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猪白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2
1
作者 江云波 方六荣 +5 位作者 肖少波 张辉 潘永飞 罗锐 李彬 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期841-845,共5页
本研究通过RT-PCR方法从用ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪IL-15(pIL-15)编码序列的cD-NA,将其克隆至T载体pMD18-T后,序列测定表明pIL-15基因长度为489 bp,编码162个氨基酸。进一步通过PCR方法获得缺失其N端48 aa的信号肽序列的成... 本研究通过RT-PCR方法从用ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪IL-15(pIL-15)编码序列的cD-NA,将其克隆至T载体pMD18-T后,序列测定表明pIL-15基因长度为489 bp,编码162个氨基酸。进一步通过PCR方法获得缺失其N端48 aa的信号肽序列的成熟pIL-15蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-28a的6×His下游,构建重组表达质粒pET-pIL15,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,重组菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到分子量约为15 ku的重组蛋白,其表达量占总菌体蛋白量的17.5%。Western blot试验也证实表达的重组融合蛋白6×His-pIL15能够很好地与抗6×His单抗发生反应。猪IL-15基因的克隆、表达为进一步研究其功能和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪白细胞介素15 基因克隆 原核表达
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白细胞介素15基因脂质体的构建及其抗肿瘤效果评价 被引量：1
2
作者 江芷萱 宋宝慧 +3 位作者 常爽 张皓淞 胡海洋 陈大为 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期267-273,280,共8页
目的制备DSPE-PEG2000-FA修饰的阳离子脂质体(FPCL),并与白细胞介素15质粒DNA(interleukin-15 plasmid DNA,IL-15 pcDNA,pIL-15)形成FPCL/pIL-15基因递送系统,并进行抗肿瘤效果评价。方法通过薄膜分散法制备FPCL,并且利用正负电荷吸引... 目的制备DSPE-PEG2000-FA修饰的阳离子脂质体(FPCL),并与白细胞介素15质粒DNA(interleukin-15 plasmid DNA,IL-15 pcDNA,pIL-15)形成FPCL/pIL-15基因递送系统,并进行抗肿瘤效果评价。方法通过薄膜分散法制备FPCL,并且利用正负电荷吸引的原理,制备FPCL/pIL-15复合物。运用动态光散射法测定复合物粒径,利用琼脂糖凝胶电泳考察复合物稳定性,采用荧光分光光度法测定其包封率,以Balb/c小鼠为模型,考察制剂的抗肿瘤效果。结果成功制备了FPCL/pIL-15阳离子脂质体基因复合物,FPCL/pDNA复合物在质量比w_((DOTAP))∶w_((pDNA))=5∶1时粒径达到200 nm以下;抵御阴离子置换实验表明FPCL包载pDNA的稳定性良好,药效学实验表明FPCL/pIL-15复合物抗肿瘤效果显著。结论FPCL作为基因递送载体对基因药物具有很好的保护性,FPCL/pIL-15复合物能够有效诱导NK-细胞增殖与激活,抑瘤效果明显,在肿瘤免疫治疗领域有很大的研究价值。 展开更多
关键词 白细胞介素15 阳离子脂质体 基因递送 肿瘤免疫治疗 药效学
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荣昌猪白细胞介素15成熟肽基因的克隆、表达及其表达产物活性检测 被引量：4
3
作者 骆爱芳 郭万柱 +1 位作者 韩国全 宋振辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1351-1356,共6页
运用RT-PCR技术从由刀豆蛋白(ConA)诱导培养的荣昌猪外周血淋巴细胞(PBMC)扩增出猪白细胞介素15(pIL-15)完整开放阅读框(ORF),共489 bp,编码162 aa。与已公布的2个猪IL-15基因核苷酸同源性均为99.4%。分子进化分析表明其与人及哺乳动物I... 运用RT-PCR技术从由刀豆蛋白(ConA)诱导培养的荣昌猪外周血淋巴细胞(PBMC)扩增出猪白细胞介素15(pIL-15)完整开放阅读框(ORF),共489 bp,编码162 aa。与已公布的2个猪IL-15基因核苷酸同源性均为99.4%。分子进化分析表明其与人及哺乳动物IL-15基因的进化关系较近,而与鸡的IL-15基因进化距离较远。运用PCR技术从含荣昌猪IL-15开放阅读框序列质粒中扩增其成熟蛋白编码基因,共345 bp。将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)后在E.coliBL21中诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白约为34 ku,重组蛋白以包涵体形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的38.7%;Western blot分析表明,在相对分子质量34 ku处有一条特异性带;对诱导重组菌进行转录检测得到约356 bp的特异性片段。MTT法试验证实,表达产物初步纯化、透析复性后,可明显增强淋巴细胞的增殖。荣昌猪IL-15成熟肽成功在体外表达,获得的高效表达的产物具有一定的生物学活性。 展开更多
关键词 猪白细胞介素15 基因克隆 原核表达 生物学活性
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猪α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究 被引量：11
4
作者 闫若潜 吴志明 +3 位作者 张志凌 盛敏 刘光辉 赵明军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期248-255,共8页
为了研究高效广谱的猪基因工程抗病毒制剂,作者采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将猪α干扰素(Porcine interferon alpha,PoIFN-α)与猪白细胞介素2(Porcine interleuk... 为了研究高效广谱的猪基因工程抗病毒制剂,作者采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将猪α干扰素(Porcine interferon alpha,PoIFN-α)与猪白细胞介素2(Porcine interleukin-2,PoIL-2)成熟肽基因连接,构建成PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因,并克隆入pGEM-T Easy载体,将PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体进行原核表达。通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rPoIFN-α-linker-PoIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白中的PoIFN-α在不同细胞系上对不同病毒增殖活性的抑制作用;分别采用MTT法和PoIL-2 ELISA试验方法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白中PoIL-2的生物学活性。结果表明成功构建并克隆PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中得到高效表达,表达的rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白相对分子质量约36.7 ku,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在细胞上具有与单一rPoIFN-α蛋白相近的抑制病毒增殖活性,其中在PK-15细胞上抗VSV的活性单位为1.891×104I U.mL-1,在Marc-145细胞上抑制高致病性PRRSV增殖的活性单位为905 U.mL-1;rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白具有与单一rPoIL-2蛋白对照相近的生物学活性,可明显促进CTLL-2细胞的增殖,并可与抗PoIL-2单抗发生特异性免疫反应。这表明rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白具有rPoIFN-α和rPoIL-2蛋白双重的生物学活性,为基因工程抗病毒制剂的开发以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征等病毒性疾病的预防和治疗等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪Α干扰素 猪白细胞介素2 重叠延伸PCR 嵌合基因 融合表达 活性
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猪白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：22
5
作者 郑敏 金宁一 +2 位作者 张洪勇 李昌 尹革芬 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期430-432,共3页
通过 RT- PCR方法从用 PHA和 L PS刺激的猪脾脏细胞中扩增出猪白细胞介素 18(p IL - 18)成熟蛋白基因的c DNA,克隆到 T载体 p UCm- T后 ,序列测定表明 ,p IL- 18成熟蛋白基因核苷酸长度为 4 74 bp,编码 15 7个氨基酸。将该基因片段克隆... 通过 RT- PCR方法从用 PHA和 L PS刺激的猪脾脏细胞中扩增出猪白细胞介素 18(p IL - 18)成熟蛋白基因的c DNA,克隆到 T载体 p UCm- T后 ,序列测定表明 ,p IL- 18成熟蛋白基因核苷酸长度为 4 74 bp,编码 15 7个氨基酸。将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体 p ET- 2 8a构建重组质粒 p ETIL 18m,转化大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,并用 IPTG诱导。重组菌菌体裂解物 SDS- PAGE可检测到相对分子质量为 190 0 0的重组蛋白 ,免疫印迹法证实该重组蛋白可以与人 IL- 展开更多
关键词 猪白细胞介素18 成熟蛋白 基因克隆 原核表达 RT-PCR 大肠杆菌 免疫佐剂 免疫调节剂
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猪白细胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的应用 被引量：10
6
作者 吴丹 郭瀛军 +1 位作者 王庆敏 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1192-1194,共3页
目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗... 目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合免疫仔猪。结果:获得的猪IL-4 cDNA序列与文献报道的完全一致,在体外瞬时表达中获得了有生物学活性的猪IL-4。其与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合应用可有效提高个体体液免疫应答水平。结论:构建了一高效表达猪IL-4的真核表达质粒,初步实验证实了其在抗囊尾蚴DNA疫苗中的佐剂效应。 展开更多
关键词 猪白细胞介素4 基因克隆 囊尾蚴 DNA疫苗 佐剂作用
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脂质体包裹猪白细胞介素6基因对猪带绦虫抗原基因免疫小鼠的影响 被引量：8
7
作者 龙章富 高荣 +4 位作者 孟民杰 武梅 郑勇 刘昆 刘世贵 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第3期25-29,共5页
比较研究了BALb/c小鼠分别肌肉注射猪带绦虫抗原基因VTS76、猪白细胞介素 6(VPIL 6)联合VTS76及其阳离子脂质体包裹质粒等 5个处理的免疫效应。结果表明 ,VTS76联合VPIL 6共注射小鼠的IgG含量和抗体滴度 ,脾细胞增殖反应和IL 2诱生活性... 比较研究了BALb/c小鼠分别肌肉注射猪带绦虫抗原基因VTS76、猪白细胞介素 6(VPIL 6)联合VTS76及其阳离子脂质体包裹质粒等 5个处理的免疫效应。结果表明 ,VTS76联合VPIL 6共注射小鼠的IgG含量和抗体滴度 ,脾细胞增殖反应和IL 2诱生活性以及免疫细胞数量 ,均比注射VTS76的显著增强。经阳离子脂质体包裹的VTS76+VPIL 6在减少质粒用量 80 %时 ,免疫应答水平仍显著高于脂质体包裹VTS76,且明显高于VTS76+VPIL 6,证明VPIL 6能显著增强基因疫苗 (VTS76)免疫小鼠的免疫应答。 展开更多
关键词 小鼠 猪 白细胞介素-6基因 阳离子脂质体 猪带绦虫抗原基因 免疫应答 免疫增强剂 疫苗
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CpG序列和猪白细胞介素6基因转染表达对猪囊尾蚴基因疫苗免疫影响的研究 被引量：6
8
作者 李江凌 高荣 +9 位作者 武梅 孟明杰 龙章富 唐漫书 沈翼 谢鸿观 王丽焕 巫雪艳 殷雪 刘世贵 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第6期26-30,共5页
以猪囊尾蚴VTS76抗原基因和质粒VPIL 6、pUCl8 CpG免疫接种小鼠 ,检测了小鼠的体液及细胞免疫反应。结果发现 ,VPIL 6或pUC CpG与VTS76共同免疫小鼠的特异性抗体滴度、IgG含量、淋巴细胞白细胞介素 2诱生活性、脾细胞增殖反应和血液免... 以猪囊尾蚴VTS76抗原基因和质粒VPIL 6、pUCl8 CpG免疫接种小鼠 ,检测了小鼠的体液及细胞免疫反应。结果发现 ,VPIL 6或pUC CpG与VTS76共同免疫小鼠的特异性抗体滴度、IgG含量、淋巴细胞白细胞介素 2诱生活性、脾细胞增殖反应和血液免疫细胞数量显著高于VTS76免疫组和对照组。证明VPIL 6和CpG序列能显著增强动物对DNA疫苗的细胞和体液免疫反应 。 展开更多
关键词 疫苗 免疫 免疫应答 猪白细胞介素-6基因 CPG序列 猪囊尾蚴 抗原基因 免疫增强剂 基因表达
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藏猪白细胞介素4基因cDNA的克隆及序列分析 被引量：5
9
作者 李惠 高荣 +8 位作者 武梅 王丽焕 丁晓涛 李平 李波 余庆 郑勇 刘崑 刘世贵 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期475-478,共4页
目的 :克隆藏猪白细胞介素 4基因cDNA。方法 :从体外ConA刺激 70小时的藏猪外周血淋巴细胞中提取总RNA ,应用RT PCR技术扩增 ,pMD T载体连接 ,常规转化后 ,进行酶切及序列测定进行鉴定。结果 :研究表明克隆得到的IL 4基因cDNA与成华猪的... 目的 :克隆藏猪白细胞介素 4基因cDNA。方法 :从体外ConA刺激 70小时的藏猪外周血淋巴细胞中提取总RNA ,应用RT PCR技术扩增 ,pMD T载体连接 ,常规转化后 ,进行酶切及序列测定进行鉴定。结果 :研究表明克隆得到的IL 4基因cDNA与成华猪的IL 4同源性达到 99% ,与长白杂交猪的同源率为 98%。结论 :从藏猪外周血淋巴细胞中成功地分离到IL 4基因。 展开更多
关键词 藏猪 白细胞介素4 基因CDNA 克隆 序列分析
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猪白细胞介素4,6融合基因和CpG基序对猪蓝耳病疫苗免疫的强化效应 被引量：6
10
作者 陈建林 杨肖 +8 位作者 章欢 李栋 程驰 赵钟钟 陈茜 章华兵 黄杰 陈文龙 高荣 《四川动物》 CSCD 北大核心 2008年第6期1012-1016,1026,共6页
为探索新型高效安全的猪蓝耳病疫苗免疫佐剂,本实验用离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒包裹猪融合基因PIL-46和CpG基序的真核表达质粒(CNP-(VRIL-46+VR1C)),将CNP-(VRIL-46+VR1C)肌注接种过猪蓝耳病灭活苗的长白川白杂交猪,接种后1、2、4、... 为探索新型高效安全的猪蓝耳病疫苗免疫佐剂,本实验用离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒包裹猪融合基因PIL-46和CpG基序的真核表达质粒(CNP-(VRIL-46+VR1C)),将CNP-(VRIL-46+VR1C)肌注接种过猪蓝耳病灭活苗的长白川白杂交猪,接种后1、2、4、6和8周采取实验猪静脉血,用Sandwich ELISA检测血清中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-6和IgG、IgA、IgM及特异抗体的含量,同时检测外周血液免疫细胞数量的变化。结果发现实验猪接种CNP-(VRIL-46+VR1C)后1～8周内,其血清中IL-2、IL-4、IL-6和IgG、IgA、IgM及特异抗体的含量较对照组均显著增多(P<0.05),淋巴细胞和单核细胞数量也明显升高(P<0.05)。这些表明接种CNP-(VRIL-46+VR1C)的实验猪的特异体液和细胞免疫水平均显著多于对照组,提示PIL-46基因和CpG基序组合能显著增强猪的特异体液和细胞免疫机能,明显提高其免疫防御力,具有研制为高效安全的分子免疫增强剂的应用前景。 展开更多
关键词 猪 猪白细胞介素4 6融合基因 CPG基序 蓝耳病 免疫
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藏猪白细胞介素-2基因的克隆及序列分析 被引量：10
11
作者 高荣 李惠 +6 位作者 武梅 王丽焕 丁晓涛 李平 李波 余庆 刘世贵 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第6期3-5,共3页
将藏猪外周血淋巴细胞在伴刀豆球蛋白 A(Con A)的刺激下体外培养 70 h后 ,提取激活淋巴细胞总 RNA,应用RT- PCR技术扩增出藏猪淋巴细胞白细胞介素 - 2 c DNA (TPIL - 2 ) ,克隆到 p MD- T载体上并测序。测序结果显示 ,克隆的TPIL- 2 c ... 将藏猪外周血淋巴细胞在伴刀豆球蛋白 A(Con A)的刺激下体外培养 70 h后 ,提取激活淋巴细胞总 RNA,应用RT- PCR技术扩增出藏猪淋巴细胞白细胞介素 - 2 c DNA (TPIL - 2 ) ,克隆到 p MD- T载体上并测序。测序结果显示 ,克隆的TPIL- 2 c DNA全长为 5 0 3个碱基 ,开放阅读框 (ORF)为 4 6 5个碱基 ,编码 15 4个氨基酸 ,分子量为 17.4 kd,等电点为 5 .38;疏水氨基酸 4 0 .3% ,亲水氨基酸 37.0 % ,碱性氨基酸 11% ,酸性氨基酸 11.7%。此 c DNA与报道猪的 IL - 2同源性为 10 0 % ,证实克隆到了藏猪白细胞介素 - 2基因 c DNA。 展开更多
关键词 藏猪 白细胞介素-2 基因克隆 序列分析 免疫系统
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猪白细胞介素-6基因的原核表达及其活性研究 被引量：5
12
作者 唐漫书 高荣 +6 位作者 孟民杰 武梅 李江凌 龙章富 沈翼 沈斌 刘世贵 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期750-754,共5页
用DNA重组技术 ,将已克隆的猪IL - 6cDNA片段插入pGEX 1λT质粒 ,转化大肠杆菌 ,以BamHI和PstI酶切鉴定重组子 ,以IPTG诱导融合蛋白表达 ,并作RT PCR及SDS PAGE分析表达情况 ,从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收融合蛋白 ,用MTT法测定重组蛋白... 用DNA重组技术 ,将已克隆的猪IL - 6cDNA片段插入pGEX 1λT质粒 ,转化大肠杆菌 ,以BamHI和PstI酶切鉴定重组子 ,以IPTG诱导融合蛋白表达 ,并作RT PCR及SDS PAGE分析表达情况 ,从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收融合蛋白 ,用MTT法测定重组蛋白刺激小鼠脾淋巴母细胞增殖反应的活性 ,并免疫家兔制备高免血清 ,得到高效表达猪IL 6的质粒pGPIL 6 ,RT PCR确证 pGPIL 6在大肠杆菌中能正确转录 ,经SDS PAGE分析表达蛋白分子量为 4 9kD ,融合蛋白具有较高的促小鼠淋巴细胞增殖反应活性 ,以此免疫家兔 ,可制备滴度为 1∶12 80 0 展开更多
关键词 猪 白细胞介素-6基因 原核表达 DNA重组 基因表达 融合蛋白 增殖反应活性
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猪淋巴细胞白细胞介素-6(PIL-6)基因的克隆和序列分析 被引量：5
13
作者 孟民杰 高荣 +7 位作者 唐漫书 李江凌 武梅 沈翼 龙章富 王丽焕 沈斌 刘世贵 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期557-560,共4页
将猪外周血淋巴细胞进行体外培养 ,在ConA的刺激下培养 4 8h后 ,提取培养的淋巴细胞总RNA ,应用RT PCR扩增猪淋巴细胞白细胞介素 6基因 (PIL 6 ) ,并克隆到pUC18载体测序 .结果发现 ,PIL 6的cDNA长度为 74 1bp ,开放阅读框为 6 36bp ,... 将猪外周血淋巴细胞进行体外培养 ,在ConA的刺激下培养 4 8h后 ,提取培养的淋巴细胞总RNA ,应用RT PCR扩增猪淋巴细胞白细胞介素 6基因 (PIL 6 ) ,并克隆到pUC18载体测序 .结果发现 ,PIL 6的cDNA长度为 74 1bp ,开放阅读框为 6 36bp ,编码 2 12个氨基酸 ,分子量2 4kD ,等电点 5 .5 ;其 4 6～ 12 9bp编码PIL 6的信号肽序列 ,130～ 6 81编码PIL 展开更多
关键词 猪 白细胞介素-6 基因克隆 测序 淋巴细胞
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成华猪淋巴细胞白细胞介素-4基因的克隆及序列分析 被引量：4
14
作者 武梅 高荣 +9 位作者 李江凌 龙章富 唐漫书 刘昆 郑勇 沈翼 谢鸿观 王丽焕 巫雪艳 刘世贵 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期8-11,共4页
将猪外周淋巴细胞进行体外培养 ,在伴刀豆球蛋白A(ConA)的刺激下培养 48h ,提取培养的淋巴细胞总RNA ,应用RT PCR扩增猪淋巴细胞白细胞介素 4(IL 4)基因 ,并克隆到pMD T载体测序。测序结果表明 ,IL 4基因的cDNA长度为 413bp ,开放阅读... 将猪外周淋巴细胞进行体外培养 ,在伴刀豆球蛋白A(ConA)的刺激下培养 48h ,提取培养的淋巴细胞总RNA ,应用RT PCR扩增猪淋巴细胞白细胞介素 4(IL 4)基因 ,并克隆到pMD T载体测序。测序结果表明 ,IL 4基因的cDNA长度为 413bp ,开放阅读框为 40 2bp ,编码 13 4个氨基酸 ,分子量 15 .0ku ,等电点 8.2 4;与人和小鼠的IL 4基因编码的氨基酸序列的同源性分别为 60 %和 42 %。 展开更多
关键词 成华猪 淋巴细胞 白细胞 介素-4 序列分析 基因克隆
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猪白细胞介素2与融合白细胞介素4/6基因共表达的免疫效应研究 被引量：2
15
作者 杨璐一 肖永乐 +5 位作者 万小平 罗公明 王晔 陈义辉 孙文魁 高荣 《四川动物》 CSCD 北大核心 2014年第2期167-173,共7页
目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染... 目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析,最后肌肉注射小鼠进行体内实验并分析。结果成功构建了重组共表达质粒VRIL4/6-2;壳聚糖包裹后转染HEK293细胞,48 h后收集细胞,RT-PCR检测显示目的基因能够在HEK293细胞中高效地转录与表达。小鼠接种实验结果表明,实验组血清中的IgG和IgG2a的含量比对照组显著增加,并且VRIL4/6-2-CS接种组的小鼠体液免疫水平明显增高(P<0.05);VRIL4/6-2实验组的CD4+淋巴细胞显著多于其它实验组(P<0.05);实验组IL-2、IL-4、IL-6、IL-23基因的表达水平明显高于对照组(P<0.05),实验组小鼠外周血白细胞、血小板和血红蛋白的含量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 VRIL4/6-2共表达质粒能够更好的增强动物体液免疫和细胞免疫机能,可作为提高动物体液免疫和细胞免疫的经济高效安全新型免疫调节剂,具有潜在的重要应用前景。 展开更多
关键词 猪融合白细胞介素4 6基因 猪白细胞介素2基因 共表达 免疫 小鼠
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白细胞介素-15协同新城疫病毒HN基因抗肿瘤免疫的作用 被引量：3
16
作者 王秀荣 王秀英 +2 位作者 冯惠东 王永祥 魏林 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期284-285,共2页
目的　探讨白细胞介素 15 (IL- 15 )质粒、新城疫病毒 HN基因 (PCD- HN)质粒对肿瘤免疫反应的作用。方法　采用 MTT法和乳酸脱氢酶释放法 ,检测 IL- 15质粒、PCD- HN质粒对小鼠抗肿瘤免疫反应作用中 T淋巴细胞的增殖和 NK细胞的活性。... 目的　探讨白细胞介素 15 (IL- 15 )质粒、新城疫病毒 HN基因 (PCD- HN)质粒对肿瘤免疫反应的作用。方法　采用 MTT法和乳酸脱氢酶释放法 ,检测 IL- 15质粒、PCD- HN质粒对小鼠抗肿瘤免疫反应作用中 T淋巴细胞的增殖和 NK细胞的活性。结果　 IL- 15质粒、PCD- HN质粒同时免疫小鼠 ,其淋巴细胞增殖指数和 NK细胞活性的百分率明显高于其它各组。结论　 IL- 15质粒联合 PCD- HN质粒免疫小鼠 ,对抑制肿瘤生长具有迭加效应。 展开更多
关键词 白细胞介素-15 新城疫病毒HN基因 NK细胞 淋巴细胞 抗肿瘤免疫
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猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究 被引量：2
17
作者 张桂红 林海波 +7 位作者 詹国英 廖明 任涛 罗开健 曹伟胜 徐成刚 江经纬 辛朝安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期474-477,共4页
用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的... 用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经过变性溶解和复性后用酶联免疫吸附试验(ELISA)做定性定量检测。ELISA结果证实了所表达的蛋白为猪IL-6,复性后具有一定活性,并测出了复性后活性蛋白的浓度。 展开更多
关键词 猪 白细胞介素-6基因 非融合原核表达 SDS-PAGE ELISA
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贵州白香猪的白细胞介素2基因的克隆及其序列分析 被引量：1
18
作者 曾智勇 周莉 +1 位作者 刘志杰 梁海英 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2012年第5期122-125,共4页
为获得贵州白香猪白细胞介素2基因,以提取的经刀豆蛋白A诱导培养的贵州白香猪外周血淋巴细胞总RNA为模板,扩增全长猪白细胞介素2(IL-2)基因,并克隆至pMD18-T Simple载体后测序。结果表明:贵州白香猪IL-2基因ORF长为465bp,可编码154个氨... 为获得贵州白香猪白细胞介素2基因,以提取的经刀豆蛋白A诱导培养的贵州白香猪外周血淋巴细胞总RNA为模板,扩增全长猪白细胞介素2(IL-2)基因,并克隆至pMD18-T Simple载体后测序。结果表明:贵州白香猪IL-2基因ORF长为465bp,可编码154个氨基酸,其中前20个氨基酸为信号肽,后134个氨基酸为成熟肽,具有一个潜在的N-糖基化位点;贵州白香猪除与FJ543109(99.4%)、Neijiang(98.7%)、JN851821(98.7%)、AB194099(98.5%)氨基酸一致性相对较低外,与其他猪源IL-2的一致性均为100%,而与其他种属动物的IL-2基因氨基酸一致性则较低,为11.9%～75%。 展开更多
关键词 贵州白香猪 白细胞介素2 基因克隆 序列分析
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版纳微型猪近交系白细胞介素6基因克隆、生物信息学及组织表达分析 被引量：1
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作者 王配 陈园园 +6 位作者 霍金龙 霍海龙 王淑燕 潘伟荣 成文敏 查星琴 曾养志 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期1925-1934,共10页
白细胞介素6(IL-6)是机体重要的免疫调节因子,在佐剂的应用方面具有很好的发展前景。本研究以版纳微型猪近交系(BMI)为实验动物,通过PCR法获得IL-6基因编码区序列,提交GenBank数据库,登录号为JQ839263。对BMI IL-6基因和相应的蛋白序列... 白细胞介素6(IL-6)是机体重要的免疫调节因子,在佐剂的应用方面具有很好的发展前景。本研究以版纳微型猪近交系(BMI)为实验动物,通过PCR法获得IL-6基因编码区序列,提交GenBank数据库,登录号为JQ839263。对BMI IL-6基因和相应的蛋白序列进行了生物信息学分析,结果显示该基因编码212个氨基酸,分子质量为23.88ku,等电点(pI)为6.66,存在一个保守结构域,一个跨膜结构,N端和C端均疏水,且在N端存在信号肽,有89%的可能性定位于细胞核。将BMI的IL-6基因编码区序列与NCBI下载到的4条猪IL-6基因序列进行比对,结果显示BMI IL-6与GenBank登录号为NM_214399和DQ832259的核苷酸序列完全相同,与GenBank登录号为AF309651和AF518322的核苷酸序列各存在1处碱基差异;多物种氨基酸序列比对及系统进化分析结果表明,BMI与骆驼亲缘关系最近。同时利用半定量PCR法确定了IL-6基因mRNA在BMI 12个组织中的表达量,结果发现在肺脏、皮肤、肌肉中表达量较高。本研究为进一步研究猪IL-6基因的表达调控奠定了理论基础。 展开更多
关键词 版纳微型猪近交系 白细胞介素6 免疫调节 基因克隆 组织表达
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石家庄地区肥胖人群KCTD15基因多态性与白细胞介素-35的关系 被引量：1
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作者 张明明 卢亚敏 +2 位作者 刘欣 张翠改 宋光耀 《广东医学》 CAS 北大核心 2015年第23期3682-3685,共4页
目的了解石家庄地区肥胖人群含钾通道四聚化结构域15(KCTD15)基因rs11084753位点多态性情况,探讨其与白细胞介素-35(IL-35)的相关性和意义。方法选取石家庄地区肥胖人群3 518例(肥胖组),同时选取正常人群3 500例为对照组,直接测序法检测... 目的了解石家庄地区肥胖人群含钾通道四聚化结构域15(KCTD15)基因rs11084753位点多态性情况,探讨其与白细胞介素-35(IL-35)的相关性和意义。方法选取石家庄地区肥胖人群3 518例(肥胖组),同时选取正常人群3 500例为对照组,直接测序法检测KCTD15基因多态性。同时检测血清中IL-35及血脂。结果肥胖组中TC、TG明显高于对照组,而HDL-C、IL-35则明显低于对照组(P<0.05)。肥胖组饮酒及阳性家族史的比例均高于对照组(P<0.05)。肥胖组和对照组按AA、AG、GG不同基因型,TC、TG水平依次升高,而HDL-C、IL-35水平依次降低(P<0.05)。肥胖组KCTD15基因rs11084753位点GG及AG基因型比例明显高于对照组(P<0.05);多元logistic回归分析显示,KCTD15基因rs11084753位点基因型和IL-35水平是肥胖的独立影响因素(P<0.05)。结论 KCTD15基因rs11084753位点突变及血清IL-35水平可能与肥胖有关。 展开更多
关键词 肥胖 基因多态性 含钾通道四聚化结构域15基因 白细胞介素-35
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