人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕赤酵母系统中的高效表达 被引量：41

1

作者 贝锦龙 陈庄 +3 位作者 杨林 廖玲 王珣章 蒋宗勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期254-258,共5页

本文以黑曲霉 (Aspergillusniger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象 ,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列 ,换用在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因 (PhyA as... 本文以黑曲霉 (Aspergillusniger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象 ,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列 ,换用在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因 (PhyA as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合入酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDS PAGE结果与表达产物酶学性质研究表明植酸酶得到分泌表达 ,且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌 ,其中SPAN Ⅲ菌株达到了在摇床培养条件下 ,每毫升发酵液产生 16 5 0 0 0u植酸酶的水平 。 展开更多

关键词 基因人工合成 植酸酶基因 phyA-as 毕赤酵母表达系统

下载PDF 职称材料

E.tenella河北株EtMIC-2基因的克隆及毕赤酵母系统表达

2

作者 张召兴 李佩国 +4 位作者 李蕴玉 张香斋 贾青辉 张艳英 丁咚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期939-942,共4页

为表达鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株EtMIC-2蛋白,本试验采用RT-PCR方法克隆出E.tenella河北株EtMIC-2基因,连接到毕赤酵母分泌表达载体pPIC9中,构建重组表达载体pPIC9-EtMIC-2。将其线化后转化到巴斯德毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表... 为表达鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株EtMIC-2蛋白,本试验采用RT-PCR方法克隆出E.tenella河北株EtMIC-2基因,连接到毕赤酵母分泌表达载体pPIC9中,构建重组表达载体pPIC9-EtMIC-2。将其线化后转化到巴斯德毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达,饱和硫酸铵4℃沉淀浓缩后,用His选择镍-亲和层析柱纯化EtMIC-2蛋白。采用SDS-PAGE和Western blot方法验证其蛋白的表达。结果表明,构建的重组表达载体pPIC9-EtMIC-2在毕赤酵母菌中表达出相对分子质量约为45 000的目的蛋白,表达的EtMIC-2蛋白能被E.tenella阳性血清识别,具有良好的免疫反应原性。为进一步研究EtMIC-2蛋白功能及构建DNA疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 柔嫩艾美耳球虫 EtMIC-2基因 毕赤酵母系统 Western blot

原文传递

新型佐剂蛋白TFPR1在毕赤酵母系统中的表达及鉴定 被引量：2

3

作者 宁秀哲 寇志华 +7 位作者 孙维来 朱青 杨裔 邱洪杰 郭晶晶 郭彦 于虹 周育森 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期294-299,共6页

目的：利用毕赤酵母系统表达一种基于蛇毒蛋白triflin的致病相关蛋白1（ PR-1）功能区蛋白 TFPR1。方法从质粒 pUC57-TFPR1中 PCR 扩增目的基因,插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-TFPR1,转染入巴斯德毕赤酵母野生... 目的：利用毕赤酵母系统表达一种基于蛇毒蛋白triflin的致病相关蛋白1（ PR-1）功能区蛋白 TFPR1。方法从质粒 pUC57-TFPR1中 PCR 扩增目的基因,插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-TFPR1,转染入巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达重组蛋白TFPR1,采用ELISA法筛选阳性菌株后,SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。结果重组表达质粒pPICZαA-TFPR1经双酶切和测序鉴定证明构建正确；重组蛋白以分泌形式表达,相对分子质量约16＆#215;103。结论利用巴斯德毕赤酵母表达系统成功表达TFPR1蛋白,为进一步研究其功能和作为佐剂的应用提供参考资料。 展开更多

关键词 佐剂 致病相关蛋白 毕赤酵母系统 分泌表达 PATHOGENESIS related protein 1 (PR-1)

原文传递

Neuritin毕赤酵母表达系统的构建及其对PC12细胞的影响 被引量：5

4

作者 张树军 赵臣 +4 位作者 狄建军 穆莎茉莉 仙玲玲 于娜 黄瑾 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期148-152,共5页

旨在构建Neuritin的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin蛋白,研究其神经生物学功能。PCR扩增编码neuritin基因cDNA序列,并纯化回收,通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K中,转化大肠杆菌DH5α,neuritin-pPIC9k重组质粒经PCR与测序... 旨在构建Neuritin的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin蛋白,研究其神经生物学功能。PCR扩增编码neuritin基因cDNA序列,并纯化回收,通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K中,转化大肠杆菌DH5α,neuritin-pPIC9k重组质粒经PCR与测序鉴定后,使用SalⅠ酶切使其线性化,电击转化酵母菌GS115,经筛选与鉴定,成功构建了Neuritin的毕赤酵母表达系统。结果表明,使用甲醇诱导其表达,SDS-PAGE和Western blot分析得到11 kD的Neuritin蛋白,纯化的Neuritin蛋白加入PC12细胞培养液中,能促进其突起的生长。 展开更多

关键词 NEURITIN PPIC9K 毕赤酵母表达系统 PC12细胞

下载PDF 职称材料

E.tenella河北株SO7基因在毕赤酵母系统中的表达及免疫保护力评价

5

作者 闫艳娟 李蕴玉 +3 位作者 张东林 李佩国 庞洪泽 张香斋 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1960-1964,共5页

为了确定重组质粒pPIC9-IL-2-SO7在毕赤酵母系统中的表达及重组蛋白SO7的免疫保护力,采用RT-PCR方法克隆E.tenella河北株SO7基因并测序,将目的基因与IL-2及真核表达载体pPIC9串联,构建真核表达载体pPIC9-IL-2-SO7,转染毕赤酵母细胞GS115... 为了确定重组质粒pPIC9-IL-2-SO7在毕赤酵母系统中的表达及重组蛋白SO7的免疫保护力,采用RT-PCR方法克隆E.tenella河北株SO7基因并测序,将目的基因与IL-2及真核表达载体pPIC9串联,构建真核表达载体pPIC9-IL-2-SO7,转染毕赤酵母细胞GS115,SDS-PAGE电泳及Western blot方法验证其在毕赤酵母系统中的表达。将纯化后的重组蛋白SO7分别在雏鸡7,21日龄以50,100,150μg/只进行免疫,28日龄时,除阴性对照组外的其他试验组口服接种E.tenella孢子化卵囊8×10^4个/只,测定各组存活率、相对增重率、盲肠病变值和卵囊值,并计算抗球虫指数(ACI)。结果显示,阳性重组子具有2条带,分别为2 200,1 100 bp,表明成功将重组质粒pPIC9-IL-2-SO7转染毕赤酵母细胞GS115,Western blot检测证明表达的蛋白具有免疫原性;3个免疫组的ACI分别比阳性对照组提高了29.66%,33.33%和19.72%,其中以免疫剂量为100μg/只时,抗球虫效果最好。 展开更多

关键词 E.TENELLA SO7基因 毕赤酵母系统 免疫保护力

原文传递

巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展 被引量：2

6

作者 姚春阳 沈旭 庄金秋 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第2期26-28,共3页

关键词 毕赤酵母表达系统 巴斯德毕赤酵母 外源基因表达 酿酒酵母 生物学特性 蛋白质表达 生物学领域 外源蛋白

下载PDF 职称材料

印第安纳型水泡性口炎病毒核衣壳蛋白基因在毕赤酵母表达系统中的表达 被引量：1

7

作者 陈义平 盛祖勋 +2 位作者 赵永刚 王宝安 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第9期22-24,共3页

将含有IN型VSV核衣壳蛋白基因的重组质粒pET-32a/N用EcoRI和NotI进行双酶切,目的基因克隆到表达载体pPICZαA,构建重组质粒pPICZαA/N。用SacI酶切线性化,并以电转化方法转化受体酵母菌GS115,PCR证实目的基因整合到重组酵母菌染色体中,... 将含有IN型VSV核衣壳蛋白基因的重组质粒pET-32a/N用EcoRI和NotI进行双酶切,目的基因克隆到表达载体pPICZαA,构建重组质粒pPICZαA/N。用SacI酶切线性化,并以电转化方法转化受体酵母菌GS115,PCR证实目的基因整合到重组酵母菌染色体中,经鉴定所获得的重组酵母菌株为Muts表型。用甲醇对重组酵母进行诱导表达,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定,核衣壳蛋白基因在毕赤酵母中获得表达,目的蛋白分子量大小为约75kDa,表达量约占菌体总量的20%,并能够被VSV阳性血清所识别,可用于VSV的血清学检测。 展开更多

关键词 水泡性口炎病毒 核衣壳蛋白基因 毕赤酵母表达系统

下载PDF 职称材料

巴斯德毕赤酵母(P pastoris)表达系统 被引量：1

8

作者 邹运明 李一经 邹丽红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2004年第11期70-71,共2页

近年来，基因工程菌被广泛用于商业化生产外源蛋白。原核生物作为基因工程表达系统简单而易培养，有其一定的优点，但也存在着一定的缺陷，如不能对表达蛋白进行糖基化等翻译后修饰，特别是对核基因的表达，可能导致产物失去生活活性。... 近年来，基因工程菌被广泛用于商业化生产外源蛋白。原核生物作为基因工程表达系统简单而易培养，有其一定的优点，但也存在着一定的缺陷，如不能对表达蛋白进行糖基化等翻译后修饰，特别是对核基因的表达，可能导致产物失去生活活性。自1981年Hitzeman等首次在酿酒酵母中表达了人重组干扰素基因后，相继又有多种外源基因表达成功。与大肠杆菌不同的是，酵母可对异源蛋白进行修饰，采用有信号肽的质粒时，蛋白能被正确折叠和加工，然后分泌到培养基中； 展开更多

关键词 马斯德毕赤酵母表达系统 基因工程 宿主菌 载体类型 外源蛋白修饰

下载PDF 职称材料

巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展 被引量：5

9

作者 张树军 杨磊 黄瑾 《农垦医学》 2007年第3期231-233,共3页

关键词 毕赤酵母表达系统 巴斯德毕赤酵母 真核生物 外源蛋白 高密度发酵 细胞内环境 原核生物 基因工程

下载PDF 职称材料

毕赤酵母表达系统及其在我国病原生物学领域的应用进展 被引量：1

10

作者 王少华 《国外医学（寄生虫病分册）》 2003年第2期60-64,共5页

本文概述了毕赤酵母表达系统及其在病原生物学领域的应用进展 ,主要阐述了毕赤酵母表达系统的构成、其表达外源蛋白的优越性以及该系统的应用现状。

关键词 毕赤酵母表达系统 病原生物学 应用进展 中国

下载PDF 职称材料

毕赤酵母分泌表达系统的研究进展 被引量：1

11

作者 黄石 邹民吉 徐东刚 《医学研究通讯》 2004年第7期34-36,共3页

毕赤酵母表达系统是一种新的,极具潜力的真核表达系统,具有其他系统不可比拟的优点,在生物医药领域正在得到越来越广泛的应用。本文综述了该蛋白表达系统的一些特征及影响其表达的相关因素。

关键词 毕赤酵母分泌表达系统 研究进展 巴斯德毕赤酵母 高效分泌表达 AOXl启动子 生物学特性

下载PDF 职称材料

毕赤酵母表达系统的实际应用研究 被引量：1

12

作者 刘春凤 《厦门科技》 2011年第3期51-56,共6页

在DNA体外重组和异源表达技术中．酵母表达系统是重要的一个组成部分。对于它的优势，大量中外文献用实例证明，用综述总结。酵母菌是最简单的真核模式生物，兼有原核、真核两种表达系统的优点：

关键词 毕赤酵母表达系统 应用 组成部分 异源表达 体外重组 模式生物 DNA 酵母菌

下载PDF 职称材料

浅析巴斯德毕赤酵母表达系统的研究 被引量：1

13

作者 王艳 《山东畜牧兽医》 2010年第10期86-87,共2页

对于一个有商业潜质和广阔市场前景的兽用蛋白质类药物的研究,主要是要寻找一条稳定的工艺条件和获得较高的工作效率,巴斯德毕赤酵母表达系统就具有这方面的优点,其优越性表现在：分泌性表达,不需要复性,有效率为100%,纯化程序简单,大... 对于一个有商业潜质和广阔市场前景的兽用蛋白质类药物的研究,主要是要寻找一条稳定的工艺条件和获得较高的工作效率,巴斯德毕赤酵母表达系统就具有这方面的优点,其优越性表现在：分泌性表达,不需要复性,有效率为100%,纯化程序简单,大大降低了生产成本,尤其适用于动物干扰素的表达。 展开更多

关键词 毕赤酵母表达系统 巴斯德 分泌性表达 蛋白质类 市场前景 工作效率 工艺条件 生产成本

下载PDF 职称材料

鸡IL-18成熟蛋白基因变构体毕赤酵母表达载体的构建及表达 被引量：4

14

作者 刘一尘 张春杰 +5 位作者 程安春 程相朝 汪铭书 李银聚 吴庭才 易明林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期502-506,共5页

为使鸡IL-18成熟蛋白基因在真核系统中高效表达,对其进行定点突变,将酵母低频密码子突变为偏嗜性密码子,构建了鸡IL-18成熟蛋白变构基因真核重组表达载体pPICZαA-MChIL18*,并将其转化入P.pastorisX-33。重组菌株X-33/pPICZαA-MChIL18... 为使鸡IL-18成熟蛋白基因在真核系统中高效表达,对其进行定点突变,将酵母低频密码子突变为偏嗜性密码子,构建了鸡IL-18成熟蛋白变构基因真核重组表达载体pPICZαA-MChIL18*,并将其转化入P.pastorisX-33。重组菌株X-33/pPICZαA-MChIL18*经甲醇诱导后,表达产物的上清液经SDS-PAGE检测,结果在约23 000处有目的条带,与预期的相对分子质量一致,占总蛋白的45%,对其进行Western-blot检测,结果与兔抗鸡IL-18多克隆抗体发生特异性免疫反应。结果表明,鸡IL-18成熟蛋白变构基因在毕赤酵母中成功的进行了表达。 展开更多

关键词 鸡IL-18 定点突变 毕赤酵母表达系统 SDS-PAGE WESTERN-BLOT

下载PDF 职称材料

β_2肾上腺素受体基因在毕赤酵母中的表达及活性测定 被引量：6

15

作者 黄园园 沈红 +4 位作者 王迪 于洪侠 孙丰梅 杨啸枫 杨曙明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期18-22,共5页

为提高β2-肾上腺素受体(β2AR)表达量,满足生产需求,使其应用到抗体技术上,利用分子克隆技术将β2-肾上腺素受体基因(β2AR)与绿色荧光蛋白基因(eGFP)克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体中。表达载体pPICZαDNAsGFP转化至酵母后,... 为提高β2-肾上腺素受体(β2AR)表达量,满足生产需求,使其应用到抗体技术上,利用分子克隆技术将β2-肾上腺素受体基因(β2AR)与绿色荧光蛋白基因(eGFP)克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体中。表达载体pPICZαDNAsGFP转化至酵母后,β2AR和eGFP基因与酵母基因重组。利用筛选出的阳性重组子诱导表达β2AR和eGFP的融合蛋白,通过125I标记的配体结合实验证明获得了有受体活性的融合蛋白。 展开更多

关键词 Β2肾上腺素受体 EGFP 毕赤酵母表达系统 pPICZαA Β2激动剂

下载PDF 职称材料

白藜芦醇合酶基因的克隆及对毕赤酵母的转化 被引量：4

16

作者 郭芝光 尉亚辉 +2 位作者 刘蕾 张儒 朱剑光 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期263-266,共4页

目的建立白藜芦醇合酶基因的毕赤酵母表达系统。方法通过PCR、限制性内切酶消化、连接、电激等方法,构建表达载体,转化毕赤酵母GS115。结果从葡萄基因组DNA中扩增得到了 1 200 bp目的基因,并克隆至pBS-T栽体;成功构建了表达载体pPIC3．5... 目的建立白藜芦醇合酶基因的毕赤酵母表达系统。方法通过PCR、限制性内切酶消化、连接、电激等方法,构建表达载体,转化毕赤酵母GS115。结果从葡萄基因组DNA中扩增得到了 1 200 bp目的基因,并克隆至pBS-T栽体;成功构建了表达载体pPIC3．5K／RS;目的基因成功整合进毕赤酵母GS115基因组中。测序及PCR鉴定证明,白藜芦醇合酶基因的毕赤酵母表达系统建立成功。结论所得方法无需高质量的RNA,从而降低了试验条件,达到了快速简便的目的。 展开更多

关键词 白藜芦醇 白藜芦醇合酶 基因克隆 毕赤酵母表达系统

下载PDF 职称材料

黑曲霉葡萄糖氧化酶基因改造及其在毕赤酵母中的表达 被引量：3

17

作者 聂金梅 李阳源 +2 位作者 刘金山 王勇 唐业 《江苏农业科学》 2018年第20期17-21,共5页

为构建并筛选高效表达的葡萄糖氧化酶基因毕赤酵母工程菌株,采用PCR法从黑曲霉基因组中获得葡萄糖氧化酶全长基因(GOD),采用定点突变法和重叠PCR法获得GOD^(mut)基因,将其插入到pPICZαA中,获得重组质粒pPIC-GOD^(mut),经Pme I线性化后... 为构建并筛选高效表达的葡萄糖氧化酶基因毕赤酵母工程菌株,采用PCR法从黑曲霉基因组中获得葡萄糖氧化酶全长基因(GOD),采用定点突变法和重叠PCR法获得GOD^(mut)基因,将其插入到pPICZαA中,获得重组质粒pPIC-GOD^(mut),经Pme I线性化后,用电击法转化毕赤酵母菌株X33,经大量筛选,获得1株高效分泌表达的工程菌株X33-pPIC-GOD^(mut),在此基础上,去除GOD基因的信号肽,用同样的试验方法构建并筛选高效分泌表达的工程菌株X33-pPIC-GODnew,结果表明:X33-pPIC-GOD^(mut)的产酶水平为460. 3 U/mL,X33-pPIC-GODnew的产酶水平为714. 9 U/mL,是前者的1. 52倍,该酶的最适作用温度和最适作用pH值分别为40℃和5. 0,成功获得1株高效稳定表达的葡萄糖氧化酶基因毕赤酵母工程菌株。 展开更多

关键词 葡萄糖氧化酶 黑曲霉 毕赤酵母表达系统 信号肽

下载PDF 职称材料

表面展示南极假丝酵母脂肪酶B的毕赤酵母FM22发酵培养基响应面优化 被引量：3

18

作者 陈明祥 谢万勇 +3 位作者 廖锡豪 陈家驹 韩双艳 林影 《中国酿造》 CAS 2012年第10期52-56,共5页

FM22培养基以丰富的氮源、较强的适应性等优势,适用于毕赤酵母发酵。为进一步对毕赤酵母发酵表达南极假丝酵母脂肪酶B进行优化,选取培养基中对其影响较大的CaSO4、KH2PO4、(NH4)2SO4、PTM4为自变量,酶活力为响应值。通过单因素试验得自... FM22培养基以丰富的氮源、较强的适应性等优势,适用于毕赤酵母发酵。为进一步对毕赤酵母发酵表达南极假丝酵母脂肪酶B进行优化,选取培养基中对其影响较大的CaSO4、KH2PO4、(NH4)2SO4、PTM4为自变量,酶活力为响应值。通过单因素试验得自变量最佳值及高低水平,再采用Box-Behnken组合设计方法,模拟二次多项式回归方程的预测模型,研究各自变量及其交互作用对酶活力的影响。最终得到自变量最佳值:KH2PO445.02g/L、(NH4)2SO45.63g/L、CaSO40.46g/L、PTM4 1.63mL/L,酶活力为3214.7U/gDCW,较优化前提高约40%。 展开更多

关键词 毕赤酵母表面展示系统 南极假丝酵母脂肪酶B FM22培养基 响应面优化

下载PDF 职称材料

汉坦病毒囊膜糖蛋白G2在毕赤酵母GS115中的表达及鉴定 被引量：1

19

作者 李璞媛 白文涛 +6 位作者 张芳琳 吴兴安 胡刚 刘艳丽 王海涛 张伟 徐志凯 《科学技术与工程》 2007年第8期1577-1581,共5页

构建了编码汉坦病毒囊膜糖蛋白G2基因的重组质粒,在毕赤酵母中表达,为汉坦病毒基因工程疫苗的研究提供实验基础。利用PCR法从含汉滩病毒76-118株M基因的M56质粒中扩增编码糖蛋白G2的基因片段,克隆入酵母分泌表达载体pPICZαA,构建重组质... 构建了编码汉坦病毒囊膜糖蛋白G2基因的重组质粒,在毕赤酵母中表达,为汉坦病毒基因工程疫苗的研究提供实验基础。利用PCR法从含汉滩病毒76-118株M基因的M56质粒中扩增编码糖蛋白G2的基因片段,克隆入酵母分泌表达载体pPICZαA,构建重组质粒pPICZαA-G2。酶切鉴定挑取的阳性克隆,转化入GS115工程菌,在含100μg/mLZeocin的YPD培养基上筛选。挑选单菌落,PCR鉴定阳性克隆,用0.5%甲醇诱导表达,并利用SDS-PAGE及Western-Blot鉴定表达产物。序列分析表明所获得的基因片段与编码汉滩病毒76-118株囊膜糖蛋白G2的基因一致;100μg/mLZeocinYPD培养基上筛选出含pPICZαA-G2转化子,PCR鉴定为阳性克隆;SDS-PAGE可见约70kDa处有目的蛋白表达条带,经Western-Blot证实该条带为汉滩病毒囊膜糖蛋白G2。成功地构建了重组酵母表达载体pPICZαA-G2,并在毕赤酵母中初步表达成功,为今后汉坦病毒囊膜糖蛋白G2表达纯化以及基因工程疫苗的制备奠定了一定基础。 展开更多

关键词 汉坦病毒 囊膜糖蛋白G2 毕赤酵母表达系统 蛋白表达

下载PDF 职称材料

复合抗菌肽在毕赤酵母中的表达及其活性研究

20

作者 杨桂茂 陶元勇 +1 位作者 孙万里 张旭光 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第12期1439-1442,1447,共5页

目的构建天蚕素A-死亡素复合基因工程抗菌肽基因CA(1-7)-T(4-19),并在毕赤酵母中表达。方法采用重叠区基因扩增法(SOE)人工合成复合肽基因,同载体pPICZαA连接后转化毕赤酵母受体菌X-33,通过博莱霉素抗性筛选得到的阳性克隆用甲醇诱导表... 目的构建天蚕素A-死亡素复合基因工程抗菌肽基因CA(1-7)-T(4-19),并在毕赤酵母中表达。方法采用重叠区基因扩增法(SOE)人工合成复合肽基因,同载体pPICZαA连接后转化毕赤酵母受体菌X-33,通过博莱霉素抗性筛选得到的阳性克隆用甲醇诱导表达,并对产物进行抗菌活性检测,建立抗菌谱。结果复合肽基因CA(1-7)-T(4-19)成功克隆到载体pPICZαA上,鉴定结果与预先设计的基因序列一致,在甲醇诱导下复合肽基因得到表达,并得到临床分离的76株革兰阴性和革兰阳性耐药致病菌的最小抑菌浓度,最小抑菌浓度可达到5μg/mL。结论成功获得了具有抑菌活性的复合基因工程抗菌肽,且该复合肽对临床常见多重耐药菌株均有明显的抑杀作用。 展开更多

关键词 复合抗菌肽 天蚕素A 死亡素 毕赤酵母表达系统 抑菌活性

下载PDF 职称材料