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欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GD2022株的分离鉴定及遗传进化分析
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作者 邓可辉 王修武 +3 位作者 郭智轩 韩淑杰 孙守湖 贺东生 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期34-41,共8页
为了解广东省欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)流行情况,将RT-PCR检测PRRSV-1阳性的病料(肺脏和淋巴结)接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs)进行病原分离鉴定,以分离毒株核酸作为模板,对分离的PRRSV-1进行全基因克隆和测序,并与国内外PRRSV-... 为了解广东省欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)流行情况,将RT-PCR检测PRRSV-1阳性的病料(肺脏和淋巴结)接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs)进行病原分离鉴定,以分离毒株核酸作为模板,对分离的PRRSV-1进行全基因克隆和测序,并与国内外PRRSV-1和PRRSV-2参考毒株序列进行同源性及遗传进化分析。结果显示,成功分离1株PRRSV-1,命名为GD2022株,其接种PAMs可引起典型的细胞病变,从出现病变的F5细胞中提取核酸,用PCR分段扩增出PRRSV-1 GD2022株10个基因组片段,分别连接到pCE2 TA/Blunt-Zero载体进行测序,拼接后获得PRRSV-1 GD2022株全基因组长15058个核苷酸(不包含polyA尾)。同源性分析显示,该分离株全基因组序列与PRRSV-1参考毒株(LV株)和PRRSV-2参考毒株(VR2333株)核苷酸序列同源性分别为87%和59.7%。遗传进化树分析显示,全基因序列和ORF5基因与国内外PRRSV-1毒株为同一进化分支,且与疫苗毒分支较远,推断分离株为1株PRRSV-1,属于基因亚型1。氨基酸序列比对分析显示,ORF3和ORF4重叠区域缺失3个核苷酸,导致GP3蛋白和GP4蛋白分别在第245和第65氨基酸位点缺失了1个氨基酸,且与LV株比对,GD2022毒株GP5的氨基酸序列在中和抗原表位第33氨基酸位点(D→A)出现点突变,在高变区第56氨基酸位点(D→A)和第63氨基酸位点(G→D)出现两处突变。重组分析显示,GD2022毒株未发生重组事件。成功分离鉴定1株PRRSV-1毒株,为国内PRRSV-1生物学特性研究提供了材料,也为了解广东省内PRRSV-1流行情况及变异特点提供参考依据。 展开更多
关键词 欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 全基因组测序 遗传进化分析
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2016年我国3株欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其全基因组特征分析 被引量:12
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作者 张洪亮 张晶 +13 位作者 张文立 相丽润 宋帅杰 刘春晓 李真 彭金美 陈家锃 冷超粮 王倩 白云 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期513-517,共5页
2016年,本实验室共检测到3株基因1型(欧洲型)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为ZD1株、WK14株和WG9株,本研究对3株PRRSV进行了全基因组序列分析。遗传演化分析显示,3株PRRSV均属于基因1型I亚型,与基因1型代表株LV的核苷酸同源性... 2016年,本实验室共检测到3株基因1型(欧洲型)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为ZD1株、WK14株和WG9株,本研究对3株PRRSV进行了全基因组序列分析。遗传演化分析显示,3株PRRSV均属于基因1型I亚型,与基因1型代表株LV的核苷酸同源性为88.7%~88.9%,与基因2型代表株VR2332的核苷酸同源性为60.7%~60.8%。ORF3与ORF4推导氨基酸序列比对结果显示,ZD1株的ORF3提前26个氨基酸(aa)终止,这是首次报道基因1型PRRSV编码的结构蛋白存在提前终止现象,WK14株与WG9株在ORF3的245位存在1个氨基酸的缺失;3株PRRSV在ORF4的66位皆存在1个氨基酸的缺失。Simplot生物学重组软件分析表明,WK14株为重组病毒,供体病毒株为BJEU06-1,提供重组片段的病毒株为NVDC-FJ,重组位置位于第931~3 379位碱基处。ZD1株和WG9株未发现重组现象。本研究发现我国欧洲型PRRSV基因组在缺失、重组等方面正发生一些新的变化,有必要对该类病毒进行持续监测和深入研究。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因1型 缺失 重组
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欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪病理学特征及其组织内病毒分布 被引量:3
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作者 李冰 刘丽颖 +1 位作者 王辉暖 周铁忠 《动物医学进展》 北大核心 2015年第7期67-70,共4页
为了研究仔猪感染欧洲型猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病理学特征及其病毒在组织内的分布特点,用辽宁分离毒株EU-PRRSV LNEU12接种健康仔猪14d后,扑杀所有仔猪,观察病理学特征并采用免疫组织化学方法分析组织内抗原分布情况。结果表明,欧... 为了研究仔猪感染欧洲型猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病理学特征及其病毒在组织内的分布特点,用辽宁分离毒株EU-PRRSV LNEU12接种健康仔猪14d后,扑杀所有仔猪,观察病理学特征并采用免疫组织化学方法分析组织内抗原分布情况。结果表明,欧洲型PRRS主要的病理变化是多发性间质性肺炎和淋巴结炎;病毒主要分布在肺脏、淋巴结、脾脏和脑组织中,其次为肝脏和肾脏。证明PRRS典型病理变化的产生与PRRSV分布情况具有明显的相关性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 欧洲型 病理学特征 病毒分布 仔猪
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欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 鲁韦韦 唐泰山 +2 位作者 姜平 张常印 王凯民 《畜牧与兽医》 北大核心 2008年第7期26-30,共5页
根据欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计E1和E6 2套PCR引物和TaqMan荧光探针,建立E1和E6荧光RT-PCR方法,用于检测PRRSV。反应条件优化后,用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA进行PCR扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟(CSFV)、猪... 根据欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计E1和E6 2套PCR引物和TaqMan荧光探针,建立E1和E6荧光RT-PCR方法,用于检测PRRSV。反应条件优化后,用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA进行PCR扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟(CSFV)、猪伪狂犬(PRV)等7种病毒进行特异性检测。结果显示,建立的E1和E6荧光RT-PCR可以检出欧洲型PRRSV,敏感性依次为616和216个拷贝的PRRSV重组质粒DNA,而CSFV等非PRRSV均为阴性。建立的E1、E6荧光RT-PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,可作为检测欧洲型PRRSV的技术储备。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 荧光RT-PCR 检测
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美洲型与欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7蛋白的截短表达和鉴定
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《中国畜牧兽医文摘》 2014年第1期119-119,共1页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp7蛋白具有较强的免疫原性,且在美洲型(NA)和欧洲型(EU)PRRSV之间免疫原性差异显著,是抗体分型检测的理想靶抗原。本研究采用原核表达系统分别表达和纯化了NA和EUPRRSVNsp7蛋白,Western blott... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp7蛋白具有较强的免疫原性,且在美洲型(NA)和欧洲型(EU)PRRSV之间免疫原性差异显著,是抗体分型检测的理想靶抗原。本研究采用原核表达系统分别表达和纯化了NA和EUPRRSVNsp7蛋白,Western blotting分析表明重组蛋白与相应血清型抗体有较强的免疫反应, 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 重组蛋白 欧洲 美洲 鉴定 截短 原核表达系统 免疫原性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒入侵宿主细胞途径研究进展 被引量:2
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作者 李睿 乔松林 张改平 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期80-83,共4页
病毒入侵宿主细胞是其完成自身复制周期的首要步骤。全面解析病毒入侵宿主细胞途径可深入揭示病毒感染及其致病机制,有助于制定更为有效的抗病毒策略。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是具有囊膜的单股正链RNA病毒,对全球养猪业造成巨大... 病毒入侵宿主细胞是其完成自身复制周期的首要步骤。全面解析病毒入侵宿主细胞途径可深入揭示病毒感染及其致病机制,有助于制定更为有效的抗病毒策略。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是具有囊膜的单股正链RNA病毒,对全球养猪业造成巨大的经济损失。以往研究报道PRRSV主要通过网格蛋白介导的内吞途径(CME)入侵宿主细胞。近年来研究发现,除CME外,PRRSV还会采取其他途径入侵宿主细胞。本文通过总结PRRSV入侵宿主细胞途径的最新研究进展,以期加深人们对PRRSV的认识,并为防控该病毒提供新的思路。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 入侵 内吞 巨胞饮 膜融合
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2021-2023年河南部分地区猪场猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病抗体检测与分析 被引量:1
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作者 王军 韩亚楠 +2 位作者 李月勤 张利卫 彭永帅 《动物医学进展》 北大核心 2024年第10期68-71,共4页
为了解河南省猪场主要病毒性疾病抗体水平,于2021-2023年共采集8014份血清样品,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对所采集的样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒gE(PRV-gE)、猪伪狂犬病病毒gB(PRV-gB)... 为了解河南省猪场主要病毒性疾病抗体水平,于2021-2023年共采集8014份血清样品,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对所采集的样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒gE(PRV-gE)、猪伪狂犬病病毒gB(PRV-gB)的抗体水平进行检测。结果显示,CSFV抗体的总阳性率为85.70%(6868/8014),PRRSV抗体的总阳性率为81.83%(6558/8014),PRV-gE抗体的总阳性率为11.08%(888/8014),PRV-gB抗体的总阳性率为83.10%(6660/8014)。研究表明,CSFV总体疫苗免疫抗体水平良好,能够有效地控制该病在猪场的发生与流行,但猪群仍存在PRRSV和PRV的感染风险,需要完善免疫方案、加强防控。研究结果可为猪场制定合理的免疫程序提供参考,促进养猪行业的健康发展。 展开更多
关键词 猪瘟 猪繁殖与呼吸综合征 猪伪狂犬病 抗体 检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒的持续感染和传播特点及防控出路 被引量:2
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作者 蔡雪辉 徐敏 汤艳东 《猪业科学》 2024年第4期28-31,6,共5页
1PRRS简述。1987年,美国首次暴发猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),随后在世界各国陆续暴发该病,截至目前PRRS已遍布世界主要的养猪业国家,成为各国养猪业最为严重的疫病之一,每年给全球养猪业造成数十亿甚至上百亿美元的经济损失。
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 养猪业 持续感染 传播特点 PRRS 疫病 暴发 经济损失
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一起输入性猪繁殖与呼吸综合征疫情的紧急流行病学调查
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作者 吴雪军 张传亮 +1 位作者 刘俐君 李盛琼 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期20-24,共5页
自2023年6月4日开始,四川省金堂县某生猪代养场引进的仔猪陆续出现异常死亡情况。为确定病因,分析来源,评估传播风险,赴现场开展了紧急流行病学调查。该猪场于2023年5月20—30日分4批共引进仔猪2200头,截至7月14日,共有222头仔猪发病,12... 自2023年6月4日开始,四川省金堂县某生猪代养场引进的仔猪陆续出现异常死亡情况。为确定病因,分析来源,评估传播风险,赴现场开展了紧急流行病学调查。该猪场于2023年5月20—30日分4批共引进仔猪2200头,截至7月14日,共有222头仔猪发病,124头死亡,袭击率为10.09%,病死率为55.86%。经现场临床诊断、病死猪病理剖检、实验室检测及干预治疗效果印证,综合判定病因为猪繁殖与呼吸综合征病毒感染。经追踪调查,该发病猪场无生猪调出,与该猪场有流行病学关联的其他猪场未出现类似发病情况,因此判定疫情扩散风险较低。溯源调查发现发病仔猪的来源种猪场曾发生过猪繁殖与呼吸综合征疫情,现场调查发现该发病猪场生产管理规范,且周边养殖场未出现猪只异常死亡情况,因此综合判定疫情由引进带毒仔猪引起。本起疫情警示,养殖场在引种前应先确认种源场的疾病流行情况,同时加强引种检疫,尽可能避免输入性疫情发生。 展开更多
关键词 紧急流行病学调查 猪繁殖与呼吸综合征 仔猪 猝死
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猪繁殖与呼吸综合征毒株的鉴定与分析
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作者 刘发全 吴昊 +2 位作者 袁琪 王旭 吴崇铤 《中国畜牧业》 2024年第7期39-40,共2页
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproducductiveandrespiratory syndrome,PRRS)是引起成年猪出现繁殖障碍、产死胎和木乃伊胎、早产、流产,仔猪发生呼吸系统疾病和大量死亡的一种高度传染性疾病,传播范围广、速度快。该病病原为猪繁殖与... 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproducductiveandrespiratory syndrome,PRRS)是引起成年猪出现繁殖障碍、产死胎和木乃伊胎、早产、流产,仔猪发生呼吸系统疾病和大量死亡的一种高度传染性疾病,传播范围广、速度快。该病病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproducductiveandrespiratory syndrome virus,PRRSV)。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 繁殖障碍 呼吸系统疾病 传染性疾病 大量死亡 木乃伊 PRRSV 鉴定与分析
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猪繁殖与呼吸综合征病毒促进猪链球菌2型感染猪肺泡巨噬细胞的初步研究 被引量:9
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作者 宋冬 全映颖 +5 位作者 高树基 申娅敏 高梦霞 王瑜欣 魏颖 汪洋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期385-391,共7页
为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对不同毒力猪链球菌2型(SS2)感染巨噬细胞的影响,本研究建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染永生化猪肺泡巨噬细胞(iPAM)的模型,实验分为4组:HA单独感染组(HA组)、PRRSV-H... 为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对不同毒力猪链球菌2型(SS2)感染巨噬细胞的影响,本研究建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染永生化猪肺泡巨噬细胞(iPAM)的模型,实验分为4组:HA单独感染组(HA组)、PRRSV-HA共感染组(PRRSV-HA组)、T1/5单独感染组(T1/5组)和PRRSV-T1/5共感染组(PRRSV-T1/5组),利用该模型通过黏附试验、侵入试验和细胞内存活试验检测PRRSV对HA和T1/5黏附、侵入iPAM细胞及对该细胞存活率的影响,进一步利用荧光定量PCR方法检测各感染组iPAM模型细胞中细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-β)的转录水平。黏附试验结果显示,HA感染2 h后,PRRSV-HA组细菌对细胞的黏附水平极显著高于HA组(P<0.01或P<0.001);T1/5感染6 h后,PRRSV-T1/5组细菌对细胞的黏附水平极显著高于T1/5组(P<0.001),表明PRRSV与HA或T1/5共感染可以促进HA和T1/5对iPAM模型细胞的黏附,且HA对iPAM细胞的黏附水平高于T1/5。侵入试验结果显示,感染4 h后,共感染组细菌侵入iPAM细胞中的数量比单独感染组极显著增多(P<0.01或P<0.001)。细胞内存活试验结果显示,感染2 h后,共感染组细菌的存活率比单独感染组极显著升高(P<0.001)。荧光定量PCR试验结果显示,感染4 h时,共感染组iPAM细胞中细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-β)的转录水平极显著高于单独感染组(P<0.001)。本研究首次建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染i PAM的模型,基于该模型研究首次发现PRRSV感染不仅促进了不同毒力SS2对i PAM细胞的黏附、侵入及SS2在iPAM细胞内的存活,还可以协同SS2显著提高该细胞中细胞因子的转录水平。本研究为进一步探究PRRSV和SS混合感染的机制提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪链球菌 永生化猪肺泡巨噬细胞 共感染
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不同猪繁殖与呼吸综合征疫苗组合体液免疫效果评估 被引量:1
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作者 任文慧 阮胜男 +5 位作者 库旭钢 张海峰 于学祥 田梓翰 何启盖 江云波 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第1期21-28,共8页
为了比较不同猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对体液免疫效果的影响,本试验选择新引进猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性后备母猪的3个猪场,将各场内猪只按体重分为3个阶段:7~20、20~35和35~50 kg,各场分别从... 为了比较不同猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对体液免疫效果的影响,本试验选择新引进猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性后备母猪的3个猪场,将各场内猪只按体重分为3个阶段:7~20、20~35和35~50 kg,各场分别从中选取20头猪,共180头猪。每场选用1种免疫方案,第1组混合疫苗组,为首次免疫PRRS弱毒疫苗(CH-1R株),28 d后加强免疫PRRS灭活疫苗(CH-1a株);第2组弱毒疫苗组,为2次均免疫PRRS弱毒疫苗;第3组灭活疫苗组,为2次均免疫PRRS灭活疫苗。疫苗首次免疫后14、28、42和56 d采集猪血清,进行特异性PRRSV ELISA(N蛋白)检测和中和抗体评价;首次免疫后14和28 d采集猪血液,进行PRRSV实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血液内是否存在PRRSV;统计试验猪分娩后头胎的活仔数、断奶仔猪数和窝均总仔数,进行临床数据比较分析。结果显示,35~50 kg体重阶段猪只接种疫苗后ELISA检测抗体水平增高较其他2个阶段更明显。混合疫苗组在免疫56 d时血清ELISA阳性率为100%,且ELISA结果极显著高于弱毒疫苗组和灭活疫苗组(P<0.01)。尽管各组没有产生特异性抗NADC30-like毒株的中和抗体,但针对PRRSV经典和高致病性毒株的中和抗体保护效价结果显示,混合疫苗组在免疫56 d时中和抗体效价极显著高于弱毒疫苗组和灭活疫苗组(P<0.01);RT-qPCR检测未发现阳性猪;各组试验猪分娩后头胎的活仔数、断奶仔猪数和窝均总仔数之间差异不显著(P>0.05)。结果表明,混合疫苗组对体液免疫的促进效果显著优于弱毒疫苗组和灭活疫苗组。该试验为临床正确选择PRRS疫苗免疫方案提供了科学数据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 疫苗 体液免疫评估 ELISA抗体 中和抗体
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猪繁殖与呼吸综合征的感染特性与防控分析 被引量:1
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作者 范亚楠 陈曦 +3 位作者 王维 史茹楠 何长生 朱良强 《畜牧兽医杂志》 2024年第4期98-101,105,共5页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是影响全球猪业生产的病毒性疫病之一,我国又将其称“蓝耳病”。PRRS是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)感染引起的,在我国广泛流行,给养猪业造成... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是影响全球猪业生产的病毒性疫病之一,我国又将其称“蓝耳病”。PRRS是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)感染引起的,在我国广泛流行,给养猪业造成严重经济损失。由于PRRSV能够引起猪只的免疫抑制,从而增加细菌性继发感染的几率,进而影响其它疫苗的免疫效果,此外,PRRSV抑制宿主免疫反应有利于PRRSV持续感染。当前商品化疫苗不能同时满足有效性和安全性,弱毒活疫苗的应用,进一步提高了PRRSV变异和重组的几率,使得PRRS成为世界上最具有挑战性的病毒性传染病之一。本文总结分析了PRRS防控难点,针对不同状况下猪群提出防控建议,以期为PRRS防控和净化提供思考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 感染 防控 净化
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京津冀地区猪繁殖与呼吸综合征流行特点及防控建议 被引量:1
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作者 杨丽景 鄢明华 +5 位作者 王建军 任卫科 钱建旺 李富强 田向学 石俊鹏 《猪业科学》 2024年第1期36-41,6,共7页
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine respiratory and reproductive syndrome,PRRS)俗称“猪蓝耳病”,临床以母猪繁殖障碍和仔猪及生长猪群呼吸道症状为主要特征。该病1987年在美国东南部首次报道,之后迅速扩散至美国主要养猪地区和加拿大。199... 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine respiratory and reproductive syndrome,PRRS)俗称“猪蓝耳病”,临床以母猪繁殖障碍和仔猪及生长猪群呼吸道症状为主要特征。该病1987年在美国东南部首次报道,之后迅速扩散至美国主要养猪地区和加拿大。1990年和1991年该病相继在欧洲和亚洲暴发和流行。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 猪繁殖障碍 防控建议 猪蓝耳病 生长猪 美国东南部 呼吸道症状 京津冀地区
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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立
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作者 覃建光 姚静 +7 位作者 刘文波 刘嘉琪 陈国昌 任同伟 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期1-6,共6页
为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pE... 为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-N。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG诱导N蛋白表达,将纯化后的重组N蛋白免疫小鼠,获得N蛋白多克隆抗体。将纯化后的N蛋白作为抗原,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,并评估该方法的特异性、重复性和准确性。结果表明,表达的重组N蛋白呈可溶性,制备的N蛋白多克隆抗体ELISA效价能达到1∶2048000,IFA和Western blot结果表明制备的鼠多克隆抗体能特异性识别PRRSV N蛋白。建立的间接ELISA方法特异性良好,重复性试验变异系数均小于10%,且与同类型商品化试剂盒结果比较,符合率达到91.10%,可为PRRSV N蛋白的免疫学检测和结构功能的研究提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体 间接ELISA
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
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作者 黄袁慧 马静 +8 位作者 王乃迪 张昕 张莹 兰冰洁 刘玉良 倪建强 周智 李义平 王传彬 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期195-200,共6页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白是病毒主要囊膜结构蛋白和中和抗体主要靶蛋白,广泛应用于PRRS新型疫苗和诊断技术的研究。为获得具有与天然构象相近的PRRSV GP5蛋白,本研... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白是病毒主要囊膜结构蛋白和中和抗体主要靶蛋白,广泛应用于PRRS新型疫苗和诊断技术的研究。为获得具有与天然构象相近的PRRSV GP5蛋白,本研究根据草地贪夜蛾(Spdopterafrugiperda)密码子偏好性,优化PRRSV ORF5基因编码密码子,并克隆至杆状病毒载体后转染Sf9昆虫细胞,构建了重组杆状病毒rBac-PRRSV-GP5。经Western blot证实GP5蛋白在Sf9细胞中获得高效表达,且具有良好的免疫反应原性。经镍离子亲和层析纯化后,获得高纯度的重组GP5蛋白,为开展PRRSV诊断技术研发、生物学功能研究等奠定了抗原基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 GP5蛋白 表达 蛋白纯化
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非洲猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用
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作者 刘影 闫若潜 +10 位作者 王东方 杨海波 赵美雪 宋丹 赵雪丽 谢彩华 王淑娟 马震原 柴茂 王翠 刘梅芬 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期118-130,共13页
建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应... 建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应程序等反应条件,建立一种基于探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和重复性,对130份临床样品进行检测,并与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)进行比较分析。本研究成功建立的ASFV和HP-PRRSV二重FQ-PCR检测方法在10^(-1)~10^(5) copies/μL模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和HP-PRRSV基因出现阳性扩增,但对猪日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲经典株(VR2332株)、健康猪脾脏等7种病原核酸样品对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在0.53%~3.14%,重复性良好;对ASFV和HP-PRRSV的最低检测模板浓度均为10 copies/μL;利用建立的二重FQ-PCR方法对130份临床样品进行检测,检测结果与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和HPPRRSV二重FQ-PCR检测方法,为ASFV和HP-PRRSV的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重FQ-PCR
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猪繁殖与呼吸综合征检测与监测技术要点 被引量:1
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作者 张宝真 刘明杰 +4 位作者 陈盛楠 颜广智 涂常松 黄良宗 白挨泉 《猪业科学》 2024年第4期36-39,共4页
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的一种严重危害全球养猪生产的传染病,其主要危害是引起母猪繁... 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的一种严重危害全球养猪生产的传染病,其主要危害是引起母猪繁殖障碍和生长猪呼吸道疾病以及发病猪群的继发感染。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 猪繁殖障碍 呼吸道疾病 继发感染 PRRSV 技术要点
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白纳米抗体的筛选及其对病毒复制的抑制效应
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作者 宋雯妍 张瀚文 +5 位作者 吴澳迪 张丽燕 刘照 叶桐桐 陈创夫 盛金良 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期258-270,共13页
为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并探究其对病毒复制的抑制效应。使用原核表达系统将PRRSV-GP5蛋白大量表达后经镍柱亲和层析法纯化,使用所获的重组... 为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并探究其对病毒复制的抑制效应。使用原核表达系统将PRRSV-GP5蛋白大量表达后经镍柱亲和层析法纯化,使用所获的重组GP5蛋白免疫羊驼,并于第0、14、28、42天时采血,检测羊驼体内抗体效价后分离全血淋巴细胞,提取细胞总RNA,反转录后使用巢式PCR扩增出重链抗体可变区(VHH)片段,并与pCANTAB-5E载体相连后转化入TG1感受态细胞,利用噬菌体展示技术构建GP5-VHH噬菌体抗体展示文库。经连续三轮特异性噬菌体的筛选与富集后,淘选出与PRRSV-GP5蛋白高结合力的纳米抗体,通过间接ELISA方法鉴定其反应原性,后将所获的纳米抗体基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,利用Lipofectamine3000转染至Marc^(-1)45细胞内,与PRRSV分别共孵育0、24、36、48、60、72 h,以探究所筛针对PRRSV-GP5蛋白的纳米抗体于胞内对病毒复制与转录产生的影响。结果表明,成功对PRRSV-GP5蛋白进行原核表达并纯化,得到浓度为2.16 mg·mL^(-1)的重组蛋白,对羊驼三次免疫14 d后,其体内抗体效价高达1∶819200,构建GP5-VHH噬菌体抗体展示文库,库容量达2.93×107 CFU·mL^(-1),插入率为98%。经对噬菌体抗体文库连续三轮淘选富集后,最终获得2株不同氨基酸序列的纳米抗体。间接ELISA结果显示,2株纳米抗体均与PRRSV-GP5蛋白具有良好的亲和力。将2株纳米抗体转染至Marc^(-1)45细胞内,它们分别于36与60 h时显著阻碍PRRSV的复制与转录,展现出了较好的阻碍病毒复制的能力。本研究首次筛选出针对PRRSV-GP5蛋白的特异性纳米抗体,且经验证所筛纳米抗体具备抑制PRRSV在细胞内复制的能力,研究结果为抗PRRSV新型药物的研发奠定了试验依据与物质基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 纳米抗体 噬菌体展示技术 病毒复制
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猪繁殖与呼吸综合征病毒2型TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立
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作者 徐之恒 孙少辉 +8 位作者 董友富 唐伟明 徐孝宙 邢军 李豪 孙刘妹 万进 王聪 张振东 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期84-88,共5页
为了准确、特异、高效地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒2型(PRRSV2),本研究根据GenBank上登录的PRRSV2不同谱系流行毒株的ORF6基因序列,选取保守区域设计合成了1对特异性检测引物和1条MGB探针,经优化退火温度、引物和探针比例等反应条件及... 为了准确、特异、高效地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒2型(PRRSV2),本研究根据GenBank上登录的PRRSV2不同谱系流行毒株的ORF6基因序列,选取保守区域设计合成了1对特异性检测引物和1条MGB探针,经优化退火温度、引物和探针比例等反应条件及敏感性、特异性、重复性试验,建立了检测PRRSV2的TaqMan MGB荧光定量PCR方法。结果:以猪繁殖与呼吸综合征病毒1型(PRRSV1)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)及猪细小病毒(PPV)等阳性核酸为模板,均无扩增;对标准质粒的最低检测下限为1×10^(1)copies/μL,建立的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.994;稳定性和重复性好,批内和批间变异系数均小于1.78%。应用该方法对保留的30份临床阳性样品进行检测,结果阳性100%,Ct值在22~36间。综上,本研究建立的TaqMan MGB荧光定量PCR方法可用于临床和实验室中PRRSV2的快速检测,为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供了技术支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF6基因 TaqMan MGB qPCR
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