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连续灌流培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体 被引量:8
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作者 米力 李玲 +2 位作者 冯强 余晓玲 陈志南 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期360-364,共5页
Hybridoma cells were cultured by continuous perfusion in Fibra-Cel of 5L packed-bed bioreactor for 22 days in low serum or serum-free media.The corresponded amino acids were fed and serum concentration was decreased b... Hybridoma cells were cultured by continuous perfusion in Fibra-Cel of 5L packed-bed bioreactor for 22 days in low serum or serum-free media.The corresponded amino acids were fed and serum concentration was decreased by analyzing glucose concentration, oxygen uptake rate, secretary antibody amount and amino acids concentration in culture supernatant. Comparing with continuous perfusion culture that amino acids were not fed, antibody amunt of production was increased about 2~3 times. The inoculated cell density was 2.5×10 5 cells/mL,while the final cell density was 8.79×10 8cells/mL. Antibody production was reached 295mg/L/d at average level, and the highest level was reached 532mg/L/d.These results provided a primary mode of enlarge culture for monoclonal antibody industrilization. 展开更多
关键词 连续灌流培养 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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扩张柱床吸附层析回收纯化灌流培养生产的单克隆抗体 被引量:1
2
作者 余晓玲 米力 +1 位作者 姚西英 陈志南 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期227-232,共6页
用扩张柱床吸附层析技术 ,一步回收纯化连续灌流培养的单克隆抗体。用StreamlineSP阳离子交换介质在固定床柱XK16 2 0上进行条件摸索 ,扩张床柱Streamline 2 5和 50分别用于小规模条件优化和中试规模放大。培养液中的低浓度单抗经此步处... 用扩张柱床吸附层析技术 ,一步回收纯化连续灌流培养的单克隆抗体。用StreamlineSP阳离子交换介质在固定床柱XK16 2 0上进行条件摸索 ,扩张床柱Streamline 2 5和 50分别用于小规模条件优化和中试规模放大。培养液中的低浓度单抗经此步处理 ,浓缩 10倍以上 ,纯度提高 5~ 7倍 ,回收率 >90 % ,制备周期比固定柱床层析缩短一半以上。根据培养液中单抗浓度的不同 ,一次处理量为 18~ 50L ,纯化规模由实验室水平 (40 0mg)扩大至中试水平(2g) ,生产成本和工艺复杂性大为降低。应用扩张柱床吸附层析技术 ,建立单克隆抗体回收纯化工艺 ,具有经济、简便。 展开更多
关键词 扩张柱床吸附层析技术 纯化工艺 灌流培养 单克隆抗体 培养
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动物细胞微载体灌流培养技术的研究和应用 被引量:1
3
作者 肖成祖 陈昭烈 +6 位作者 黄子才 胡显文 周鹤山 王佃亮 高丽华 刘红 郭志霞 《医学研究通讯》 2000年第11期16-17,共2页
随着基因工程的发展,人们逐渐认识到有许多基因产物不能在原核细胞内表达,它们需要经过真核细胞所特有的翻译后修饰,以及正确的切割,折叠后,才能形成与自然分子一样的功能和抗原性。这就使动物细胞一跃成为一种重要的宿主细胞,用以生产... 随着基因工程的发展,人们逐渐认识到有许多基因产物不能在原核细胞内表达,它们需要经过真核细胞所特有的翻译后修饰,以及正确的切割,折叠后,才能形成与自然分子一样的功能和抗原性。这就使动物细胞一跃成为一种重要的宿主细胞,用以生产各种各样的重要的生物制品,包括有疫苗(如乙肝疫苗、狂犬病疫苗。 展开更多
关键词 动物细胞微载体 灌流培养技术 研究 应用
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用改装的Super-Spinner搅拌瓶连续灌流培养产凝血酶原CHO工程细胞
4
作者 陈昭烈 Kai Iding +1 位作者 Dirk Lütkemeyer JürgenLehmann 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期109-112,共4页
A Super\|Spinner was Modified by mounting a stainless steel filter(pore size 75 μm)to the impeller shaft to retain cells while fresh nutrient is perfused.Using Macroporous microcarrier Cytopore 1,continuously perfuse... A Super\|Spinner was Modified by mounting a stainless steel filter(pore size 75 μm)to the impeller shaft to retain cells while fresh nutrient is perfused.Using Macroporous microcarrier Cytopore 1,continuously perfused cultivation of a recombinant CHO cell line,CHO2DS producing prothrombin was performed with the perfusion of a protein\|free medium DF6S.The cell retention rate was more than 90% during the 24 days continuously perfused cultivation.The viable cell density of CHO2DS and prothrombin concentration reached 4.62×10 6(cells.m/L) and 11.3(mg/L)respectively after 9 days culture. 展开更多
关键词 连续灌流培养 CHO工程细胞 凝血酶原 动物细胞 细胞培养
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微流控芯片细胞灌流培养技术及其应用研究进展 被引量:2
5
作者 王文甲 彭钊 +3 位作者 吕雪飞 邓玉林 李晓琼 徐建栋 《载人航天》 CSCD 北大核心 2021年第5期646-654,共9页
细胞培养是开展细胞生物学、生物医学及药物筛选、细胞分析等研究的重要方法。与静态培养相比,细胞的灌流培养能够持续提供营养并清除废物,有利于保持相对稳定的培养条件,受到研究者广泛关注。具有小型化、集成性、高度自动化等特点的... 细胞培养是开展细胞生物学、生物医学及药物筛选、细胞分析等研究的重要方法。与静态培养相比,细胞的灌流培养能够持续提供营养并清除废物,有利于保持相对稳定的培养条件,受到研究者广泛关注。具有小型化、集成性、高度自动化等特点的微流控芯片与细胞灌流培养系统的耦合,可以大大拓展宏观尺度的灌流和微观尺度的细胞培养能力。在系统介绍微流控细胞灌流培养芯片的设计与加工、细胞操作等基础之上,综述了近年来微流控芯片细胞灌流培养技术的应用及面临的挑战,讨论了微流控芯片细胞灌流培养技术在空间生命科学及航天医学等领域中的潜在应用前景。 展开更多
关键词 细胞培养 灌流培养 控芯片 空间生命科学
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猪十二指肠组织灌流培养与静态培养比较
6
作者 王绿阳 康翠翠 +2 位作者 冯江银 丁立人 杭苏琴 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期246-252,共7页
组织灌流培养和静态培养是肠道组织体外培养最常见的两种方法,但目前尚不清楚这两种培养方法哪种更适合用于体外胃肠激素分泌的研究。以猪十二指肠组织为研究对象,首先比较L-精氨酸下两种体外培养方法对组织胆囊收缩素(Cholecystokinin,... 组织灌流培养和静态培养是肠道组织体外培养最常见的两种方法,但目前尚不清楚这两种培养方法哪种更适合用于体外胃肠激素分泌的研究。以猪十二指肠组织为研究对象,首先比较L-精氨酸下两种体外培养方法对组织胆囊收缩素(Cholecystokinin,CCK)分泌和组织活性乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)分泌的影响;并进一步与体内十二指肠L-精氨酸灌注对血液CCK的变化水平进行比较,确定更适合用于体外胃肠激素分泌研究的方法。结果表明,组织灌流培养下培养液CCK浓度随时间增长呈平稳波动,LDH浓度随时间增长而逐渐降低;而静态培养下CCK浓度随时间增长呈累积效应,LDH浓度则随时间增长而逐渐升高。此外,组织灌流培养CCK的分泌过程与血液CCK的变化非常相似。以上结果表明组织灌流培养更适用于体外胃肠激素分泌的研究。 展开更多
关键词 组织灌流培养 组织静态培养 L-精氨酸 胆囊收缩素 乳酸脱氢酶
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结直肠类器官芯片灌流培养技术研究
7
作者 张国栋 杨元展 +2 位作者 杨春华 樊云龙 李晓琼 《生命科学仪器》 2022年第3期40-46,共7页
器官芯片是近年来快速发展的前沿交叉技术,通过其建立的生理模型,相比传统细胞模型更能表现出生物体的特征,在多个研究和产业领域都展现出巨大的优势。在肿瘤学研究中,类器官由于能够高度模拟肿瘤体内形态结构及生物学特性,引起广泛关... 器官芯片是近年来快速发展的前沿交叉技术,通过其建立的生理模型,相比传统细胞模型更能表现出生物体的特征,在多个研究和产业领域都展现出巨大的优势。在肿瘤学研究中,类器官由于能够高度模拟肿瘤体内形态结构及生物学特性,引起广泛关注。而传统二维培养无法模拟肿瘤独特区域微环境,因而三维培养被认为是理想模型,利用器官芯片构建体外肿瘤细胞三维类器官模型也逐渐成为研究热点。论文针对肿瘤类器官体外三维培养的需求,根据肿瘤类器官实验要求选择芯片种类,并针对芯片进行流速场仿真,确保合适的流速环境。最后利用灌流培养方式进行结直肠癌类器官芯片模型的构建。结果表明,稳定且具有较低剪切力的灌流培养可以维持结直肠癌细胞三维类器官连续7天的稳定生长,实现了肿瘤类器官芯片体外三维培养模型的构建,为肿瘤发生发展机制研究、抗癌药物筛选提供了有效的手段。 展开更多
关键词 器官芯片 肿瘤模型 灌流培养
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仕必纯 KrosFIo MagLev磁悬浮细胞灌流培养系统
8
《流程工业》 2015年第11期82-82,共1页
仕必纯KrosFIo MagLev磁悬浮细胞灌流培养(KML)系统为生物制药行业高密度细胞培养工艺提供了全套解决方案,系统包括控制系统、细胞截留装置及MBT流路。与传统细胞灌流培养装置相比.该系统集成了更多自动化控制和数据记录功能,使细... 仕必纯KrosFIo MagLev磁悬浮细胞灌流培养(KML)系统为生物制药行业高密度细胞培养工艺提供了全套解决方案,系统包括控制系统、细胞截留装置及MBT流路。与传统细胞灌流培养装置相比.该系统集成了更多自动化控制和数据记录功能,使细胞培养工艺更具可控性和可重复性。 展开更多
关键词 悬浮细胞 培养系统 灌流培养 培养工艺 培养装置 自动化控制 制药行业 控制系统
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高渗胁迫和灌流培养策略提高HEK 293细胞生产重组腺病毒载体产量
9
作者 张卓曦 白仲虎 +2 位作者 刘光胤 聂简琪 杨艳坤 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3364-3378,共15页
由于各种疾病在全球范围内的肆虐,国际市场对重组腺病毒载体(adenoviralvector,Adv)疫苗的需求量急剧增加,而工艺研究是解决这一问题的有效手段之一。在细胞接毒前施加高渗胁迫可以提高分批培养模式下的Adv产量,新兴的灌流培养也可以显... 由于各种疾病在全球范围内的肆虐,国际市场对重组腺病毒载体(adenoviralvector,Adv)疫苗的需求量急剧增加,而工艺研究是解决这一问题的有效手段之一。在细胞接毒前施加高渗胁迫可以提高分批培养模式下的Adv产量,新兴的灌流培养也可以显著提高Adv的产量。将高渗胁迫工艺与灌流培养相结合,有望进一步提升高细胞密度生产过程中的Adv产量。本研究利用摇瓶结合拟灌流培养作为生物反应器灌流培养的缩小模型,使用渗透压为300–405 mOsm的培养基研究了高渗胁迫对细胞生长和Adv生产的影响。结果显示,在细胞生长阶段使用370mOsm的高渗透压培养基,在病毒生产阶段使用300 mOsm的等渗透压培养基的灌流培养工艺有效地提高了Adv的产量。进一步研究发现这可能归因于病毒复制后期HSP70蛋白的表达量增加。将这种工艺放大至生物反应器中,Adv的产量达到3.2×10^(10)IFU/mL,是传统灌流培养工艺的3倍。本研究首次将高渗胁迫工艺与灌流培养相结合的策略应用于HEK 293细胞生产Adv,同时揭示了高渗胁迫工艺增产Adv的可能原因,为HEK 293细胞生产其他类型Adv的工艺优化提供了借鉴。 展开更多
关键词 高渗胁迫 灌流培养 HEK 293细胞 腺病毒载体
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重组蛋白生物制品灌流培养工艺及药学评价考量
10
作者 邱晓 赛文博 +1 位作者 寇雅真 韦薇 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期138-142,共5页
灌流培养作为一种连续细胞培养技术,较传统批量生产工艺有利于企业生产成本控制,并可根据供应需求灵活调整规模。本文对比了传统批量发酵工艺与灌流工艺,明确了灌流培养工艺特点。结合国际人用药品注册技术协会目前正在起草的指导原则,... 灌流培养作为一种连续细胞培养技术,较传统批量生产工艺有利于企业生产成本控制,并可根据供应需求灵活调整规模。本文对比了传统批量发酵工艺与灌流工艺,明确了灌流培养工艺特点。结合国际人用药品注册技术协会目前正在起草的指导原则,本文从细胞传代稳定性研究、批次及规模定义、生产工艺控制、外源因子控制、生产工艺验证等方面,总结了灌流培养工艺药学评价的考量内容。 展开更多
关键词 灌流培养 连续生产 细胞传代稳定性 工艺控制 工艺验证
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狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞灌流培养中细胞特异性灌流速率的研究
11
作者 宋兰兰 安晨 +5 位作者 汪艳艳 郭岚 张祺 唐金舟 马树奇 陈继军 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第2期41-45,共5页
目的 研究灌流培养中,不同的细胞特异性灌流速率(cell specific perfusion rate, CSPR)对狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞生长及抗体蛋白表达的影响,摸索适合本细胞株灌流培养的CSPR。方法 在标号为CSPR 1~5[CSPR1;0.02 nL/(细胞·d)、CS... 目的 研究灌流培养中,不同的细胞特异性灌流速率(cell specific perfusion rate, CSPR)对狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞生长及抗体蛋白表达的影响,摸索适合本细胞株灌流培养的CSPR。方法 在标号为CSPR 1~5[CSPR1;0.02 nL/(细胞·d)、CSPR2:0.03 nL/(细胞·d)、CSPR3:0.04 nL/(细胞·d)、CSPR4:0.05 nL/(细胞·d)、CSPR5:0.06 nL/(细胞·d),每组3个重复]的15个TPP管中按100万个/mL的初始密度接种相同的CHO种子细胞;摇床中,以转速225 r/min、CO_(2)浓度5.0%、湿度80%和温度37℃的条件培养细胞;以后每天取细胞样品,分别检测活细胞密度(viable cell density, VCD)、细胞活率、葡萄糖浓度、乳酸浓度和渗透压。接种3 d起,每天分别从CSPR 1~5的各管中,按0.02~0.06 nL/(细胞·d)的CSPR计算所需要更换的细胞悬液体积,将各管中的细胞悬液离心,取出相应体积的上清并补入相同体积的新鲜培养液重悬细胞后,继续培养。如细胞悬液中的葡萄糖质量浓度≤3 g/L时,用300 g/L的葡萄糖补至8 g/L。CHO细胞培养约19 d时,结束实验。根据CHO细胞生长、细胞代谢、抗体蛋白滴度(titer)、收获液总体积和抗体蛋白总收量,确定适合本细胞生长和表达的CSPR。结果 在CSPR 1~2[0.02~0.03 nL/(细胞·d)]的条件下灌流培养时,最高VCD分别为1 059万个/mL、1 298万个/mL,细胞活率在培养中后期下降较快,抗体蛋白总收量分别为98 mg和112 mg。CSPR3~5[0.04~0.06 nL/(细胞·d)]条件下的最高VCD分别为1 422万个/mL、1 523万个/mL和1538万个/mL,细胞活率维持较好,抗体蛋白总收量分别为119 mg、120 mg和107 mg。结论 当CSPR为0.04~0.05 nL/(细胞·d)时,细胞生长和抗体蛋白表达情况较好,为适合本细胞株灌流培养的CSPR。 展开更多
关键词 狂犬病毒单克隆抗体 CHO细胞 灌流培养 细胞特异性速率 细胞生长 蛋白表达
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用国产SH-2型微载体和低血清培基灌流培养CHO工程细胞 被引量:2
12
作者 肖成祖 黄子才 +5 位作者 陈昭烈 郭智霞 高丽华 李风知 周鹤山 李予川 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1995年第2期81-85,共5页
采用国产SH—2型聚苯乙烯微载体和新研制的低血清培基添加剂BIGBEF—2,在改进了的灌流控制系统的控制下灌流培养产尿激酶原CHO工程细胞CL—11G,所得细胞密度超过1×10 ̄7细胞/ml,尿激酶原平均活性为4... 采用国产SH—2型聚苯乙烯微载体和新研制的低血清培基添加剂BIGBEF—2,在改进了的灌流控制系统的控制下灌流培养产尿激酶原CHO工程细胞CL—11G,所得细胞密度超过1×10 ̄7细胞/ml,尿激酶原平均活性为4007IU/ml,最高达6614IU/ml,均高于以前采用5%血清的培基和Biosilon微载体培养时的水平,从而更有利于中试和未来的大规模工业化生产。 展开更多
关键词 微载体 低血清培基 添加剂 灌流培养 尿激酶原
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生物反应罐Vero细胞微载体灌流培养
13
作者 张丽旌 李平忠 +2 位作者 任邦彦 李桂兰 段可谦 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2001年第2期139-141,共3页
用 7L生物反应罐 ,3g/LCytoedx 1,φ =5 0 %溶解氧 ,40~ 5 0r/min搅拌速度进行细胞培养 ,培养 48h开始灌流 .连续动态测定葡萄糖含量、渗透压变化及 pH值 ,同时观察细胞形态、增殖情况 .连续 3批 7L规模灌流培养表明 ,细胞贴附率高 ,... 用 7L生物反应罐 ,3g/LCytoedx 1,φ =5 0 %溶解氧 ,40~ 5 0r/min搅拌速度进行细胞培养 ,培养 48h开始灌流 .连续动态测定葡萄糖含量、渗透压变化及 pH值 ,同时观察细胞形态、增殖情况 .连续 3批 7L规模灌流培养表明 ,细胞贴附率高 ,增殖速度快 ,细胞形态良好 ,细胞群体倍增数达 4.7.结果表明生物反应罐灌流培养法是一种快速。 展开更多
关键词 灌流培养 VERO细胞 微载体 生物反应罐 细胞贴附率 细胞培养 培殖速度 细胞密度
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哺乳动物细胞灌流培养工艺开发与优化 被引量:3
14
作者 张琼琼 方明月 +1 位作者 栗军杰 曹荣月 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1041-1050,共10页
近年来生物药市场需求量激增,高产量、高质量、低成本的哺乳动物细胞灌流培养工艺顺势成为工业界和学术界普遍关注的热点。文中围绕灌流培养工艺特有的操作环节及工艺优化应着重关注的细节展开论述,综述了近年来在灌流培养工艺开发和优... 近年来生物药市场需求量激增,高产量、高质量、低成本的哺乳动物细胞灌流培养工艺顺势成为工业界和学术界普遍关注的热点。文中围绕灌流培养工艺特有的操作环节及工艺优化应着重关注的细节展开论述,综述了近年来在灌流培养工艺开发和优化上取得的进步和提出的策略,以期为哺乳动物细胞灌流培养技术的开发提供参考。 展开更多
关键词 灌流培养 单细胞速率 中空纤维柱 滤膜堵塞
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哺乳动物细胞灌流培养工艺研究进展 被引量:3
15
作者 苏爽 金永杰 +2 位作者 黄瑞晶 李剑 徐寒梅 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期105-110,共6页
当前生物制药领域,由于成本压力、市场需求急剧波动以及生物仿制药的竞争日益激烈,现有的生物制造技术受到诸多挑战,生物技术公司越来越倾向于开发灵活、高效的创新型生产制造工艺。灌流培养作为当前哺乳动物细胞培养的重要工艺之一,不... 当前生物制药领域,由于成本压力、市场需求急剧波动以及生物仿制药的竞争日益激烈,现有的生物制造技术受到诸多挑战,生物技术公司越来越倾向于开发灵活、高效的创新型生产制造工艺。灌流培养作为当前哺乳动物细胞培养的重要工艺之一,不仅可以通过不断移出副产物和添加营养物来提供有利于细胞的稳定环境,以解决蛋白质量不稳定或者表达量偏低等问题,还可以通过提高单位体积产率来优化产能利用率并提高生产效率。通过系统介绍灌流培养用于哺乳动物细胞培养的研究进展,为其进一步开发与应用提供参考。 展开更多
关键词 灌流培养 哺乳动物细胞 培养工艺 连续性工艺
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高通量灌流培养模型在生物工艺开发中的应用研究
16
作者 靳露 周航 +2 位作者 曹云 王振守 曹荣月 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期63-73,共11页
近年来,连续型细胞培养由于其高单位体积产量、稳定的产品质量属性以及潜在的成本节约效应正成为生物大分子制药生产的工艺焦点。相比传统的流加培养模式,灌流培养因培养的连续性、操作的复杂性,致使其反应器规模培养需消耗大量培养基,... 近年来,连续型细胞培养由于其高单位体积产量、稳定的产品质量属性以及潜在的成本节约效应正成为生物大分子制药生产的工艺焦点。相比传统的流加培养模式,灌流培养因培养的连续性、操作的复杂性,致使其反应器规模培养需消耗大量培养基,产生更高人力成本,不能满足当今加速化高效化的工艺开发需求。为获得稳健的灌流培养工艺并控制较低成本,高通量灌流培养模型被用于批量化的小规模灌流培养,进行灌流培养前期的克隆筛选、培养基筛选及工艺参数优化等工作,为后期大规模培养提供实用性数据支持,同时也被用于预测大规模培养的细胞表型和产品质量属性。重点介绍了当前高通量系统包括摇瓶/摇管系统、多平行自动化系统以及微流控体系用作灌流培养的特征、具体应用及比较,同时论述当前高通量灌流培养系统在生物工艺领域发展所面临的机遇及挑战,并展望其应用前景。 展开更多
关键词 灌流培养 高通量 微型生物反应器 Ambr
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表达重组抗CD52单克隆抗体CHO细胞灌流培养基的筛选
17
作者 张祺 南建军 +3 位作者 宋兰兰 赵晓瑞 宋宪铭 陈继军 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第1期43-47,共5页
目的筛选重组抗CD52单克隆抗体CHO细胞株培养和连续灌流表达用培养基,以提高抗体表达量。方法通过调整原有批培养用培养基中谷氨酰胺和植物水解蛋白,获得5种培养基配比。使用模拟灌注方式进行细胞培养,分析细胞密度、活细胞比率和目标... 目的筛选重组抗CD52单克隆抗体CHO细胞株培养和连续灌流表达用培养基,以提高抗体表达量。方法通过调整原有批培养用培养基中谷氨酰胺和植物水解蛋白,获得5种培养基配比。使用模拟灌注方式进行细胞培养,分析细胞密度、活细胞比率和目标蛋白表达,筛选连续灌流细胞培养和表达用培养基。最后在7 L反应器中采用灌注培养方式对筛选获得的培养基进行验证。结果使用50 mL细胞培养管进行模拟灌注培养时,活细胞比率较高,达到90%以上;CHO细胞在添加谷氨酰胺至4.0 mmol/L和植物水解蛋白至5.0 g/L的批培养用培养基中生长速度最快;在基础培养基中抗体表达量比优化前高15%。20 d培养周期内,优化的培养基在7 L反应器中可以维持CHO细胞密度在(2727±253)万个/mL,活细胞比率在95%以上。结论通过模拟灌注培养,筛选获得了一种在7 L反应器灌流培养中适宜于重组抗CD52单克隆抗体CHO细胞表达的培养基。 展开更多
关键词 灌流培养 重组抗体 培养 抗体表达
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超声截留灌流培养重组CHO细胞工艺优化
18
作者 庄宗兰 程杰 +5 位作者 彭杰 周云 祁碧玉 杨文静 杨世龙 谭小东 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第3期43-49,共7页
目的采用超声截留控制器超声使得细胞聚集、沉降的方法截留悬浮细胞,优化重组CHO细胞灌流培养工艺。方法基于无血清化学限定(CD)培养基,选择表达水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(VZV gE)的重组CHO细胞在5 L生物... 目的采用超声截留控制器超声使得细胞聚集、沉降的方法截留悬浮细胞,优化重组CHO细胞灌流培养工艺。方法基于无血清化学限定(CD)培养基,选择表达水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(VZV gE)的重组CHO细胞在5 L生物反应器中灌流培养。对初步确定的培养条件进行响应面分析,优化培养温度、培养基pH、灌流速度;并采用上述优化条件验证超声截留控制器灌流培养重组CHO细胞工艺。结果本实验条件下,优化后的灌流培养条件为:温度33.2℃、pH 7.0、灌流速度4.1 mL/min。3批验证结果显示,相较批培养,灌流培养时间延长5~7 d,收获体积增加5~7倍。其中,葡萄糖和乳酸含量、细胞密度和活性批间变化趋势一致;细胞截留效率均高于90%,批间差异无统计学意义(P>0.05);目的蛋白比活性约为0.5,批间差异无统计学意义(P>0.05);Western blot结果显示,相对分子质量和糖基化修饰与批培养一致。结论实现了5 L生物反应器灌流培养重组CHO细胞表达gE蛋白工艺,为后续大规模生产提供了依据。 展开更多
关键词 灌流培养 重组CHO细胞 生物反应器 水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E
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基于灌流浓缩培养的罗伊氏乳杆菌高密度发酵研究
19
作者 李子财 李林 +5 位作者 李光洲 王建清 辛维岗 张棋麟 王峰 林连兵 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第15期18-23,共6页
罗伊式乳杆菌作为美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)和国家卫生部批准的食用级益生菌,具有重要的益生功能,已被广泛地应用于食品与发酵行业,因此,研究其高密度发酵具有重要的意义。该研究首先探索了批培养、批... 罗伊式乳杆菌作为美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)和国家卫生部批准的食用级益生菌,具有重要的益生功能,已被广泛地应用于食品与发酵行业,因此,研究其高密度发酵具有重要的意义。该研究首先探索了批培养、批补料培养和灌流浓缩培养对罗伊氏乳杆菌发酵生物量的影响,然后以灌流浓缩培养方式探究发酵过程中培养条件对发酵液中活菌数的影响。结果表明:灌流浓缩培养相比于批培养和批补料培养,能极大地延长菌株对数生长期的持续时间,活菌数高达2.98×10^(15)CFU/mL,菌体干重较前两者分别提高了5.3和3.6倍;在通气(氧含量恒定设定为15%)、恒pH为5.5、流速40 mL/min的条件下灌流培养,活菌数最高达8.1×10^(15)CFU/mL,菌体干重为60.96 g/L,相比于未通气和不维持恒定pH值的发酵方式,菌体干重分别提高了2.72和1.07倍。综上结果表明,灌流浓缩培养方式能实现罗伊氏乳杆菌高密度发酵,活菌数和产量都凸显出巨大的优势,该研究为罗伊氏乳杆菌的高效制备奠定了较好的基础。 展开更多
关键词 罗伊氏乳杆菌 高密度发酵 浓缩培养
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杂交瘤细胞培养中摄氧速率(OUR)的在线检测及其与细胞生长及代谢的关系 被引量:1
20
作者 冯强 米力 +2 位作者 李玲 王贤辉 陈志南 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期593-597,共5页
在批式及灌流培养条件下研究了杂交瘤细胞在无血清培养基中的生长、代谢情况与氧消耗的关系。应用动力学方法在线进行OUR的检测 ,同时离线取样检测其他参数。结果发现OUR与谷氨酰胺的消耗、抗体的生成及活细胞密度间有明显的相关关系 ,... 在批式及灌流培养条件下研究了杂交瘤细胞在无血清培养基中的生长、代谢情况与氧消耗的关系。应用动力学方法在线进行OUR的检测 ,同时离线取样检测其他参数。结果发现OUR与谷氨酰胺的消耗、抗体的生成及活细胞密度间有明显的相关关系 ,进一步的分析还发现在对数生长期 ,OUR与活细胞密度间具有良好的线性关系 ,qOUR=(0 .10 3± 0 .0 2 8)× 10 - 1 2 mol cell h ,可以通过它来进行细胞密度的在线检测。并通过以ΔOUR 展开更多
关键词 杂交瘤细胞 摄氧速率 在线检测 细胞密度 谷氨酰胺 灌流培养 细胞培养
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