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重组Hepcidin融合蛋白的氧化复性及活性鉴定
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作者 王继雯 谢宝恩 +2 位作者 甄静 周伏忠 陈国参 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期192-195,共4页
将诱导表达的His-hepcidin融合蛋白包涵体通过固定化金属离子配体亲和层析(IMAC)柱分离纯化后,在cys-teine/cystine氧化还原体系中氧化形成二硫键,稀释复性后用肠激酶将融合蛋白的his-tag切除。酶切后所得的Hepcidin经抑菌圈试验检验,... 将诱导表达的His-hepcidin融合蛋白包涵体通过固定化金属离子配体亲和层析(IMAC)柱分离纯化后,在cys-teine/cystine氧化还原体系中氧化形成二硫键,稀释复性后用肠激酶将融合蛋白的his-tag切除。酶切后所得的Hepcidin经抑菌圈试验检验,对枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌具有抗菌活性。 展开更多
关键词 HEPCIDIN 纯化 氧化复性 抑菌圈
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海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ的固相化学合成和氧化复性
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作者 皮建辉 全妙华 曾雄智 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期399-403,共5页
应用芴甲氧羰基(Fm o c)固相化学合成了海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ,并优化了其最佳氧化复性条件。最佳的氧化复性条件为pH7.5的重蒸水溶液体系,样品质量浓度为0.1g/L,还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的浓度分别为1.0mm o l/L和0.1mm o l/L、L-A... 应用芴甲氧羰基(Fm o c)固相化学合成了海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ,并优化了其最佳氧化复性条件。最佳的氧化复性条件为pH7.5的重蒸水溶液体系,样品质量浓度为0.1g/L,还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的浓度分别为1.0mm o l/L和0.1mm o l/L、L-A rg浓度为1.0m o l/L。复性产物经质谱测定其相对分子质量为3 607.68;与天然毒素等量混合后用高效液相色谱分析得到单一峰;膈神经-膈肌标本生理实验结果表明,合成的毒素具有与天然毒素相同的生物学活性,从而可确定二者在结构与功能上具有一致性。 展开更多
关键词 固相化学合成 海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ 氧化复性 结构与功能 反相高效液相色谱 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
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精氨酸对牛胰核糖核酸酶氧化复性的时相性抑制作用 被引量:2
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作者 冯崔香 邓丽刚 +2 位作者 闫征 杜国华 王楠 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期12-20,共9页
精氨酸常在重组蛋白的体外复性中,作为一种小分子添加剂用于抑制蛋白聚集。精氨酸对蛋白复性折叠过程本身的影响尚不清楚。首次以不易聚集的牛胰核糖核酸酶为研究对象,通过飞行质谱检测氧化复性中间体的变化,通过酶学活性检测蛋白活性... 精氨酸常在重组蛋白的体外复性中,作为一种小分子添加剂用于抑制蛋白聚集。精氨酸对蛋白复性折叠过程本身的影响尚不清楚。首次以不易聚集的牛胰核糖核酸酶为研究对象,通过飞行质谱检测氧化复性中间体的变化,通过酶学活性检测蛋白活性的恢复过程,观察了精氨酸对氧化复性的直接影响。发现不同浓度精氨酸对牛胰核糖核酸酶的氧化复性有直接的抑制作用。特别在0.5 mol/L浓度时,精氨酸对牛胰核糖核酸酶氧化复性的抑制作用具有独特的时相依赖性:早期复性可持续至4 h,其活性恢复达30%后,晚期复性基本终止。这种抑制特征与脲的抑制作用有明显的不同,精氨酸没有完全抑制关键结构中间体的形成。结果说明,牛胰核糖核酸酶的氧化复性,除经关键结构中间体的主要通路外,还可能存在一个潜在复性通路,它是其氧化复性后期的关键限速通路。该复性通路可以被0.5 mol/L精氨酸完全阻断。 展开更多
关键词 精氨酸 牛胰核糖核酸酶 氧化复性 中间体
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rhIFN-κ包涵体的氧化复性与纯化
4
作者 吴佳奇 张宇翔 +5 位作者 张路瑶 颜灵樱 余蓉 刘永东 张耀 张纯 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1667-1675,共9页
干扰素卡帕(Interferon-Kappa, IFN-κ)是一种具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等重要功能的蛋白质,独特的分泌方式和生理功能使其在临床上具有良好的应用前景。通过大肠杆菌以包涵体形式表达的重组人干扰素卡帕(rhIFN-κ)需要经过体外折... 干扰素卡帕(Interferon-Kappa, IFN-κ)是一种具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等重要功能的蛋白质,独特的分泌方式和生理功能使其在临床上具有良好的应用前景。通过大肠杆菌以包涵体形式表达的重组人干扰素卡帕(rhIFN-κ)需要经过体外折叠复性才能获得生物活性,由于IFN-κ含两对二硫键,因此复性时面临易生成沉淀和二硫键难以正确氧化等双重挑战。本研究采用强阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)溶解包涵体,并在复性过程添加多元醇2-甲基-2,4-戊二醇(MPD)逐渐剥离与蛋白质紧密结合的SDS,实现rhIFN-κ的氧化复性。研究发现,rhIFN-κ复性后主要形成了二硫键不同氧化程度的三种结构,包括完全氧化的正确结构、部分氧化的中间体和完全未氧化的变性蛋白。在SDS/MPD复性体系中,rhIFN-κ完全氧化的复性收率与两者浓度及比例密切相关。SDS浓度过低或MPD浓度过高易导致蛋白质沉淀或聚集,SDS浓度过高或MPD浓度过低则会抑制二硫键的正确氧化。进一步对氧化还原体系及pH值进行优化,确定了最优的复性缓冲液:添加0.05wt%SDS, 1 mol/L MPD, 0.2 mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG), 0.1 mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)的20 mmol/L Tris, pH=9.5。且在此条件下,蛋白质浓度提高至2.0 mg/mL时,rhIFN-κ复性收率基本不变。室温复性24 h,rhIFN-κ的复性收率达66%。利用制备反相高效液相色谱一步纯化,可有效去除杂质及复性中间体等错误结构,获得非还原电泳为单一条带的纯度90%的rhIFN-κ。结果表明,SDS/MPD体系能抑制包涵体复性时沉淀形成的同时还能有效提高二硫键的正确氧化,该结果可为rhIFN-κ的规模化生产奠定良好的基础。 展开更多
关键词 重组人IFN-κ 包涵体 氧化复性 SDS/MPD复性系统
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敬钊毒素-V突变体K12A-JZTX-V的化学合成与氧化还原复性
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作者 曾雄智 全妙华 +1 位作者 皮建辉 梁宋平 《怀化学院学报》 2008年第5期41-43,共3页
敬钊毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,由29个氨基酸残基组成,含有三对二硫键.为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了... 敬钊毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,由29个氨基酸残基组成,含有三对二硫键.为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第12位赖氨酸残基的突变体K12A-JZTX-V,合成粗品经反相高效液相色谱分离纯化和MALDI-TOF质谱鉴定,证明化学合成是成功的.线性多肽经谷胱甘肽氧化复性后,复性产物经质谱测定其相对分子量为3549.63,比线性分子的理论分子质量低6,说明六个半胱氨酸已经配对形成了三对二硫键. 展开更多
关键词 敬钊缨毛蛛毒素-V 固相多肽合成 突变体 氧化复性 质谱
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盐酸胍变性烟草多酚氧化酶的复性
6
作者 肖厚荣 徐小龙 +1 位作者 解永树 刘清亮 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期9-13,共5页
研究了盐酸胍变性烟草多酚氧化酶后的复性。结果表明,在没有外加添加剂存在的条件下,最优的复性条件为:盐酸胍浓度为15mol/L;适宜的酶浓度为15×10-4g/mL;变性时间短(30min);复性温度低(4℃),此时,复性收率最高达到6336%。10mol/L... 研究了盐酸胍变性烟草多酚氧化酶后的复性。结果表明,在没有外加添加剂存在的条件下,最优的复性条件为:盐酸胍浓度为15mol/L;适宜的酶浓度为15×10-4g/mL;变性时间短(30min);复性温度低(4℃),此时,复性收率最高达到6336%。10mol/L硫酸铵具有一定的促进烟草多酚氧化酶复性的作用,与此相比,100μmol/L硫酸铜促进烟草多酚氧化酶复性的效果较大,硫酸铜和硫酸铵存在协同作用,联合使用可获得最高的烟草多酚氧化酶复性收率;β环糊精对变性烟草多酚氧化酶的复性具有一定辅助作用,溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)可增强β环糊精辅助变性蛋白质复性的作用。 展开更多
关键词 多酚氧化 复性 盐酸胍 β-环糊精 溴化十六烷基三甲基铵
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化学合成ω-芋螺毒素MⅦA的复性与质谱分析 被引量:5
7
作者 王贤纯 梁宋平 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期121-126,共6页
为了探讨质谱分析在合成多肽氧化复性和分离纯化研究中的应用 ,用固相多肽合成方法合成ω -芋螺毒素MⅦA ,在含谷胱甘肽的缓冲体系中进行氧化复性后 ,经离子交换和RP HPLC分离纯化。利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS... 为了探讨质谱分析在合成多肽氧化复性和分离纯化研究中的应用 ,用固相多肽合成方法合成ω -芋螺毒素MⅦA ,在含谷胱甘肽的缓冲体系中进行氧化复性后 ,经离子交换和RP HPLC分离纯化。利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)和电喷雾串联质谱 (ESI MS/MS)分析ω -芋螺毒素MⅦA氧化复性和分离纯化的效果 ,最后用电生理学实验测定复性ω -芋螺毒素MⅦA的生理活性。其结果表明 ,获得的ω -芋螺毒素MⅦA纯化复性样品具有与天然ω 展开更多
关键词 ω-芋螺毒素MⅦA 氧化复性 质谱分析
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敬钊毒素-Ⅴ的合成、复性及其钾通道活性鉴定 被引量:1
8
作者 曾雄智 邓梅春 +2 位作者 孙正华 王贤纯 梁宋平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期463-468,共6页
敬钊毒素-Ⅴ(jingzhaotoxin-Ⅴ,JZTX-Ⅴ)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化得到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂.为了深入研究该毒素的功能,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了JZTX-Ⅴ,合成多肽经谷胱甘肽法氧化复性后,利用反相高... 敬钊毒素-Ⅴ(jingzhaotoxin-Ⅴ,JZTX-Ⅴ)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化得到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂.为了深入研究该毒素的功能,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了JZTX-Ⅴ,合成多肽经谷胱甘肽法氧化复性后,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离纯化.复性产物的相对分子质量经质谱测定为3605.51,而与天然毒素混合进行HPLC共洗脱实验时也只得到单一峰.全细胞膜片钳实验显示,JZTX-Ⅴ能够抑制大鼠背根神经节细胞上的A型钾电流,却对外向延迟整流钾电流没有影响,对处于静息关闭状态的A-型钾通道也表现出较高的亲和性.JZTX-Ⅴ对A型钾通道的这种抑制作用具有浓度依从性,其半数有效抑制浓度(IC50)为52.3nmol/L·JZTX-Ⅴ通过引起A型钾通道的活化曲线往去极化方向漂移,和失活曲线往超极化方向漂移来改变通道的门控特征.目前的研究结果为深入开展JZTX-Ⅴ的功能研究及分子改造奠定了基础. 展开更多
关键词 敬钊毒素-Ⅴ(JZTX-Ⅴ) 固相多肽合成 氧化复性 全细胞记录 钾电流
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虎纹捕鸟蛛毒素IV突变体K27A-HWTX-IV的合成和复性及其生物学活性研究 被引量:1
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作者 陈再冉 王贤纯 梁宋平 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2003年第3期67-72,共6页
用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成的方法在固相多肽合成仪上合成了用丙氨酸代替虎纹捕鸟蛛毒素 IV的第27位的赖氨酸的突变体K27A HWTX IV,通过反相HPLC对不同条件下突变体的氧化复性结果进行监测,摸索出其最佳氧化复性条件为:0.1mol LTri... 用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成的方法在固相多肽合成仪上合成了用丙氨酸代替虎纹捕鸟蛛毒素 IV的第27位的赖氨酸的突变体K27A HWTX IV,通过反相HPLC对不同条件下突变体的氧化复性结果进行监测,摸索出其最佳氧化复性条件为:0.1mol LTris HCl,pH8.0,GSH1mmol LGSSG0.1mmol L的复性缓冲液,样品浓度为0.1mg mL.复性产物经HPLC纯化并用基质辅助激光解吸飞行时间质谱法进行鉴定,相对分子质量为4050.63Da.生物学活性实验小鼠离体膈神经 膈肌标本测活实验表明:10μg mL天然HWTX IV阻断小鼠离体膈神经 膈肌接头传递时间为16min,10μg mL复性后的突变体阻断小鼠离体膈神经 膈肌接头传递时间为120min,残基的替换导致突变体生物学活性比天然毒素少,证明了第27位的赖氨酸为虎纹捕鸟蛛毒素 IV活性相关的残基. 展开更多
关键词 虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅳ 突变体 K27A—HWTX-Ⅳ 固相多肽合成法 氧化复性 生物学活性 肽类毒素
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最大脂肪氧化强度研究进展 被引量:6
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作者 鲍军超 陈万红 田英 《武汉体育学院学报》 CSSCI 北大核心 2019年第5期95-100,共6页
阐述了最大脂肪氧化运动强度(Fat_(max))进行减脂、促进健康的研究进展,为进行科学运动减脂提供了理论依据。Fat_(max)受最大脂肪氧化率(MFO)制约,而MFO随个体年龄增加而降低,训练有素的人MFO较高,且Fat_(max)较低,性别与肥胖程度对MFO... 阐述了最大脂肪氧化运动强度(Fat_(max))进行减脂、促进健康的研究进展,为进行科学运动减脂提供了理论依据。Fat_(max)受最大脂肪氧化率(MFO)制约,而MFO随个体年龄增加而降低,训练有素的人MFO较高,且Fat_(max)较低,性别与肥胖程度对MFO的影响仍存有争议。药物(营养物)不同程度影响个体脂肪氧化;参与运动做功的肌肉量影响个体脂肪氧化。MIIT、HIIT、SIT有着与中等强度或Fat_(max)持续运动相比拟的减脂效果和健康促进作用;并阐述了不同强度运动的脂肪氧化机制。目前研究仍有4大问题亟待解决:(1)Fat_(max)的标准测试协议;(2)Fat_(max)是否是最佳减脂强度?(3)MIIT、HIIT、SIT运动的最佳减脂方案问题;(4)间歇运动减脂的机制:刺激的间歇性或脉动性对机体适应性反应起到怎样的作用? 展开更多
关键词 最大脂肪氧化强度 中等强度持续运动 高强度间歇运动 运动后恢复性脂肪氧化
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Arg20突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响 被引量:1
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作者 曾雄智 邓梅春 +3 位作者 皮建辉 全妙华 王贤纯 梁宋平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1228-1232,共5页
敬钊缨毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第20位... 敬钊缨毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第20位精氨酸残基的突变体R20A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性。复性产物分别用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)进行分子量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析。研究结果表明,Arg20被Ala取代后,R20A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞(DRG)膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V相当,提示Arg20与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性无关或关系不大;而R20A-JZTX-V对TTX-R钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约18.3倍,说明Arg20是与JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道抑制活性相关的关键活性残基之一,推测R20A-JZTX-V活性降低的原因是用Ala替代Arg20后改变了JZTX-V与TTX-R型钠通道的作用位点。 展开更多
关键词 敬钊缨毛蛛毒素-V固相多肽合成 突变体 氧化复性 膜片钳
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Lys4突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响 被引量:1
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作者 曾雄智 邓梅春 +3 位作者 彭莹 魏文廷 王贤纯 梁宋平 《生命科学研究》 CAS CSCD 2008年第1期20-23,共4页
敬钊缨毛蛛毒素-V(jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第4位赖... 敬钊缨毛蛛毒素-V(jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第4位赖氨酸残基的突变体K4A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性.复性产物分别用MALDI-TOF/TOF质谱进行相对分子质量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析.研究结果表明,Lys4被Ala取代后,K4A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V基本相当,提示Lys4与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性关系不大;而K4A-JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约8.3倍,说明Lys4是JZTX-V与河豚毒素不敏感型钠通道抑制活性相关的氨基酸残基. 展开更多
关键词 敬钊缨毛蛛毒素-V 固相多肽合成 突变体 氧化复性 膜片钳
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Thr28突变对虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅳ钠通道活性的影响
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作者 邓梅春 罗旋 +2 位作者 陈汉春 王军 梁宋平 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期111-115,共5页
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅳ(HWTX-Ⅳ)是从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离纯化到的一种新型多肽类神经毒素,能明显抑制表达于大鼠背根神经节细胞的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道.为了更好地研究该毒素的结构与功能之间的关系,采用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽... 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅳ(HWTX-Ⅳ)是从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离纯化到的一种新型多肽类神经毒素,能明显抑制表达于大鼠背根神经节细胞的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道.为了更好地研究该毒素的结构与功能之间的关系,采用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成法合成了用谷氨酸(Glu)替代HWTX-Ⅳ第28位苏氨酸残基的突变体T28D-HWTX-Ⅳ,线性多肽合成产物经反相高效液相色谱(HPLC)分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性.复性产物采用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)技术鉴定分子质量,通过全细胞膜片钳电生理技术测定其电压门控钠通道药理学活性.当第28位Thr残基被Glu取代后,突变体T28D-HWTX-Ⅳ对表达于大鼠DRG细胞膜上的TTX-S钠通道的IC50值约为362 nmol/L,对TTX-S钠通道的抑制活性比天然HWTX-Ⅳ(IC50值=30 nmol/L)下降了约12倍,显示第28位的Thr残基是HWTX-Ⅳ与TTX-S型钠通道相互作用的关键活性残基.目前的研究为进一步探索HWTX-Ⅳ的结构与功能关系及新型镇痛药物的研发奠定了基础. 展开更多
关键词 虎纹毒素-IV(HWTX—IV) 突变体 固相多肽合成 氧化复性 钠通道
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牛朊病毒正常蛋白特异性片段的克隆表达和纯化 被引量:1
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作者 李炎鑫 马贵平 +1 位作者 尹少满 田波 《检验检疫科学》 2005年第3期3-6,共4页
〔目的〕表达重组牛朊病毒正常蛋白特异性片段。〔方法〕用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因,利用DNA重组技术,将牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,将表达... 〔目的〕表达重组牛朊病毒正常蛋白特异性片段。〔方法〕用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因,利用DNA重组技术,将牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,将表达产物(包涵体)用8mol/L尿素溶解,在变性条件下用Cu2+氧化复性纯化。〔结果〕重组表达质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,目的蛋白分子量约为15KD,Westernblotting分析表明,目的蛋白具有朊病毒蛋白的抗原特性,变性条件下用Cu2+氧化复性纯化得到电泳纯的重组蛋白。〔结论〕这一工作为下一步制备抗体和进行结构、功能的研究打下扎实基础。 展开更多
关键词 特异性 片段 纯化 克隆表达 聚合酶链式反应 DNA重组技术 重组表达质粒 大肠杆菌 氧化复性 Cu2+ 目的蛋白 朊病毒蛋白 表达载体 基因插入 表达产物 高效表达 抗原特性 重组蛋白 包涵体 分子量 分析表 变性 引物 电泳
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Anti-oxidation properties of ZrB_2 modified silicon-based multilayer coating for carbon/carbon composites at high temperatures 被引量:7
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作者 李贺军 姚西媛 +2 位作者 张雨雷 姚栋嘉 王少龙 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2013年第7期2094-2099,共6页
To improve the anti-oxidation ability of silicon-based coating for carbon/carbon (C/C) composites at high temperatures, a ZrB2 modified silicon-based multilayer oxidation protective coating was prepared by pack ceme... To improve the anti-oxidation ability of silicon-based coating for carbon/carbon (C/C) composites at high temperatures, a ZrB2 modified silicon-based multilayer oxidation protective coating was prepared by pack cementation. The phase composition, microstructure and oxidation resistance at 1773, 1873 and 1953 K in air were investigated. The prepared coating exhibits dense structure and good oxidation protective ability. Due to the formation of stable ZrSiO4-SiO2 compound, the coating can effectively protect C/C composites from oxidation at 1773 K for more than 550 h. The anti-oxidation performance decreases with the increase of oxidation temperature. The mass loss of coated sample is 2.44% after oxidation at 1953 K for 50 h, which is attributed to the decomposition of ZrSiO4 and the volatilization of SiO2 protection layer. 展开更多
关键词 C/C composites COATING ZRB2 anti-oxidation properties
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Preparation and performance of coating on rare-earth compounds-immersed magnesium alloy by micro-arc oxidation 被引量:5
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作者 刘峰 李玉洁 +3 位作者 顾佳婧 严青松 罗强 蔡启舟 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2012年第7期1647-1654,共8页
A composite ceramic coating containing Y2O3-ZrO2-MgO(YSZ-MgO) was prepared on AZ91D magnesium alloy,which was immersed in Y(NO3)3 aqueous solution as pretreatment,by micro-arc oxidation(MAO) process.The morpholo... A composite ceramic coating containing Y2O3-ZrO2-MgO(YSZ-MgO) was prepared on AZ91D magnesium alloy,which was immersed in Y(NO3)3 aqueous solution as pretreatment,by micro-arc oxidation(MAO) process.The morphology,elemental and phase compositions,corrosion behavior and thermal stability of the coatings were studied by SEM,EDX,XRD,electrochemical corrosion test,high temperature oxidation and thermal shock test.The results show that the coating mainly consists of ZrO2,Y2O3,MgO,Mg2SiO4,and MgF2.Among these compounds,Y2O3 accounts for 26.7% of(Y2O3 + ZrO2).The thickness of YSZ-MgO coating is smaller than that of ZrO2-MgO coating,but its compactness and surface roughness are better than those of ZrO2-MgO coating.YSZ-MgO coating has a good corrosion resistance,and its corrosion rate in 5% NaCl aqueous solution is lower than that of ZrO2-MgO and only about 8.5% of that of AZ91D magnesium alloy.After oxidation at 410 °C,the mass gain of AZ91D magnesium alloy presents a linear increase with the oxidation time.The YSZ-MgO coating and ZrO2-MgO coating can remarkably decrease the oxidation mass gain.The oxidation mass gain of YSZ-MgO coating is lower than that of ZrO2-MgO coating,especially during a long oxidation period.The thermal shock resistance of YSZ-MgO coating is superior to ZrO2-MgO coating. 展开更多
关键词 AZ91D magnesium alloy micro-arc oxidation(MAO) Y2O3-ZrO2-MgO composite coating corrosion behavior thermal stability
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Electrosynthesis and physicochemical properties ofα-PbO_2-CeO_2-TiO_2 composite electrodes 被引量:4
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作者 陈步明 郭忠诚 徐瑞东 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2013年第4期1191-1198,共8页
In order to investigate the effect of solid particles dopants on physicochemical properties of α-PbO2 electrodes, a-PbO2 composite electrodes doped with nano-TiO2 and nano-CeO2 particles were respectively prepared on... In order to investigate the effect of solid particles dopants on physicochemical properties of α-PbO2 electrodes, a-PbO2 composite electrodes doped with nano-TiO2 and nano-CeO2 particles were respectively prepared on A1/conductive coating electrodes in 4 mol/L NaOH solution with addition of PbO until saturation by anodic codeposition. The electrodeposition mechanism, morphology, composition and structure of the composite electrodes were characterized by cyclic voltarnmogram (CV), SEM, EDAX and XRD. Results show that the doping solid particles can not change reaction mechanism of α-PbO2 electrode in alkaline or acid plating bath, but can improve deposition rate and reduce oxygen evolution potential. The doping solid particles can inhibit the growth of a-PbO2 unit cell and improve specific surface area. The diffraction peak intensity of a-PbO2-CeO2-TiO2 composite electrode is lower than that of pure a-PbO2 electrode. The electrocatalytic activity of a-PbO2-2.12%CEO2-3.71%TIO2 composite electrode is the best. The Guglielmi model for CeO2 and TiO2 codeposition with a-PbO2 is also pronosed. 展开更多
关键词 A1 lead dioxide composite electrodes ELECTROCATALYSIS physicochemical property
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CeO_2/Zn NANOCOMPOSITE COATING BY ELECTRODEPOSITION 被引量:7
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作者 骆心怡 何建平 李顺林 《Transactions of Nanjing University of Aeronautics and Astronautics》 EI 2002年第2期161-165,共5页
The nanocomposite coating is obtained by electrochemical deposition of the zinc plating solution with ceria nanoparticles (mean diameter 30 nm). The effect of ceria nanoparticles on the electrodeposited zinc coating i... The nanocomposite coating is obtained by electrochemical deposition of the zinc plating solution with ceria nanoparticles (mean diameter 30 nm). The effect of ceria nanoparticles on the electrodeposited zinc coating is stu died by weight loss test, inductively copuled plasma quantometer (ICP), scanning electron microscopy (SEM) and X ray diffraction (XRD), respectively. It is found that under the same electrodeposition conditions, the corrosion resistance of the nanocomposite coating increases obviously while that of the micron composite coating only improves slightly; The ceria content of the nanocomposite coating is more than that of the micron composite coating. Ceria nanoparticles modify the surface morphology and crystal structure of the zinc matrix in correlation with the increase of corrosion resistance. 展开更多
关键词 composite electrodeposition ceria nanoparticles nanocomposite coating corrosion resistance zinc coating
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Effects of thermal oxidation on microwave-absorbing and mechanical properties of SiC_f/SiC composites with PyC interphase 被引量:2
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作者 史毅敏 罗发 +3 位作者 丁冬海 穆阳 周万城 朱冬梅 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2015年第5期1484-1489,共6页
The SiCf/SiC composites containing PyC interphase were prepared by chemical vapor infiltration process. The influences of thermal oxidation on the complex permittivity and microwave absorption properties of Si Cf/Si C... The SiCf/SiC composites containing PyC interphase were prepared by chemical vapor infiltration process. The influences of thermal oxidation on the complex permittivity and microwave absorption properties of Si Cf/Si C composites were investigated in the frequency range of 8.2-12.4 GHz. Both the real and imaginary parts of the complex permittivity decreased after thermal oxidation. The composites after 100 h thermal oxidation showed that reflection loss exceeded-10 d B in the frequency of 9.7-11.9 GHz and the minimum value was-11.4 d B at 11.0 GHz. The flexural strength of composites decreased but fracture behavior was improved obviously after thermal oxidation. These results indicate that the SiCf/SiC composites containing PyC interphase after thermal oxidation possess good microwave absorbing property and fracture behavior. 展开更多
关键词 SiCf/SiC composites thermal oxidation dielectric properties microwave absorbing mechanical properties
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Preparation and oxidation behaviour of electrodeposited Ni-CeO_2 nanocomposite coatings 被引量:4
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作者 张海军 周月波 孙俭峰 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2013年第7期2011-2020,共10页
Ni-CeO2 nanocomposite coatings with different CeO2 contents were prepared by codeposition of Ni and CeO2 nanoparticles with an average particle size of 7 nm onto pure Ni surfaces from a nickel sulfate. The CeO2 nanopa... Ni-CeO2 nanocomposite coatings with different CeO2 contents were prepared by codeposition of Ni and CeO2 nanoparticles with an average particle size of 7 nm onto pure Ni surfaces from a nickel sulfate. The CeO2 nanoparticles were dispersed in the electrodeposited nanocrystalline Ni grains (with a size range of 10-30 nm). The isothermal oxidation behaviours of Ni-CeO2 nanocomposite coatings with two different CeO2 particles contents and the electrodeposited pure Ni coating were comparatively investigated in order to elucidate the effect of CeO2 at different temperatures and also CeO2 contents on the oxidation behaviour of Ni-CeO2 nanocomposite coatings. The results show that the as-codeposited Ni-CeO2 nanocomposite coatings have a superior oxidation resistance compared with the electrodeposited pure Ni coating at 800 °C due to the codeposited CeO2 nanoparticles blocking the outward diffusion of nickel along the grain boundaries. However, the effects of CeO2 particles on the oxidation resistance significantly decrease at 1050 °C and 1150 °C due to the outward-volume diffusion of nickel controlling the oxidation growth mechanism, and the content of CeO2 has little influence on the oxidation. 展开更多
关键词 codeposition nanocomposite coating OXIDATION reactive-element effect
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