目的观察矿物三氧化物凝聚体(Mineral Trioxide Aggregate,MTA)和三种改良盖髓剂(nRoot、Vitapex、iRoot BP Plus)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖、分化为成牙本质细胞的促进作用。方法①不同浓度四种盖髓剂对hDPSCs增殖的促进作用观察。取...目的观察矿物三氧化物凝聚体(Mineral Trioxide Aggregate,MTA)和三种改良盖髓剂(nRoot、Vitapex、iRoot BP Plus)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖、分化为成牙本质细胞的促进作用。方法①不同浓度四种盖髓剂对hDPSCs增殖的促进作用观察。取第5代hDPSCs细胞分为MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组、Vitapex组及空白组,MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组、Vitapex组分别加入不同浓度(0.02、0.2、1、2 mg/mL)的MTA、iRoot BP Plus、nRoot和Vitapex培养液,空白组加入含10%FBS的DMEM/F12培养液。分别于培养24、48 h时,采用CCK-8法测算各组细胞增殖活性。②四种盖髓剂对hDPSCs分化为成牙本质细胞的促进作用观察。通过ALP活性检测筛选出四种材料对hDPSCs最适诱导浓度。取第4代hDPSCs分为五组:空白组、MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组和Vitapex组换为0.2 mg/mL的MTA、iRoot BP Plus、nRoot和Vitapex成骨培养基,空白组为正常成骨培养基。培养第21天时采用茜素红染色和半定量分析法观察各组细胞矿化结节形成情况,培养第7天时采用Western Blotting法检测细胞相关蛋白类核转录因子(Runt-related transcription factor 2,RUNX-2)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)以及牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP-1)。结果与空白组相比,培养第2天时0.02、0.2、1 mg/mL的MTA组、iRoot BP Plus在和nRoot组细胞增殖活性高(P均<0.05);与培养第1天时相比,培养第2天时2 mg/mL的MTA组和Vitapex组细胞增殖活性低(P均<0.05)。筛选0.2 mg/mL为后续受试浓度。与nRoot组和Vitapex组相比,iRoot BP Plus组和MTA组细胞钙沉积量高(P均<0.05)。与空白组相比,MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组和Vitapex组细胞OCN、RUNX-2、DSPP、DMP-1相对表达量均升高(P均<0.05);与nRoot组、Vitapex组相比,iRoot BP Plus组细胞OCN、RUNX-2、DSPP、DMP-1相对表达量均高(P均<0.05)。结论相比于MTA、Vitapex,nRoot和iRoot BP Plus更能促进hDPSCs的细胞增殖、诱导细胞分化为成牙本质细胞。展开更多
背景间充质干细胞来源的凋亡囊泡具有促进骨组织再生的作用,目前关于人牙髓干细胞凋亡囊泡(apoptotic vesicles derived from human dental pulp stem cells,hDPSC-apovs)用于骨组织再生的研究尚未见报道。目的探讨hDPSC-apovs对小鼠骨...背景间充质干细胞来源的凋亡囊泡具有促进骨组织再生的作用,目前关于人牙髓干细胞凋亡囊泡(apoptotic vesicles derived from human dental pulp stem cells,hDPSC-apovs)用于骨组织再生的研究尚未见报道。目的探讨hDPSC-apovs对小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,mBMSC)增殖和成骨分化能力的影响。方法原代培养、分离和鉴定hDPSC,采用星孢素(staurosporine,STS)诱导细胞凋亡,高速离心法分离hDPSC-apovs并鉴定。将mBMSC与不同浓度的hDPSC-apovs(0μg/mL、0.2μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、25μg/mL)进行共培养,CCK-8法检测不同浓度hDPSCapovs对mBMSC增殖能力的影响。mBMSC与不同浓度的hDPSC-apovs在成骨诱导培养基中共培养7 d后,茜素红染色分析钙结节形成,qPCR检测各组mBMSC的成骨分化相关基因Alp、Runx2、Spp1、Bglap的表达。结果与不含hDPSCapovs的对照组相比,0.2μg/mL、lμg/mL浓度hDPSC-apovs均能够促进mBMSC的增殖(P<0.05),而5μg/mL、25μg/mL浓度hDPSC-apovs则抑制mBMSC的增殖(P<0.05)。各浓度hDPSC-apovs处理组的钙结节形成量均高于对照组(P<0.05);qPCR结果显示,5μg/mL、25μg/mL组Alp、Runx2、Spp1、Bglap表达均上调(P<0.05),1μg/mL组只有Alp和Runx2表达上调,0.2μg/mL组仅有Alp表达水平上调(P<0.05)。结论在本研究浓度范围内,低浓度的hDPSC-apovs对mBMSC增殖具有促进作用,高浓度则表现为抑制作用;hDPSC-apovs对于mBMSC的成骨分化有一定促进作用,且不同浓度hDPSCapovs对成骨相关基因表达的影响不同。展开更多
文摘目的观察矿物三氧化物凝聚体(Mineral Trioxide Aggregate,MTA)和三种改良盖髓剂(nRoot、Vitapex、iRoot BP Plus)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖、分化为成牙本质细胞的促进作用。方法①不同浓度四种盖髓剂对hDPSCs增殖的促进作用观察。取第5代hDPSCs细胞分为MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组、Vitapex组及空白组,MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组、Vitapex组分别加入不同浓度(0.02、0.2、1、2 mg/mL)的MTA、iRoot BP Plus、nRoot和Vitapex培养液,空白组加入含10%FBS的DMEM/F12培养液。分别于培养24、48 h时,采用CCK-8法测算各组细胞增殖活性。②四种盖髓剂对hDPSCs分化为成牙本质细胞的促进作用观察。通过ALP活性检测筛选出四种材料对hDPSCs最适诱导浓度。取第4代hDPSCs分为五组:空白组、MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组和Vitapex组换为0.2 mg/mL的MTA、iRoot BP Plus、nRoot和Vitapex成骨培养基,空白组为正常成骨培养基。培养第21天时采用茜素红染色和半定量分析法观察各组细胞矿化结节形成情况,培养第7天时采用Western Blotting法检测细胞相关蛋白类核转录因子(Runt-related transcription factor 2,RUNX-2)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)以及牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP-1)。结果与空白组相比,培养第2天时0.02、0.2、1 mg/mL的MTA组、iRoot BP Plus在和nRoot组细胞增殖活性高(P均<0.05);与培养第1天时相比,培养第2天时2 mg/mL的MTA组和Vitapex组细胞增殖活性低(P均<0.05)。筛选0.2 mg/mL为后续受试浓度。与nRoot组和Vitapex组相比,iRoot BP Plus组和MTA组细胞钙沉积量高(P均<0.05)。与空白组相比,MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组和Vitapex组细胞OCN、RUNX-2、DSPP、DMP-1相对表达量均升高(P均<0.05);与nRoot组、Vitapex组相比,iRoot BP Plus组细胞OCN、RUNX-2、DSPP、DMP-1相对表达量均高(P均<0.05)。结论相比于MTA、Vitapex,nRoot和iRoot BP Plus更能促进hDPSCs的细胞增殖、诱导细胞分化为成牙本质细胞。
文摘背景间充质干细胞来源的凋亡囊泡具有促进骨组织再生的作用,目前关于人牙髓干细胞凋亡囊泡(apoptotic vesicles derived from human dental pulp stem cells,hDPSC-apovs)用于骨组织再生的研究尚未见报道。目的探讨hDPSC-apovs对小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,mBMSC)增殖和成骨分化能力的影响。方法原代培养、分离和鉴定hDPSC,采用星孢素(staurosporine,STS)诱导细胞凋亡,高速离心法分离hDPSC-apovs并鉴定。将mBMSC与不同浓度的hDPSC-apovs(0μg/mL、0.2μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、25μg/mL)进行共培养,CCK-8法检测不同浓度hDPSCapovs对mBMSC增殖能力的影响。mBMSC与不同浓度的hDPSC-apovs在成骨诱导培养基中共培养7 d后,茜素红染色分析钙结节形成,qPCR检测各组mBMSC的成骨分化相关基因Alp、Runx2、Spp1、Bglap的表达。结果与不含hDPSCapovs的对照组相比,0.2μg/mL、lμg/mL浓度hDPSC-apovs均能够促进mBMSC的增殖(P<0.05),而5μg/mL、25μg/mL浓度hDPSC-apovs则抑制mBMSC的增殖(P<0.05)。各浓度hDPSC-apovs处理组的钙结节形成量均高于对照组(P<0.05);qPCR结果显示,5μg/mL、25μg/mL组Alp、Runx2、Spp1、Bglap表达均上调(P<0.05),1μg/mL组只有Alp和Runx2表达上调,0.2μg/mL组仅有Alp表达水平上调(P<0.05)。结论在本研究浓度范围内,低浓度的hDPSC-apovs对mBMSC增殖具有促进作用,高浓度则表现为抑制作用;hDPSC-apovs对于mBMSC的成骨分化有一定促进作用,且不同浓度hDPSCapovs对成骨相关基因表达的影响不同。
