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抗凝、溶栓双功能水蛭素12肽-瑞替普酶融合蛋白的模拟、构建与表达 被引量：9
1
作者 余蓉 韦利军 +2 位作者 李灵玲 高玲 吴梧桐 《药物生物技术》 CAS CSCD 2007年第3期168-172,共5页
将水蛭素12肽通过柔性肽(Gly)3与r-PA连接,以期望获得既具有抗凝活性,又具有溶栓活性的新型基因工程蛋白质分子。采用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构与其活性区可以正常发挥功能。构建并表达了兼有溶栓和抗凝活性的... 将水蛭素12肽通过柔性肽(Gly)3与r-PA连接,以期望获得既具有抗凝活性,又具有溶栓活性的新型基因工程蛋白质分子。采用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构与其活性区可以正常发挥功能。构建并表达了兼有溶栓和抗凝活性的瑞替普酶(r-PA)与水蛭素12肽双功能融合基因。通过两轮加端PCR获得水蛭素12肽与r-PA通过柔性肽(Gly)3连接得到的融合基因,再克隆到pET-21a载体上,经测序正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,融合蛋白约占菌体总蛋白的12%,以包涵体形式存在,经过体外复性后,融合蛋白的纤溶比活达到8 400.5 IU/mg,抗凝比活达到930.2 ATU/mg,具有较高的溶栓抗凝双功能活性。该双功能融合蛋白有望成为治疗血栓疾病的新型药物。 展开更多
关键词 瑞替普酶 水蛭素12肽 溶栓 抗凝
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液相色谱-串联质谱法研究重组水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的一级结构 被引量：4
2
作者 余蓉 张贵锋 +2 位作者 高玲 苏志国 吴梧桐 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期737-742,共6页
利用液质联用研究重组水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的一级结构。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的相对分子质量;采用液质联用分别分析HV12p-rPA的胰蛋白... 利用液质联用研究重组水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的一级结构。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的相对分子质量;采用液质联用分别分析HV12p-rPA的胰蛋白酶(trypsin)和胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)酶解产物。MALDI-TOF-MS测得HV12p-rPA的相对分子质量为41 472 Da,与理论值相符;HV12p-rPA的胰蛋白酶(trypsin)酶解产物进行液质联用分析结果表明该融合蛋白中含有瑞替普酶序列;HV12p-rPA的胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)酶解产物进行液质联用分析,结果表明融合蛋白中含有水蛭素12肽,并检测出融合蛋白中的链接肽(DEGGGSY),融合蛋白的N末端MASDF和C末端LDWIRDNMRP;采用液质联用进行肽图分析,识别出的多肽匹配度Xcorr均超过1.5,部分多肽的Xcorr超过3.0,表明本实验测定过程中多肽识别结果准确可靠;目标蛋白的氨基酸序列覆盖率超过85%。结果确定了HV12p-rPA融合蛋白的序列与理论值相符。 展开更多
关键词 高效液相色谱质谱联用 水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白 相对分子质量 氨基酸序列
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水蛭素12肽与低分子量单链尿激酶融合基因的构建、表达及产物特性分析
3
作者 刘凤云 李秀珍 +1 位作者 李风知 程度胜 《生物技术通讯》 CAS 1996年第3期114-117,共4页
用化学合成的方法合成了水蛭素12肽基因的编码序列,通过DNA重组技术将水蛭素12肽基因片段与低分子量单链尿激酶cDNA片段连接构建了融合基因。融合基因在大肠杆菌中获得表达。体外实验结果表明,表达的融合蛋白具有溶纤活性和抗凝活性。
关键词 水蛭素12肽 低分子量单链尿激酶 溶纤活性 抗凝活性
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水蛭素12肽与低分子量尿激酶融合基因的构建和表达 被引量：1
4
作者 刘凤云 李秀珍 +1 位作者 李风知 程度胜 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1998年第1期16-19,共4页
目的：旨在获得既能抗栓又能溶栓的双功能蛋白，并在大肠杆菌中表达。方法：化学合成水蛭素１２肽基因编码序列。通过ＤＮＡ重组技术将水蛭素１２肽基因片段连接到低分子量尿激酶ｃＤＮＡ片段５′端，构建成融合基因。结果：构建了水蛭... 目的：旨在获得既能抗栓又能溶栓的双功能蛋白，并在大肠杆菌中表达。方法：化学合成水蛭素１２肽基因编码序列。通过ＤＮＡ重组技术将水蛭素１２肽基因片段连接到低分子量尿激酶ｃＤＮＡ片段５′端，构建成融合基因。结果：构建了水蛭素１２肽与低分子量尿激酶的融合基因，在大肠杆菌中获得表达。重组融合蛋白具有溶栓与抗栓双功能。结论：运用ＤＮＡ重组技术可将两种不同功能的蛋白合理地融合在一起，使其具有溶纤活性和抗凝活性。 展开更多
关键词 水蛭素12肽 低分子量尿激酶 抗凝血酶 融合基因
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HV12p-rPA血栓靶向脂质体的制备及体内溶栓实验
5
作者 邓璇 梁兰 +4 位作者 高漫潞 康丽梅 余蓉 苏志国 吴梧桐 《药物生物技术》 CAS CSCD 2011年第3期215-219,共5页
将通过蛋白质工程获得的抗凝溶栓双功能蛋白水蛭素12肽-瑞替普酶(HV12p-rPA)制备成靶向脂质体,并考察其体内溶栓效果。用薄膜分散-超声法制备HV12p-rPA脂质体,通过正交设计优化处方,采用碳二亚胺法偶联抗纤维蛋白原单克隆抗体(McAbSZ-65... 将通过蛋白质工程获得的抗凝溶栓双功能蛋白水蛭素12肽-瑞替普酶(HV12p-rPA)制备成靶向脂质体,并考察其体内溶栓效果。用薄膜分散-超声法制备HV12p-rPA脂质体,通过正交设计优化处方,采用碳二亚胺法偶联抗纤维蛋白原单克隆抗体(McAbSZ-65)制备HV12p-rPA靶向脂质体,采用大鼠颈总动脉血栓模型,考察HV12p-rPA靶向脂质体的体内溶栓效果。结果:最佳处方中HV12p-rPA脂质体的粒径为(142.45±1.20)nm,Zeta电位为(-30.63±0.48)mV,平均包封率为(91.59±1.39)%。靶向脂质体组(0.48±0.083)mg在相同剂量下(80k IU/kg)与PBS空白对照组(2.04±0.114)mg、游离HV12p-rPA组(1.2±0.100)mg和普通HV12p-rPA脂质体组(0.74±0.089)mg分别比较,其血栓干重明显减轻(P<0.05);靶向脂质体组与5倍剂量(400k IU/kg)的游离HV12p-rPA组(0.52±0.084)mg比较,其血栓干重较之偏轻(P>0.05)。制备出的靶向HV12p-rPA脂质体具有体内靶向溶栓效果。 展开更多
关键词 水蛭素12肽-瑞替普酶 脂质体 靶向溶栓 颈总动脉血栓模型
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