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温胆汤含药血清对10 mmol/L谷氨酸环境下星型胶质细胞PI3K、Akt、mTOR表达的影响
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作者 徐义勇 徐欣怡 +1 位作者 万红娇 田真真 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第3期184-188,I0025-I0027,共8页
目的 探讨温胆汤含药血清对10 mmol/L谷氨酸诱导的大鼠星型胶质细胞凋亡、周期及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase, PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR... 目的 探讨温胆汤含药血清对10 mmol/L谷氨酸诱导的大鼠星型胶质细胞凋亡、周期及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase, PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)表达的影响。方法 将60只SPF级SD雄性大鼠随机分为5组,其中正常组20只,氯氮平组和温胆汤高、中、低剂量组各10只。正常组予20 g/kg 0.9%氯化钠溶液灌胃,氯氮平组予氯氮平原药20 mg/kg灌胃,温胆汤高、中、低剂量组分别予40、20、10 g/kg温胆汤灌胃,1次/d,共8 d。处死大鼠后取血,离心取血清,灭活除菌,EP管分装备用。将大鼠星型胶质细胞分为正常血清组、模型血清组,氯氮平含药血清组和温胆汤高、中、低剂量含药血清组,除正常血清组外,其余各组予10μmol/mL谷氨酸处理48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;Western bloting、Real-time PCR分别测定细胞PI3K、Akt、mTOR蛋白和mRNA表达。结果 温胆汤含药血清可明显降低谷氨酸环境下大鼠星型胶质细胞凋亡率(P<0.01)和G0/G1期细胞占比(P<0.05),升高S期及G2/M期细胞占比;降低细胞P-P13K/P13K、P-ATK/AKT、P-mTOR/mTOR蛋白表达比值(温胆汤低剂量血清组除外,P<0.05)和细胞PI3K、Akt、mTOR mRNA表达(温胆汤低剂量血清组除外,P<0.01)。结论 温胆汤含药血清可有效调节大鼠星形胶质细胞PI3K、Akt、mTOR表达,达到保护神经细胞的目的,这可能是温胆汤治疗精神分裂症的作用机制之一。 展开更多
关键词 温胆汤含药血清 谷氨酸 细胞凋亡 细胞周期 信号通路
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温胆汤含药血清对代谢相关脂肪性肝病细胞模型的影响
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作者 李昱芃 臧超越 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期52-58,共7页
为了探讨温胆汤含药血清对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)细胞模型药物干预的作用及可能的分子机制,将C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组和温胆汤含药血清组,实验第14 w处死小鼠,采取下腔静脉取血的方式,收集全血,制备含药血清.利用MTT方... 为了探讨温胆汤含药血清对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)细胞模型药物干预的作用及可能的分子机制,将C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组和温胆汤含药血清组,实验第14 w处死小鼠,采取下腔静脉取血的方式,收集全血,制备含药血清.利用MTT方法检测不同浓度的温胆汤含药血清对于HepG2细胞活力的影响.利用游离脂肪酸建立MAFLD HepG2细胞模型,细胞模型分为6组:正常对照组(简称空白组)、细胞模型组(简称模型组)温胆汤含药血清低剂量组(简称低剂量组)、温胆汤含药血清中剂量组(简称中剂量组)、温胆汤含药血清高剂量组(简称高剂量组)、吡咯列酮治疗组(简称吡咯列酮组).比较6组细胞甘油三酯含量,检测各组细胞的炎症反应水平、氧化损伤指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平、脂质代谢重要基因、蛋白SREBP-1c、FAS、DGAT-2、SCD-1和ACO表达水平.MTT检测的结果表明,5、10、20、和50 mg/L的温胆汤含药血清对于HepG2细胞活力不会产生明显的抑制作用,但是,100 mg/L的温胆汤含药血清会产生明显的细胞毒性.模型组细胞与空白组细胞比较,细胞中形成大量脂滴,甘油三酯含量明显升高,证实了游离脂肪酸成功构建了MAFLD细胞模型;各药物干预治疗组细胞脂肪水平,甘油三酯含量、炎症反应水平、脂质过氧化水平、和脂质代谢重要基因和蛋白表达均较模型组细胞显著降低,高剂量组和吡咯列酮组降低最为显著,差异有统计学意义(P<0.05).本研究表明不同剂量温胆汤含药血清均能明显改善MAFLD细胞模型中脂质沉积,降低甘油三酯含量和炎症反应水平,可能与调节脂质代谢、降低细胞中脂质过氧化水平和脂质代谢重要基因的表达有关. 展开更多
关键词 温胆汤含药血清 代谢相关脂肪性肝病 脂质代谢 HepG2细胞 吡咯列酮
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温胆汤含药血清对CREB mRNA沉默海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响 被引量:13
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作者 田真真 徐义勇 +3 位作者 朱金华 叶喜德 高源 万红娇 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第22期1-6,共6页
目的:探讨温胆汤对环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)mRNA沉默海马细胞活性、凋亡及海马脑源性神经营养因子/原肌球蛋白相关受体激酶/CREB(BDNF/TrkB/CREB)信号通路作用的影响。方法:制备温胆汤含药血清,将SD雄性大鼠随机分为温胆汤高、... 目的:探讨温胆汤对环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)mRNA沉默海马细胞活性、凋亡及海马脑源性神经营养因子/原肌球蛋白相关受体激酶/CREB(BDNF/TrkB/CREB)信号通路作用的影响。方法:制备温胆汤含药血清,将SD雄性大鼠随机分为温胆汤高、中、低剂量组、氯氮平组、正常生理盐水组,每组10只,其中每组15只。正常组予20 mL·kg-1生理盐水灌胃,氯氮平组给予0.02 g·kg-1氯氮平原药灌胃,温胆汤高、中、低剂量组分别予质量浓度为2,1,0.5 g·mL-1的等量温胆汤浓缩生药灌胃,1次/d,连续灌胃8 d后,股动脉取血,5 000 r·min-1离心15 min,倾取上清液,灭活,-80℃保存,备用。通过脂质体转染至海马细胞中,构建CREB mRNA沉默海马神经元细胞系,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证小分子干扰核糖核酸(siRNA)转录后效果。检测海马细胞周期和凋亡,正常海马细胞和CREB基因沉默海马细胞内BDNF,TrkB,CREB,钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA表达水平。结果:对于细胞凋亡,与正常大鼠血清组比较,各组别在24,48 h时,细胞凋亡显著降低(P<0.01);与正常大鼠血清-siRNA组比较,各给药组细胞凋亡显著降低(P<0.01)。对于BDNF,TrkB,CREB,CaMKⅡmRNA表达,与正常大鼠血清组比较,基因沉默正常组CREB,BDNF mRNA表达均显著下降(P<0.01);与正常大鼠血清-siRNA组比较,各给药组可显著提高BDNF mRNA表达(P<0.01),其中TrkB,CaMKⅡ各组间差异无明显统计学意义。结论:温胆汤含药血清可提高BDNF mRNA表达,通过调控BDNF/TrkB/CREB信号通路,以保护海马神经元,达到防治精神分裂症认知障碍的目的。 展开更多
关键词 温胆汤含药血清 CREB基因沉默 海马细胞 脑源性神经营养因子/原肌球蛋白相关受体激酶/环磷腺苷效应元件结合蛋白(BDNF/TrKB/CREB)信号通路
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温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞凋亡及PI3K,Akt,GSK3β表达的影响 被引量:8
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作者 田真真 朱丽娟 +2 位作者 万红娇 周步高 徐义勇 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第13期45-51,共7页
目的:探讨温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞的保护作用及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为5组,其中正常组20只,氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,每... 目的:探讨温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞的保护作用及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为5组,其中正常组20只,氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,每组10只。正常组给予20 mL·kg^-1生理盐水灌胃,氯氮平组给予氯氮平原药20 mg·kg^-1灌胃,温胆汤组分别给予剂量为40,20,10 g·kg^-1的温胆汤灌胃,1次/d,8 d后处死大鼠,取血,离心取血清,灭活,过滤除菌,离心管分装备用。将星型胶质细胞分为空白组、模型组、氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,其中空白组、模型组给予空白血清培养,其余各组给予相应含药血清培养;除空白组外,其余各组用10 mmol·L^-1谷氨酸处理24 h后予流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测星型胶质细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞凋亡率则显著下降(P<0.01)。与空白组比较,模型组细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白、磷酸化蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白、磷酸化蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组细胞PI3K,Akt,GSK3βmRNA的表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞PI3K,Akt,GSK3βmRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:温胆汤含药血清可有效升高PI3K,Akt,GSK3β表达,从而调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路,保护神经细胞。 展开更多
关键词 温胆汤含药血清 星型胶质细胞 谷氨酸 磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路
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温胆汤含药血清对10 mmol/L谷氨酸条件下星形胶质细胞PSD-95、GAP-43、JIP-3、Cx-43表达的影响 被引量:3
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作者 朱金华 李琳琳 +4 位作者 周敏 张媛 张米兰 周军 万红娇 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期8-13,共6页
目的:以谷氨酸作用的星形胶质细胞为细胞模型,通过检测突触可塑性相关蛋白的变化,并从突触可塑性角度探讨温胆汤改善精神分裂症认知障碍的分子机制。方法:将大鼠随机分成5组:正常对照组、氯氮平0.02 g/kg组和温胆汤20、30、40 g/kg组。... 目的:以谷氨酸作用的星形胶质细胞为细胞模型,通过检测突触可塑性相关蛋白的变化,并从突触可塑性角度探讨温胆汤改善精神分裂症认知障碍的分子机制。方法:将大鼠随机分成5组:正常对照组、氯氮平0.02 g/kg组和温胆汤20、30、40 g/kg组。正常对照组灌胃生理盐水,其余各组灌胃相应药物,1次/d,7 d后取血,制备含药血清。采用MTT法确定谷氨酸对星形胶质细胞的作用浓度和时间点;观察温胆汤含药血清对谷氨酸造模的星形胶质细胞形态变化的影响;RT-qPCR法检测星形胶质细胞中突触后致密蛋白95(Psd95)、生长相关蛋白43(Gap43)、Jnk相互作用蛋白3(JIP3)、连接蛋白43(Cx43)mRNA表达;WB法检测星形胶质细胞中PSD-95、GAP-43、JIP-3、Cx-43蛋白表达。结果:根据不同浓度谷氨酸对星形胶质细胞增殖率影响的结果,确定谷氨酸浓度为10 mmol/L的条件下作用星形胶质细胞48 h为细胞实验条件。与正常对照组比较,模型对照组星形胶质细胞形态皱缩、拉长、呈多边形,突触少而且短,形态简单,细胞密度低;其Psd95、Gap43、Jip3、Cx43 mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,温胆汤20、30、40 g/kg含药血清组星形胶质细胞、突触的形态和状态均有比较大的改善,且细胞密度更密集,并明显上调Psd95、Gap43、Jip3、Cx43 mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:温胆汤能有效改善精神分裂症认知缺陷,其作用机制可能是通过减轻星形胶质细胞病理损伤,上调PSD-95、GAP-43、JIP-3、Cx-43表达,进而增强突触可塑性。 展开更多
关键词 温胆汤含药血清 星形胶质细胞 突触后致密蛋白95 生长相关蛋白43 JNK相互作用蛋白3 连接蛋白43
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温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞凋亡及NRG1、ErbB4表达的影响 被引量:4
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作者 徐义勇 刘金莲 +2 位作者 朱丽娟 田真真 万红娇 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期7-11,共5页
目的:探讨温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞凋亡及NRG1、ErbB4表达的影响。方法:SD大鼠灌胃相应药物或生理盐水后制备含药血清,灭活,过滤除菌,EP管(4mL)分装备用。以正常组、模型组、氯氮平20mg/kg含药血清、温胆汤40g/kg、20g... 目的:探讨温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞凋亡及NRG1、ErbB4表达的影响。方法:SD大鼠灌胃相应药物或生理盐水后制备含药血清,灭活,过滤除菌,EP管(4mL)分装备用。以正常组、模型组、氯氮平20mg/kg含药血清、温胆汤40g/kg、20g/kg、10g/kg含药血清培养,干预谷氨酸环境下星形胶质细胞,流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡;Western bloting、Real-time PCR分别测定星型胶质细胞NRG1、ErbB4蛋白、磷酸化和mRNA表达。结果:温胆汤各浓度含药血清组均能明显减少星形胶质细胞凋亡;降低NRG1、ErbB4蛋白和mRNA表达,提高其磷酸化表达。结论:温胆汤10%含药血清可有效调节NRG1、ErbB4表达,从而调控NRG1-ErbB4信号通路的功能,保护神经细胞,这也许是温胆汤能够治疗精神分裂症的作用机制之一。 展开更多
关键词 温胆汤含药血清 谷氨酸 星型胶质细胞 NRG1-ErbB4信号通路
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温胆汤含药血清对星形胶质细胞Cx43和GJ的影响 被引量:1
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作者 朱金华 刘丹丹 +3 位作者 魏妍妍 熊怀亮 戎文娟 万红娇 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期5-8,共4页
目的:探讨温胆汤含药血清对星形胶质细胞缝隙连接(GJ)和连结蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:40只SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20mg/kg组、温胆汤40g/kg组、温胆汤30g/kg组、温胆汤20g/kg组。氯氮平组ig氯氮平20 mg/kg,温胆汤40g/kg... 目的:探讨温胆汤含药血清对星形胶质细胞缝隙连接(GJ)和连结蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:40只SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20mg/kg组、温胆汤40g/kg组、温胆汤30g/kg组、温胆汤20g/kg组。氯氮平组ig氯氮平20 mg/kg,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg组分别ig温胆汤生药40、30、20 g/kg,正常组用等量生理盐水ig,1次/d,8天后处死大鼠,取血,离心取血清,灭活,过滤除菌备用。将星形胶质细胞分为6组:对照组(普通培养基培养)、正常鼠血清组、氯氮平20mg/kg血清组、温胆汤40g/kg血清组、温胆汤30g/kg血清组、温胆汤20g/kg血清组,按照相应的分组更换含药血清进行培养24h、36h、48h后,采用划痕染料标记示踪技术(SLDT)在荧光显微镜下,通过荧光黄扩散距离测定星形胶质细胞间GJ水平;Western blotting法检测星形胶质细胞中Cx43磷酸化和非磷酸化的表达。结果:温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg血清组作用于星形胶质细胞24h、36h、48h后,能使荧光扩散面积及强度不同程度的显著增加;并显著提高Cx43磷酸化和非磷酸化的表达。结论:温胆汤能够上调星形胶质细胞Cx43磷酸化和非磷酸化的表达,增强GJ水平,从而改善细胞间隙连接通讯(GJIC)功能。 展开更多
关键词 温胆汤含药血清 星形胶质细胞 连结蛋白43 缝隙连接
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温胆汤含药血清对谷氨酸条件下星形胶质细胞Cx43和GJIC功能的影响 被引量:4
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作者 熊怀亮 朱金华 +3 位作者 戎文娟 何欢 刘丹丹 万红娇 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-5,共5页
目的:探讨温胆汤含药血清在10μmol/ml谷氨酸条件下对星形胶质细胞细胞缝隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)功能和连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响。方法:将40只清洁级SD大鼠随机分为5组:正常组、... 目的:探讨温胆汤含药血清在10μmol/ml谷氨酸条件下对星形胶质细胞细胞缝隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)功能和连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响。方法:将40只清洁级SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20 mg/kg组、温胆汤40 g/kg组、温胆汤30 g/kg组、温胆汤20 g/kg组,每组8只。正常组用等量生理盐水ig,氯氮平20 mg/kg组ig氯氮平20 mg/kg,温胆汤40、30、20 g/kg组分别ig温胆汤生药40、30、20 g/kg,1次/d,8天后处死取血,制备含药血清。星形胶质细胞在10μmol/ml谷氨酸条件下经含药血清处理,即10μmol/ml谷氨酸对照组、正常鼠血清组、氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤40、30g、20 g/kg血清组,处理24、36、48 h后,采用细胞划痕染料标记示踪技术(scrape-loading and dye transfer,SLDT),以荧光染料在细胞间的扩散程度作为评价缝隙连接通讯的指标;Western blotting法检测星形胶质细胞中Cx43磷酸化和非磷酸化的表达。结果:10μmol/ml谷氨酸条件下,星形胶质细胞24h之后细胞凋亡数量明显,36h之后80%以上细胞处于凋亡坏死状态;划痕染料标记示踪技术直接检测GJIC中,温胆汤40、30 g/kg血清组在3个时间段不同程度的明显增加细胞GJIC,温胆汤20 g/kg血清组只在36h时间段增加细胞GJIC;10μmol/ml谷氨酸条件下,温胆汤40 g/kg含药血清使Cx43磷酸化下调和非磷酸化升高。结论:温胆汤含药血清可减少星形胶质细胞的凋亡;促进星形胶质细胞细胞缝隙连接通讯(GJIC);下调星形胶质细胞Cx43磷酸化,升高Cx43非磷酸化程度,从而对细胞缝隙连接通讯功能具有促进作用,这可能与其引起细胞内Cx43的异常活化有关。 展开更多
关键词 温胆汤含药血清 星形胶质细胞 缝隙连接通讯 连接蛋白43
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