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利用电转化和三亲杂交方法高效转化根癌农杆菌
被引量：
4
1
作者
徐威
朱春宝
+1 位作者
朱宝泉
姚新生
《沈阳药科大学学报》
CAS
CSCD
2003年第6期451-454,共4页
目的探索根癌农杆菌的高效转化方法。方法考察质粒经电击转化法转化根癌农杆菌 (A grobacteriumtumefaciensLBA440 4)的影响因素 ,并优化其转化条件 ;研究采用三亲杂交方法 ,将带有vgb基因簇的重组质粒 pYG3 0 8导入A .tumefaciensLBA44...
目的探索根癌农杆菌的高效转化方法。方法考察质粒经电击转化法转化根癌农杆菌 (A grobacteriumtumefaciensLBA440 4)的影响因素 ,并优化其转化条件 ;研究采用三亲杂交方法 ,将带有vgb基因簇的重组质粒 pYG3 0 8导入A .tumefaciensLBA440 4;经PCR扩增反应进行验证。 结果外加电场强度和脉冲时间是决定电转化效率的关键因素 ,两者适当组合才可获得高转化效率 ;采用对数期中期的细菌和提高细菌浓度均可提高转化效率。用三亲杂交方法转化A .tumefaciensLBA440 4,可得到较高的转化效率。所获抗性转化子的质粒DNA酶切图谱正确。结论带有双元载体 (含vgb基因 )
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关键词
三亲杂交
电击转化
基因转移
转移DNA
根癌
农
杆菌
lba
4404
多聚酶链式反应
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职称材料
重组根瘤农杆菌葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶性质
2
作者
郭华
边英男
+2 位作者
刘锐
郑茂发
黄伟达
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期1356-1361,共6页
目前已发现的葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶均来源于真菌,尚无原核细胞来源的相关报道。从根瘤农杆菌LBA4404中克隆β-葡萄糖苷酶基因bg1,将其构建在表达载体pET-28b上,转化Escherichia coli RP(DE3),IPTG诱导表达。重组β-葡萄糖苷酶的比...
目前已发现的葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶均来源于真菌,尚无原核细胞来源的相关报道。从根瘤农杆菌LBA4404中克隆β-葡萄糖苷酶基因bg1,将其构建在表达载体pET-28b上,转化Escherichia coli RP(DE3),IPTG诱导表达。重组β-葡萄糖苷酶的比活高达36.7μmol/(min·mg)。对经过Ni柱纯化的重组酶进行酶学分析发现:该酶是糖基水解酶家族1的成员,底物亲和力高,专一性低,在温度为40℃和pH在5-8之间时具有较高的酶活,在低于40℃和pH5-10之间时可稳定保存。以pNP-β-Glc为底物,该酶的最适pH为6.4,最适温度为60℃,在37℃和pH6.4的反应体系中,该酶的Km为0.09mmol/L,竞争性抑制剂葡萄糖酸-δ-内酯和葡萄糖的Ki分别为0.03mmol/L和75mmol/L,具有很高的葡萄糖耐受性,当金属离子Ag+和Zn2+存在时,酶活被明显抑制。该酶对pNP-β-Gal和pNP-α-Glc的Km分别为3.61mmol/L和14.31mmol/L。
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关键词
Β-葡萄糖苷酶
根瘤农杆菌lba4404
葡萄糖耐受性
原文传递
用LBA4404/pCAMBIA系列转化水稻的最佳条件
被引量：
11
3
作者
刘志学
张旭
+4 位作者
徐亚南
何艺园
马向前
沈大棱
唐克轩
《复旦学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第4期439-443,共5页
用带有ｇｕｓ报告基因的农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１ 转化水稻品种鄂宜１０５ 成熟胚诱导的愈伤组织，以ｇｕｓ基因瞬间表达活性为指标测定转化频率，对于利用ｐＣＡＭＢＩＡ 表达载体系列进行水稻遗传转化的最佳条...
用带有ｇｕｓ报告基因的农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１ 转化水稻品种鄂宜１０５ 成熟胚诱导的愈伤组织，以ｇｕｓ基因瞬间表达活性为指标测定转化频率，对于利用ｐＣＡＭＢＩＡ 表达载体系列进行水稻遗传转化的最佳条件进行了初步的研究．结果表明：最适菌液浓度值为Ｄ（６００）＝ １．０；最适共培养温度为２２～２８ ℃；共培养培养基的ｐＨ 值在５．２～６．２ 这一较宽的范围内均可．共培养时间以不超过３ ｄ 为宜；在共培养培养基中加入乙酰丁香酮对提高转化效率非常重要，而在菌液中加入乙酰丁香酮处理对提高转化效率作用不大．但不同品种，甚至不同转化受体之间存在一定的差别，其最佳转化条件应视具体情况在此基础上加以摸索．
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关键词
pCAMBIA载体
农
杆菌
水稻
遗传转化
lba
4404
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职称材料
转猪轮状病毒VP6基因烟草植物的获得
被引量：
5
4
作者
张二芹
李世访
+2 位作者
王春凤
钱爱东
成卓敏
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期173-174,共2页
根据G enB ank中轮状病毒VP 6序列设计1对引物,从pGEM-T-VP 6质粒中扩增VP 6 PCR产物。将VP 6克隆到PB I121质粒中,转化根癌农杆菌LBA 4404,挑取阳性菌落的质粒进行酶切鉴定。用叶盘法转化烟草,获得再生苗,用RT-PCR、PCR和PCR-sou ther...
根据G enB ank中轮状病毒VP 6序列设计1对引物,从pGEM-T-VP 6质粒中扩增VP 6 PCR产物。将VP 6克隆到PB I121质粒中,转化根癌农杆菌LBA 4404,挑取阳性菌落的质粒进行酶切鉴定。用叶盘法转化烟草,获得再生苗,用RT-PCR、PCR和PCR-sou thern杂交方法进行鉴定,结果表明,VP 6基因已成功地转入烟草中。
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关键词
猪轮状病毒
VP6基因
根癌
农
杆菌
lba
4404
烟草
植物疫苗
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职称材料
将TERF1基因导入糖橙的研究
被引量：
1
5
作者
罗赛男
钟晓红
+1 位作者
邓子牛
黄容峰
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期623-627,共5页
用携带TERF1基因的EHA105和LB4404 2种农杆菌分别转化糖橙实生苗节间茎段。根据已建立的再生体系和转化体系,对已得到的抗性芽经PCR和RT-PCR检测,验证已获得7个转TERF1基因的糖橙株系。此外,还比较了2种农杆菌菌株对糖橙的浸染能力,结...
用携带TERF1基因的EHA105和LB4404 2种农杆菌分别转化糖橙实生苗节间茎段。根据已建立的再生体系和转化体系,对已得到的抗性芽经PCR和RT-PCR检测,验证已获得7个转TERF1基因的糖橙株系。此外,还比较了2种农杆菌菌株对糖橙的浸染能力,结果表明,EHA105农杆菌的浸染能力强于LB4404。
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关键词
糖橙
TERF1基因
EHA105
农
杆菌
lba
4404
农
杆菌
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职称材料
鹅细小病毒NS1基因植物真核表达载体的构建
被引量：
1
6
作者
李艳梅
张廷荣
+2 位作者
吴春涛
沈涛
朱新产
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期96-99,共4页
根据发表的鹅细小病毒GPV B株全基因组设计一对引物,采用PCR方法扩增出鹅细小病毒扬州株(GPV YZ)非结构蛋白基因NS1,克隆到植物表达载体pBI121中,转化至大肠杆菌感受态细胞JM109。经菌液PCR、双酶切及质粒PCR鉴定后,将阳性重组质粒转化...
根据发表的鹅细小病毒GPV B株全基因组设计一对引物,采用PCR方法扩增出鹅细小病毒扬州株(GPV YZ)非结构蛋白基因NS1,克隆到植物表达载体pBI121中,转化至大肠杆菌感受态细胞JM109。经菌液PCR、双酶切及质粒PCR鉴定后,将阳性重组质粒转化感受态农杆菌LBA4404。经菌液PCR及质粒PCR分析,获得了真核表达载体pBI121-NS1,该载体的构建为进一步研究鹅细小病毒NS1基因的分子生物学特性打下良好基础。
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关键词
鹅细小病毒
NS1基因
农
杆菌
lba
4404
真核植物表达载体
下载PDF
职称材料
万寿菊雄性不育两用系遗传转化体系的建立
7
作者
陈利文
唐楠
+7 位作者
张五华
唐道城
尹计成
张金艳
陈梦茹
冯依玲
姚文周
杨红峡
《分子植物育种》
CAS
北大核心
2023年第19期6398-6405,共8页
为了筛选适合万寿菊不定芽诱导的最佳外植体及激素浓度组合,并探讨该组织部位对卡那霉素、潮霉素的抗性临界点以及头孢霉素和利福平对LBA4404的抑菌性效果,构建万寿菊遗传转化体系。本研究以三种激素为组合,以万寿菊雄性不育两用系2-2...
为了筛选适合万寿菊不定芽诱导的最佳外植体及激素浓度组合,并探讨该组织部位对卡那霉素、潮霉素的抗性临界点以及头孢霉素和利福平对LBA4404的抑菌性效果,构建万寿菊遗传转化体系。本研究以三种激素为组合,以万寿菊雄性不育两用系2-2的子叶、下胚轴、叶片为材料筛选出适合万寿菊的再生体系的激素配比及最佳的组织部位;以万寿菊子叶为材料筛选其对卡那霉素、利福平、头孢霉素、潮霉素四种抗生素抗性临界点;筛选利福平、头孢霉素对农杆菌LBA4404的抑菌浓度。结果表明:1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA+30 g蔗糖的MS培养基可以作为万寿菊子叶的最佳诱导激素浓度组合,MS5和MS9可以在万寿菊叶片中诱导出不定芽,但诱导率极低,下胚轴在48个激素组合无不定芽的产生;利福平和头孢霉素两种抗生素浓度在200 mg/L时能对LBA4404农杆菌的生长起到有效的抑制,并且在该浓度下对万寿菊子叶不定芽的产生起到一定的促进作用;子叶对于潮霉素、卡那霉素的抗性浓度分别为30、100 mg/L。利用建立的万寿菊再生体系及抗生素浓度体系可以为农杆菌介导万寿菊遗传转化提供理论基础。
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关键词
万寿菊
抗生素
lba
4404
农
杆菌
再生体系
遗传转化体系
原文传递
题名
利用电转化和三亲杂交方法高效转化根癌农杆菌
被引量：
4
1
作者
徐威
朱春宝
朱宝泉
姚新生
机构
沈阳药科大学制药工程学院
上海医药工业研究院
出处
《沈阳药科大学学报》
CAS
CSCD
2003年第6期451-454,共4页
基金
国家高技术研究发展计划资助项目 (863计划 2 0 0 1AA2 1 42 0 1 )
文摘
目的探索根癌农杆菌的高效转化方法。方法考察质粒经电击转化法转化根癌农杆菌 (A grobacteriumtumefaciensLBA440 4)的影响因素 ,并优化其转化条件 ;研究采用三亲杂交方法 ,将带有vgb基因簇的重组质粒 pYG3 0 8导入A .tumefaciensLBA440 4;经PCR扩增反应进行验证。 结果外加电场强度和脉冲时间是决定电转化效率的关键因素 ,两者适当组合才可获得高转化效率 ;采用对数期中期的细菌和提高细菌浓度均可提高转化效率。用三亲杂交方法转化A .tumefaciensLBA440 4,可得到较高的转化效率。所获抗性转化子的质粒DNA酶切图谱正确。结论带有双元载体 (含vgb基因 )
关键词
三亲杂交
电击转化
基因转移
转移DNA
根癌
农
杆菌
lba
4404
多聚酶链式反应
Keywords
tri-parental mating
electroporation
gene transfer
T-DNA
Agrobacterium tumefaciens
lba
4404
PCR
分类号
R94 [医药卫生—药剂学]
下载PDF
职称材料
题名
重组根瘤农杆菌葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶性质
2
作者
郭华
边英男
刘锐
郑茂发
黄伟达
机构
复旦大学生物化学与分子生物学系
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期1356-1361,共6页
文摘
目前已发现的葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶均来源于真菌,尚无原核细胞来源的相关报道。从根瘤农杆菌LBA4404中克隆β-葡萄糖苷酶基因bg1,将其构建在表达载体pET-28b上,转化Escherichia coli RP(DE3),IPTG诱导表达。重组β-葡萄糖苷酶的比活高达36.7μmol/(min·mg)。对经过Ni柱纯化的重组酶进行酶学分析发现:该酶是糖基水解酶家族1的成员,底物亲和力高,专一性低,在温度为40℃和pH在5-8之间时具有较高的酶活,在低于40℃和pH5-10之间时可稳定保存。以pNP-β-Glc为底物,该酶的最适pH为6.4,最适温度为60℃,在37℃和pH6.4的反应体系中,该酶的Km为0.09mmol/L,竞争性抑制剂葡萄糖酸-δ-内酯和葡萄糖的Ki分别为0.03mmol/L和75mmol/L,具有很高的葡萄糖耐受性,当金属离子Ag+和Zn2+存在时,酶活被明显抑制。该酶对pNP-β-Gal和pNP-α-Glc的Km分别为3.61mmol/L和14.31mmol/L。
关键词
Β-葡萄糖苷酶
根瘤农杆菌lba4404
葡萄糖耐受性
Keywords
β-glucosidase
Agrobacterium tumefaciens str.
lba
4404
Glucose tolerance
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
用LBA4404/pCAMBIA系列转化水稻的最佳条件
被引量：
11
3
作者
刘志学
张旭
徐亚南
何艺园
马向前
沈大棱
唐克轩
机构
复旦大学遗传学研究所
复旦大学微生物和微生物工程系
出处
《复旦学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第4期439-443,共5页
基金
国家科委八六三高科技项目
洛氏基金
文摘
用带有ｇｕｓ报告基因的农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１ 转化水稻品种鄂宜１０５ 成熟胚诱导的愈伤组织，以ｇｕｓ基因瞬间表达活性为指标测定转化频率，对于利用ｐＣＡＭＢＩＡ 表达载体系列进行水稻遗传转化的最佳条件进行了初步的研究．结果表明：最适菌液浓度值为Ｄ（６００）＝ １．０；最适共培养温度为２２～２８ ℃；共培养培养基的ｐＨ 值在５．２～６．２ 这一较宽的范围内均可．共培养时间以不超过３ ｄ 为宜；在共培养培养基中加入乙酰丁香酮对提高转化效率非常重要，而在菌液中加入乙酰丁香酮处理对提高转化效率作用不大．但不同品种，甚至不同转化受体之间存在一定的差别，其最佳转化条件应视具体情况在此基础上加以摸索．
关键词
pCAMBIA载体
农
杆菌
水稻
遗传转化
lba
4404
Keywords
pCAMBIA
Agrobacterium tumefaciens
rice
genetic transformation
分类号
S511.035 [农业科学—作物学]
下载PDF
职称材料
题名
转猪轮状病毒VP6基因烟草植物的获得
被引量：
5
4
作者
张二芹
李世访
王春凤
钱爱东
成卓敏
机构
吉林农业大学动物科技学院
中国农业科学院植物保护研究所
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期173-174,共2页
基金
国家"863"计划项目(2003AA241120)
文摘
根据G enB ank中轮状病毒VP 6序列设计1对引物,从pGEM-T-VP 6质粒中扩增VP 6 PCR产物。将VP 6克隆到PB I121质粒中,转化根癌农杆菌LBA 4404,挑取阳性菌落的质粒进行酶切鉴定。用叶盘法转化烟草,获得再生苗,用RT-PCR、PCR和PCR-sou thern杂交方法进行鉴定,结果表明,VP 6基因已成功地转入烟草中。
关键词
猪轮状病毒
VP6基因
根癌
农
杆菌
lba
4404
烟草
植物疫苗
Keywords
porcine rotavirus（PRV）
VP6 gene
agrobacterium tumefaciens strain
lba
4404
tobacco
plant vaccine
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
将TERF1基因导入糖橙的研究
被引量：
1
5
作者
罗赛男
钟晓红
邓子牛
黄容峰
机构
湖南农业大学园艺园林学院
国家柑橘改良中心长沙分中心
中国农业科学院生物技术研究所
出处
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期623-627,共5页
基金
湖南省重大科技专项(04NK1005)
文摘
用携带TERF1基因的EHA105和LB4404 2种农杆菌分别转化糖橙实生苗节间茎段。根据已建立的再生体系和转化体系,对已得到的抗性芽经PCR和RT-PCR检测,验证已获得7个转TERF1基因的糖橙株系。此外,还比较了2种农杆菌菌株对糖橙的浸染能力,结果表明,EHA105农杆菌的浸染能力强于LB4404。
关键词
糖橙
TERF1基因
EHA105
农
杆菌
lba
4404
农
杆菌
Keywords
sweet orange
TERF1 gene
EHA105
lba
4404
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
S666.4 [农业科学—果树学]
下载PDF
职称材料
题名
鹅细小病毒NS1基因植物真核表达载体的构建
被引量：
1
6
作者
李艳梅
张廷荣
吴春涛
沈涛
朱新产
机构
莱阳农学院动物科技学院
山东农业大学动物科技学院
山东信得药业有限公司
莱阳农学院生命科学学院
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期96-99,共4页
基金
青岛市科技发展计划项目
文摘
根据发表的鹅细小病毒GPV B株全基因组设计一对引物,采用PCR方法扩增出鹅细小病毒扬州株(GPV YZ)非结构蛋白基因NS1,克隆到植物表达载体pBI121中,转化至大肠杆菌感受态细胞JM109。经菌液PCR、双酶切及质粒PCR鉴定后,将阳性重组质粒转化感受态农杆菌LBA4404。经菌液PCR及质粒PCR分析,获得了真核表达载体pBI121-NS1,该载体的构建为进一步研究鹅细小病毒NS1基因的分子生物学特性打下良好基础。
关键词
鹅细小病毒
NS1基因
农
杆菌
lba
4404
真核植物表达载体
Keywords
Goose parvovirus
NS1 gene
Agrobacterium
lba
4404
Eukaryotic plant expressing vector
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
万寿菊雄性不育两用系遗传转化体系的建立
7
作者
陈利文
唐楠
张五华
唐道城
尹计成
张金艳
陈梦茹
冯依玲
姚文周
杨红峡
机构
青海大学高原花卉研究中心
青海大学
青海通艺生态治理有限公司
出处
《分子植物育种》
CAS
北大核心
2023年第19期6398-6405,共8页
基金
青海省中央引导地方科技发展资金项目(2021ZY025)。
文摘
为了筛选适合万寿菊不定芽诱导的最佳外植体及激素浓度组合,并探讨该组织部位对卡那霉素、潮霉素的抗性临界点以及头孢霉素和利福平对LBA4404的抑菌性效果,构建万寿菊遗传转化体系。本研究以三种激素为组合,以万寿菊雄性不育两用系2-2的子叶、下胚轴、叶片为材料筛选出适合万寿菊的再生体系的激素配比及最佳的组织部位;以万寿菊子叶为材料筛选其对卡那霉素、利福平、头孢霉素、潮霉素四种抗生素抗性临界点;筛选利福平、头孢霉素对农杆菌LBA4404的抑菌浓度。结果表明:1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA+30 g蔗糖的MS培养基可以作为万寿菊子叶的最佳诱导激素浓度组合,MS5和MS9可以在万寿菊叶片中诱导出不定芽,但诱导率极低,下胚轴在48个激素组合无不定芽的产生;利福平和头孢霉素两种抗生素浓度在200 mg/L时能对LBA4404农杆菌的生长起到有效的抑制,并且在该浓度下对万寿菊子叶不定芽的产生起到一定的促进作用;子叶对于潮霉素、卡那霉素的抗性浓度分别为30、100 mg/L。利用建立的万寿菊再生体系及抗生素浓度体系可以为农杆菌介导万寿菊遗传转化提供理论基础。
关键词
万寿菊
抗生素
lba
4404
农
杆菌
再生体系
遗传转化体系
Keywords
Marigold
Antibiotics
A grobacterium
lba
4404
Regeneration system
Genetic transformation system
分类号
S681.9 [农业科学—观赏园艺]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用电转化和三亲杂交方法高效转化根癌农杆菌
徐威
朱春宝
朱宝泉
姚新生
《沈阳药科大学学报》
CAS
CSCD
2003
4
下载PDF
职称材料
2
重组根瘤农杆菌葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶性质
郭华
边英男
刘锐
郑茂发
黄伟达
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
原文传递
3
用LBA4404/pCAMBIA系列转化水稻的最佳条件
刘志学
张旭
徐亚南
何艺园
马向前
沈大棱
唐克轩
《复旦学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
1999
11
下载PDF
职称材料
4
转猪轮状病毒VP6基因烟草植物的获得
张二芹
李世访
王春凤
钱爱东
成卓敏
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
5
下载PDF
职称材料
5
将TERF1基因导入糖橙的研究
罗赛男
钟晓红
邓子牛
黄容峰
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
下载PDF
职称材料
6
鹅细小病毒NS1基因植物真核表达载体的构建
李艳梅
张廷荣
吴春涛
沈涛
朱新产
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
下载PDF
职称材料
7
万寿菊雄性不育两用系遗传转化体系的建立
陈利文
唐楠
张五华
唐道城
尹计成
张金艳
陈梦茹
冯依玲
姚文周
杨红峡
《分子植物育种》
CAS
北大核心
2023
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