α_(1A)-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2稳定共表达细胞的构建

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作者 王晓璇 李玉蕾 +1 位作者 周培岚 苏瑞斌 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第8期587-594,共8页

目的建立α_(1A)-肾上腺素能受体(α_(1A)-AR)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)稳定共表达细胞。方法①将pcDNA3.1-α_(1A)-AR-3×FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFPNFAT2细胞,经潮霉素B(Hygro-B)200 mg·L^... 目的建立α_(1A)-肾上腺素能受体(α_(1A)-AR)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)稳定共表达细胞。方法①将pcDNA3.1-α_(1A)-AR-3×FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFPNFAT2细胞,经潮霉素B(Hygro-B)200 mg·L^(-1)压力筛选后加入α_(1A)-AR激动剂去甲肾上腺素(NE,10μmol·L^(-1))孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测细胞核内绿色荧光强度,验证EGFP-NFAT2核转位,筛选得到稳定表达α_(1A)-AR的U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞。②采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法检测该细胞和对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中α_(1A)-AR mRNA和蛋白的表达水平。③将U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞接种于96孔板,分别加入NE(10^(-8)~10^(-5) mol·L^(-1))或α2-AR激动剂右美托咪定(DMED,10^^(-8.8)~10^(-5) mol·L^(-1))孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位。④将U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞分为溶剂对照组、α1-AR拮抗剂萘派地尔(1μmol·L^(-1))组、NE(1μmol·L^(-1))组、萘派地尔+NE(各1μmol·L^(-1)共孵育)组、α2-AR拮抗剂阿替美唑(0.1μmol·L^(-1))组、DMED(0.1μmol·L^(-1))组、阿替美唑+DMED(各0.1μmol·L^(-1)共孵育)组和萘派地尔+DMED(萘派地尔1μmol·L^(-1)与DMED 0.1μmol·L^(-1)共孵育)组,药物孵育时间均为30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位,验证该细胞α_(1A)-AR功能的特异性。结果①Hygro-B压力筛选得到58株U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞,NE 10μmol·L^(-1)孵育后,其中50号细胞核内绿色荧光强度最强,故选定其为稳定共表达α_(1A)-AR和EGFPNFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞。②Western印迹法结果显示,U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞可明显表达α_(1A)-AR蛋白,而对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中未见α_(1A)-AR蛋白表达。RT-qPCR结果显示,该细胞在传代5~20代内α_(1A)-AR mRNA均稳定表达,其表达水平为对照细胞的500~800倍。③NE或DMED使U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞中EGFP-NFAT2核转位明显增加,半数有效浓度(EC50)分别为5.94×10^(-7)和6.15×10^(-8) mol·L^(-1)。④与溶剂对照组和萘派地尔组比较,NE组U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),而萘派地尔+NE组EGFP-NFAT2核转位较NE组明显减弱(P<0.01)。与溶剂对照组和阿替美唑组比较,DMED组EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),阿替美唑+DMED组EGFP-NFAT2核转位与DMED组比较无明显差别,而萘派地尔+DMED组EGFP-NFAT2核转位较DMED组明显减弱(P<0.01)。结论成功构建稳定共表达α_(1A)-AR和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFPNFAT2-α_(1A)-AR细胞,可用于靶向α_(1A)-AR化合物筛选和受体分子机制研究。 展开更多

关键词 α1A-肾上腺素能受体 活化t细胞核因子2 核转位 去甲肾上腺素 高内涵筛选系统

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基于胸腺基质淋巴细胞生成素/蛋白酶激活受体2/瞬时电位受体香草酸受体1/活化T细胞的核因子信号通路探讨麻荆止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制

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作者 陈家卫 蔡穗珍 《中医临床研究》 2023年第28期69-74,共6页

目的:通过麻荆止咳颗粒调控胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)/蛋白酶激活受体2(Proteinase Activated Receptor-2,PAR2)/瞬时电位感受器香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)/活化T... 目的:通过麻荆止咳颗粒调控胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)/蛋白酶激活受体2(Proteinase Activated Receptor-2,PAR2)/瞬时电位感受器香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)/活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFAT)信号通路的动物实验,探讨其治疗咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)的疗效机制。方法:将豚鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组和地塞米松组,构建CVA豚鼠模型,药物干预10天,采用辣椒素激发各组豚鼠,观察咳嗽情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法观察各组肺组织病理学变化;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Method,ELISA)法检测各组血清TSLP含量;免疫组化染色及实时定量聚合酶链反应(quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)法检测肺组织PAR2、TRPV1、NFAT的表达。结果:与模型组对比,中药组和地塞米松组药物干预后咳嗽次数明显减少;血清TSLP含量显著降低;且肺组织病理变化较模型组明显减轻;PAR2、TRPV1和NFAT的蛋白与mRNA表达均下调。结论:麻荆止咳颗粒可通过抑制CVA模型豚鼠TSLP/PAR2/TRPV1/NFAT信号通路表达,降低气道敏感性及改善气道炎症,达到止咳效果。 展开更多

关键词 麻荆止咳颗粒 咳嗽变异性哮喘 胸腺基质淋巴细胞生成素/蛋白酶激活受体2/瞬时电位受体香草酸受体1/活化t细胞的核因子信号通路 气道敏感性

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转录因子Krüppel样因子15通过下调活化T细胞核因子胞质1型保护足细胞

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作者 窦曹帅 张鸿 +6 位作者 柯贵宝 连智雯 陈雪芹 史伟 梁馨苓 章斌 刘双信 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期427-434,共8页

目的:探究转录因子Krüppel样因子15(Krüppel-Like Factor 15,KLF15)通过下调活化T细胞核因子胞质1型(Nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)保护足细胞的作用机制。方法:通过免疫荧光染色观察在正常人... 目的:探究转录因子Krüppel样因子15(Krüppel-Like Factor 15,KLF15)通过下调活化T细胞核因子胞质1型(Nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)保护足细胞的作用机制。方法:通过免疫荧光染色观察在正常人及不同类型肾小球疾病患者足细胞KLF15的表达情况;通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot检测体外培养的永生化小鼠足细胞在高糖(HG)、脂多糖(LPS)处理48h及阿霉素(ADR)处理24h后KLF15的表达情况,足细胞感染腺病毒瞬时过表达KLF15后KLF15过表达效率、促凋亡蛋白BAX、抗凋亡蛋白BCL2及NFATc1的表达情况,足细胞给予地塞米松处理后NFATc1表达情况;通过流式细胞术检测在过表达KLF15的足细胞中给予损伤刺激(ADR、LPS、HG)后,足细胞的凋亡情况;通过免疫染色质共沉淀(CHIP)检测足细胞在正常情况下与LPS处理后转录因子KLF15与NFATc1启动子的结合情况;通过RT-PCR检测足细胞过表达KLF15后,NFATc1下游基因的表达情况;结果:KLF15在不同类型的肾小球疾病患者足细胞表达降低;体外培养的足细胞在损伤刺激的情况下KLF15的mRNA及蛋白水平表达均降低;足细胞过表达KLF15后,促凋亡蛋白BAX表达降低,抗凋亡蛋白BCL2表达升高,在给予损伤刺激的情况下,过表达KLF15组的足细胞凋亡率较对照组明显减少;足细胞过表达KLF15后,NFATc1在mRNA及蛋白水平的表达降低;NFATc1下游目的基因转录减少;在正常的足细胞中,转录因子KLF15与NFATc1启动子区域有结合,且在LPS损伤刺激下结合减弱,过表达足细胞中的KLF15,NFATc1的下游基因(Fzd9、Rcan1、Plaur)在mRNA水平表达降低;在体外培养的足细胞给予地塞米松处理后,转录因子KLF15表达明显增高, NFATc1表达降低。结论:转录因子KLF15通过下调NFATc1保护足细胞,地塞米松可通过升高KLF15抑制NFATc1保护足细胞。 展开更多

关键词 足细胞 Krüppel样因子15 活化t细胞核因子胞质1型

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系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞转录因子NF-AT和AP-1活性的初步观察 被引量：2

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作者 许韩师 叶任高 +3 位作者 杨岫岩 孙林 黄凌虹 林穗珍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期508-510,共3页

目的 :观察系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血单个核细胞 (PBMC)NF AT和AP 1活性 ,并进一步探讨其临床意义。方法 :NF AT和AP 1活性检测采用电泳迁移率改变法 (EMSA)。结果 :①活动期 ( 1 9例 )和缓解期 ( 1 3例 )SLE患者PBMCNF AT活性均... 目的 :观察系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血单个核细胞 (PBMC)NF AT和AP 1活性 ,并进一步探讨其临床意义。方法 :NF AT和AP 1活性检测采用电泳迁移率改变法 (EMSA)。结果 :①活动期 ( 1 9例 )和缓解期 ( 1 3例 )SLE患者PBMCNF AT活性均显著高于正常对照组 ( P <0 0 5) ;活动期SLE显著高于缓解期 ( P <0 0 5)。②活动期SLE组PBMCAP 1活性均显著低于正常对照组 (P <0 0 1 ) ;缓解期SLE与正常对照组无明显差别 (P >0 0 5)。③血清抗dsDNA抗体阳性SLE患者 ( 2 1例 )NF AT明显高于抗dsDNA抗体阴性组 ( 1 1例 ) ( P <0 0 5) ,而两组患者AP 1活性无显著差异 ( P >0 0 5)。④SLE患者PB MCNF AT活性与CRP和SLEDAI呈正相关关系 ,与ESR、ANA、C3无相关关系 ;AP 1与上述各临床指标无相关关系。结论 :SLE外周血单个细胞中存在介导细胞内信号转导的转录因子NF AT和AP 1表达异常 ,这可能与SLE的发病机制有关 ;NF AT可能与SLE的疾病活性有关。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 外周血单个核幼儿 活化t细胞因子 活化蛋白-1 NF-At AP-1

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NFATc4在舌鳞状细胞癌神经侵犯诊断中的作用

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作者 罗霖 陈昕煜 +4 位作者 刘能铭 周博森 陈鹏宁 陈冠希 于大海 《广西医科大学学报》 CAS 2024年第5期716-721,共6页

目的:通过比较活化T细胞核因子胞质4(NFATc4)与S100钙结合蛋白(S100)、p75神经营养素受体(p75)对舌鳞状细胞癌(TSCC)神经侵犯(PNI)的免疫组织化学染色特点,探索NFATc4在TSCC PNI诊断中的作用。方法:收集59例TSCC病理标本,10例癌前病变... 目的:通过比较活化T细胞核因子胞质4(NFATc4)与S100钙结合蛋白(S100)、p75神经营养素受体(p75)对舌鳞状细胞癌(TSCC)神经侵犯(PNI)的免疫组织化学染色特点,探索NFATc4在TSCC PNI诊断中的作用。方法:收集59例TSCC病理标本,10例癌前病变为对照组,每个标本连续切片后采用免疫组织化学染色,观察NFATc4对TSCC以及神经的染色情况,并与S100和p75进行比较。结果:59例TSCC病理标本中,NFATc4阳性率为47.5%(28/59),PNI发生率为35.6%(21/59),NFATc4阳性表达组的PNI发生率高于NFATc4阴性表达组(P<0.05),NFATc4染色可见神经内膜淡染色,TSCC细胞胞质可见染色,NFATc4对神经的鉴别效果与S100和p75比较,无统计学差异(P>0.05)。结论:NFATc4的表达与PNI的发生存在关联,NFATc4能在染色神经束的同时,将TSCC组织染色,可以在同一个视野内直观地观察肿瘤与神经的关系,有利于提高PNI判读准确率,有望成为一个判断PNI的指标。 展开更多

关键词 活化t细胞核因子胞质4 舌鳞状细胞癌 神经侵犯

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TSLP、HIF-1α、RANKL在义齿修复后种植体周围炎患者龈沟液中的表达及意义

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作者 张云霞 杨娜 +2 位作者 姚莉 符建青 王全智 《临床和实验医学杂志》 2024年第15期1656-1659,共4页

目的研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)在义齿修复后种植体周围炎(PI)患者龈沟液中的表达及意义。方法回顾性选取2019年8月至2023年8月大同市第五人民医院收治的义齿修... 目的研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)在义齿修复后种植体周围炎(PI)患者龈沟液中的表达及意义。方法回顾性选取2019年8月至2023年8月大同市第五人民医院收治的义齿修复患者86例作为研究对象,根据术后3个月是否发生PI将患者分为预后良好组(n=61)和预后不良组(n=25)。比较两组患者的临床资料及术前龈沟液TSLP、HIF-1α及RANKL水平,采用多因素Logistic回归分析对龈沟液TSLP、HIF-1α及RANKL水平与义齿修复患者术后发生PI的关系进行分析,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析TSLP、HIF-1α及RANKL水平对义齿修复患者的预后评估价值。结果两组患者临床资料(性别、年龄、病程、义齿种植原因及种植颗数)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。预后良好组患者的龈沟液中TSLP、HIF-1α、RANKL水平分别为(122.57±11.30)ng/L、(417.79±115.43)ng/mL、(116.02±13.45)pg/μL,均明显低于预后不良组[(138.93±12.70)ng/L、(576.55±177.60)ng/mL、(133.24±15.69)pg/μL],差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析义齿修复患者预后,结果显示龈沟液中TSLP水平升高、HIF-1α水平升高和RANKL水平升高是义齿修复患者术后发生PI的独立危险因素(OR=1.119,95%CI:1.048~1.195;OR=1.007,95%CI:1.002~1.013;OR=1.065,95%CI:1.016~1.117;P<0.05)。ROC曲线分析龈沟液中TSLP、HIF-1α、RANKL水平预测义齿修复患者预后的价值,结果显示曲线下面积(AUC)值分别为0.833、0.786和0.809。其中,RANKL具有最高的特异度(0.852),而HIF-1α具有最高的敏感度(0.800),具有较好的预测价值(P<0.05)。结论龈沟液中TSLP、HIF-1α、RANKL水平升高是义齿修复患者术后并发PI的独立危险因素,且均具有较高的预测义齿修复患者预后的价值。 展开更多

关键词 义齿修复术 牙种植体 缺氧诱导因子1 α亚基 胸腺基质淋巴细胞生成素 核因子-ΚB受体活化因子配体 种植体周围炎 龈沟液

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NFATc1对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响 被引量：1

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作者 李智慧 姚菲菲 王富霞 《天津医科大学学报》 2021年第5期477-481,共5页

目的:检测活化T细胞c1核因子(NFATc1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR检测NSCLC细胞H1650、H460、H1299及正常人支气管上皮细胞BEAS-2B中NFATc1表达水平,将si-NFATc质粒转染至H1650细胞... 目的:检测活化T细胞c1核因子(NFATc1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR检测NSCLC细胞H1650、H460、H1299及正常人支气管上皮细胞BEAS-2B中NFATc1表达水平,将si-NFATc质粒转染至H1650细胞中,通过CCK-8增殖及集落形成实验、划痕和Western印迹实验分别检测转染后H1650细胞增殖、迁移及EMT的影响。结果:NFATc1 mRNA在H1650、H460、H1299细胞中的相对表达水平高于BEAS-2B细胞(t=10.732,P<0.001;t=4.705,P=0.009;t=4.792,P=0.009),且H1650细胞中NFATc1 mRNA表达水平高于H460、H1299细胞(t=3.593,P=0.023;t=7.505,P=0.002);转染si-NFATc1组NFATc1 mRNA(t=9.325,P<0.001),NFATc1蛋白(t=10.254,P<0.001),细胞的OD值(t=7.954,P<0.001)均低于si-NC组,细胞集落形成数(t=12.210,P<0.001),迁移率(t=8.951,P<0.001)低于si-NC组;si-NFATc1组E-cadherin蛋白表达水平高于si-NC组(t=6.352,P<0.001),Vimentin和N-cadherin蛋白的表达(t=6.012,P<0.001;t=10.241,P<0.001)低于si-NC组。结论:NFATc1在H1650细胞中表达水平增加,敲低其表达水平后可减弱细胞增殖、迁移和EMT。 展开更多

关键词 活化t细胞c1的核因子 增殖 上皮间质转化

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破骨细胞生成中RANKL依赖性机制的研究进展

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作者 常岳 武一 吉尚戎 《兰州大学学报（医学版）》 2024年第6期1-6,共6页

破骨细胞在体内执行骨吸收功能,异常分化会影响骨稳态,导致众多骨相关疾病。核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)在破骨细胞分化中具有重要意义,它是由成骨细胞和骨细胞分泌的促进破骨细胞分化的因子,尚未发现经过充分证明的、不依赖于RA... 破骨细胞在体内执行骨吸收功能,异常分化会影响骨稳态,导致众多骨相关疾病。核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)在破骨细胞分化中具有重要意义,它是由成骨细胞和骨细胞分泌的促进破骨细胞分化的因子,尚未发现经过充分证明的、不依赖于RANKL独立驱动破骨细胞分化的分子,理解破骨细胞分化对RANKL的依赖性有助于为破骨细胞过度分化相关疾病开发更精细的治疗方案。本研究回顾文献,从RANKL对破骨细胞分化关键转录因子活化T细胞核因子1的调控和RANKL对破骨细胞分化阻遏的解除等方面讨论破骨细胞生成过程中RANKL依赖性的机制。 展开更多

关键词 破骨细胞 核因子κB受体激活蛋白配体 活化t细胞核因子1 干扰素 骨免疫

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共培养体系中重组结核杆菌热休克蛋白10对破骨细胞相关基因表达的影响(R68) 被引量：1

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作者 张元豫 刘霞 +2 位作者 李坤 郭永荣 白靖平 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期755-760,788,共7页

目的观察重组结核杆菌热休克蛋白10(CPN10)对成骨细胞(OB)-外周血单个核细胞(PBMs)共培养体系中破骨细胞生成及相关基因表达的影响。方法建立培养上清相通但二者互相不接触的成骨细胞一单个核细胞共育模型。实验分对照组和CPN10(10μg/... 目的观察重组结核杆菌热休克蛋白10(CPN10)对成骨细胞(OB)-外周血单个核细胞(PBMs)共培养体系中破骨细胞生成及相关基因表达的影响。方法建立培养上清相通但二者互相不接触的成骨细胞一单个核细胞共育模型。实验分对照组和CPN10(10μg/ml)处理组。主要观察指标:①采用TRAP染色及扫描电镜检测破骨细胞生成及小牛骨磨片吸收陷窝,②应用Realtime PCR检测与破骨细胞生成相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。结果两组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成,并在小牛骨磨片上形成吸收陷窝;但对照组所获TRAP阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及面积均显著小于CPN10组。Realtime PCR检测结果显示CPN10组与对照组相比NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG相对浓度分别为7.410±1.738、8.844±1.981、22.4272±2.058、2.445±0.2517(P<0.05),对照组各基因表达均显著低于CPN10组。结论 CPN10在成骨细胞-单个核细胞(OB-PBMs)共培养体系中可促进OC的生成及骨吸收,CPN10通过对成骨细胞的作用,致其分泌的OPG/RANKL比例失调,并上调破骨细胞相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。 展开更多

关键词 重组结核杆菌热休克蛋白10 破骨细胞生成 共培养 核因子KB受体活化因子配体 活化t细胞核因子1蛋白 护骨素 C-Fos

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磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸降解产物促进小鼠单核细胞破骨向分化

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作者 龙桂月 李冬冬 廖红兵 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第8期1193-1198,共6页

背景:前期研究发现磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸复合材料可加速骨改建过程,其降解产物对单核细胞破骨向分化的影响有待进一步研究。目的:观察磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸降解产物对小鼠RAW264.7单核细胞破骨向分化的影响。方法:实验分... 背景:前期研究发现磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸复合材料可加速骨改建过程,其降解产物对单核细胞破骨向分化的影响有待进一步研究。目的:观察磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸降解产物对小鼠RAW264.7单核细胞破骨向分化的影响。方法:实验分为空白对照组、羟基乙酸组、磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸组,按照实验分组,将配制好的溶液和50μg/L核因子κB受体活化因子配体添加到完全培养基中制备成不同条件的培养基,培养小鼠RAW264.7细胞5 d,诱导其分化。应用CCK-8法分析各组培养液对细胞增殖作用的影响;RT-PCR和Western blot检测小鼠RAW264.7细胞破骨向分化相关因子活化T细胞核因子c1、基质金属蛋白酶9、核因子κB受体活化因子、抗酒石酸酸性磷酸酶基因和蛋白表达水平的变化;使用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法鉴定破骨样细胞。结果与结论:①CCK-8结果显示,细胞在前72 h处于快速生长期,96 h后开始下降;②RT-PCR、Western blot结果显示磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸组的活化T细胞核因子c1、核因子κB受体活化因子、抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA的表达水平及活化T细胞核因子c1、核因子κB受体活化因子的蛋白表达水平显著高于羟基乙酸组、对照组(P<0.05);③羟基乙酸组和磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸组基质金属蛋白酶9mRNA和蛋白的表达水平差异无显著性意义,但高于对照组(P<0.01);④抗酒石酸酸性磷酸酶染色可见磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸组破骨样细胞数高于对照组和羟基乙酸组,差异有显著性意义(P<0.05);⑤结果表明磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸组降解产物形成的微环境可促进小鼠RAW264.7细胞破骨向分化。 展开更多

关键词 磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸 单核细胞 破骨分化 基质金属蛋白酶9 活化t细胞核因子c1 核因子ΚB受体活化因子

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制何首乌水提液对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及OPG-RANKL mRNA表达的影响 被引量：3

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作者 范迎赛 李琴 +2 位作者 高宗勤 范开 刘钟杰 《动物医学进展》 北大核心 2015年第8期67-70,共4页

为研究制何首乌水提液对小鼠成骨细胞MC3T3-E1的影响,将不同浓度的制何首乌水提液作用于MC3T3-E1细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、碱性磷酸酶(ALP)活力检测试剂盒和实时荧光定量PCR法对细胞增殖、ALP蛋白分泌及骨保护素(OPG)和核因子κB受体活... 为研究制何首乌水提液对小鼠成骨细胞MC3T3-E1的影响,将不同浓度的制何首乌水提液作用于MC3T3-E1细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、碱性磷酸酶(ALP)活力检测试剂盒和实时荧光定量PCR法对细胞增殖、ALP蛋白分泌及骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达水平进行检测。结果显示,药物作用2d和3d后,各浓度制何首乌水提液均可促进MC3T3-E1细胞增殖;药物作用6d后,各浓度制何首乌水提液均可促进MC3T3-E1细胞分泌ALP;药物作用1d后,较高浓度制何首乌水提液可上调MC3T3-E1细胞OPG/RANKL mRNA表达比。表明制何首乌水提液具有促进成骨细胞增殖、分化和上调成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达比的作用。 展开更多

关键词 制何首乌 MC3t3-E1细胞 增殖分化 骨保护素 核因子ΚB受体活化因子配体

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姜黄素对类风湿关节炎破骨细胞分化中NF-κB p65和NFATc1表达的影响 被引量：13

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作者 商玮 徐子涵 +3 位作者 郭郡浩 董晓蕾 赵智明 蔡辉 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期467-472,共6页

目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)破骨细胞(osteoclast,OC)分化中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65、活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells cytoplasmic 1,NFATc1... 目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)破骨细胞(osteoclast,OC)分化中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65、活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells cytoplasmic 1,NFATc1)表达的影响。方法密度梯度离心法分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),经核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)诱导培养为OC,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色及骨吸收功能检测鉴定OC,分别用不同浓度(0、2.5、5及10μmol/L)的Cur进行干预。采用CCK-8法进行Cur细胞毒性检测;计数TRAP染色阳性细胞数;Western-blotting检测NF-κB p65、NFATc1蛋白的表达;免疫荧光染色检测NF-κB p65核易位。结果 CCK-8结果示,Cur2.5、5和10μmol/L的浓度对PBMC未产生细胞毒性;TRAP染色结果示,Cur抑制RANKL诱导的RA-OC分化;Westernblotting结果示,经不同浓度Cur干预后,NF-κB p65在细胞浆中的表达明显升高,在细胞核中的表达明显降低,NFATc1的蛋白表达明显降低;免疫荧光染色结果示Cur抑制NF-κB p65核易位。结论 Cur能明显抑制NF-κB的入核表达,降低NFATc1的表达,从而抑制RA-OC的分化。 展开更多

关键词 姜黄素 类风湿关节炎 破骨细胞 外周血单个核细胞 核因子-ΚB P65 活化t细胞核因子c1

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黄芩素通过Nrf2/NF-κB/NFATc1信号通路对牙周病大鼠破骨细胞形成和牙槽骨吸收的影响 被引量：5

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作者 毕磊 刘辉 武燃 《广西医学》 CAS 2021年第5期600-606,共7页

目的探讨黄芩素通过核因子E2相关因子(Nrf2)/核因子κB(NF-κB)/活化T细胞核因子c1(NFATc1)信号通路对牙周病大鼠破骨细胞形成和牙槽骨吸收的影响。方法将40只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组,各10... 目的探讨黄芩素通过核因子E2相关因子(Nrf2)/核因子κB(NF-κB)/活化T细胞核因子c1(NFATc1)信号通路对牙周病大鼠破骨细胞形成和牙槽骨吸收的影响。方法将40只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组,各10只。除对照组外,其他组制备牙周病大鼠模型。造模1周后,于黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组大鼠创伤处分别注射2.5 mg/(kg·d)、5.0 mg/(kg·d)的黄芩素,于模型组和对照组大鼠相同部位注射等量生理盐水。连续给药7 d后,检测大鼠牙槽骨吸收情况,观察大鼠牙周组织病理变化,计数大鼠牙周组织的破骨细胞数量,并检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧活性、谷胱甘肽和丙二醛水平,以及牙周组织Nrf2、NF-κB、NFATc1蛋白表达水平。结果与对照组相比,其他组大鼠牙周组织上皮增生,胶原纤维排列紊乱,有大量炎症细胞浸润,牙槽骨吸收度、牙周组织破骨细胞数、牙周组织NF-κB和NFATc1蛋白表达水平、血清IL-1β、TNF-α水平以及活性氧活性升高,血清谷胱甘肽水平及SOD活性、牙周组织Nrf2蛋白表达水平降低,模型组和黄芩素低剂量组大鼠血清IL-6、丙二醛水平升高(均P<0.05)。模型组、黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组牙槽骨吸收度、牙周组织破骨细胞数、牙周组织NF-κB和NFATc1蛋白表达水平、血清IL-1β、IL-6、TNF-α、丙二醛水平及活性氧活性依次降低,血清SOD活性、牙周组织Nrf2蛋白表达水平依次升高,且黄芩素低剂量组与黄芩素高剂量组的血清谷胱甘肽水平均高于模型组(均P<0.05)。结论黄芩素可能通过调节Nrf2/NF-κB/NFATc1信号通路抑制机体炎症和氧化应激反应,从而减少破骨细胞形成,进而减少牙槽骨吸收。 展开更多

关键词 牙周病 黄芩素 核因子E2相关因子2/核因子κB/活化t细胞核因子c1通路 破骨细胞 牙槽骨 炎症反应 氧化应激 大鼠

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PPAR-α激活对ET-1诱导的心肌肥大和转录因子NFATc4的影响 被引量：6

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作者 李瑞芳 段冷昕 +4 位作者 乐康 王平 高洁 杨国庆 刘培庆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1046-1050,共5页

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)激活对内皮素-1(ET-1)诱导的心肌肥大和活化T细胞核因子c4(NFATc4)的影响,探讨在心肌肥大发病过程中PPAR-α和NFATc4的相互作用。方法:培养新生SD大鼠心肌细胞,采用[3H]亮氨酸法和RT-PC... 目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)激活对内皮素-1(ET-1)诱导的心肌肥大和活化T细胞核因子c4(NFATc4)的影响,探讨在心肌肥大发病过程中PPAR-α和NFATc4的相互作用。方法:培养新生SD大鼠心肌细胞,采用[3H]亮氨酸法和RT-PCR法观察PPAR-α激动剂非诺贝特对ET-1诱导的心肌细胞肥大的影响;应用免疫荧光和免疫共沉淀技术分别检测非诺贝特对ET-1诱导的NFATc4核转位以及PPAR-α和NFATc4相互作用的影响;用Western blotting法检测NFATc4的胞浆和胞核表达。结果:(1)PPAR-α激动剂非诺贝特显著抑制ET-1诱导的肥厚反应。(2)非诺贝特阻止ET-1诱导NFATc4由胞浆到胞核的转位。(3)在心肌细胞中,PPAR-α和NFATc4之间存在相互作用,非诺贝特加强了这种相互作用。结论:PPAR-α激活后可以通过调控转录因子NFATc4来抑制ET-1诱导的心肌肥大反应。 展开更多

关键词 内皮缩血管肽1 心肌肥大 过氧化物酶体增殖物激活受体Α 活化t细胞的核因子

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青钱柳三萜对3T3-L1细胞成脂分化的影响及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的调节作用 被引量：1

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作者 潘朝旺 贺君宇 +3 位作者 潘尚铠 石孟琼 徐小军 李洁 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期72-78,共7页

目的:观察青钱柳三萜对3T3-L1细胞成脂分化的影响及Toll样受体/髓样分化因子88/核因子κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路的调节作用。方法:采用MTT法测定青钱柳三萜对3T3-L1细胞增殖活性的影响;油红O染色分析3T3-L1细胞脂肪积累;生化法检... 目的:观察青钱柳三萜对3T3-L1细胞成脂分化的影响及Toll样受体/髓样分化因子88/核因子κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路的调节作用。方法:采用MTT法测定青钱柳三萜对3T3-L1细胞增殖活性的影响;油红O染色分析3T3-L1细胞脂肪积累;生化法检测3T3-L1细胞中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的含量;ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-4和IL-10含量;Real-time PCR法测定细胞中Tlr4、Myd88、Nfkbp65、Tnfa、Il1b、Il6、Il4和Il10的mRNA表达;Western blot法测定细胞中TLR4、MyD88、核因子κB抑制因子α(IκBα)、p-IκBα、核因子κB抑制物激酶β(IKKβ)、p-IKKβ及胞质和胞核中NF-κBp65蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组脂质积累,细胞中TC、TG含量,细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显升高,IL-4、IL-10含量明显降低;细胞中Tlr4、Myd88、Nfkbp65、Tnfa、Il1b、Il6 mRNA和TLR4、MyD88、p-IκBα、p-IKKβ、胞核中NF-κBp65蛋白表达明显上调,p-IκBα/IκBα、p-IKKβ/IKKβ比率明显升高;细胞中Il4、Il10 mRNA和胞质中NF-κBp65蛋白表达明显下调(P<0.01);与模型对照组比较,青钱柳三萜可显著抑制3T3-L1细胞中脂质积累,降低细胞中TC、TG含量及上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量,升高上清液中IL-4和IL-10含量,下调细胞中Tlr4、Myd88、Nfkbp65、Tnfa、Il1b、Il6 mRNA表达,下调TLR4、MyD88及胞核中NF-κBp65蛋白表达和p-IκBα/IκBα、p-IKKβ/IKKβ比率,上调细胞中Il4、Il10 mRNA表达和胞质中NF-κBp65蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:青钱柳三萜对3T3-L1细胞成脂分化具有良好的抑制作用,其作用机制与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活、减轻脂肪细胞炎症反应、抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、TC、TG生成和脂质积累,促进IL-4、IL-10生成有关。以上结果显示了青钱柳三萜在肥胖防治上良好的应用前景。 展开更多

关键词 青钱柳三萜 3t3-L1细胞 脂质积累 toll样受体/髓样分化因子88/核因子κB信号通路

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破骨细胞分化发育中的信号转导及转录因子研究进展 被引量：3

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作者 赵晴潇 何爱民 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第19期111-113,共3页

关键词 破骨细胞 巨噬细胞集落刺激因子 细胞核因子κB受体活化因子配基 转录因子 核转录因子ΚB 激活蛋白1 活化t细胞核因子c1 小眼相关转录因子

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辅助性T细胞功能分化的分子机制 被引量：8

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作者 张宁 徐永健 张珍祥 《国外医学（呼吸系统分册）》 2003年第2期57-61,共5页

TH1和TH2 的失衡是哮喘的重要特征。探讨同一前体细胞向不同亚型分化的分子机制有助于阐明哮喘炎症反应形成的本质。胞外信号分子、胞内信号传递、核转录因子三个环节调控着TH 细胞的分化 ,其中转录因子T bet、GATA3、C Maf,胞外信号分... TH1和TH2 的失衡是哮喘的重要特征。探讨同一前体细胞向不同亚型分化的分子机制有助于阐明哮喘炎症反应形成的本质。胞外信号分子、胞内信号传递、核转录因子三个环节调控着TH 细胞的分化 ,其中转录因子T bet、GATA3、C Maf,胞外信号分子IL 12、IL 4和胞内信号分子STAT4。 展开更多

关键词 哮喘 辅助性t细胞 tH1 tH2 功能分化 胞外信号分子 胞内信号传递 核转录因子

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17β-雌二醇对成骨细胞生成的作用 被引量：1

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作者 袁成良 金小岚 +2 位作者 侯建红 钱江龙 黄迎春 《四川医学》 CAS 2003年第11期1105-1108,共4页

目的　研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其核结合因子α1(Cbfα1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2 (PPAR γ2 )mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　 1,2 5 (OH ) 2 D3 和地塞米松 (DEX... 目的　研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其核结合因子α1(Cbfα1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2 (PPAR γ2 )mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　 1,2 5 (OH ) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 ,应用半定量RT PCR及Northernblot技术 ,观察不同浓度E2对骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1及PPAR γ2mRNA表达的影响 ,以α 磷酸奈酚为底物 ,测定细胞碱性磷酸酶 (ALP)的活性 ,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果　E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1mRNA的表达 ,E2浓度为 (0 10 -6)mol/L时 ,Cbfα1mRNA的表达量从 (2 5 0± 3 3 ) %降至 (14 5± 1 3 ) % (P <0 0 1)和 (6 5± 1 9) % (P <0 0 1) ;E2能明显促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR γ2mRNA的表达 ,在上述E2浓度时 ,PPAR γ2mRNA的表达从 (1 75± 0 5 ) %增至 (9 5± 2 1) % (P <0 0 1)和 (19 3± 3 0 ) % (P <0 0 1) ;Northernblot结果显示随着E2浓度的增加 ,CbfαlmRNA的表达量从 4 42± 0 3 9降至 1 88± 0 16(P <0 0 1)和 1 2 0± 0 11(P <0 0 1) ;PPAR γ2mRNA的表达量从 1 47± 0 12增至 2 81±0 2 2 (P <0 0 1)和 4 0 2± 0 3 6(P 展开更多

关键词 雌二醇 骨髓基质细胞 过氧化物酶增殖活化受体γ2 分化 核结合因子α1

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创伤后IL-2表达受抑与核转录NFAT和AP-1变化的关系 被引量：1

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作者 罗艳 梁华平 +2 位作者 胡承香 徐祥 王正国 《感染．炎症．修复》 2001年第4期197-200,共4页

目的:探讨创伤后脾细胞活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)和激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的DNA结合活性、部分家族成员c-Fos,c-Jun,JunB蛋白的表达和白细胞介素2(IL-2)表达的动态变化及它们间的关系... 目的:探讨创伤后脾细胞活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)和激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的DNA结合活性、部分家族成员c-Fos,c-Jun,JunB蛋白的表达和白细胞介素2(IL-2)表达的动态变化及它们间的关系。方法:采用小鼠双后肢闭合性砸伤+骨折模型,于创伤后6、12h,1、4、7、10、14d处死动物,分离脾细胞,经ConA刺激细胞后收集培养上清以测定IL-2活性;提取脾细胞RNA以测定IL-2 mRNA;提取脾细胞核蛋白,用电泳迁移率改变试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测NFAT、AP-1的DNA结合活性,用免疫蛋白印迹法(Western blot assay)检测c-Fos,c-Jun,JunB蛋白的表达。结果:和正常对照组相比,创伤后IL-2活性均有不同程度的降低,其受抑的程度在创伤后4d更为明显。创伤后脾细胞NFAT和AP-1的DNA结合活性亦逐渐下降,至伤后4d时下降最明显,为正常对照组的41%和49%。这与创伤后脾细胞IL-2的活性和IL-2 mRNA的降低相一致。c-Fos蛋白水平在伤后1、4d明显降低;c-Fos蛋白表达无明显变化;JunB蛋白水平仅在伤后1d明显表达。结论:上述结果提示,创伤后脾细胞IL-2表达受抑至少部分是由于核转录因子NFAT和AP-1的DNA结合活性降低所导致;而NFAT和AP-1的DNA结合活性降低可能部分由于创伤影响c-Fos蛋白的生成所致。 展开更多

关键词 创伤 IL-2 活化t细胞核因子 激活蛋白-1 核转录因子

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安石榴苷对钛颗粒诱导破骨细胞活化的作用

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作者 褚耿磊 刘思含 +2 位作者 李东亚 李洪伟 郭开今 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第12期1759-1765,共7页

背景:有关安石榴苷对破骨细胞形成分化方面的研究很少,对磨损颗粒引起骨吸收类疾病影响的研究更少。目的:建立钛颗粒诱导的小鼠单核/巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化模型,观察不同浓度安石榴苷对破骨细胞增殖分化的影响。方法:将小鼠... 背景:有关安石榴苷对破骨细胞形成分化方面的研究很少,对磨损颗粒引起骨吸收类疾病影响的研究更少。目的:建立钛颗粒诱导的小鼠单核/巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化模型,观察不同浓度安石榴苷对破骨细胞增殖分化的影响。方法:将小鼠单核/巨噬细胞株RAW264.7分5组培养,分别加入培养基(空白组)、含0.1 g/L钛颗粒悬液的培养基、含0.1 g/L钛颗粒悬液+25μmol/L安石榴苷的培养基、含0.1 g/L钛颗粒悬液+50μmol/L安石榴苷的培养基、含0.1 g/L钛颗粒悬液+100μmol/L安石榴苷的培养基。CCK-8法检测培养1,3,5 d的细胞增殖活性;培养5 d后,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测成熟破骨细胞数量,Western blot法检测IκBα及核转录因子κB p65磷酸化水平,RT-PCR测量活化T细胞核因子c1、抗酒石酸酸性磷酸酶和基质金属蛋白酶9 mR NA的表达。结果与结论:与空白组比较,钛颗粒和不同浓度安石榴苷对RAW264.7细胞的增殖能力均无影响(P>0.05)。与空白组比较,钛颗粒组成熟破骨细胞数量、IκBα及核转录因子κB p65磷酸化水平、活化T细胞核因子c1mR NA、抗酒石酸酸性磷酸酶mR NA和基质金属蛋白酶9 mR NA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),安石榴苷呈浓度依赖性降低上述指标表达。结果表明安石榴苷可抑制破骨细胞的形成与活化。 展开更多

关键词 骨质吸收 骨生物材料 破骨细胞 钛 石榴科 金属纳米粒子 组织工程 生物材料 骨组织工程 安石榴苷 钛颗粒 核转录因子κB 无菌性松动 活化t细胞核因子c1 骨溶解

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