杀菌/渗透性增强蛋白功能及应用前景 被引量：4

1

作者 颜金鹏 王丽 +2 位作者 李善妮 邓丽明 韩旭 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期622-631,共10页

杀菌/通透性增强蛋白(BPI)是存在于中性粒细胞中的阳离子蛋白,约为55 kD.BPI能与革兰氏阴性菌外膜上的脂多糖结合,增加外膜对抗菌药的通透性,具有特异性杀灭革兰氏阴性菌及结合/中和内毒素的生物学功能,在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有... 杀菌/通透性增强蛋白(BPI)是存在于中性粒细胞中的阳离子蛋白,约为55 kD.BPI能与革兰氏阴性菌外膜上的脂多糖结合,增加外膜对抗菌药的通透性,具有特异性杀灭革兰氏阴性菌及结合/中和内毒素的生物学功能,在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有良好的发展前景.近年来,国内外对BPI研究颇多,并逐渐发现BPI还具有调理作用、抗真菌、抗原虫和抑制血管生成等许多功能,被学者称为未来的"超级抗生素".本文主要就BPI的结构、分布、生理功能、作用机理及临床研究方面的研究进展作一综述. 展开更多

关键词 杀菌/渗透性增强蛋白(BPI) 中性粒细胞 革兰氏阴性菌 内毒素

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杀菌/渗透增强蛋白功能区抗菌肽与内毒素亲和性的SPR技术检测 被引量：1

2

作者 李晶琴 孔庆利 樊峥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1143-1145,共3页

目的:研究杀菌/渗透增强蛋白(BPI)不同功能区抗菌肽与内毒素(LPS)结合的能力。方法:设计、合成来自杀菌/渗透增强蛋白N端不同功能区的3段抗菌肽,分别为BPI22-36、BPI85-99和BPI147-161,将其固定于CM5蛋白质芯片上,使用表面等离子共振(S... 目的:研究杀菌/渗透增强蛋白(BPI)不同功能区抗菌肽与内毒素(LPS)结合的能力。方法:设计、合成来自杀菌/渗透增强蛋白N端不同功能区的3段抗菌肽,分别为BPI22-36、BPI85-99和BPI147-161,将其固定于CM5蛋白质芯片上,使用表面等离子共振(SPR)仪检测3种抗菌肽与LPS和类脂A(Lipid A)相互作用的情况。结果:3种抗菌肽中,BPI147-161与LPS和Lipid A结合的能力最强,BPI85-99次之,但BPI22-36与其不结合;BPI147-161与Lipid A的亲和常数KA为1.12×106L/mol,相比,多黏菌素B(PMB)的亲和常数KA为5.58×106L/mol。结论:来自杀菌/渗透增强蛋白的抗菌肽BPI147-161能有效地中和内毒素,这可能为败血症休克的治疗提供一种新的策略。 展开更多

关键词 杀菌/渗透增强蛋白 内毒素 (类)脂质A 相互作用 表面等离子共振技术

原文传递

人杀菌/渗透增强蛋白N端功能片段基因突变文库的构建和鉴定

3

作者 李晶琴 孔庆利 安云庆 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第6期903-910,共8页

目的为提高杀菌/渗透性增强蛋白N端功能片段BPI_(23)对内毒素(lipopolysaccharides,LPS)的亲和性,通过易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和DNA改组技术,对其编码序列BPI_(600)进行突变,在大肠杆菌XL10-Gold中构建BPI_(... 目的为提高杀菌/渗透性增强蛋白N端功能片段BPI_(23)对内毒素(lipopolysaccharides,LPS)的亲和性,通过易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和DNA改组技术,对其编码序列BPI_(600)进行突变,在大肠杆菌XL10-Gold中构建BPI_(600)基因突变体库。方法通过控制Mg2+和Mn2+的浓度进行易错PCR,获得BPI_(600)随机突变基因片段,经测序和基因比对,确定BPI_(600)的随机突变率。再对易错PCR产物进行DNA改组,将改组产物克隆至pYD1载体中,转化大肠杆菌XL10-Gold,从Amp抗性(LuriaBertani,LB)固体培养平板上任选10个单菌落,增菌后提取质粒,得到pYD1-shuffled BPI_(600)重组质粒,将质粒进行HindⅢ/XhoⅠ酶切鉴定,取5个阳性质粒进行DNA测序,通过基因和氨基酸比对鉴定突变情况。结果测序和基因比对显示,BPI_(600)经易错PCR所获突变文库的随机突变率达2.3%;改组后重组质粒的酶切结果表明,在随机选择的10个菌落所提质粒中,有6个含BPI_(600),表明构建了重组质粒pYD1-shuffled BPI_(600);在5个阳性质粒中,有4个重组质粒的BPI_(23)编码序列分别发生了6、9、11和14个碱基突变;1个不仅有10个碱基突变,还存在1个碱基的缺失。氨基酸比对表明,有2个质粒(分别有6和14个碱基突变)具有正确的读码框,能够翻译完整的蛋白质,各有4或14个氨基酸突变。3个质粒因含终止密码子而不能表达完整目的蛋白。结论成功构建pYD1-shuffled BPI_(600)重组质粒,获得库容量为2×105的突变文库,为高内毒素亲和力突变体的筛选奠定了基础。 展开更多

关键词 人杀菌 渗透增强蛋白 定向进化 易错PCR DNA改组

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杀菌/渗透增强蛋白基因转染小鼠受到大肠杆菌攻击后结肠粘膜上皮离子转运的变化机制

4

作者 李利生 孔庆利 +3 位作者 徐敬东 张悦 安云庆 朱进霞 《医学信息（医学与计算机应用）》 2014年第34期42-42,43,共2页

目的:杀菌通透性增加蛋白嵌合基因(BPI700-Fcγ1700)转染的小鼠,给予感染最小致死剂量(MLD)的大肠杆菌,观察和探究结肠上皮电阻和离子转运的变化和机制。方法利用基因转染、短路电流记录、ELISA测定技术,记录转基因小鼠结肠粘膜的基础... 目的:杀菌通透性增加蛋白嵌合基因(BPI700-Fcγ1700)转染的小鼠,给予感染最小致死剂量(MLD)的大肠杆菌,观察和探究结肠上皮电阻和离子转运的变化和机制。方法利用基因转染、短路电流记录、ELISA测定技术,记录转基因小鼠结肠粘膜的基础电流、电压以及给予促分泌物对上皮离子转运的影响。结果基因转染小鼠与对照组相比,结肠上皮基础电阻和短路电流明显增加,在上皮的顶膜侧加入钠离子通道阻断剂阿米洛利后,则可以明显抑制增加的电阻;应用上皮离子促分泌物forskolin后,可以明显增加结肠上皮的短路电流,这种短路电流可以被氯离子通道阻断剂DPC、Na+-K+-2Cl-共转运体抑制剂bumetanide明显抑制;并且forskolin作用结肠粘膜后上皮cAMP的含量明显高于对照组。结论基因转染小鼠结肠上皮阴离子转运明显增加,从而促进了肠道排毒反应,这可能是转基因小鼠对致死性大肠杆菌抵抗力增加的原因之一。本研究为革兰氏阴性菌感染的研究和治疗提供了理论基础。 展开更多

关键词 杀菌/渗透增强蛋白 结肠 上皮 离子转运 短路电流

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人杀菌渗透增强性蛋白N末端片段在大肠杆菌中的表达 被引量：2

5

作者 董伟 董晓慧 +3 位作者 楚雍烈 杨娥 胡刚 郑建武 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期11-14,共4页

目的构建表达人杀菌渗透增强性蛋白(BPI)N-端193个氨基酸的重组表达质粒,诱导表达BPI193重组蛋白。方法应用RT-PCR的方法从HL-60细胞内扩增出BPI氨基端1-193个氨基酸的基因序列,克隆入T载体。将BPI193基因片段定向克隆入原核表达载体PET... 目的构建表达人杀菌渗透增强性蛋白(BPI)N-端193个氨基酸的重组表达质粒,诱导表达BPI193重组蛋白。方法应用RT-PCR的方法从HL-60细胞内扩增出BPI氨基端1-193个氨基酸的基因序列,克隆入T载体。将BPI193基因片段定向克隆入原核表达载体PET-28a中,构建重组的原核表达质粒PET-BPI193,转化大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导表达蛋白。应用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,计算机薄层扫描分析蛋白占菌体总蛋白百分比;Western-blot技术检测表达蛋白的特异性。结果从HL-60细胞中扩增得到579bp的BPI193基因片段,构建了T-BPI193亚克隆和PET-BPI193重组表达质粒。转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导,经SDS-PAGE检测表明,成功表达了6His-BPI193融合蛋白。计算机薄层扫描分析表达量占菌体总蛋白的12%。Western-blot检测显示表达产物具有特异性。结论成功构建了PET-BPI193重组表达质粒。在大肠杆菌BL21内,诱导获得了BPI193与组氨酸融合表达的重组蛋白。 展开更多

关键词 杀菌/渗透增强性蛋白 基因表达 大肠杆菌

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杀菌/渗透增强蛋白在小鼠组织器官和细胞中的分布 被引量：2

6

作者 郭玲 许晴 +5 位作者 吕喆 刘振龙 范宜强 王炜 孔庆利 安云庆 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2009年第5期671-676,共6页

目的探讨生理状态和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下,杀菌渗透增强蛋白(murine bactericidal/permeability-increasing protein,muBPI)在小鼠组织器官和细胞中的表达情况。方法①实验小鼠分为3组,即LPS未刺激组、LPS刺激组和阴性... 目的探讨生理状态和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下,杀菌渗透增强蛋白(murine bactericidal/permeability-increasing protein,muBPI)在小鼠组织器官和细胞中的表达情况。方法①实验小鼠分为3组,即LPS未刺激组、LPS刺激组和阴性对照组;②制备小鼠心、肝、脾、肺、肾、胸腺、睾丸、小肠组织切片和骨髓细胞、腹腔灌洗细胞、骨髓源树突状细胞涂片;③采用免疫组化方法检测muBPI在上述组织器官和细胞中的表达。结果①LPS未刺激组小鼠睾丸、小肠、肾脏组织切片和骨髓细胞、腹腔灌洗细胞、骨髓源树突状细胞涂片均呈黄色着染;LPS刺激后上述组织切片和细胞涂片呈棕黄或深棕色着染;阴性对照组呈现非特异微弱黄色背景着染;②LPS未刺激组小鼠肺、肝组织切片呈微弱黄色背景着染;LPS刺激后上述组织切片呈棕黄色着染;阴性对照呈微弱黄色背景着染;③其余器官组织切片在LPS刺激或未刺激组均呈现与阴性对照组相同的非特异微弱黄色背景着染。结论①生理状态下,小鼠睾丸、小肠、肾脏、骨髓细胞、腹腔灌洗细胞和骨髓源树突状细胞可组成性表达BPI蛋白,LPS刺激后BPI蛋白表达量显著增高;②生理状态下,小鼠肺、肝组织不表达BPI蛋白,LPS可诱导上述组织表达BPI蛋白;③其余组织器官在生理状态下和LPS刺激后均不表达BPI蛋白。 展开更多

关键词 脂多糖 杀菌/渗透增强蛋白 小鼠BPI抗血清 免疫组化

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毕赤酵母表达杀菌/渗透性增强蛋白N端片段 被引量：2

7

作者 文淑萍 刘霆 +2 位作者 陈玉祥 赵颜忠 杨宜华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1820-1823,1827,共5页

目的探讨在毕赤酵母中进行杀菌/渗透性增强蛋白N端片段的分泌表达。方法从质粒pUCm-BPI上PCR扩增得到编码BPI氨基端196个氨基酸的基因片段(BPI588)。将该基因克隆到酵母表达载体Ppic9K上,使其准确融合于α交配因子分泌信号之后,电击转... 目的探讨在毕赤酵母中进行杀菌/渗透性增强蛋白N端片段的分泌表达。方法从质粒pUCm-BPI上PCR扩增得到编码BPI氨基端196个氨基酸的基因片段(BPI588)。将该基因克隆到酵母表达载体Ppic9K上,使其准确融合于α交配因子分泌信号之后,电击转化毕赤酵母宿主菌GS115/His-。对酵母重组子的基因组DNA作PCR和总RNA作RT-PCR分析。筛选出的转化子用甲醇作诱导物在29℃进行诱导后,分泌到培养基中的表达产物用于革兰氏阴性细菌E.coliJM109的抑菌实验。结果BPI588基因已整合到毕赤酵母染色体基因组中,并有转录产物mRNA的存在,表达产物能够抑制革兰氏阴性细菌的生长。结论利用毕赤酵母进行杀菌/渗透性增强蛋白N端片段的分泌表达是可行的。 展开更多

关键词 杀菌/渗透性增强蛋白 表达 毕赤酵母

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杀菌/渗透增强蛋白的分子结构和主要生物学功能

8

作者 丛敏 《临床和实验医学杂志》 2002年第4期270-273,共4页

杀菌 /渗透增强蛋白 (BPI)分子呈“飞镖”状结构 ,其N端和C端功能区中具有两个非极性磷脂结合口袋。目前认为 ,BPI与细菌脂多糖 (LPS)之间的结合主要与以下因素有关 :①疏水基团的作用 :即LPS疏水性乙酰基链与BPIN端口袋中非极性侧链间... 杀菌 /渗透增强蛋白 (BPI)分子呈“飞镖”状结构 ,其N端和C端功能区中具有两个非极性磷脂结合口袋。目前认为 ,BPI与细菌脂多糖 (LPS)之间的结合主要与以下因素有关 :①疏水基团的作用 :即LPS疏水性乙酰基链与BPIN端口袋中非极性侧链间的相互作用 ;②静电作用 :BPIN端功能区氨基酸携带的正电荷与LPS类脂A携带的负电荷之间的相互作用。BPI主要生物学功能如下 :①对革兰阴性菌 (GNB)的抑制和杀伤作用 ;②对游离LPS的结合 /中和作用 ;③促进补体活化。 展开更多

关键词 杀菌/渗透增强蛋白 革兰阴性菌 细菌脂多糖 分子结构 生物学功能

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重组杀菌/渗透增强蛋白21在体内抗感染免疫作用的研究

9

作者 章璐 《微生物学免疫学进展》 2003年第1期58-62,共5页

本文介绍了rBPI2 1在革兰氏阴性菌败血症、慢性渗出性耳炎、下肢缺血再灌注损伤后并发症三种动物模型和临床创伤性失血及其并发症、肝部分切除术后、脑膜炎菌血症患者体内抗感染免疫作用的研究结果。提示rBPI2 1作为一种新型的抗菌蛋白 。

关键词 重组杀菌/渗透增强蛋白21 rBPI21 革兰氏阴性细菌 GNB 内毒素

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影响杀菌-渗透增强蛋白的研究进展

10

作者 刘菁 《国外医学（微生物学分册）》 2000年第4期17-19,共3页

血清补体、磷脂酶和P_(15)可增强杀菌-渗透增强蛋白(bactericidal/permeability-incresing protein,BPI)对革兰阴性菌的杀伤或抑制作用;BPI与抗生素联合应用可产生强大的协同抗菌作用。BPI及其功能性N端片段具有以下特性;①选择性杀伤... 血清补体、磷脂酶和P_(15)可增强杀菌-渗透增强蛋白(bactericidal/permeability-incresing protein,BPI)对革兰阴性菌的杀伤或抑制作用;BPI与抗生素联合应用可产生强大的协同抗菌作用。BPI及其功能性N端片段具有以下特性;①选择性杀伤革兰阴性菌,而对革兰阳性菌及真核细胞无细胞毒作用;②在体液中,其抗菌活性不受抑制,反而增强;③产生抗菌效应的浓度明显低于其他抗菌蛋白或多肽;④中和细菌脂多糖(内毒素),并可对脂多糖(LPS)结合蛋白(LBP)产生拮抗作用;⑤为多形核白细胞(PMN)的自身成分,临床应用不会引起免疫应答;⑥可采用基因工程技术规模生产。BPI_(23)-IgFcγ重组蛋白具有BPI和IgG Fc双重功能,有可能解决BPI血清半寿期短和体内清除率快等问题,获得较好的临床治疗效果。 展开更多

关键词 杀菌-渗透增强白 抗菌作用 抗菌素 协同抗菌作用

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酵母可能成为鼻渗透增强剂

11

作者 徐欣（摘） 《国外药讯》 2006年第1期31-31,共1页

英国Leeds大学的研究人员发现，用于啤酒和面包发酵的传统酵母，也许在胰岛素的鼻部给药中起重要作用。实验室的研究结果显示，酵母细胞可以成功地增加胰岛素在鼻粘膜的渗透。由于酵母显示可逆的作用、无毒并且容易获得，因此酵母作为... 英国Leeds大学的研究人员发现，用于啤酒和面包发酵的传统酵母，也许在胰岛素的鼻部给药中起重要作用。实验室的研究结果显示，酵母细胞可以成功地增加胰岛素在鼻粘膜的渗透。由于酵母显示可逆的作用、无毒并且容易获得，因此酵母作为鼻粘膜渗透提高剂有益处。酵母的结构与已知的渗透增强剂脱乙酰壳多糖相似，但其作用机理尚不清楚，正在做进一步的研究。 展开更多

关键词 渗透增强剂 酵母细胞 鼻部给药 脱乙酰壳多糖 研究人员 胰岛素 鼻粘膜 实验室 显示

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高渗透压环境下OREBP对AQP5的调控

12

作者 许颂霄 王虹 尹一兵 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第4期346-350,共5页

目的:探讨高渗透压环境下OREBP对AQP5的调控作用.方法:利用qRT-PCR和Western Blot,研究高渗透压刺激下,MLE-15细胞OREBP和AQP5的mRNA和蛋白水平的变化规律;运用RNAi技术抑制OREBP表达后,观察AQP5mRNA及蛋白水平随高渗刺激的变化;探讨AQP... 目的:探讨高渗透压环境下OREBP对AQP5的调控作用.方法:利用qRT-PCR和Western Blot,研究高渗透压刺激下,MLE-15细胞OREBP和AQP5的mRNA和蛋白水平的变化规律;运用RNAi技术抑制OREBP表达后,观察AQP5mRNA及蛋白水平随高渗刺激的变化;探讨AQP5基因上游不同区域对Luciferase表达的启动及高渗环境下表达增强作用,用RNAi技术研究这种增强表达作用对OREBP的依赖性.结果:高渗透压刺激下,OREBP和AQP5的mRNA水平在12,18h达到峰值,两者蛋白水平也分别在12,18h达到峰值,RNAi抑制OREBP的表达后,AQP5对高渗的反应性消失.Luciferase实验表明在-593至-144区域内存在启动子,-2563至-2055区域存在ORE.结论:高渗透压环境下,OREBP通过与AQP5基因上游的ORE结合,调控AQP5的表达. 展开更多

关键词 渗透压反应增强子结合蛋白 水孔蛋白5 渗透压反应增强子

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鉴别诊断临床急性肺炎病原体感染的血清标志物研究 被引量：12

13

作者 刘萌 窦云鹏 +5 位作者 谷丽 吕喆 王一民 刘颖梅 安云庆 曹彬 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第5期636-640,共5页

目的检测急性肺炎患者血清相关生物标志物含量,为建立一种快速鉴别诊断临床急性支原体肺炎、病毒性肺炎、细菌性肺炎的免疫胶体金检测法提供实验依据。方法以临床病原学诊断明确的急性支原体肺炎,病毒性肺炎,细菌性肺炎患者和正常人血... 目的检测急性肺炎患者血清相关生物标志物含量,为建立一种快速鉴别诊断临床急性支原体肺炎、病毒性肺炎、细菌性肺炎的免疫胶体金检测法提供实验依据。方法以临床病原学诊断明确的急性支原体肺炎,病毒性肺炎,细菌性肺炎患者和正常人血清为检测样品,采用血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)/杀菌渗透增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒检测上述血清中相关生物标志物含量。结果 (1)正常人群血清78份,急性支原体肺炎患者血清46份,病毒性肺炎和细菌性肺炎患者血清42份,其中病毒感者患者血清35份,细菌感染患者血清7份;(2)正常人群血清PDGF最大值<6 000 pg/m L;血清BPI最大值<80 ng/m L;(3)以血清PDGF值6 000 pg/m L作为鉴别诊断急性支原体感染的基线值,支原体感染患者阳性检出率为93.47%(43/46);病毒和细菌感染患者出现支原体感染的假阳性率为7.14%(3/42);(4)以血清BPI值80 ng/m L作为鉴别诊断急性细菌感染的基线值,细菌感染患者阳性检出率为85.71%(6/7);病毒感染患者出现细菌感染的假阳性率为3.22%(1/31)。结论以血清PDGF6 000 pg/m L和BPI 80 ng/m L作为鉴别诊断不同病原体感染的基线值,对临床急性支原体肺炎、病毒性肺炎、细菌性肺炎鉴别诊断具有一定意义。 展开更多

关键词 肺炎 鉴别诊断 血小板衍生生长因子 杀菌渗透增强蛋白

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小鼠BPI N端功能片段(muBPI_(25)蛋白)体外杀菌和中和内毒素作用研究 被引量：2

14

作者 吕喆 王炜 +7 位作者 范宜强 刘振龙 孔庆利 温铭杰 龙军 李晨 许晴 安云庆 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期294-297,303,共5页

目的:建立胞内杀菌和体外中和内毒素实验模型,检测muBPI25目的蛋白对胞内寄生菌的抑杀作用和对内毒素的中和作用。方法:将pcDNA3.1(+)-muBPI36-259质粒导入RAW264.7细胞,用胞内寄生G+/G-菌感染上述细胞建立muBPI25目的蛋白胞内杀菌实验... 目的:建立胞内杀菌和体外中和内毒素实验模型,检测muBPI25目的蛋白对胞内寄生菌的抑杀作用和对内毒素的中和作用。方法:将pcDNA3.1(+)-muBPI36-259质粒导入RAW264.7细胞,用胞内寄生G+/G-菌感染上述细胞建立muBPI25目的蛋白胞内杀菌实验模型;将pSecTag2B-muBPI36-259与双荧光素酶报告基因质粒共转染RAW264.7细胞,建立体外检测muBPI25蛋白中和内毒素实验模型。结果:胞内杀菌实验模型证实muBPI25目的蛋白对G-伤寒杆菌具有抑杀作用;中和内毒素实验模型证实muBPI25目的蛋白对内毒素具有中和作用。结论:首次证实小鼠BPI N端功能片段,即muBPI25目的蛋白对G-菌具有抑杀作用,对其裂解产物内毒素具有中和作用。 展开更多

关键词 杀菌/渗透性增强蛋白 RAW264.7细胞 胞内寄生菌 内毒素

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无功能垂体腺瘤中杀菌/渗透增强折叠家族蛋白B1基因的表达及其对肿瘤侵袭性的作用研究 被引量：2

15

作者 陈贤斌 吴泽睿 +2 位作者 卢江龙 蔡霖 苏志鹏 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2021年第6期598-604,共7页

目的探讨无功能垂体腺瘤中杀菌/渗透增强折叠家族蛋白Bl(BPIFBl)基因的表达情况及其对垂体腺瘤增殖和侵袭性的影响;方法利用高通量基因表达(GEO)公共数据库垂体腺瘤芯片的数据,通过生物信息学分析方法筛选出侵袭性相关基因;然后选取5例... 目的探讨无功能垂体腺瘤中杀菌/渗透增强折叠家族蛋白Bl(BPIFBl)基因的表达情况及其对垂体腺瘤增殖和侵袭性的影响;方法利用高通量基因表达(GEO)公共数据库垂体腺瘤芯片的数据,通过生物信息学分析方法筛选出侵袭性相关基因;然后选取5例侵袭性无功能垂体腺瘤和5例非侵袭性无功能垂体腺瘤的组织标本,通过实时荧光定量PCK和免疫组织化学染色检测BPIFBI基因和蛋白的表达情况。在垂体腺瘤GH3细胞株中通过siRNA敲减BPIFB1的表达,采用细胞活性和细胞划痕实验等检测肿瘤细胞的增殖和迁移能力;采用实时荧光定量PCR测定基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9 mRNA的表达水平;采用蛋白质免疫印迹技术检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达水平t结果生物信息学分析结果提示,侵袭性垂体腺瘤中BPIFB1的表达水平低于非侵袭性垂体腺瘤(log2FC=-5.29,P<0.01);免疫组织化学染色结果显示,侵袭性无功能垂体腺瘤中BPIFB1的表达水平(0.53±0.10)明显低于非侵袭性无功能垂体腺瘤(1.02±0.44)(P<0.05);实时荧光定量PCR结果显示,BIMFBl mRNA的表达水平与肿瘤KnSp分级呈负相关(r_(s)=-0.88,P<0.01)。细胞活性实验结果显示,BPIFB1敲减GH3细胞的细胞活性(2.98±0.14)高于正常GH3细胞(2.14±0.05)(P<0.01);细胞划痕实验结果显示,BPIFB1敲减GH3细胞的迁移率[(43.82±3.74)%]高于正常0113细胞[(17.53±2.05)%](P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,BPIFBI敲减GH3细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达水平均高于正常GH3细胞(均P<0.05);蛋白质免疫印迹实验显示,BPIFB1敲减GH3细胞中EMT相关蛋白的表达水平与正常GH3细胞比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论侵袭性无功能垂体腺瘤中BPIFBI的表达水平降低,BPIFB1可能通过调控MMP的表达及EMT来抑制肿瘤的增殖和侵袭能力。 展开更多

关键词 垂体肿瘤 基因表达 肿瘤侵润 基质金属蛋白酶 杀菌/渗透增强折叠家族蛋白B1

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BPI_(m23)重组抗菌蛋白在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达 被引量：3

16

作者 靖学芳 安云庆 杨贵贞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期374-378,共5页

目的 :采用巴斯德毕赤酵母表达系统表达分泌型功能性rBPIm2 3抗菌蛋白。方法 :利用构建的pUC1 8 synBPI4 1 4质粒和PBV2 2 0 BPIm4 2 0 质粒 ,按分子克隆方法构建pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;用线性化pPICZα synBPIm6 0 0 质... 目的 :采用巴斯德毕赤酵母表达系统表达分泌型功能性rBPIm2 3抗菌蛋白。方法 :利用构建的pUC1 8 synBPI4 1 4质粒和PBV2 2 0 BPIm4 2 0 质粒 ,按分子克隆方法构建pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;用线性化pPICZα synBPIm6 0 0 质粒电转化PichiapastorisGS1 1 5 ,筛选抗性转化子 ,进行PCR和Mut表型鉴定 ;用甲醇诱导目的蛋白rBPIm2 3的表达 ;用离子交换层析纯化rBPIm2 3,并进行SDS PAGE分析、Westernblot鉴定和用BCA法定量。结果 :①成功构建了pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;②获得稳定整合目的基因的GS1 1 5菌株 ;③表达产物相对分子量约为 2 3kD ,可与抗BPI抗体特异性结合 ;④培养上清液中目的蛋白表达量约为 2 9mg L。结论 :BPIm2 3重组抗菌蛋白在毕赤酵母GS1 1 5中得到分泌表达。 展开更多

关键词 杀菌/渗透增强蛋白 BPIm23重组抗菌蛋白 巴斯德毕赤酵母 分泌表达

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小鼠BPI N端功能基因片段的克隆及其表达产物的胞内杀菌作用 被引量：2

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作者 李丽 冯颖 +6 位作者 吕喆 庆利 刘振龙 赵冬 高燕 王炜 安云庆 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期500-503,508,共5页

目的:克隆小鼠BPI36-259基因片段,转染细胞获得具有杀菌作用的目的抗菌蛋白。方法:采用生物信息学方法,构建PUC57-muBPI1-281质粒;PCR扩增获得muBPI36-259基因片段,制备pcDNA3.1(+)-muBPI36-259重组质粒;采用电穿孔法将上述重组质粒转染... 目的:克隆小鼠BPI36-259基因片段,转染细胞获得具有杀菌作用的目的抗菌蛋白。方法:采用生物信息学方法,构建PUC57-muBPI1-281质粒;PCR扩增获得muBPI36-259基因片段,制备pcDNA3.1(+)-muBPI36-259重组质粒;采用电穿孔法将上述重组质粒转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白在胞内的表达;建立胞内杀菌实验模型,检测muBPI36-259目的蛋白对胞内寄生菌(伤寒杆菌)的杀伤作用。结果:muBPI36-259目的蛋白在RAW264.7细胞内成功表达,对胞内寄生菌-G-伤寒杆菌具有杀伤作用。结论:成功克隆了小鼠BPI36-259基因片段,转染RAW264.7细胞获得具有生物学活性目的抗菌蛋白。 展开更多

关键词 杀菌/渗透性增强蛋白 RAW264.7细胞 伤寒杆菌

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杀菌/渗透增强蛋白mRNA在大鼠体内的分布 被引量：2

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作者 王昕昕 梁宁生 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期629-631,共3页

目的研究杀菌/渗透增强蛋白(BPI)mRNA在正常大鼠体内的存在情况,为了解和临床应用BPI提供重要的信息。方法从大鼠不同器官和组织的匀浆中提取总RNA,合成第1链cDNA,利用PCR扩增大鼠BPI的DNA片段。结果遍及全身的21种器官和组织中,肾、卵... 目的研究杀菌/渗透增强蛋白(BPI)mRNA在正常大鼠体内的存在情况,为了解和临床应用BPI提供重要的信息。方法从大鼠不同器官和组织的匀浆中提取总RNA,合成第1链cDNA,利用PCR扩增大鼠BPI的DNA片段。结果遍及全身的21种器官和组织中,肾、卵巢、睾丸、肝脏、小肠、大肠、胸腺、脾脏和白细胞等9种器官中均能检测到BPI的mRNA,其中,在睾丸中最为丰富,在肝脏、大肠中也较为丰富。结论BPI的mRNA在正常大鼠体内多个器官和组织中都存在,提示它在机体内控制细菌感染的作用较为广泛。 展开更多

关键词 大鼠 杀菌/渗透增强蛋白 信使核糖核酸 分布

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pBV-BPI600重组表达载体的构建及其在E.coli中的表达 被引量：1

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作者 安云庆 刘箐 +1 位作者 柯岩 沈海中 《首都医科大学学报》 CAS 2001年第1期1-5,共5页

①采用RT PCR技术 ,以HL 60细胞mRNA为模板扩增获得编码BPI氨基端 1 93个氨基酸 (rBPI2 1)的基因片段 (BPI60 0 ) ;EcoRI/BamHI酶切扩增产物获得BPI 2 0 0bp和BPI 4 0 0bp 2个基因片段。②成功构建PUC1 8 BPI2 0 0和PUC1 8 BPI4 0 0重... ①采用RT PCR技术 ,以HL 60细胞mRNA为模板扩增获得编码BPI氨基端 1 93个氨基酸 (rBPI2 1)的基因片段 (BPI60 0 ) ;EcoRI/BamHI酶切扩增产物获得BPI 2 0 0bp和BPI 4 0 0bp 2个基因片段。②成功构建PUC1 8 BPI2 0 0和PUC1 8 BPI4 0 0重组克隆载体 ,DNA测序分析结果与文献报道一致。③成功构建pBV2 2 0 BPI60 0重组表达载体 ;转化E .coliDH5α感受态细胞 ,诱导目的重组蛋白表达 ;经SDS PAGE电泳和Western blot鉴定 ,证实表达的重组蛋白确为外源基因 (BPI 60 0bp)编码的产物BPI2 1重组蛋白。 展开更多

关键词 重组杀菌 渗透增强蛋白 pBV220表达载体 PUC18克隆载体

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