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蜂毒肽分离纯化及基于氨基酸水解同位素稀释质谱法的定值方法研究 被引量：1
1
作者 史浩川 杨梦瑞 +5 位作者 翟睿 强维 刘香艳 周剑 严晨斌 王敏 《农产品质量与安全》 2023年第3期56-61,共6页
本研究重点开展了蜂毒冻干粉中蜂毒肽的分离纯化研究,并采用氨基酸水解同位素稀释质谱法对纯化后的蜂毒肽样品进行了纯度准确测定,以及采用经典的质量平衡法对测定结果进行比较验证。结果表明,氨基酸水解同位素稀释质谱法测定蜂毒肽纯度... 本研究重点开展了蜂毒冻干粉中蜂毒肽的分离纯化研究,并采用氨基酸水解同位素稀释质谱法对纯化后的蜂毒肽样品进行了纯度准确测定,以及采用经典的质量平衡法对测定结果进行比较验证。结果表明,氨基酸水解同位素稀释质谱法测定蜂毒肽纯度为66.14%±0.27%,质量平衡法测定结果为68.26%±0.51%,两种不同原理方法的测量结果一致性较好。此外,经确证与定量测定发现镇静肽-2、水分、三氟乙酸是影响蜂毒肽纯度提升的主要杂质。 展开更多
关键词 蜂毒肽 分离纯化 氨基酸水解同位素稀释质谱法 定值
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基于水解氨基酸-同位素稀释质谱法的酪蛋白磷酸肽特征肽段纯度定值研究
2
作者 徐琪 李玲 +3 位作者 杨梦瑞 周剑 李付凯 李亮 《化学试剂》 2025年第3期77-84,共8页
针对酪蛋白磷酸肽特征肽段YKVPQLEIVPNpSAEER,建立了基于水解氨基酸-同位素稀释质谱法(AA-LC-IDMS/MS)的纯度定值方法。重点表征了特征肽段原料分子量、氨基酸序列等结构信息,优化了肽段氨基酸水解条件,讨论了空间位阻对水解效率的影响... 针对酪蛋白磷酸肽特征肽段YKVPQLEIVPNpSAEER,建立了基于水解氨基酸-同位素稀释质谱法(AA-LC-IDMS/MS)的纯度定值方法。重点表征了特征肽段原料分子量、氨基酸序列等结构信息,优化了肽段氨基酸水解条件,讨论了空间位阻对水解效率的影响。选取脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸以及异亮氨酸这4种氨基酸,运用建立的AA-LC-IDMS/MS方法,对酪蛋白磷酸肽特征肽段原料展开纯度定值。结果表明,基于4种不同氨基酸的肽段定值结果一致性良好,定值准确可靠,最终肽段的定值结果为(0.916±0.016)g/g。该方法的建立,为下一步特征肽段标准物质研制及酪蛋白磷酸肽的准确测量奠定了基础。 展开更多
关键词 酪蛋白磷酸肽 特征肽段 水解氨基酸同位素稀释质谱法 纯度 定值
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同位素稀释-气相色谱-质谱法测定血清中三种支链氨基酸
3
作者 朱天翼 孟娇然 +2 位作者 夏娃 杨柳 商易安 《上海计量测试》 2024年第3期22-26,共5页
建立了一种同位素稀释-气相色谱-质谱法测定血清中三种支链氨基酸含量的检测方法。采用该方法对血清中缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸进行定量分析,结果的相对标准偏差为0.19%~0.46%,平均回收率为99.9%~102.2%。方法重复性好、准确度高、结... 建立了一种同位素稀释-气相色谱-质谱法测定血清中三种支链氨基酸含量的检测方法。采用该方法对血清中缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸进行定量分析,结果的相对标准偏差为0.19%~0.46%,平均回收率为99.9%~102.2%。方法重复性好、准确度高、结果准确可靠,可满足临床血清样品中三种氨基酸含量的准确检测。 展开更多
关键词 血清 同位素稀释 支链氨基酸 气相色谱-质谱法
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氨基酸分析-同位素稀释质谱法准确定量胱抑素C重组蛋白 被引量：4
4
作者 沈蕾 季伙燕 +3 位作者 崔明 王建新 倪红兵 王惠民 《交通医学》 2017年第3期205-208,共4页
目的:建立同位素稀释液相色谱串联质谱法进行氨基酸分析,准确定量人重组蛋白胱抑素C(Cys C)。方法:优化Cys C蛋白酸水解条件,将Cys C蛋白水解成氨基酸,以水解产物缬氨酸(Val)和苯丙氨酸(Phe)为研究对象,13C5-Val和13C9,15N-Phe为内标,... 目的:建立同位素稀释液相色谱串联质谱法进行氨基酸分析,准确定量人重组蛋白胱抑素C(Cys C)。方法:优化Cys C蛋白酸水解条件,将Cys C蛋白水解成氨基酸,以水解产物缬氨酸(Val)和苯丙氨酸(Phe)为研究对象,13C5-Val和13C9,15N-Phe为内标,根据括号法分别计算水解产物Val和Phe浓度,从而准确定量Cys C蛋白。结果:Cys C蛋白在130℃,6 mol/L HCl溶液中水解4 h可完全水解。以水解产物Val和Phe分别计算Cys C浓度为1.324 mg/g和1.328 mg/g,一致性较好,检测结果变异系数均小于7%(n=5),取二者平均值得到重组Cys C蛋白浓度为1.326 mg/g。结论:成功建立同位素稀释质谱法准确定量重组蛋白Cys C的氨基酸分析方法,有望为临床实验室蛋白质检测的溯源提供思路。 展开更多
关键词 氨基酸分析 同位素稀释质谱法 蛋白定量 溯源
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基于液相色谱-同位素稀释质谱法测定氨基酸的蛋白质定量方法
5
作者 李永利 高艳秋 +2 位作者 薛民杰 郝玉红 李杰 《同位素》 CAS 2023年第6期598-604,共7页
为定量分析蛋白质,建立蛋白质水解液中氨基酸的液相色谱-同位素稀释质谱分析方法。蛋白质在6 mol/L盐酸溶液存在下130℃水解,经Hypercarb多孔石墨碳色谱柱、0.1%全氟戊酸水溶液/乙腈流动相体系分离,选择脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨... 为定量分析蛋白质,建立蛋白质水解液中氨基酸的液相色谱-同位素稀释质谱分析方法。蛋白质在6 mol/L盐酸溶液存在下130℃水解,经Hypercarb多孔石墨碳色谱柱、0.1%全氟戊酸水溶液/乙腈流动相体系分离,选择脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸5种较为稳定的氨基酸,以其相应的稳定同位素标记物为内标括号法定量,结合蛋白质的氨基酸序列信息实现对蛋白质的绝对定量。结果表明,5种氨基酸在10~1000 ng/mL范围内线性关系良好(R^(2)>0.995),检出限和定量限分别在0.02~0.07 ng/mL和0.06~0.2 ng/mL之间,3个不同质量水平下经水解处理的回收率在97.0%~102.4%之间、相对标准偏差在1.1%~3.0%之间。对新型冠状病毒(新冠病毒)N蛋白人源IgG单克隆抗体有证标准物质的分析结果和新冠病毒N蛋白国家计量比对的测量结果满意,证明该方法具有足够的准确度。 展开更多
关键词 液相色谱-串联质谱法 同位素稀释质谱法 氨基酸 蛋白质
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氨基酸-稳定同位素稀释质谱法用于合成肽段准确含量分析 被引量：2
6
作者 王雪颖 秦伟捷 +1 位作者 钱小红 张养军 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期239-244,共6页
建立了氨基酸同位素稀释液相色谱-串联质谱法准确测定合成肽段绝对含量的方法。实验中对合成肽段的纯度进行了表征,色谱纯度表征结果为99%以上,质谱纯度为90%以上。在肽段溶液中加入13C标记的氨基酸后进行酸溶液水解时间的优化,水解后... 建立了氨基酸同位素稀释液相色谱-串联质谱法准确测定合成肽段绝对含量的方法。实验中对合成肽段的纯度进行了表征,色谱纯度表征结果为99%以上,质谱纯度为90%以上。在肽段溶液中加入13C标记的氨基酸后进行酸溶液水解时间的优化,水解后的氨基酸直接经液相色谱分离和质谱检测,结果表明肽段中的被测氨基酸在150℃、6 mol/L HCl溶液水解4～6 h就可以达到水解平衡。每个肽段选择两个或两个以上的被测氨基酸,测得随机选择的5种合成肽段的绝对含量为62.07%～88.18%,测定结果的相对标准偏差小于8%,相对误差小于5%,均满足定量要求。除常用的被测氨基酸苯丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸外,还考察了选择赖氨酸和精氨酸作为被测氨基酸的可行性,实验结果表明增加精氨酸为被测氨基酸是可行的,从而进一步增加了方法的普适性。该方法的建立避免了色谱法定量时氨基酸衍生化处理带来的副反应影响及操作繁琐等问题,提高了肽段含量测定的准确度和精密度,为肽段含量的准确测定提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 液相色谱 同位素稀释质谱法 合成肽段 氨基酸分析
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超高效液相色谱-同位素稀释质谱法定量分析芥子气染毒血浆中5种氨基酸加合物
7
作者 梁德莘 文龙 +4 位作者 耿舒 舒志斌 刘石磊 陈博 王风云 《分析试验室》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1356-1362,共7页
利用合成的芥子气-氨基酸加合物及其同位素标记化合物,基于超高效液相色谱-同位素稀释串联质谱技术,建立了芥子气染毒人血浆中5种氨基酸加合物的绝对定量分析方法。5种氨基酸加合物在0.100~100 ng/mL范围内线性良好,相关系数R2>0.995... 利用合成的芥子气-氨基酸加合物及其同位素标记化合物,基于超高效液相色谱-同位素稀释串联质谱技术,建立了芥子气染毒人血浆中5种氨基酸加合物的绝对定量分析方法。5种氨基酸加合物在0.100~100 ng/mL范围内线性良好,相关系数R2>0.995,检出限分别为0.0200 ng/mL([N1-HETE]-His和[N3-HETE]-His)和0.0500 ng/mL(HETE-Lys,HETE-Asp和HETE-Glu)。应用该定量方法研究了芥子气在人血浆蛋白上不同加合位点的反应趋势。本文所建立的氨基酸加合物绝对定量方法,不仅提供了一种芥子气中毒快速溯源方法,还为芥子气暴露人员的临床诊断救治及代谢机理研究等提供了重要的手段。 展开更多
关键词 芥子气 氨基酸加合物 血浆 超高效液相色谱-同位素稀释质谱法 绝对定量方法
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同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法测定谷物中隐蔽型伏马菌素 被引量：2
8
作者 张烁 周爽 +1 位作者 赵云峰 吴永宁 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2021年第6期680-685,共6页
目的建立谷物中隐蔽型伏马菌素的同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱测定方法。方法谷物样品溶剂提取后,一部分稀释后用于原型伏马菌素(FBs)检测,另一部分经碱水解后经强阴离子交换(MAX)柱净化用于水解型伏马菌素(HFBs)检测。0.2%甲酸... 目的建立谷物中隐蔽型伏马菌素的同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱测定方法。方法谷物样品溶剂提取后,一部分稀释后用于原型伏马菌素(FBs)检测,另一部分经碱水解后经强阴离子交换(MAX)柱净化用于水解型伏马菌素(HFBs)检测。0.2%甲酸甲醇-0.2%甲酸水作为流动相梯度洗脱,CORTECS C18色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.6μm)分离,四极杆串联质谱仪,在电喷雾正离子化模式(ESI+)和多反应监测模式(MRM)下,同位素稀释法定量。水解型伏马菌素与游离原型伏马菌素之差即为隐蔽型伏马菌素含量。结果 FB1、FB2、FB3、HFB1、HFB2和HFB3在线性范围内相关系数(r)> 0.99;方法定量限为5.0~10μg/kg。3种谷物基质在低、中、高各水平的回收率在88.01%~114.2%之间,相对标准偏差为0.72%~11.5%。结论该方法准确、灵敏、重现性好,适用于谷物中隐蔽伏马菌素的常规检测。 展开更多
关键词 谷物 高效液相色谱-串联质谱法 隐蔽型伏马毒素 同位素稀释 碱水解
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