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鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究
1
作者 赵雪丽 闫若潜 +8 位作者 王华俊 王淑娟 马震原 谢彩华 柴茂 杨海波 王翠 刘影 王东方 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期165-173,共9页
建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性... 建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 rep基因 猪圆环病毒3型 cap基因 双重TaqMan MGB FQ-PCR
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2020—2022年安徽省猪圆环病毒2型和3型流行情况调查
2
作者 周迎春 段倩倩 +7 位作者 王倩 王军 王维 沈艳 刘华 苗文萍 何长生 朱良强 《中国动物检疫》 CAS 2024年第3期1-4,共4页
为了解安徽省猪圆环病毒病(PCVAD)流行情况,2020—2022年于安徽省13个定点监测点采集950份病原学样品和650份血清学样品,采用荧光PCR方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)病原检测,采用间接ELISA方法进行PCV2抗体检测。结... 为了解安徽省猪圆环病毒病(PCVAD)流行情况,2020—2022年于安徽省13个定点监测点采集950份病原学样品和650份血清学样品,采用荧光PCR方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)病原检测,采用间接ELISA方法进行PCV2抗体检测。结果显示:安徽省PCV2抗体阳性率逐年升高,大型养殖场的抗体阳性率显著高于中、小型养殖场(P<0.05);PCV2病原阳性率呈下降趋势,PCV3呈上升趋势,且同一年份的PCV2病原阳性率均显著高于PCV3(P<0.05);屠宰场的PCV2和PCV3病原阳性率均显著高于养殖场(P<0.05);大型养殖场的PCV2和PCV3病原阳性率均显著高于小型养殖场(P<0.05)。结果表明:安徽省PCVAD防控取得一定成效,但是PCV2仍存在广泛感染,PCV3愈加流行,屠宰场和大型养殖场感染风险高。建议持续做好PCV2免疫工作,加强屠宰场的风险监测及大型养殖场的饲养管理和生物安全管理,严防PCV2和PCV3在养殖和屠宰环节流通传播。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 病原学 血清学 安徽省
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野鼠中猪圆环病毒2型毒株的分离鉴定及其基因变异情况分析
3
作者 孟晨光 喻蓓蕾 +5 位作者 王开心 彭小烨 谭磊 蒋一凡 彭璇 麦金辉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期87-92,共6页
湖南省某规模化猪场妊娠母猪发生由PCV2感染引起的繁殖障碍,为了解猪场周围野鼠PCV2感染及其基因变异情况,本研究采用PCR法检测从该场采集的猪血液及该场周边的野鼠组织样品中是否存在PCV2核酸;扩增PCV2阳性样品全基因组并测序,分析鼠... 湖南省某规模化猪场妊娠母猪发生由PCV2感染引起的繁殖障碍,为了解猪场周围野鼠PCV2感染及其基因变异情况,本研究采用PCR法检测从该场采集的猪血液及该场周边的野鼠组织样品中是否存在PCV2核酸;扩增PCV2阳性样品全基因组并测序,分析鼠源和猪源PCV2全基因组的同源性与遗传进化关系,对野鼠源PCV2(HNRCV株)进行分离与鉴定。结果表明,该场母猪和周边野鼠存在PCV2感染,且猪源和野鼠源PCV2全基因组序列(1767 bp)的同源性为100%;同源性与遗传进化分析结果表明,湖南HNRCV分离株与美国毒株22625-33的同源性最高(99.89%),同属于PCV2d,且Cap基因的同源性为99.72%;在野鼠组织中成功分离出HNRCV株,并且该分离株可在PK-15细胞中增殖。本研究结果提示,野鼠在猪场中PCV2的流行与传播发挥着重要作用,为PCV2的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 野鼠 检测 分离鉴定
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猪圆环病毒2型疫苗及其效力评价方法比较研究
4
作者 徐嫄 彭国瑞 +8 位作者 徐小艾 吴睿智 赵启祖 朱元源 李翠 王团结 邹兴启 李琰 刘业兵 《中国兽药杂志》 2024年第1期87-94,共8页
为探索对不同猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)疫苗产品进行统一质量评价的可行性,对国内该类疫苗产品及其现有效力评价方法进行了归纳和比较研究。结果发现,目前猪圆环病毒2型疫苗类产品种类有25个,且疫苗毒株数量多达10... 为探索对不同猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)疫苗产品进行统一质量评价的可行性,对国内该类疫苗产品及其现有效力评价方法进行了归纳和比较研究。结果发现,目前猪圆环病毒2型疫苗类产品种类有25个,且疫苗毒株数量多达10余个,效力检验方法包括传统的免疫攻毒法、血清学方法和多种不同的替代方法,但尚没有统一的效力评价体系。本研究可为进一步完善PCV2疫苗效力评价方法、统一评价疫苗效力、提高产品质量提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 疫苗 效力评价方法
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猪圆环病毒2型和3型引起母猪繁殖障碍的研究进展
5
作者 李苏尧 杨青 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期56-58,共3页
猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的成员,目前已报道发现4种基因型,猪圆环病毒病对全球养猪业造成重大影响。文章重点对猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)所引起的母猪繁殖障碍进行了综述,旨在进一步提高大家对PCV感染的认识,并为... 猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的成员,目前已报道发现4种基因型,猪圆环病毒病对全球养猪业造成重大影响。文章重点对猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)所引起的母猪繁殖障碍进行了综述,旨在进一步提高大家对PCV感染的认识,并为猪场提高生产效益提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 猪圆环病毒3型(PCV3) 繁殖障碍
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2020-2021年我国规模化猪场猪圆环病毒2型和3型的分子流行病学调查分析
6
作者 陈翔鸿 曹琪 +5 位作者 谌磊 邓文芳 袁意 孔丹妮 宋文博 汤细彪 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期88-96,共9页
采集13个省市自治区的491个规模化猪场的1447份疑似猪圆环病毒感染样本,通过荧光定量PCR方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的检测。分别随机选取50份PCV2和PCV3阳性样品,对其ORF2基因进行测序并分别进行核苷酸同源性比... 采集13个省市自治区的491个规模化猪场的1447份疑似猪圆环病毒感染样本,通过荧光定量PCR方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的检测。分别随机选取50份PCV2和PCV3阳性样品,对其ORF2基因进行测序并分别进行核苷酸同源性比对和遗传进化分析。结果显示,样本中PCV2和PCV3检出率分别为29.16%(422/1447)和18.93%(274/1447)。规模化猪场中PCV2和PCV3检出率分别为47.05%(231/491)和15.68%(77/491),PCV2和PCV3混合感染率为23.81%,混合感染高于单一感染,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪肺炎支原体(MhP)等病原体以多种组合的混合感染形式出现。50个PCV2序列与16个参考毒株序列的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为75.6%~100%和83.1%~99.1%,PCV3对应同源性分别为95.9%~100%和96.3%~100%。分子遗传进化分析显示PCV2d占80%(40/50),PCV2a占4%(2/50),PCV2b占16%(8/50),未检测到PCV2c和PCV2e。PCV3a、PCV3b和PCV3c分别占28%(14/50)、22%(11/50)和50%(25/50)。表明2020-2021年我国规模化猪场PCV2的主要流行基因型是PCV2d,其次为PCV2a和PCV2b。PCV3c为我国规模化猪场中的主要流行基因型,而PCV3a和PCV3b流行率也依然较高。论文对我国猪圆环病毒的分子流行病学进行了数据补充,对临床防控起到了预警作用,也为猪圆环病毒疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 混合感染 分子流行病学
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猪圆环病毒2型ORF1部分位点突变对病毒复制能力的影响 被引量：1
7
作者 李荷然 肖琦 +3 位作者 温立斌 朱雪蛟 芮荣 何孔旺 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第1期71-76,共6页
猪圆环病毒2型(PCV2)可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征,导致仔猪逐渐消瘦。PCV2 ORF1表达的Rep蛋白及其剪切体Rep′是PCV2复制所需的重要蛋白。为了研究PCV2 ORF1部分位点对PCV2复制能力的影响,本试验通过构建PCV2 ORF1区域点突变双拷贝... 猪圆环病毒2型(PCV2)可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征,导致仔猪逐渐消瘦。PCV2 ORF1表达的Rep蛋白及其剪切体Rep′是PCV2复制所需的重要蛋白。为了研究PCV2 ORF1部分位点对PCV2复制能力的影响,本试验通过构建PCV2 ORF1区域点突变双拷贝感染性克隆质粒,在无PCV2污染的PK-15细胞中进行病毒拯救,使用荧光定量PCR检测不同位点突变病毒培养不同代次上清液的Ct值。结果:将PCV2 Rep的17 aa、19 aa、20 aa和21 aa突变为丙氨酸后病毒无法成功拯救,2 aa突变后严重影响病毒的复制能力,3 aa、5 aa和18 aa突变后病毒的复制能力增强且细胞病毒载量高于PCV2原毒株,推测17 aa、19 aa、20 aa和21 aa是影响PCV2复制的关键作用位点。本研究结果为未来PCV2复制相关研究提供了试验依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 REP蛋白 病毒复制
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猪圆环病毒2型疫苗抗原定量方法及其应用
8
作者 何召庆 徐晨 +4 位作者 汪爱芬 尹秀凤 南祥祝 邵营格 晁锦 《中国畜牧业》 2024年第4期43-44,共2页
猪圆环病毒病是一种可以给猪场造成严重经济损失的疾病,当前,猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)感染在很多猪场仍有很高的比例,给猪场管理带来了巨大压力。有效的疫苗免疫有利于猪抵抗病毒,减少病毒血症的发生和缩短带毒时... 猪圆环病毒病是一种可以给猪场造成严重经济损失的疾病,当前,猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)感染在很多猪场仍有很高的比例,给猪场管理带来了巨大压力。有效的疫苗免疫有利于猪抵抗病毒,减少病毒血症的发生和缩短带毒时间,因此,疫苗免疫仍是猪场控制PCV2的重要手段。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒病 猪场管理 病毒血症 PCV2 疫苗免疫 抗原定量
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猪圆环病毒2型ORF9蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备
9
作者 边孟婷 梁海英 +7 位作者 曾智勇 汤德元 王彬 叶泥 柳佳佳 黄书 潘向英 田红利 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期226-232,共7页
为了鉴定并深入研究ORF9蛋白在猪圆环病毒2型感染中的作用,本研究制备了小鼠抗ORF9蛋白多克隆抗体并进行了初步应用。首先通过扩增克隆ORF9基因,构建原核表达质粒pET-32a(+)-PCV2-ORF9并转化至BL21(DE3)感受态细胞中,再利用SDS-PAGE对... 为了鉴定并深入研究ORF9蛋白在猪圆环病毒2型感染中的作用,本研究制备了小鼠抗ORF9蛋白多克隆抗体并进行了初步应用。首先通过扩增克隆ORF9基因,构建原核表达质粒pET-32a(+)-PCV2-ORF9并转化至BL21(DE3)感受态细胞中,再利用SDS-PAGE对可能影响ORF9蛋白表达效果的因素(温度、IPTG浓度、时间)进行优化研究,随后将重组蛋白经纯化复性后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定小鼠多抗效价,并用IFA和Western-blot方法对抗ORF9多克隆抗体特异性进行研究。结果显示,重组质粒p ET-32a(+)-PCV2-ORF9构建成功;ORF9重组蛋白在IPTG浓度为0.1 mmol/L、37℃条件下诱导4 h表达量最高,且主要以包涵体形式表达,分子量大小约24.2 ku;经ELISA检测制备的多抗效价为1∶6 400;IFA和Western-blot试验结果均证明ORF9蛋白能被PCV2阳性血清和小鼠多克隆抗体特异性识别。本研究成功表达并纯化了具备抗原性的PCV2 ORF9重组蛋白,制备的特异性抗PCV2 ORF9多克隆抗体为探究ORF9蛋白在PCV2感染中的作用奠定了基础材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF9蛋白 原核表达 多克隆抗体
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2020-2022年华中地区部分猪场猪圆环病毒3型的分子流行特征与遗传变异分析
10
作者 李博天 李春琪 +8 位作者 刘国平 谢军 曾攀 赵润泽 李桐 裴洁 郭利伟 伍锐 谭磊 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期613-626,共14页
【目的】通过系统性试验方案摸清我国华中部分地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3)流行病学及遗传变异特点,为PCV3疫苗研究提供数据基础。【方法】对华中地区(湖北、湖南和河南)15个规模化养猪场的3500份临床采集样品进行real-time... 【目的】通过系统性试验方案摸清我国华中部分地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3)流行病学及遗传变异特点,为PCV3疫苗研究提供数据基础。【方法】对华中地区(湖北、湖南和河南)15个规模化养猪场的3500份临床采集样品进行real-time PCR检测,分析不同猪群、不同组织器官、不同排毒量和对应流行病学症状特点关系。对部分阳性样本PCV3全基因组进行扩增、测序和分析。【结果】50.86%(1780/3500)被检样本为PCV3核酸阳性,不同发育阶段猪群PCV3均易感,保育猪、哺乳仔猪、生长育肥猪PCV3阳性率较高,分别为70.44%(498/707)、67.19%(596/887)、41.75%(177/424)。在不同组织器官和样品中,淋巴结、肺脏、产后胎盘样本PCV3阳性率为67.05%(59/88)、63.79%(74/116)、49.11%(55/112),血液、初乳样本PCV3阳性率分别为56.09%(502/895)、44.20%(278/629),且鼻拭子和唾液中均检出PCV3。出现猪繁殖障碍症状、厌食症状和呼吸障碍症状的猪群PCV3阳性率高,分别为44.43%(399/898)、36.43%(431/1183)、28.04%(233/831)。24条PCV3全基因组序列长度均为2000 nt,其全基因核苷酸序列同源性为98.4%—100%,与参考株PCV3全基因组的同源性为97.4%—99.5%。遗传进化分析结果显示,23株PCV3属于PCV3b亚型,1株属于PCV3a亚型。Rep氨基酸序列比对结果发现,PCV3-L2、L23和L14株分别在(N^(124)I)、(A^(183)E)和(V^(244)I)出现独特变异位点;Cap蛋白氨基酸序列比对结果发现,PCV3-L15、L21、L3和L19株分别在(T^(45)P)、(R^(2)K)、(R^(14)K)和(F7L)出现独特变异位点。【结论】PCV3可感染不同发育阶段猪群,且分布于不同组织器官中;PCV3可通过垂直传播(如初乳和精液)和水平传播(如口鼻分泌物和唾液)感染猪群;PCV3感染可能与生猪繁殖障碍、呼吸障碍和多器官炎症和关节炎症密切相关。此外,被调查地区规模化猪场同时流行PCV3a和PCV3b两种亚型,其中PCV3b亚型为优势毒株。研究通过全基因组氨基酸序列分析发现部分独特变异位点位于Cap蛋白,这可能导致Cap蛋白赋予的免疫原性发生变化。对PCV3全基因序列的遗传进化做出详细阐述,为未来的PCV3疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 病毒载量 全基因组扩增 遗传进化分析
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微流控芯片环介导等温扩增技术检测3种猪圆环病毒
11
作者 石艳萍 邓飞 +6 位作者 周丽媛 李丽 邵靓 陈斌 张孟思 邱明双 陈弟诗 《中国动物检疫》 CAS 2024年第2期58-64,共7页
为建立快速区分3种猪圆环病毒(PCV2、PCV3和PCV4)的现场检测方法,采用微流控芯片环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),收集3种猪圆环病毒临床阳性样本进行核酸提取,与市场上3种猪圆环病毒荧光探针法检测... 为建立快速区分3种猪圆环病毒(PCV2、PCV3和PCV4)的现场检测方法,采用微流控芯片环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),收集3种猪圆环病毒临床阳性样本进行核酸提取,与市场上3种猪圆环病毒荧光探针法检测试剂盒进行灵敏度、特异性和重复性同步比对。结果显示:微流控芯片LAMP法在3种猪圆环病毒联检测试中具有非常高的灵敏度,可以在30 min内,实现不低于荧光定量PCR法的敏感性;与非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒临床阳性样本均无交叉反应,特异性好;测试3种猪圆环病毒重复性Ct值变异系数(CV)均在2%以下,稳定性好。结果表明:3种猪圆环病毒微流控芯片快速联检技术特异性好、灵敏度高、重复性强,检测速度快,环境要求低,可以满足现场检测的要求,适用于养猪场等场所的猪圆环病毒现场快速检测。本方法的建立为猪相关病原体的现场快速核酸检测提供了有力工具。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 微流控芯片 环介导恒温扩增 快速检测 核酸检测
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猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立
12
作者 张宝戈 黄雅琴 +2 位作者 蔡金双 朱晨光 李玉峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1170-1178,共9页
旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆... 旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆抗体作为检测抗体,经条件优化后建立了一种检测PCV3抗体的阻断ELISA方法。用建立的阻断ELISA方法检测50份临床阴性血清,计算阻断率(PI)的临界值,以此来确定该方法的判定标准:当PI≤28.30%时,判定结果为阴性;当PI≥35.05%时,判定结果为阳性;当28.30%<PI<35.05%时,判定为可疑,重复一次试验后如果结果仍为可疑,则判定为阳性。特异性试验表明该方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)以及猪瘟病毒(CSFV)的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验表明其检测效价可达到1:128;重复性试验表明批内与批间的变异系数均小于10%;符合性检验表明该方法与PCV检测金标准免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)比对的Kappa值达0.9,具有高度的一致性。综上所述,本研究建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性与较高的符合率,可用于后期进行PCV3抗体的检测,为PCV3的流行病学调查与临床诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 Cap重组蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA
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猪圆环病毒Ⅱ型感染3D4/2细胞的转录组学分析
13
作者 陈虹伶 赵怡 +5 位作者 陈家骥 韦秋旭 李禧梦 冯国越 胡焜翔 胡庭俊 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期42-51,共10页
【目的】通过转录组测序筛选猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus typeⅡ,PCV2)感染猪肺泡巨噬细胞系(3D4/2)差异表达基因,为了解PCV2感染宿主免疫细胞机制和抗PCV2感染药物研发奠定基础。【方法】用感染复数(multiplicity of infection,... 【目的】通过转录组测序筛选猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus typeⅡ,PCV2)感染猪肺泡巨噬细胞系(3D4/2)差异表达基因,为了解PCV2感染宿主免疫细胞机制和抗PCV2感染药物研发奠定基础。【方法】用感染复数(multiplicity of infection, MOI)为1的PCV2 NJ2002株处理3D4/2细胞,利用Illumina NovaSeq 6000测序平台进行转录组测序。使用DeSeq 2.0软件进行差异表达基因分析,并对差异表达基因进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能分析及转录因子靶向分析,选取免疫及凋亡相关基因进行实时荧光定量PCR验证,用Western blotting技术检测细胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)及磷酸化胞内磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平。【结果】转录组测序结果显示,与对照组相比,PCV2感染组共获得713个差异表达基因,其中313个上调,400个下调。GO功能和KEGG通路富集分析显示,差异表达基因与免疫应答等相关,主要富集在细胞外基质受体互作通路、新陈代谢通路、HIF-1信号通路、病毒致癌作用、PI3K-Akt等信号通路。实时荧光定量PCR结果与转录组测序的基因表达水平保持一致。Western blotting检测结果显示,PCV2感染3D4/2细胞24 h后PI3K和Akt蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05)。转录因子靶向分析表明,差异表达基因与核转录因子Y亚基β(NFYB)和ETS转录因子(ELK4)联系紧密。【结论】PCV2可能通过PI3K-Akt信号通路影响下游炎症信号通路和凋亡信号通路增强自身复制能力。NFYB和ELK4转录因子在PCV2感染过程中可能发挥重要作用,可考虑作为抗PCV2药物靶点。研究结果为深入了解PCV2感染宿主免疫细胞机制和相关药物开发提供了理论基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒Ⅱ型 3D4/2细胞 转录组测序 差异表达基因 转录因子
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猪圆环病毒2型疫苗的应用和研发进展
14
作者 王鹏 沈伟桢 周斌 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期139-146,共8页
猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,感染后会导致猪淋巴系统功能衰竭和免疫抑制,严重危害养猪业的正常生产。近年来,PCV2疫苗的研发一直备受关注,相关研究已取得一定进展,已上市了多种疫苗,包括灭活疫苗、亚单... 猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,感染后会导致猪淋巴系统功能衰竭和免疫抑制,严重危害养猪业的正常生产。近年来,PCV2疫苗的研发一直备受关注,相关研究已取得一定进展,已上市了多种疫苗,包括灭活疫苗、亚单位疫苗、嵌合疫苗和合成肽疫苗等。此外,研究人员还在疫苗的免疫机制和接种策略方面进行了深入探讨,为疫苗的研发和应用提供了重要的理论支持。然而,目前PCV2疫苗的研究仍面临着诸多挑战,如临床流行的主要毒株从PCV2b逐渐转变为PCV2d,疫苗安全性、长期免疫效果等,现有疫苗的免疫效果仍需进一步研究证实。本文对PCV2及其现有疫苗的生产现状、新型疫苗的研发进展、佐剂在疫苗中的应用、疫苗对不同基因型的保护能力等进行了综述,以期为我国有效防控PCVAD提供科学参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 疫苗 佐剂 保护力
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猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗不同免疫程序的免疫效果比较分析
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作者 马红伟 潘华春 +5 位作者 杨书敏 张可 杨红 蔺肖 阮坤祥 李家奎 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期58-65,共8页
为了评估不同免疫策略对猪场免疫效果和经济效益的影响,以确定最佳的疫苗免疫程序,本试验将处于产前1个月的四胎次健康三元母猪随机分为2个组,A组(联合免疫组)母猪于产前27 d联合免疫猪圆环病毒2型基因工程疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗... 为了评估不同免疫策略对猪场免疫效果和经济效益的影响,以确定最佳的疫苗免疫程序,本试验将处于产前1个月的四胎次健康三元母猪随机分为2个组,A组(联合免疫组)母猪于产前27 d联合免疫猪圆环病毒2型基因工程疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗(圆柯欣+柯喘宁+稳柯健),其所产仔猪于21日龄联合免疫圆柯欣、柯喘宁和稳柯健;B组(对照组)母猪于产前34和27 d分别免疫稳柯健、猪圆环病毒疫苗和猪肺炎支原体疫苗二联疫苗(圆-支二联疫苗),其所产仔猪于14日龄免疫圆-支二联疫苗,28日龄免疫稳柯健。统计和分析免疫各组临床指标、生产性能和持续性抗体水平。结果显示,免疫疫苗后,2个组的母猪采食情况均正常;2个组的仔猪整体精神状态良好,哺乳情况正常,均未出现咳嗽和喘气等呼吸道疾病。在试验期间内,2个组的母猪的窝产健仔数和仔猪出生健仔均重并无差别。A组和B组的出生至23日龄死淘率、出生至50日龄死淘率分别为3.77%、5.11%和4.07%、5.43%,A组略优于B组。抗体监测结果显示,A组母猪的CSFV和PCV2抗体水平较B组无显著差异(P>0.05);A组仔猪的CSFV抗体阳性率与B组无明显差异(P>0.05),而PCV2抗体水平在免疫早期阶段(21日龄)明显高于B组(P<0.05)。结果表明,猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗可以联合免疫,且免疫后相互之间不干扰。该联合免疫策略在确保免疫效果的同时,简化了疫苗免疫程序,为确定最佳的疫苗免疫程序提供了有价值的临床应用参考。 展开更多
关键词 猪瘟活疫苗 猪圆环病毒2型基因工程疫苗 猪肺炎支原体灭活疫苗 不同免疫程序 免疫效果评价
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猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达与鉴定
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作者 朱钰英 高翠翠 +6 位作者 唐青海 刘婷 赵婷芳 曾沛暄 赵铖 胡意 李小申 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期35-38,共4页
[目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋... [目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋白鉴定。[结果]PCV3 Cap蛋白在p ET28a原核表达系统中无表达;Rosetta-p Cold-PCV3-Cap在诱导温度为15℃、IPTG浓度为1.0 mmo L/L、诱导4 h的条件下,能够表达分子量约为25 k Da的Cap蛋白,且为可溶性表达。[结论]试验成功制备了PCV3 Cap蛋白,为制备PCV3疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) CAP蛋白 原核表达 鉴定
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猪圆环病毒2型诱发肠炎与非编码RNA的研究
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作者 张莉 方满新 +2 位作者 钟可欣 谭思敏 邓治邦 《上海畜牧兽医通讯》 2024年第1期1-5,共5页
本文综述了PCV 2诱发肠炎的研究现状,阐述了miRNA、circRNA和lncRNA等作用机制及在炎症性疾病中的作用,进一步介绍了PCV 2感染对非编码RNA表达影响的相关研究,以期为探索PCV 2相关性肠炎的发病机制提供思路。
关键词 猪圆环病毒2型 非编码RNA 肠炎
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酒泉市猪圆环病毒2型和3型的流行病学监测和分析 被引量：1
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作者 张溪 南金鱼 +2 位作者 张翠花 张若玉 王新强 《畜牧兽医杂志》 2024年第1期107-110,共4页
为掌握酒泉市五个农业县猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)流行情况,在辖区内不同区域、不同养殖规模、不同生长阶段的19个规模化养殖场、38个散养户、4家屠宰场采集血清样品230份、粪便样品250份、猪肺脏、扁桃体、颌下淋巴结等组织样品... 为掌握酒泉市五个农业县猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)流行情况,在辖区内不同区域、不同养殖规模、不同生长阶段的19个规模化养殖场、38个散养户、4家屠宰场采集血清样品230份、粪便样品250份、猪肺脏、扁桃体、颌下淋巴结等组织样品220份,进行PCV2和PCV3核酸检测,检出阳性样品138份,阳性率为21.23%,PCV2的阳性率为15.54%,PCV3的阳性率为5.69%,表明PCV2的流行比PCV3更普遍、阳性感染率更高,但在不同区域、不同规模猪场的危害程度和流行情况存在一定的差异。规模养殖场的总体阳性感染率明显低于散养户,保育猪的感染率高于其他生长阶段的生猪。本次实验对酒泉市猪场PCV感染综合防控提供技术支撑,为科学养猪产生积极影响。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 酒泉市 流行病学监测
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副猪革拉瑟菌影递送猪圆环病毒2型DNA二联疫苗的制备及小鼠免疫效果评价
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作者 王康 刘格言 +10 位作者 王宇 杨振 唐欣巍 曹三杰 黄小波 颜其贵 伍锐 赵勤 杜森焱 文心田 文翼平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1179-1191,共13页
本研究旨在研制猪圆环病毒2型(PCV2)-副猪革拉瑟菌(GPS)二联菌影疫苗,并评价其在小鼠上的免疫保护效果。选择GPS 5型菌株SH0165作为疫苗株,利用氢氧化钠最低抑菌浓度法将其制备成菌影,再将PCV2的ORF2基因克隆至pEGFP-N1真核表达质粒,将... 本研究旨在研制猪圆环病毒2型(PCV2)-副猪革拉瑟菌(GPS)二联菌影疫苗,并评价其在小鼠上的免疫保护效果。选择GPS 5型菌株SH0165作为疫苗株,利用氢氧化钠最低抑菌浓度法将其制备成菌影,再将PCV2的ORF2基因克隆至pEGFP-N1真核表达质粒,将GPS菌影作为PCV2 DNA疫苗的载体,构建PCV2-GPS二联菌影疫苗,设计了商品化疫苗组、PCV2-GPS二联菌影疫苗组、菌影组、质粒组、PBS组、空白组,对4周龄BALB/c小鼠进行免疫,测定免疫后PCV2和GPS的IgG抗体效价、PCV2中和抗体、脏器中PCV2病毒载量、血清杀菌率、GPS攻毒保护率以及血清中细胞因子(IFN-γ、IL-12)水平。结果显示:二联菌影疫苗组小鼠血清中PCV2和GPS的IgG抗体水平显著增高,PCV2中和抗体滴度提高,PCV2攻毒后的小鼠淋巴结和肺脏中病毒载量下降,血清杀菌率显著提高,GPS攻毒后免疫保护率达70%(7/10),小鼠血清中IFN-γ含量显著上调。综上表明,PCV2-GPS二联菌影疫苗显著激活了小鼠对PCV2和GPS的体液免疫反应和细胞免疫反应,且能够抑制PCV2在小鼠体内的增殖,对感染GPS的小鼠达到较好的保护效果,为新型安全高效的PCV2、GPS联合疫苗的研制提供了生物材料和实验数据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF2基因 副猪革拉瑟菌 菌影 小鼠 免疫保护
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猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 张英婕 周文锋 +7 位作者 邹亚文 白一涵 蒋一凡 湛洋 王乃东 杨毅 杜红梅 王东亮 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期217-225,共9页
本研究旨在制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体(m Ab),为PCV2免疫学诊断方法的建立和应用提供特异性抗体。首先通过原核大肠杆菌表达系统表达PCV2 Cap蛋白,将纯化后的Cap蛋白在体外组装成病毒样颗粒(VLPs),以VLPs作为免疫原免疫B... 本研究旨在制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体(m Ab),为PCV2免疫学诊断方法的建立和应用提供特异性抗体。首先通过原核大肠杆菌表达系统表达PCV2 Cap蛋白,将纯化后的Cap蛋白在体外组装成病毒样颗粒(VLPs),以VLPs作为免疫原免疫BALB/c小鼠,使用杂交瘤细胞技术筛选能稳定分泌抗PCV2 Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。进一步制备单抗腹水并纯化,通过Western-blot和IFA方法对单克隆抗体的特异性进行鉴定。采用逐步截取法合成45条覆盖PCV2 Cap蛋白全长的短肽,并通过间接ELISA鉴定单克隆抗体识别的表位区域。利用两株mAbs对人工感染PCV2的猪肺脏组织进行免疫组化(IHC)检测鉴定。结果表明,成功筛选两株识别PCV2 Cap蛋白单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为1A6和1A8,其中1A6重链为Ig G2b亚型,1A8重链为Ig G1亚型,轻链均为κ链,纯化后的抗体效价均达1∶656 100。IFA结果显示,两株mAbs均能与PCV2感染的PK-15细胞发生特异性反应;Western-blot结果显示,两株mAbs均与PCV2 Cap蛋白发生特异性反应,且不与PCV3和PCV4 Cap蛋白发生交叉反应;所获抗体均识别PCV2 Cap蛋白C端211-225 aa肽段;IHC检测结果表明,两株mAbs均能与感染PCV2的临床样品发生特异性免疫反应。本研究成功获得了两株单克隆抗体1A6和1A8,均能识别PCV2 Cap蛋白,具有良好的特异性,为PCV2免疫学诊断方法的建立及Cap蛋白生物学功能研究提供了重要生物材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 CAP蛋白 原核表达系统 病毒样颗粒 单克隆抗体
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