(NASBA)、链替代扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)、环介导等温扩增(LAMP)、赖解旋酶恒温基因扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、梯型熔解温度等温扩增(LMTIA)几种主要核酸等温扩增检测技术的发展及其基本原理、特点... 综述了依赖核酸序列的扩增(NASBA)、链替代扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)、环介导等温扩增(LAMP)、赖解旋酶恒温基因扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、梯型熔解温度等温扩增(LMTIA)几种主要核酸等温扩增检测技术的发展及其基本原理、特点和在动物源食品检测中的应用,并对几种主要核酸等温扩增检测技术的特点及应用进行比较。 展开更多
关键词 核酸等温扩增技术 检测 动物源食品 梯型熔解温度等温扩增技术
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基于核酸等温扩增技术金黄色葡萄球菌检测的研究进展 被引量：1
2
作者 伊廷存 胡梅 +4 位作者 霍胜楠 孟静 任意婕 翟清燕 孙潇慧 《中国酿造》 CAS 北大核心 2023年第9期26-31,共6页
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)作为一种食源性致病菌,是导致食品安全和公共卫生事件的主要病原体之一,开发快速准确的金黄色葡萄球菌检测技术是保障食品安全和提高食源性致病菌防控水平的关键措施。核酸等温扩增技术具有检测... 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)作为一种食源性致病菌,是导致食品安全和公共卫生事件的主要病原体之一,开发快速准确的金黄色葡萄球菌检测技术是保障食品安全和提高食源性致病菌防控水平的关键措施。核酸等温扩增技术具有检测速度快、灵敏度高和设备简单等优点,在金黄色葡萄球菌检测方面具有很大的应用前景。基于此,该文简要介绍了核酸等温扩增技术的原理及优缺点,主要阐述了核酸等温扩增技术在金黄色葡萄球菌检测上的应用,并总结了目标产物检测技术,为金黄色葡萄球菌等温扩增快速检测技术的开发提供理论支持,为食品安全控制和食源性致病菌监控工作奠定基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 核酸等温扩增技术 目标产物检测
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核酸等温扩增技术在水产病原体快速检测中的应用 被引量：5
3
作者 庞建虎 乔龙亮 +2 位作者 朱鹏 高威芳 章礼萍 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第5期530-540,共11页
有别于费力和费时的传统病原体检测方法,基于靶基因的分子生物学检测方法以其快速和灵敏的特点逐渐成为现代水产病原体检测的首选.在众多分子生物学检测方法中,尤以核酸等温扩增技术备受关注.本文对各种核酸等温扩增技术在水产病原体检... 有别于费力和费时的传统病原体检测方法,基于靶基因的分子生物学检测方法以其快速和灵敏的特点逐渐成为现代水产病原体检测的首选.在众多分子生物学检测方法中,尤以核酸等温扩增技术备受关注.本文对各种核酸等温扩增技术在水产病原体检测中的应用进行了综述,阐述了各种核酸等温扩增技术的原理,对比分析了各种核酸等温扩增技术的优劣,介绍了该技术在水产病原体检测中的应用现状,展望了该技术的发展趋势,旨在促进我国水产病原体现场快速检测技术的发展. 展开更多
关键词 核酸等温扩增 水产病原体 快速检测
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离心微流控芯片技术用于核酸等温扩增的研究进展 被引量：3
4
作者 曹宁 周新丽 《工业微生物》 CAS 2020年第6期48-55,共8页
常规聚合酶链式反应对反应条件的要求很高,需要在多个温度下进行循环,而核酸等温扩增仅需在恒定温度下就能进行核酸的高效快速扩增。离心式微流控芯片技术具有微型化、集成化、高通量、自动化等优势,可实现实时、低成本生化检测分析。... 常规聚合酶链式反应对反应条件的要求很高,需要在多个温度下进行循环,而核酸等温扩增仅需在恒定温度下就能进行核酸的高效快速扩增。离心式微流控芯片技术具有微型化、集成化、高通量、自动化等优势,可实现实时、低成本生化检测分析。本文介绍了离心微流控芯片技术在核酸扩增前处理和核酸等温扩增中的应用,主要包括核酸提取、试剂预存储和核酸等温扩增等方面,并且对离心微流控芯片技术用于核酸等温扩增中存在的问题与未来的发展方向进行分析讨论。 展开更多
关键词 离心微流控 核酸提取 核酸等温扩增 实时检验
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基于环介导核酸等温扩增的快检技术研究
5
作者 赵璐瑶 杨曙明 +1 位作者 游新勇 张莹 《农产品质量与安全》 2018年第1期71-74,共4页
环介导核酸等温扩增(LAMP)技术可在恒温条件下特异、高效、快速地扩增靶序列,对仪器要求低,还可节约试剂成本。本文综述了基于LAMP技术的快检技术研究进展,拟为食品安全领域快检技术的发展提供参考。
关键词 环介导核酸等温扩增技术 核酸扩增分析 快速检测
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我校新型核酸等温扩增技术研究取得新进展
6
《许昌学院学报》 CAS 2021年第5期F0002-F0002,共1页
许昌学院王德国教授课题组在新型核酸等温扩增技术研究领域取得重要进展。近年来,非洲猪瘟病毒、新冠病毒等致病微生物的不断出现。而致病微生物的主要检测方法是核酸检测,但现有方法存在需要热循环仪、扩增时间长、非特异性扩增等缺点... 许昌学院王德国教授课题组在新型核酸等温扩增技术研究领域取得重要进展。近年来,非洲猪瘟病毒、新冠病毒等致病微生物的不断出现。而致病微生物的主要检测方法是核酸检测,但现有方法存在需要热循环仪、扩增时间长、非特异性扩增等缺点,因此新型核酸检测方法就成为研究热点。王德国教授课题组潜心研究核酸等温扩增技术近二十年。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 致病微生物 非特异性扩增 核酸检测 核酸等温扩增 检测方法 许昌学院 近二十年
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核酸等温扩增技术在电化学平台的应用
7
作者 刘翠颖 吴茳铃 +2 位作者 付正香 李胜强 黄昱 《分析试验室》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1029-1040,共12页
生物分子(包括核酸和蛋白等)的检测在临床诊断、疾病治疗、细菌和病毒的检测及环境监测等方面日益重要,因此,寻找简单、快速、灵敏度高、特异性佳的检测平台就显得极为重要。近年来,电化学检测平台因体积小、结构简单、灵敏度和特异性... 生物分子(包括核酸和蛋白等)的检测在临床诊断、疾病治疗、细菌和病毒的检测及环境监测等方面日益重要,因此,寻找简单、快速、灵敏度高、特异性佳的检测平台就显得极为重要。近年来,电化学检测平台因体积小、结构简单、灵敏度和特异性高等优点,在生物分子检测中得到了许多应用。为了更好的检测各种目标分析物,不同的核酸等温扩增技术被应用于电化学检测平台。本文从等温扩增技术的发展历程、扩增的基本原理及其在电化学平台的实际应用方面进行了综述,为后续应用中选择扩增技术提供一些借鉴思路。 展开更多
关键词 核酸等温扩增技术 电化学检测平台 生物分子检测 链置换扩增 滚环扩增
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“一锅法”等温核酸扩增策略联合荧光定量侧流层析技术对多种细菌16S rRNA的超灵敏检测
8
作者 周杰 张璞 《化学传感器》 CAS 2023年第1期67-68,共2页
致病菌对人类健康构成了极大的威胁,因此及时、灵敏地检测病原体是确诊感染源、预防疾病传播和改善患者治疗的关键。最近的研究表明,细菌的16S rRNA包含了种间差异信息,而典型的细菌则拥有约10000个16S rRNA拷贝。因此,使用16S rRNA作... 致病菌对人类健康构成了极大的威胁,因此及时、灵敏地检测病原体是确诊感染源、预防疾病传播和改善患者治疗的关键。最近的研究表明,细菌的16S rRNA包含了种间差异信息,而典型的细菌则拥有约10000个16S rRNA拷贝。因此,使用16S rRNA作为检测模板对于低浓度病原体的即时检测(POCT)具有重大意义。 展开更多
关键词 层析技术 感染源 荧光定量 超灵敏检测 一锅法 16S rRNA 等温核酸扩增 病原体
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基于hipO基因的环介导等温核酸扩增技术检测食源性空肠弯曲菌 被引量：1
9
作者 田祥强 王西 +9 位作者 邹作成 胡仲皓 杜晓莉 何晓花 王佳玲 李柯 刘浩洋 刘雪兰 嵇辛勤 胡青海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期114-119,共6页
空肠弯曲杆菌是人细菌性胃肠炎的常见食源性致病菌之一,严重危害人类的健康,建立快速精准检测食源性空肠弯曲杆菌的方法,对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究建立了一种可视化、低成本基于hipO基因的环介导等温扩增(LAMP... 空肠弯曲杆菌是人细菌性胃肠炎的常见食源性致病菌之一,严重危害人类的健康,建立快速精准检测食源性空肠弯曲杆菌的方法,对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究建立了一种可视化、低成本基于hipO基因的环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测空肠弯曲菌的方法。该LAMP方法检测空肠弯曲菌CJFX01基因组DNA为阳性,而对肠出血性大肠杆菌O157:H7、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌、小肠结肠炎耶尔森菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌等食源性致病菌和胸膜肺炎放线杆菌Aha01、副猪嗜血杆菌Ahh01、多杀性巴氏杆菌Ahm03、猪链球菌Ahs02、猪丹毒丝菌Ahe01、支气管败血波氏杆菌Ahb01等猪源致病菌基因组DNA检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。灵敏度的检测结果表明,LAMP检测空肠弯曲杆菌的检测限为5.4×10^(1)CFU/mL,而基于F3/B3引物对常规PCR的检测限为5.4×10^(6)CFU/mL,即LAMP检测空肠弯曲杆菌的灵敏度比常规PCR高100 000倍。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、可视化、低成本、特异性好和灵敏度高等优点,适用于实验室和基层食品安全监管部门进行现场快速检测。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 环介导等温核酸扩增(LAMP) hipO 食源性致病菌 快速检测
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基于nuc基因的环介导等温核酸扩增可视化技术检测食源性金黄色葡萄球菌 被引量：1
10
作者 邹作成 王西 +9 位作者 刘雪兰 胡仲皓 田祥强 何晓花 杜晓莉 王佳玲 李柯 刘浩洋 嵇辛勤 胡青海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期108-113,共6页
金黄色葡萄球菌食物中毒主要是由食用被金黄色葡萄球菌及其所产生的肠毒素污染的奶、肉、蛋、糕点、剩饭等蛋白或淀粉含量丰富的食品引起,快速精准的金黄色葡萄球菌检测技术对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究以nuc基因... 金黄色葡萄球菌食物中毒主要是由食用被金黄色葡萄球菌及其所产生的肠毒素污染的奶、肉、蛋、糕点、剩饭等蛋白或淀粉含量丰富的食品引起,快速精准的金黄色葡萄球菌检测技术对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究以nuc基因作为检测靶基因,建立了一种检测金黄色葡萄球菌的环介导等温核酸扩增(LAMP)技术。该方法检测金黄色葡萄球菌基因组DNA样品为阳性,而对单细胞增生李斯特菌、鼠伤寒沙门菌、肠出血性大肠杆菌、空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌和产气荚膜梭菌等食源性致病菌和猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌等猪源细菌基因组DNA检测结果均为阴性,表明建立的LAMP方15法具有较好的特异性。灵敏度的检测结果表明,LAMP的检测限可达5.6×10^(1) CFU/mL,而常规PCR的检测限为5.6×10^(5) CFU/mL,即LAMP的检测灵敏度比常规PCR高出10000倍。临床样品的检测结果表明,50份猪肉样品中有4份检出金黄色葡萄球菌。本研究为食源性金黄色葡萄球菌提供了一种快速、可视化、特异性好、灵敏度高、成本低的LAMP检测方法。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 nuc基因 环介导等温核酸扩增技术 可视化
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重组酶介导等温核酸扩增技术在食源性致病菌检测中的应用 被引量：7
11
作者 秦爱 刘明明 +2 位作者 邓方进 余秋地 肖昭竞 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第10期278-286,共9页
重组酶介导等温核酸扩增(recombinase aided amplification, RAA)是一种新型的国产等温扩增技术,其扩增反应可以在恒定温度(37~42℃)下快速完成,具有较高检测效率,且对精密仪器和检测场地的要求较低,更能应对大批量筛查、应急处理等应... 重组酶介导等温核酸扩增(recombinase aided amplification, RAA)是一种新型的国产等温扩增技术,其扩增反应可以在恒定温度(37~42℃)下快速完成,具有较高检测效率,且对精密仪器和检测场地的要求较低,更能应对大批量筛查、应急处理等应用场景。经10年的科学研究和实践应用, RAA技术已取得了诸多突破性成果,本文介绍了RAA技术的反应原理,综述了近3年RAA技术及其扩展技术在食源性致病菌检测中的研究进展,总结了RAA技术在样品前处理、假阳性和假阴性、检测通量、试剂盒开发等方面存在的技术难点,并对未来的研究方向提出了若干建议,以期为RAA技术在食源性致病菌快速检测中的应用推广提供研究思路。 展开更多
关键词 重组酶介导等温核酸扩增 食源性致病菌 分子检测
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等温核酸扩增技术在食源性致病菌检测中的研究进展 被引量：4
12
作者 秦爱 张明娟 +3 位作者 邓方进 王娟 袁磊 李根容 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第5期173-182,共10页
等温扩增技术是近年来发展迅速的一种新型核酸扩增技术,其反应过程始终维持在恒定的温度下,降低了对精密仪器和检测场地的要求,并大幅度缩短了检测时间,更能满足准确、快速、灵敏、便携的日常检测需求。目前,食源性致病菌仍是影响食品... 等温扩增技术是近年来发展迅速的一种新型核酸扩增技术,其反应过程始终维持在恒定的温度下,降低了对精密仪器和检测场地的要求,并大幅度缩短了检测时间,更能满足准确、快速、灵敏、便携的日常检测需求。目前,食源性致病菌仍是影响食品安全的主要因素之一,等温核酸扩增技术已成功应用于部分食源性致病菌的检测中,具有广阔的应用前景,有望成为食源性致病菌快速检测的新方法。本文综述了环介导核酸等温扩增、滚环扩增、跨越式滚环扩增、重组酶聚合酶扩增、等温多自配引发扩增、单引物等温扩增、依赖解旋酶的等温扩增、链置换扩增、交叉引物扩增9种等温核酸扩增技术的扩增原理和优缺点,及其在食源性致病菌检测中的应用研究进展,提出了样品前处理、引物设计、结果判读、检测灵敏度、检测通量方面存在的共性问题,并给出相应解决措施,以期为等温核酸扩增技术在食源性致病菌快速检测中的实际应用和相关标准的制定提供研究思路。 展开更多
关键词 食源性致病菌 等温核酸扩增 快速检测 技术难点 解决措施
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重组酶介导的日本血吸虫特异性基因片段核酸等温扩增检测方法的建立 被引量：31
13
作者 赵松 李婷 +7 位作者 杨坤 李伟 张键锋 郭利川 刘燕红 戴洋 应清界 羊海涛 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期273-277,306,共6页
目的建立一种可用于日本血吸虫特异性基因片段检测的重组酶介导的核酸等温扩增方法(RAA)。方法以日本血吸虫SjG28基因片段作为靶序列,根据RAA反应原理设计合成引物,建立并优化RAA反应体系。应用此方法与聚合酶链式反应(PCR)同时扩增梯... 目的建立一种可用于日本血吸虫特异性基因片段检测的重组酶介导的核酸等温扩增方法(RAA)。方法以日本血吸虫SjG28基因片段作为靶序列,根据RAA反应原理设计合成引物,建立并优化RAA反应体系。应用此方法与聚合酶链式反应(PCR)同时扩增梯度稀释的含不同拷贝数的SjG28基因片段TA克隆质粒及不同浓度的基因组DNA,以评价其敏感性;应用此方法检测曼氏血吸虫、似蚓蛔线虫、十二指肠钩口线虫基因组DNA及健康人血基因组DNA,以评价其特异性。结果建立的RAA法可特异性扩增日本血吸虫中国大陆株成虫及虫卵基因组DNA,反应可在30 min内完成。以重组质粒为模板,RAA法最低可检出的质粒拷贝数为20个/μL;以基因组DNA为模板,RAA法最低可检测浓度为0.01 ng/μL。建立的RAA法以健康人全血基因组DNA及曼氏血吸虫成虫、似蚓蛔线虫、十二指肠钩口线虫基因组DNA为模板的扩增结果均为阴性。结论本研究建立了一种反应快捷、敏感性和特异性均较高的RAA方法,其具有应用于日本血吸虫病基因诊断的价值。 展开更多
关键词 日本血吸虫 基因片段 核酸等温扩增 重组酶
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结合重组酶介导的核酸等温扩增和荧光探针快速检测日本血吸虫基因片段 被引量：18
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作者 赵松 刘燕红 +6 位作者 李婷 李伟 张键锋 郭利川 应清界 羊海涛 杨坤 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期23-27,共5页
目的结合重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplification, RAA)和荧光探针方法建立日本血吸虫特异性基因片段的快速检测方法。方法以日本血吸虫G28 (Sj G28)基因片段作为靶序列,应用DNAMAN 7.0软件设计合成引物及荧光探针,... 目的结合重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplification, RAA)和荧光探针方法建立日本血吸虫特异性基因片段的快速检测方法。方法以日本血吸虫G28 (Sj G28)基因片段作为靶序列,应用DNAMAN 7.0软件设计合成引物及荧光探针,建立荧光RAA反应体系。扩增不同拷贝数的Sj G28重组质粒,评价荧光RAA检测的敏感性;分别以日本血吸虫、曼氏血吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫、似蚓蛔线虫、华支睾吸虫基因组为模板进行荧光RAA检测,以评价该方法的特异性。采用荧光RAA分别检测500、 200和50条日本血吸虫尾蚴感染的兔粪中虫卵DNA。分别在50只阴性钉螺中混入1、 2、 3、 4、 5、 10只阳性钉螺,并提取DNA进行荧光RAA检测。结果以不同拷贝数的Sj G28重组质粒为模板进行荧光RAA扩增,在5 min时即可观察到明显的荧光信号,随着拷贝数的不断降低,检测到荧光信号的时间也随之延长,不同拷贝数的扩增均在10 min内完成,最低可检出的质粒浓度为10拷贝/μl。以曼氏血吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫、似蚓蛔线虫及华支睾吸虫基因组DNA为模板的荧光RAA扩增结果均为阴性。不同数量尾蚴感染的兔粪中提取的DNA样品经荧光RAA检测,均能得到有效的扩增,检测可在15 min内完成。含不同数量阳性钉螺的50只阴性钉螺提取的日本血吸虫DNA经荧光RAA检测,均能得到有效的扩增,检测可在10 min内完成。结论本研究建立的可检测日本血吸虫核酸片段的荧光RAA方法,反应快捷,敏感性和特异性均较高。 展开更多
关键词 日本血吸虫 基因检测 核酸等温扩增 荧光探针 重组酶
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基于重组酶介导核酸等温扩增反应的曼氏血吸虫基因检测方法的建立 被引量：9
15
作者 赵松 刘燕红 +6 位作者 叶钰滢 李伟 张键锋 郭利川 应清界 羊海涛 杨坤 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期335-339,344,共6页
目的建立一种可用于曼氏血吸虫特异性基因片段检测的重组酶介导的核酸等温扩增方法(Recombinase-aided amplification,RAA)。方法以曼氏血吸虫121 bp高重复基因片段作为靶序列,根据RAA反应原理设计、合成引物及荧光探针,建立并优化荧光... 目的建立一种可用于曼氏血吸虫特异性基因片段检测的重组酶介导的核酸等温扩增方法(Recombinase-aided amplification,RAA)。方法以曼氏血吸虫121 bp高重复基因片段作为靶序列,根据RAA反应原理设计、合成引物及荧光探针,建立并优化荧光RAA法反应体系。分别以不同拷贝数的含121 bp基因片段的重组质粒及不同浓度曼氏血吸虫基因组DNA为模板进行荧光RAA法扩增,评价该方法的敏感性;分别以日本和埃及血吸虫虫卵、十二指肠钩虫虫卵、华支睾吸虫囊蚴基因组DNA为模板进行荧光RAA法检测,评价其特异性。结果建立的荧光RAA法可在39℃、20 min内特异性扩增曼氏血吸虫基因组DNA。以重组质粒为模板,荧光RAA法最低可检出的质粒拷贝数为10拷贝/μL;以基因组DNA为模板,荧光RAA法最低可检测浓度为0.1 fg/μL。以日本血吸虫虫卵、埃及血吸虫虫卵、十二指肠钩虫虫卵、华支睾吸虫囊蚴基因组DNA为模板进行荧光RAA法检测,结果均为阴性。结论成功建立了一种可用于曼氏血吸虫DN A检测的荧光RAA法,该方法反应快捷、操作简便,敏感性和特异性均较好。 展开更多
关键词 曼氏血吸虫 基因检测 核酸等温扩增 荧光探针 重组酶
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多重环介导核酸等温扩增技术检测血液中常见病原体 被引量：6
16
作者 梁超 成思佳 +3 位作者 王聪 初亚男 奚涛 周国华 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第1期141-145,77,共6页
背景:血液安全性筛查是输血前必要检测项目。目前临床采用血清学检测技术,存在较长的检测窗口期,易产生假阴性检测结果,造成输血交叉感染。目的:建立多重环介导核酸等温扩增技术,实现在一管反应体系内同时检测四种病原体:乙肝病毒,丙肝... 背景:血液安全性筛查是输血前必要检测项目。目前临床采用血清学检测技术,存在较长的检测窗口期,易产生假阴性检测结果,造成输血交叉感染。目的:建立多重环介导核酸等温扩增技术,实现在一管反应体系内同时检测四种病原体:乙肝病毒,丙肝病毒,艾滋病毒和梅毒螺旋体。方法:通过限制性酶切处理多重环介导核酸等温扩增产物,利用酶切产物的长度分析扩增产物的种类,从而分析待测样本中含有何种血液病原体。结果:检测164例临床样本,其检测结果可以通过琼脂糖电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳及芯片电泳分析,且均可实现对多重扩增产物的酶切片段进行区分和鉴别。结论:多重环介导核酸等温扩增技术可以同时单管检测多种待测血液病原体,可以为临床提高简单、快速、高灵敏和高特异的检测技术。 展开更多
关键词 多重环介导核酸等温扩增技术 限制性酶切分析 血液病原体检测
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核酸等温扩增技术及其在中药分子鉴定中的应用研究概况 被引量：1
17
作者 吴文如 杨璐 周华 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第23期4289-4294,共6页
中药品种的准确鉴定是中药质量控制的首要环节,寻找高效、便捷、准确的鉴定方法,是中药鉴定技术的发展趋势。相对于以表型标记为鉴定特征的传统方法,DNA分子遗传标记鉴定技术具有更加准确、可靠的特点,适用于近缘混淆及多来源品种的鉴定... 中药品种的准确鉴定是中药质量控制的首要环节,寻找高效、便捷、准确的鉴定方法,是中药鉴定技术的发展趋势。相对于以表型标记为鉴定特征的传统方法,DNA分子遗传标记鉴定技术具有更加准确、可靠的特点,适用于近缘混淆及多来源品种的鉴定,但同时受PCR技术的限制,存在成本高、步骤复杂、时间长的缺点,无法实现快速鉴定。环介导等温扩增是一种新型核酸扩增技术,具有高特异性、高灵敏性、简便、快速、低成本等优点,成为继PCR技术之后的又一新兴技术,可成功实现对中药材的快速分子鉴定。通过对常见的核酸等温扩增技术及其在中药材分子鉴定研究中的应用情况进行综述,为中药材的快速分子鉴定体系研究提供参考。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 核酸等温扩增技术 中药鉴定 分子鉴定 快速鉴定
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核酸等温扩增技术在电化学生物传感器中的应用 被引量：1
18
作者 李晓璐 郭晶 +1 位作者 翟倩 易钢 《化学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1127-1133,共7页
生物分子检测在临床诊断、基因治疗、基因突变分析等方面变得日益重要,因而,建立简单、快速、灵敏的检测方法具有重要意义。近年,电化学生物传感器因其简单、便携、易操作、成本低等优势在生物分子检测的研究中备受关注。为了提高检测... 生物分子检测在临床诊断、基因治疗、基因突变分析等方面变得日益重要,因而,建立简单、快速、灵敏的检测方法具有重要意义。近年,电化学生物传感器因其简单、便携、易操作、成本低等优势在生物分子检测的研究中备受关注。为了提高检测方法的灵敏度,不同的核酸等温扩增技术被应用于电化学生物传感器的构建中。本文简单介绍了电化学生物传感器的工作原理,着重综述了几种主要应用于电化学传感器中的核酸等温扩增技术,同时比较了各方法的优缺点。 展开更多
关键词 核酸等温扩增技术 电化学分析 生物传感器 生物检测
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可视化核酸等温扩增方法快速检测羊肉源性成分
19
作者 吴晓芳 杨海兵 +3 位作者 朱晓娟 纪蕾 徐德顺 徐昌平 《中国卫生检验杂志》 CAS 2021年第7期817-819,822,共4页
目的建立羊肉源性成分核酸等温扩增可视化快速检测方法。方法用加热煮沸方法直接提取羊肉标本中的DNA;根据羊属特异性的Cytb基因序列的片段设计扩增引物,优化反应体系和反应条件,确立最佳等温扩增温度和扩增时间,对羊肉制品进行可视化... 目的建立羊肉源性成分核酸等温扩增可视化快速检测方法。方法用加热煮沸方法直接提取羊肉标本中的DNA;根据羊属特异性的Cytb基因序列的片段设计扩增引物,优化反应体系和反应条件,确立最佳等温扩增温度和扩增时间,对羊肉制品进行可视化等温扩增。并将建立的核酸等温扩增方法与荧光定量PCR法进行实际样品的检测。结果建立的可视化核酸等温扩增快速检测方法最佳的等温扩增温度和扩增时间为65℃30 min;该方法的最低检测限为1μg;对肉制品中目标检测物具有高度特异性。本研究对实际样品的检测结果与荧光PCR方法一致。结论该方法用于羊肉源性成分快速检测,具有操作简便、敏感性高、特异性强以及检测结果可肉眼观察等特点,适用于在超市、农贸市场进行羊肉类成分的现场快速检测。 展开更多
关键词 核酸等温扩增 可视化检测 羊肉源性成分
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重组酶介导的核酸等温扩增荧光法快速检测日本血吸虫感染性钉螺 被引量：22
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作者 李婷 刘燕红 +6 位作者 赵松 熊春蓉 董萱 张键锋 李伟 应清界 杨坤 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期109-114,120,共7页
目的建立重组酶介导的核酸等温扩增荧光(Recombinase aided amplification,RAA)法快速检测日本血吸虫感染性钉螺技术,并探索钉螺样品的最佳处理方式。方法将钉螺样本分成3组,每组均含7个亚组,其中6个亚组分别为50只阴性钉螺中混合1、2、... 目的建立重组酶介导的核酸等温扩增荧光(Recombinase aided amplification,RAA)法快速检测日本血吸虫感染性钉螺技术,并探索钉螺样品的最佳处理方式。方法将钉螺样本分成3组,每组均含7个亚组,其中6个亚组分别为50只阴性钉螺中混合1、2、3、4、5、10只日本血吸虫感染性钉螺,1个亚组为100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺。3组钉螺分别采用压碎去壳核酸试剂盒提取法、压碎去壳核酸粗提法和直接压碎带壳核酸粗提法进行处理,并分别进行荧光RAA与PCR法检测,对检测结果进行比较。结果建立了荧光RAA检测技术,工作温度为39℃,30 min内即可完成日本血吸虫感染性钉螺检测。钉螺群体样本采用压碎去壳核酸试剂盒提取法处理后,荧光RAA法最低可检测到100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺,PCR法最低可检测到50只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺;采用压碎去壳核酸粗提法处理后,荧光RAA法最低可检测到100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺,PCR法最低可检测到50只阴性钉螺中混合3只感染性钉螺;采用直接压碎带壳核酸粗提法处理后,荧光RAA法最低可检出50只阴性钉螺中混合10只感染性钉螺,PCR法仅可检测出50只阴性钉螺中混合10只感染性钉螺。结论成功建立了钉螺群体样本中日本血吸虫感染性钉螺快速检测的荧光RAA法,该方法具有快速、灵敏、操作简便等特点;压碎去壳核酸粗提法为钉螺样品的最优处理方式。 展开更多
关键词 日本血吸虫 钉螺 重组酶介导的核酸等温扩增技术 荧光检测
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