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Chir99021调控Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠牙髓干细胞成骨诱导分化的机制
1
作者 谢惠兰 方芳 林毅 《解剖学报》 CAS CSCD 2024年第1期67-72,共6页
目的探讨Chir99021对大鼠牙髓干细胞(DPSCs)成骨诱导分化的影响及机制。方法原代分离大鼠DPSCs,利用荧光免疫法进行验证。设置不同浓度的Chir99021,通过CCK-8检测细胞增殖情况挑选最适浓度。利用茜素红染色验证细胞成骨诱导分化。最后通... 目的探讨Chir99021对大鼠牙髓干细胞(DPSCs)成骨诱导分化的影响及机制。方法原代分离大鼠DPSCs,利用荧光免疫法进行验证。设置不同浓度的Chir99021,通过CCK-8检测细胞增殖情况挑选最适浓度。利用茜素红染色验证细胞成骨诱导分化。最后通过Real-time PCR、Western blotting检测成骨诱导分化相关基因与蛋白无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)、无翅型MMTV整合位点家族成员3A(Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)、轴抑制蛋白2抗体(Axin2)、骨钙素(OCN)、牙本质基质蛋白1(DMP1)的mRNA和蛋白表达情况。结果牙本质涎磷蛋白(DSPP)和干细胞标记物波形蛋白(vimentin)阳性表达,说明大鼠DPSCs分离成功。大鼠DPSCs成骨诱导后钙沉积物显著上升,加入糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的小分子抑制剂Chir99021后钙沉积物明显减少。大鼠DPSCs成骨诱导分化后Wnt1、Wnt3a、β-catenin、Axin2、OCN和DMP1表达明显上升,而加入Chir99021后Wnt1、Wnt3a、β-catenin、Axin2、OCN和DMP1蛋白表达均显著下降。结论Chir99021对诱导7 d后的大鼠DPSCs成骨诱导分化有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 成骨诱导分化 Chir99021 实时定量聚合酶链反应 大鼠
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活化α7乙酰胆碱受体促进LPS刺激的人牙髓干细胞牙/骨向分化
2
作者 李梦圆 王宇萌 +4 位作者 徐青清 关卓 卞成玥 江飞 张光东 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第2期145-153,共9页
目的:探讨活化α7乙酰胆碱受体(alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor,α7-nAChR)联合钙离子(calcium ion,Ca^(2+)对LPS刺激的人牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)牙/骨向分化的影响。方法:分离培养DPSC,流式细胞术对DPSC进... 目的:探讨活化α7乙酰胆碱受体(alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor,α7-nAChR)联合钙离子(calcium ion,Ca^(2+)对LPS刺激的人牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)牙/骨向分化的影响。方法:分离培养DPSC,流式细胞术对DPSC进行表面标志物表达鉴定。CCK-8检测α7-nAChR激动剂PNU-282987和Ca^(2+)对DPSC增殖的影响。通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和染色筛选PNU-282987促进DPSC表达ALP活性的最佳浓度。用大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)模拟炎性微环境刺激DPSC。采用免疫印迹分析(Western blot,WB)、实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)和茜素红染色等方法检测牙/骨向分化的相关蛋白:Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,COL-I)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialoprotein,DSPP)、骨钙素(osteopontin,OPN)、ALP、核心转录因子-2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX),相关基因(COL-I、DSPP、OPN、ALP、RUNX2、OSX)和矿化基质表达情况。Fura-2AM用于检测细胞内Ca^(2+)流动情况。结果:CCK-8实验显示,PNU-282987浓度低于10μmol/L时对细胞增殖无抑制作用,且此浓度处理LPS刺激的DPSC后ALP活性增加最明显;Ca^(2+)浓度低于2 mmol/L对细胞增殖无抑制作用;Western blot和RT-qPCR实验显示,PNU-282987及Ca^(2+)处理后的LPS刺激的DPSC牙/骨向分化相关蛋白(COL-I、DSPP、OPN、ALP、RUNX2、OSX)和相关基因(COL-I、DSPP、OPN、ALP、RUNX2、OSX)的表达及矿化基质形成均明显上调,二者联合后上调最显著(P <0.001)。Fura-2 AM钙离子探针结果显示DPSC细胞内Ca^(2+)浓度增加。结论:10μmol/L PNU-282987联合2 mmol/L Ca^(2+)可以促进LPS刺激的DPSC的牙/骨向分化能力。 展开更多
关键词 α7乙酰胆碱受体 牙/骨向分化 人牙髓干细胞 钙离子 脂多糖
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DSPP与BMP-2在牙髓干细胞修复再生牙髓牙本质复合体中的表达及意义
3
作者 铁晓敏 钟良军 刘奕杉 《健康研究》 CAS 2024年第2期187-191,F0003,共6页
目的 探讨牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)与骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)在第三代同质异体牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSCs)再生修复牙髓牙本质复合体后的表达和意义,为年轻恒牙牙... 目的 探讨牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)与骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)在第三代同质异体牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSCs)再生修复牙髓牙本质复合体后的表达和意义,为年轻恒牙牙髓根尖周疾病提供新的诊疗思路。方法 18只SD大鼠随机分为实验组和对照组,两组均在全麻下摘除大鼠上颌双侧第一磨牙冠髓,实验组同期髓腔定植体外培养的同质异体大鼠牙髓干细胞,对照组冠髓摘除后不进行任何处理,术后均使用玻璃离子充填封闭髓腔。两组动物均于术后2、4、6周处死,取其上颌骨进行免疫组织化学方法检测DSPP和BMP-2的表达。结果 术后2、4、6周时,实验组牙髓牙本质复合体处的DSPP、BMP-2的表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 同质异体牙髓干细胞再植后会增加牙髓牙本质复合体处的DSPP和BMP-2的表达,有助于修复再生牙髓牙本质复合体。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 牙本质涎磷蛋白 骨形态发生蛋白-2
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依普黄酮促进人牙髓干细胞增殖和成骨分化
4
作者 乐曼妮 王小聪 +5 位作者 黄子璇 张慧琳 张晓月 赵卿 李明 王基栋 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期310-314,共5页
目的:初步检测依普黄酮(IP)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)的增殖和成骨向分化的影响。方法:在体外对hDPSCs进行培养鉴定,用含IP(10^(-9)~10^(-5) mol/L)的完全培养液培养hDPSCs,CCK-8法检测不同时间点(1、2、3 d... 目的:初步检测依普黄酮(IP)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)的增殖和成骨向分化的影响。方法:在体外对hDPSCs进行培养鉴定,用含IP(10^(-9)~10^(-5) mol/L)的完全培养液培养hDPSCs,CCK-8法检测不同时间点(1、2、3 d)的细胞活性;用含IP(10-8~10^(-5) mol/L)的矿化诱导液诱导hDPSCs 7 d,通过碱性磷酸酶活性测定、ALP染色、茜素红染色及RT-qPCR检测IP对hDPSCs成骨分化的影响。结果:CCK-8检测结果表明10^(-9)~10^(-5) mol/L IP均可促进hDPSCs增殖,其中10^(-6) mol/L IP组促进增殖效果最佳(P<0.05);10^(-6) mol/L IP组ALP染色加深,ALP活性增高(P<0.05),矿化结节增多(P<0.05);RT-qPCR检测结果显示10^(-6) mol/L IP组能够提高成骨分化相关基因骨钙素(osteocalcin,OCN)、碱性磷酸酶和矮小相关转录基因2的表达水平(P<0.05)。结论:10^(-6) mol/L IP能提高hDPSCs增殖和成骨向分化的能力。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 增殖 成骨分化 依普黄酮
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miR-26b对人脱落乳牙牙髓干细胞及人脐带间充质干细胞增殖、迁移和成骨分化的影响
5
作者 袁媛园 潘露 +3 位作者 周绍兰 梁燕 许键炜 徐文 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第13期2017-2023,共7页
背景:microRNA-26b(miR-26b)对干细胞的多种功能具有重要的调节作用,但其对人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞生物学特性的影响尚不清楚。目的:探讨miR-26b对人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞增殖、迁移和成骨分化的... 背景:microRNA-26b(miR-26b)对干细胞的多种功能具有重要的调节作用,但其对人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞生物学特性的影响尚不清楚。目的:探讨miR-26b对人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞增殖、迁移和成骨分化的影响。方法:培养及鉴定人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞;用miR-26 mimics(实验组)和miRNAs mimics对照(对照组)转染2种细胞,构建过表达模型用于后续实验。CCK-8法检测过表达miR-26b细胞的增殖能力;Transwell和划痕实验分析过表达miR-26b细胞的迁移能力;RT-qPCR法检测过表达miR-26b细胞成骨诱导后成骨标志物的表达。结果与结论:①转染miR-26b模拟物可提高2种细胞中miR-26b表达量,促进人脱落乳牙牙髓干细胞增殖,对人脐带间充质干细胞的扩增无明显影响;②相较于对照组,2种细胞过表达miR-26b后迁移能力增强;③miR-26b在2种细胞成骨分化过程中表达水平降低;④相较于对照组,2种细胞过表达miR-26b后,成骨相关基因骨钙素、骨桥素、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原蛋白mRNA水平均下调。结果表明,过表达miR-26b能促进人脱落乳牙牙髓干细胞增殖、迁移,抑制其成骨分化;也促进人脐带间充质干细胞迁移,抑制其成骨分化,但对其增殖无明显影响。 展开更多
关键词 miR-26b 人脱落乳牙牙髓干细胞 人脐带间充质干细胞 迁移 增殖 成骨分化
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过表达Sema3A促进牙髓干细胞和MC3T3-E1的成骨分化
6
作者 王雯 郑芃芃 +2 位作者 孟浩浩 刘浩 袁长永 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第7期993-999,共7页
背景:Sema3A是一种强有力的骨保护因子。目前,关于Sema3A基因修饰牙髓干细胞(pulp stem cells,DPSCs)在骨再生方面的研究较少。目的:探讨Sema3A修饰的DPSCs(Sema3A-DPSCs)的成骨分化能力,及其对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化的调控作用... 背景:Sema3A是一种强有力的骨保护因子。目前,关于Sema3A基因修饰牙髓干细胞(pulp stem cells,DPSCs)在骨再生方面的研究较少。目的:探讨Sema3A修饰的DPSCs(Sema3A-DPSCs)的成骨分化能力,及其对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化的调控作用。方法:首先,使用慢病毒载体将Sema3A基因转导至DPSCs构建Sema3A-DPSCs,以对照慢病毒处理的DPSCs(Vector-DPSCs)为对照,然后将Sema3A-DPSCs或Vector-DPSCs与前成骨细胞系MC3T3-E1以1∶1及1∶3比例共培养24 h,最后将单独培养的Sema3A-DPSCs、Vector-DPSCs以及二者与MC3T3-E1共培养细胞进行成骨诱导分化,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色、实时定量RT-PCR检测成骨基因表达评价成骨分化能力。结果与结论:(1)Sema3A-DPSCs中Sema3A m RNA及蛋白表达水平显著上调,细胞上清液中分泌型Sema3A水平上调;(2)与Vector-DPSCs相比,Sema3A-DPSCs中成骨相关基因碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨钙素、Sp7转录因子的m RNA表达上调,碱性磷酸酶活力增强,矿化结节形成增多;(3)Vector-DPSCs与Sema3A-DPSCs的增殖能力无显著差异;(4)相比于MC3T3-E1/Vector-DPSCs共培养体系,MC3T3-E1/Sema3A-DPSCs共培养体系中MC3T3-E1细胞的成骨相关基因表达上调,总的碱性磷酸酶活性增强并有更多矿化结节形成;(5)结果提示:过表达Sema3A可增强DPSCs的成骨分化能力;在DPSCs中过表达Sema3A可促进DPSCs/MC3T3-E1共培养体系中MC3T3-E1成骨分化。 展开更多
关键词 干细胞治疗 基因治疗 SEMA3A 牙髓干细胞 成骨细胞 成骨分化
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重组人生长激素促进人牙髓干细胞的成骨分化
7
作者 孙菁 廖健 +2 位作者 孙江龄 程萍 冯红超 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第1期56-61,共6页
背景:既往研究表明人牙髓干细胞具有良好的成骨分化潜能,是骨组织工程中潜在的种子细胞,目前重组人生长激素对人牙髓干细胞的增殖及成骨分化的作用尚不明确。目的:探究重组人生长激素对人牙髓干细胞增殖及成骨分化的影响。方法:采用组... 背景:既往研究表明人牙髓干细胞具有良好的成骨分化潜能,是骨组织工程中潜在的种子细胞,目前重组人生长激素对人牙髓干细胞的增殖及成骨分化的作用尚不明确。目的:探究重组人生长激素对人牙髓干细胞增殖及成骨分化的影响。方法:采用组织块培养法分离培养人牙髓干细胞,根据药物浓度梯度筛选后,选取10,100,250,500,1000μg/L重组人生长激素干预为实验组,正常培养基培养为对照组。在干预后第1,3,5,7天采用CCK-8法检测人牙髓干细胞的增殖情况。选取含10,100,250,500,1000μg/L重组人生长激素的成骨诱导液干预人牙髓干细胞,在诱导第7天,采用碱性磷酸酶染色及其半定量分析法检测碱性磷酸酶活性,采用荧光定量RT-qPCR检测成骨相关基因Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素、Runt相关转录因子2的mRNA表达,在诱导第14天,采用茜素红染色观察成骨矿化情况。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,从干预第3天开始,100,250,500,1000μg/L重组人生长激素均能促进人牙髓干细胞增殖,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.01);②与对照组比较,100,250,500μg/L重组人生长激素组人牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性显著升高(P<0.01);100,250μg/L重组人生长激素组人牙髓干细胞的茜素红染色矿化结节数显著增多(P<0.01);250μg/L重组人生长激素组Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素的mRNA表达量升高(P<0.05,P<0.01),100,250μg/L重组人生长激素组Runt相关转录因子2的mRNA表达量升高(P<0.01);③上述结果表明,250μg/L重组人生长激素更适合促进人牙髓干细胞增殖和成骨分化。 展开更多
关键词 间充质干细胞 人牙髓干细胞 生长激素 重组人生长激素 细胞增殖 成骨 分化
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可溶性环氧化物水解酶抑制剂对暴露于HEMA的人牙髓干细胞细胞迁移及成牙分化的影响
8
作者 罗加欣 黄旌 +2 位作者 王渝灵 冯燕 党海霞 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期166-171,共6页
目的:探讨在树脂单体甲基丙烯酸羟乙酯(2-hydroxyethyl methacrylate, HEMA)暴露环境下,可溶性环氧化物水解酶抑制剂(TPPU)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs)迁移及成牙分化的影响。方法:分离提取hDPSCs,并利用茜... 目的:探讨在树脂单体甲基丙烯酸羟乙酯(2-hydroxyethyl methacrylate, HEMA)暴露环境下,可溶性环氧化物水解酶抑制剂(TPPU)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs)迁移及成牙分化的影响。方法:分离提取hDPSCs,并利用茜素红染色和流式细胞仪鉴定其干性。以无添加药物的诱导培养基为对照组,以HEMA、HEMA+TPPU为实验组,利用CCK-8检测细胞活性;利用细胞划痕实验检测细胞迁移;利用碱性磷酸酶染色法进行染色,并检测碱性磷酸酶(ALP)活性;利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成牙分化相关基因Runt相关转录因子2(Runx2)、牙本质基质蛋白-1(DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(DSPP)的相对表达;利用茜素红染色检测矿化结节形成情况。结果:HEMA组细胞活性较对照组显著降低(P<0.05),HEMA+TPPU组较HEMA组增加(P<0.05)。HEMA组细胞迁移率较对照组显著降低(P<0.05),HEMA+TPPU组较HEMA组增加(P<0.05)。在成牙诱导分化过程中,用2 mmol/L的HEMA处理细胞后,ALP活性较对照组降低(P<0.05),相关成牙分化基因表达也显著降低(P<0.05)。而HEMA+TPPU组ALP活性较HEMA组显著升高(P<0.05),且基因Runx2、DMP-1、DSPP表达也显著增加(P<0.05)。此外茜素红染色结果也显示HEMA+TPPU组和对照组的相对钙含量均较HEMA组显著升高(P<0.05)。结论:HEMA可在一定程度上抑制hDPSCs的细胞迁移和成牙分化能力,而TPPU可部分逆转HEMA对细胞迁移和成牙分化能力的抑制作用。 展开更多
关键词 可溶性环氧化物水解酶抑制剂 HEMA 牙髓干细胞 细胞迁移 成牙分化
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脂多糖和肿瘤坏死因子α对人牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响
9
作者 刘岩 刘昕昕 +2 位作者 石刘 李婉怡 费立崑 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第3期340-346,共7页
目的探讨脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖和分化的影响。方法体外分离培养hDPSCs,分别用不同浓度LPS(0,0.1,1,10μg/mL)和TNF-α(0,1,10,100 ng/mL)培养细胞。培养24,48,72 h,应用细胞计数试剂盒-8(CCK... 目的探讨脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖和分化的影响。方法体外分离培养hDPSCs,分别用不同浓度LPS(0,0.1,1,10μg/mL)和TNF-α(0,1,10,100 ng/mL)培养细胞。培养24,48,72 h,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测hDPSCs增殖活性变化;培养7,14,21 d应用茜素红(AR)染色试剂盒和5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)碱性磷酸酯酶(ALP)显色试剂盒检测hDPSCs肉眼观AR染色变化、钙结节定量、ALP染色和ALP活性等成骨分化指标。结果①CCK-8实验显示1,10,100 ng/mL TNF-α作用于hDPSCs 24,48,72 h后细胞增殖活力降低(P<0.05)。AR成骨诱导染色结果显示培养7,14 d,TNF-α各浓度组肉眼观AR染色无明显差异;培养21 d,10 ng/mL和100 ng/mL TNF-α组矿化程度相比0 ng/mL组低(P<0.05)。ALP染色和ALP活性试剂盒分析显示诱导培养7,14,21 d后,相比0 ng/mL组,1 ng/mL,10 ng/mL和100 ng/mL TNF-α组ALP染色变浅,且ALP活性降低(P<0.05)。②CCK-8实验显示不同浓度LPS作用hDPSCs 24 h和48 h后细胞增殖活性没有明显差异,而1μg/mL和10μg/mL组LPS作用hDPSCs 72 h后OD_(450)值大于0μg/mL组(P<0.05)。ALP成骨诱导染色显示培养7,14,21 d,不同浓度LPS作用后ALP染色和ALP活性变化不明显。AR成骨诱导染色显示培养7 d,LPS各浓度组的矿化程度不明显;10μg/mL LPS培养14,21 d矿化程度较0μg/mL低(P<0.05)。结论LPS对hDPSCs成骨分化的影响取决于LPS浓度和作用时间,高浓度LPS促进hDPSCs增殖。TNF-α抑制hDPSCs的增殖和成骨分化。 展开更多
关键词 脂多糖 肿瘤坏死因子Α 人牙髓干细胞 牙髓炎 成骨分化
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METTL7A通过m6A甲基化调控牙髓干细胞的衰老和成骨/成牙分化
10
作者 王宁 马华瑞 +1 位作者 苏丽 余日月 《口腔生物医学》 2024年第1期26-31,共6页
目的:探索甲基转移酶样7A(METTL7A)通过N6-甲基腺苷(m6A)甲基化对牙髓干细胞(DPSCs)衰老和成骨/成牙分化的影响。方法:利用慢病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定敲低的DPSCs,利用逆转录病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定过表达的DPSCs,实时荧光定... 目的:探索甲基转移酶样7A(METTL7A)通过N6-甲基腺苷(m6A)甲基化对牙髓干细胞(DPSCs)衰老和成骨/成牙分化的影响。方法:利用慢病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定敲低的DPSCs,利用逆转录病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定过表达的DPSCs,实时荧光定量PCR和Western blot实验检测敲低及过表达效率。在此基础上,利用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色及定量检测METTL7A是否调控DPSCs的衰老,斑点杂交实验检测METTL7A是否调控DPSCs的m6A甲基化水平。METTL7A过表达组加入m6A甲基化抑制剂环亮氨酸(Cyc)后,利用SA-β-gal染色及定量检测和碱性磷酸酶(ALP)活性实验检测METTL7A通过m6A甲基化调控DPSCs的衰老和成骨/成牙分化。结果:利用慢病毒转染DPSCs,与对照组(Consh)相比,METTL7A基因和蛋白在METTL7A敲低组(METTL7Ash)的表达显著降低(P<0.01),METTL7Ash组的SA-β-gal染色及定量检测发现阳性细胞数量增加(P<0.05);利用逆转录病毒转染DPSCs,与对照组(Vector)相比,METTL7A在METTL7A过表达(HA-METTL7A)组的表达显著增加(P<0.01),HA-METTL7A组的SA-β-gal染色及定量检测显示阳性细胞数量减少(P<0.01)。此外,相比于Consh组,METTL7Ash组DPSCs的m6A甲基化修饰水平显著降低,而过表达METTL7A组DPSCs的m6A甲基化修饰水平明显升高。在此基础上,在METTL7A过表达组加入Cyc,SA-β-gal染色及其定量检测显著增加因METTL7A过表达而减少的阳性细胞数量(P<0.01),同时也显著抑制因METTL7A过表达促进的ALP活性(P<0.05)。结论:METTL7A可能通过调控m6A甲基化水平抑制DPSCs的衰老并促进其成骨/成牙分化。 展开更多
关键词 METTL7A m6A甲基化 牙髓干细胞 衰老 成骨/成牙分化
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牙髓干细胞及其组织工程在活髓保存中的应用
11
作者 贾晓玲 章慧 《医药前沿》 2024年第6期31-34,共4页
组织工程方法正越来越多地被应用于牙齿的活髓保存术中,许多口腔干细胞与可生物降解的支架结合植入,取得了良好的组织再生效果。其中牙髓干细胞(DPSCs)能参与牙髓损伤的修复过程并继续形成牙本质,牙本质作为牙髓组织的物理保护屏障,对... 组织工程方法正越来越多地被应用于牙齿的活髓保存术中,许多口腔干细胞与可生物降解的支架结合植入,取得了良好的组织再生效果。其中牙髓干细胞(DPSCs)能参与牙髓损伤的修复过程并继续形成牙本质,牙本质作为牙髓组织的物理保护屏障,对牙髓组织的正常功能至关重要。本文通过文献检索归纳近5年来应用DPSCs组织工程方法的研究成果,总结DPSCs在成血管、神经及再生牙本质中的作用,并和许多组织工程支架结合讨论其综合效果,包括不同细胞因子或成分对组织工程支架性能的可控性调节探索,为临床DPSCs及其组织工程在活髓保存中的应用提供依据。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 活髓保存 牙髓再生 组织工程支架 性能可控调节
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处理牙本质基质浸提液对牙髓干细胞成牙分化的影响 被引量：1
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作者 李锐 付昊杰 +1 位作者 孙晶晶 郑廉 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2023年第3期310-315,共6页
目的:观察处理牙本质基质(TDM)浸提液对牙髓干细胞(DPSC)成牙分化的诱导作用及可能机制。方法:取健康离体牙,采用梯度脱矿法制备TDM并收集TDM浸提液。将分离培养的DPSC分为2组,分别用正常培养基(正常对照组)和TDM浸提液(TDM组)培养7 d... 目的:观察处理牙本质基质(TDM)浸提液对牙髓干细胞(DPSC)成牙分化的诱导作用及可能机制。方法:取健康离体牙,采用梯度脱矿法制备TDM并收集TDM浸提液。将分离培养的DPSC分为2组,分别用正常培养基(正常对照组)和TDM浸提液(TDM组)培养7 d。采用Western blot法检测2组细胞中成牙相关蛋白(DSPP、DMP-1、Runx2、ALP),GSK3β,磷酸化GSK3β(Ser9)及活化的β-catenin蛋白的表达,采用免疫荧光染色定位活化的β-catenin。结果:与正常对照组比较,TDM组成牙相关蛋白表达均升高,GSK3β磷酸化水平与活化的β-catenin蛋白表达升高(P<0.05);免疫荧光染色结果显示活化的β-catenin定位在细胞核中,且TDM组活化的β-catenin荧光强度强于正常对照组。结论:TDM浸提液可以促进DPSC成牙分化,其机制可能与抑制GSK3β、激活Wnt/β-catenin信号通路有关。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 处理牙本质基质 糖原合成酶激酶-3Β WNT/Β-CATENIN信号通路
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不同来源条件培养基对人牙髓干细胞增殖的影响
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作者 杨燕 王静娴 +4 位作者 张荣红 李晨 范安然 崔冬冰 吴淑梅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第1期49-53,共5页
背景:利用条件培养基与人牙髓干细胞共培养,初步探索可以快速促进人牙髓干细胞增殖的方法,为今后细胞治疗、扩增高质量种子细胞提供研究基础。目的:初步探究不同来源条件培养基对人牙髓干细胞增殖的影响。方法:体外分离培养人牙髓干细胞... 背景:利用条件培养基与人牙髓干细胞共培养,初步探索可以快速促进人牙髓干细胞增殖的方法,为今后细胞治疗、扩增高质量种子细胞提供研究基础。目的:初步探究不同来源条件培养基对人牙髓干细胞增殖的影响。方法:体外分离培养人牙髓干细胞,并用流式细胞术鉴定。然后将胎牛血清超高速低温离心产物、骨折患者尿液超高速低温离心产物、骨髓来源树突状细胞体外培养上清液、人皮肤成纤维细胞培养上清液与低糖DMEM培养液配置成条件培养基后,再分别与人牙髓干细胞共培养,使用细胞无标记培养观察装置(BioStation-T)连续拍摄各组细胞生长72 h的照片、使用实时无标记细胞分析仪(RTCA)动态监测150 h,比较各组细胞的标准化细胞指数值的差异。结果与结论:①人牙髓干细胞为典型的间充质干细胞形态,表达间充质干细胞表面标志物CD90和CD105,不表达CD34和CD45;②细胞无标记培养观察装置动态监测时,发现胎牛血清超高速低温离心组的颗粒物质被吸收时间要显著早于其他实验组和空白对照组;③在实时无标记细胞分析仪检测时,与空白对照组相比,胎牛血清超高速低温离心组、骨髓来源树突状细胞体外培养上清液组、人皮肤成纤维细胞培养上清液组的标准化细胞指数值均显著升高(P<0.001),骨折患者尿液超高速低温离心组的标准化细胞指数值显著降低(P<0.001);④结果表明,胎牛血清超高速低温离心产物、骨髓来源树突状细胞体外培养上清液、人皮肤成纤维细胞培养上清液所配置的条件培养基能促进人牙髓干细胞增殖,其中胎牛血清超高速低温离心产物所配置的条件培养基对细胞还有一定保护作用。 展开更多
关键词 人牙髓干细胞 超高速低温离心 条件培养基 细胞增殖 标准化细胞指数 组织块培养法
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BMP-2蛋白通过Smad途径对牙髓干细胞成牙本质分化的作用机制研究
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作者 王晔 于淼 +2 位作者 张丞 张婉君 马永平 《中国美容医学》 CAS 2023年第2期1-5,共5页
目的:探讨骨形成蛋白2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对牙髓干细胞成牙本质分化的影响及对Smad1/5通路的调节作用。方法:取对数生长期的人牙髓干细胞,配制成密度为3×10^(4)个/毫升的细胞悬液,接种于24孔板,置于培养箱中培... 目的:探讨骨形成蛋白2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对牙髓干细胞成牙本质分化的影响及对Smad1/5通路的调节作用。方法:取对数生长期的人牙髓干细胞,配制成密度为3×10^(4)个/毫升的细胞悬液,接种于24孔板,置于培养箱中培养至细胞密度约为80%时,将细胞随机分为对照组、单纯诱导组和抑制剂组。对照组细胞不做任何处理,单纯诱导组细胞用浓度为100 ng/ml的BMP-2诱导液(BMP-2溶于DMEM培养基)培养,抑制剂组细胞先用200 nmol/L的Smad1/5抑制剂LDN-193189处理24 h后,更换为BMP-2诱导液,培养14 d后,CCK-8检测人牙髓干细胞活性、qRT-PCR检测牙本质基质蛋白1(DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(DSPP)mRNA相对表达量、检测碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色观察矿化结节情况、蛋白印迹法检测BMP-2和p-Smad1/5蛋白相对表达量。结果:单纯诱导组矿化结节明显,抑制剂组矿化结节减少;与对照组比较,单纯诱导组牙髓干细胞活性、ALP活性增强,DMP-1和DSPP mRNA相对表达量、BMP-2和p-Smad1/5蛋白相对表达量升高(P<0.05);与单纯诱导组比较,抑制剂组牙髓干细胞活性、ALP活性减弱,DMP-1和DSPP mRNA相对表达量、BMP-2和p-Smad1/5蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论:BMP-2可诱导人牙髓干细胞成牙本质分化,可能是通过调节Smad1/5信号通路发挥作用。 展开更多
关键词 牙髓干细胞成牙本质分化 骨形成蛋白2 Smad1/5 调节作用 信号通路
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骨碎补总黄酮对乳牙牙髓干细胞增殖及成骨向分化的影响
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作者 李春梅 高艳宇 李慧 《系统医学》 2023年第3期32-35,共4页
目的初步探索不同浓度骨碎补总黄酮(total flavone of rhizoma drynariae)对乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth)增殖及成骨分化能力的影响。方法2020年3月—2021年8月黑龙江省医院检验科初步筛选出适宜... 目的初步探索不同浓度骨碎补总黄酮(total flavone of rhizoma drynariae)对乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth)增殖及成骨分化能力的影响。方法2020年3月—2021年8月黑龙江省医院检验科初步筛选出适宜浓度的RDTF,三代分离、培养SHEDs,通过流式细胞术及茜素红染色分别对细胞表面标志物和成骨分化潜能进行鉴定。实验分为4组(0时段为对照组,24、48、72 h组),每组设置3个复孔,采用不同浓度RDTF处理SHEDs后钙钴法染色,Western blot法检测其成骨相关蛋白表达情况。结果结果显示,所获取的细胞为具有成骨分化能力的SHEDs。与对照组相比,24、48、72 h内各浓度组均对SHEDs增殖无明显影响,差异无统计学意义(P>0.05),12.5、25 mg/L RDTF组的Runt相关转录因子2(Runx2)及骨钙素(OCN)的蛋白表达均显著上调,其中25 mg/L RDTF组对Runx2表达的促进效果最明显(249.681±14.653),差异有统计学意义(F=102.7,P<0.001)。结论RDTF对SHEDs的增殖无显著影响,可促进SHEDs成骨分化。 展开更多
关键词 骨碎补总黄酮 骨缺损 乳牙牙髓干细胞 增殖 成骨分化
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乳牙牙髓干细胞分化前后的外泌体miRNA筛选研究
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作者 黄燕华 刘澍 李言凤 《医学研究杂志》 2023年第4期83-88,97,共7页
目的 分析乳牙牙髓干细胞分化前后的外泌体中miRNA差异表达谱。方法 原代提取乳牙牙髓干细胞,在矿化诱导培养基中进行分化。超速离心法提纯外泌体并进行鉴定;利用miRNA基因芯片检测分化前后的外泌体中miRNA的表达谱,验证差异表达的miRNA... 目的 分析乳牙牙髓干细胞分化前后的外泌体中miRNA差异表达谱。方法 原代提取乳牙牙髓干细胞,在矿化诱导培养基中进行分化。超速离心法提纯外泌体并进行鉴定;利用miRNA基因芯片检测分化前后的外泌体中miRNA的表达谱,验证差异表达的miRNA,预测其靶基因,进行GO分析和KEGG通路的功能分析。结果 在未分化和分化的乳牙牙髓干细胞的外泌体中共发现215个差异表达的miRNA,最相关的KEGG通路为FoxO、Ras和MAPK等信号通路。GO分析包括多细胞生物的发育和结构形态发生的调控。结论 乳牙牙髓干细胞分化前后的外泌体miRNA可能会参加调控成牙本质向分化过程,为牙髓修复提供了理论依据。 展开更多
关键词 乳牙牙髓干细胞 成牙本质向分化 外泌体 微RNA
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葛根素通过Wnt/β-catenin信号通路对牙髓干细胞的增殖及成骨向分化的作用机制研究
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作者 杨盼盼 马鹏涛 郑蕾 《口腔颌面修复学杂志》 2023年第1期13-19,共7页
目的:探讨葛根素对牙髓干细胞体外增殖及成骨向分化的影响及其可能作用机制。方法:分离人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,h DPSCs)并培养鉴定,使用不含葛根素及含不同浓度葛根素(0.01、0.1、1、10μmol/L)的培养液干预,CCK-8... 目的:探讨葛根素对牙髓干细胞体外增殖及成骨向分化的影响及其可能作用机制。方法:分离人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,h DPSCs)并培养鉴定,使用不含葛根素及含不同浓度葛根素(0.01、0.1、1、10μmol/L)的培养液干预,CCK-8法检测细胞增殖情况,筛选出最佳作用浓度;将细胞分为阴性对照组、阳性对照组及实验组,茜素红染色观察并分析各组h DPSCs矿化沉积情况,比色分析法检测各组细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性以评估葛根素对h DPSCs成骨向分化的影响;免疫荧光染色检测β-catenin细胞内表达情况;Western blot技术检测通路相关蛋白和细胞周期素D1(Cyclin D1)、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的蛋白表达水平。结果:经成骨化诱导及成脂化诱导检测,体外分离并培养、传代细胞为h DPSCs,具有成骨向分化潜能,可用于后续试验;CCK8检测结果显示,与不含葛根素组比较,0.01、0.1、1、10μmol/L葛根素组细胞吸光度值均升高,且1μmol/L葛根素作用下的细胞吸光度值最高(P<0.05);与阴性对照组比较,阳性对照组及实验组h DPSCs矿化沉积明显,矿化结节量、ALP活性升高(P<0.05),β-catenin在细胞质中强烈表达,h DPSCs中Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、RUNX2、OCN蛋白表达水平升高(P<0.05),GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05);与阳性对照组比较,实验组细胞矿化结节量及ALP活性升高,h DPSCs中除p-GSK-3β蛋白表达水平降低外,Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、RUNX2、OCN蛋白表达升高(P<0.05)。结论:葛根素可促进h DPSCs增殖及成骨向分化,其作用发挥机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 葛根素 牙髓干细胞 增殖 成骨向分化 WNT/Β-CATENIN信号通路
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骨再生过程中炎症因素与牙髓干细胞的双向作用
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作者 徐溶蔚 王浩 +2 位作者 付秋月 兰兴明 杨琨 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第33期5385-5393,共9页
背景:牙髓干细胞具有多向分化的优良特性,其中成骨分化潜能在骨组织工程和再生治疗中有较好的前景,而炎症因素与其关系密切。目的:综述骨再生过程中炎症因素与牙髓干细胞成骨分化双向作用的研究进展。方法:在PubMed、中国知网和万方数... 背景:牙髓干细胞具有多向分化的优良特性,其中成骨分化潜能在骨组织工程和再生治疗中有较好的前景,而炎症因素与其关系密切。目的:综述骨再生过程中炎症因素与牙髓干细胞成骨分化双向作用的研究进展。方法:在PubMed、中国知网和万方数据库中进行检索,中文检索词为“牙髓干细胞、炎症、成骨分化、骨再生”;英文检索词为“dental pulp stem cell*,dpsc*,inflam*,osteogenic differentiation,ossification,osteogenesis,bone formation”,分别检索2012-2022年发表的相关文献,最终纳入76篇进行综述分析。结果与结论:(1)牙髓干细胞作为牙源性间充质干细胞,有着众人熟知的多向分化特性,其中成骨分化潜能是骨组织工程的研究热点。(2)炎症因素不论是作为细胞所处的微环境、可调节的免疫炎症反应、抑或是需要再生修复的炎症性骨组织缺损疾病,都与牙髓干细胞介导的骨再生有着密切的关联,近年来也不乏相关的研究。(3)文章选取了近十年以来相关的文献报道,发现即使是发炎牙髓组织来源的炎症牙髓干细胞仍然保留一定的成骨分化潜能,而进一步分析骨再生过程中炎症因素与牙髓干细胞的双向关系,发现炎症因素对于牙髓干细胞成骨分化的影响和牙髓干细胞对于炎症的免疫调节都具有促进和抑制的双重作用,这主要与炎症递质的种类、浓度及作用时间等有关,但是具体机制都尚不全面。(4)近来学者的研究热点主要集中于探索介导炎症环境下牙髓干细胞成骨分化的促进因素,尤其是除了炎症递质以外的外源性因素如药物等。(5)也有一些动物实验和少数临床试验利用牙髓干细胞抗炎促成骨的特性验证了牙髓干细胞对炎症性骨缺损疾病尤其是对牙周炎和关节炎的治疗作用。(6)目前,骨再生过程中炎症因素与牙髓干细胞成骨分化双向作用的相关机制部分的研究还有较大的空缺,未来仍需进一步研究验证。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 炎症牙髓干细胞 炎症 成骨分化 骨再生 骨组织工程 治疗 综述
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白藜芦醇促进人乳牙牙髓干细胞的增殖和成骨分化
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作者 岳海云 孙银雪 毕迎春 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第19期3011-3016,共6页
背景:白藜芦醇是一种天然非黄酮类多酚化合物。研究表明,白藜芦醇具有抗氧化、抗炎、抗衰老和抗肿瘤等多种生物活性,并且能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,但其是否能调节乳牙牙髓干细胞的成骨分化尚不清楚。目的:研究白藜芦醇对人乳... 背景:白藜芦醇是一种天然非黄酮类多酚化合物。研究表明,白藜芦醇具有抗氧化、抗炎、抗衰老和抗肿瘤等多种生物活性,并且能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,但其是否能调节乳牙牙髓干细胞的成骨分化尚不清楚。目的:研究白藜芦醇对人乳牙牙髓干细胞增殖和成骨分化能力的影响。方法:组织块法分离培养人乳牙牙髓干细胞,不同浓度的白藜芦醇处理成骨诱导的人乳牙牙髓干细胞,CCK-8检测细胞活性,茜素红染色检测矿化结节数量,RT-qPCR检测成骨相关基因的mRNA表达及Western blot检测Runt相关转录因子2的蛋白水平。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,处理第3天时,较高浓度(20,40,80,100μmol/L)白藜芦醇显著抑制细胞增殖,因此,后续实验中选用1,5,10μmol/L白藜芦醇处理乳牙牙髓干细胞,检测其对成骨分化的作用;②与成骨诱导对照组相比,10μmol/L白藜芦醇组乳牙牙髓干细胞的矿化结节数量显著增多;③与成骨诱导对照组相比,10μmol/L白藜芦醇组乳牙牙髓干细胞的碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2和骨钙素的mRNA表达量升高;④与成骨诱导对照组相比,白藜芦醇组乳牙牙髓干细胞的Runt相关转录因子2蛋白水平呈浓度依赖性增加;⑤结果表明,适宜浓度的白藜芦醇可提高人乳牙牙髓干细胞的增殖和成骨分化能力。 展开更多
关键词 干细胞 间充质干细胞 牙髓干细胞 人乳牙牙髓干细胞 白藜芦醇 成骨 分化
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缺氧诱导因子1α基因修饰牙髓干细胞的体外成骨及成血管分化 被引量：1
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作者 唐娟 于栋林 +3 位作者 刘郭琦 宋娇娇 左金华 付洪海 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第24期3865-3870,共6页
背景:如何有效地修复和重建临界骨缺损是临床医学的难题。牙髓干细胞作为转基因靶细胞修复受损组织或器官具有一定优势。目的:探究缺氧诱导因子1α对牙髓干细胞体外成骨及成血管的作用。方法:选取临床上12-18岁患者因正畸治疗需要拔除... 背景:如何有效地修复和重建临界骨缺损是临床医学的难题。牙髓干细胞作为转基因靶细胞修复受损组织或器官具有一定优势。目的:探究缺氧诱导因子1α对牙髓干细胞体外成骨及成血管的作用。方法:选取临床上12-18岁患者因正畸治疗需要拔除的健康、完整双尖牙的牙髓组织分离、培养牙髓干细胞,实验组将缺氧诱导因子1α基因转染至牙髓干细胞,对照组不做任何处理,采用qPCR检测缺氧诱导因子1α的基因表达以及Western blot检测成骨及成血管因子的蛋白表达。结果与结论:(1)牙髓干细胞为短梭形的成纤维样细胞,细胞呈集落式生长。(2)缺氧诱导因子1α基因稳定转染至牙髓干细胞内,随着时间延长缺氧诱导因子1α基因表达逐渐增高,至14 d达到高峰,21 d明显降低。(3)与对照组相比,实验组的成血管相关因子表达水平更高。转染后1 d,血管内皮生成因子、基质细胞衍生因子1、促血管生成素2、胎盘生长因子蛋白表达明显增高,4 d达到高峰,随后实验组成血管相关蛋白表达虽略有降低,但与对照组相比明显增高。(4)与对照组相比,实验组的成骨相关因子表达水平更高。转染后1 d,人骨形态发生蛋白2、骨钙蛋白、Runt相关转录因子2蛋白表达明显增高,4 d达到高峰。(5)结果表明,缺氧诱导因子1α能够促进牙髓干细胞成骨及成血管因子的表达。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 缺氧诱导因子1Α 血管内皮生长因子 骨形态发生蛋白2 生长因子 基质细胞衍生因子1 血管生成素2
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