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lncRNA TCONS00815878对猪骨骼肌卫星细胞分化的影响 被引量：4
1
作者 黄子莹 李龙 +2 位作者 李倩倩 刘向东 李长春 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1119-1128,I0002,I0003,共12页
猪骨骼肌发育是一个复杂的生物学过程,其中骨骼肌卫星细胞分化是影响骨骼肌发育的重要环节。近年来发现长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在骨骼肌卫星细胞分化中具有重要作用。为探究lncRNA TCONS00815878对猪骨骼肌卫星细胞... 猪骨骼肌发育是一个复杂的生物学过程,其中骨骼肌卫星细胞分化是影响骨骼肌发育的重要环节。近年来发现长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在骨骼肌卫星细胞分化中具有重要作用。为探究lncRNA TCONS00815878对猪骨骼肌卫星细胞分化的影响,本研究利用qRT-PCR技术检测出生7 d内大白仔猪6种组织(心脏、脾脏、肺脏、肾脏、背肌和腿肌)及从胚胎期到出生后5个不同时间点(35 d、45 d、55 d胚胎及产后第7 d和第200 d后腿肌肉组织)TCONS00815878的表达情况;利用反义核苷酸(antisense oligonucleotides,ASO)在猪骨骼肌卫星细胞中敲低TCONS00815878,检验分化标记基因MyoD、MyoG和MyHC表达情况;通过生物信息学分析预测TCONS00815878靶基因,并利用DAVID软件在线预测其靶基因的功能与通路。结果表明:TCONS00815878在猪心肌和腿肌中高表达;仔猪出生后7 d内,TCONS00815878在猪肌肉组织中表达量不断升高,第7 d达到高峰;在猪骨骼肌卫星细胞增殖和分化过程中,TCONS00815878在分化期表达量不断上升,且在分化30 h表达量达到峰值;敲低TCONS00815878后,MyoD、MyoG和MyHC基因表达量降低,其中MyoD表达量显著下降(P<0.05)。此外,功能预测结果发现,其靶基因富集到糖酵解和丙酮酸代谢等与骨骼肌卫星细胞分化相关的多个生物学过程。本研究推测,lncRNA TCONS00815878可能对猪骨骼肌卫星细胞的分化起促进作用。 展开更多
关键词 lncRNA TCONS00815878 猪骨骼肌卫星细胞 分化 敲低 靶基因
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共培养体系中猪骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响 被引量：1
2
作者 马衍旋 王文杰 +5 位作者 穆淑琴 席静宁 李宁 郑梓 闫峻 孙超 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期1423-1430,共8页
本试验旨在研究共培养体系中猪骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响。试验分离培养了猪骨骼肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞,2种细胞分离培养鉴定后,接种于Transwell细胞小室共培养板进行共培养,待细胞密度达到90%以上分别进... 本试验旨在研究共培养体系中猪骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响。试验分离培养了猪骨骼肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞,2种细胞分离培养鉴定后,接种于Transwell细胞小室共培养板进行共培养,待细胞密度达到90%以上分别进行诱导分化。骨骼肌卫星细胞诱导分化8 d后,检测肌内前体脂肪细胞分化水平、分化标志基因的表达以及脂质代谢关键酶的表达。结果显示:与肌内前体脂肪细胞单独培养相比,共培养体系内肌内前体脂肪细胞的脂滴数量和脂滴面积极显著减少(P<0.01),肌内前体脂肪细胞增殖分化转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ和CCAAT增强子结合蛋白的基因和蛋白表达水平极显著下降(P<0.01),肌内前体脂肪细胞的乙酰辅酶A羧化酶、脂肪酸合成酶的基因和蛋白表达水平极显著下降(P<0.01)。由此可见,共培养体系中猪骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质沉积具有抑制作用。 展开更多
关键词 猪骨骼肌卫星细胞 肌内前体脂肪细胞 共培养 脂质沉积
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猪骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体的制备及鉴定
3
作者 张静 李玉静 +3 位作者 张二敬 李紫然 刘静静 李春生 《肉类研究》 2021年第9期33-37,共5页
为制备猪骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体,利用生物化学方法提取猪骨骼肌肌钙蛋白并免疫小鼠,通过细胞融合制备稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采取体内诱生腹水法批量制备单克隆抗体,并对其免疫学特征进行鉴定。结果表明:最终筛选获得1... 为制备猪骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体,利用生物化学方法提取猪骨骼肌肌钙蛋白并免疫小鼠,通过细胞融合制备稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采取体内诱生腹水法批量制备单克隆抗体,并对其免疫学特征进行鉴定。结果表明:最终筛选获得1株杂交瘤细胞株,将其命名为2E8,其分泌的抗体为免疫球蛋白G2a亚型,效价为1:4,1×10^(5),亲和力常数为5.14×10^(6)L/mol;采用间接酶联免疫吸附测定检测单克隆抗体2E8特异性,结果表明,单克隆抗体2E8与鸡、鸭检测原的交叉反应率均为25%;与牛、羊检测原的交叉反应率分别为1.7%、6.3%;免疫印迹检测结果显示,单克隆抗体2E8与猪检测原反应条带清晰,与羊、鸡、鸭检测原反应条带轻微,与牛检测原几乎不发生反应。 展开更多
关键词 猪骨骼肌肌钙蛋白T 单克隆抗体 肉类掺假 间接酶联免疫吸附测定 免疫学特征
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一种优化的猪骨骼肌来源无细胞基质支架材料制备方法及鉴定 被引量：3
4
作者 张迪 谭秋雯 +3 位作者 汤沈力 罗静聪 张忆 吕青 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1282-1289,共8页
目的 探讨一种优化的猪骨骼肌脱细胞制备方法,以期制备理想的猪骨骼肌来源无细胞基质（decellularized porcine muscle tissue,DPMT）支架材料。方法 取市售新鲜健康成年家猪腰部骨骼肌组织,采用匀浆-球磨-去垢剂多步骤脱细胞方案制备D... 目的 探讨一种优化的猪骨骼肌脱细胞制备方法,以期制备理想的猪骨骼肌来源无细胞基质（decellularized porcine muscle tissue,DPMT）支架材料。方法 取市售新鲜健康成年家猪腰部骨骼肌组织,采用匀浆-球磨-去垢剂多步骤脱细胞方案制备DPMT。行组织学观察脱细胞、脱脂效果,天狼猩红染色分析胶原成分,扫描电镜观察材料内部微结构;测定材料中DNA含量及总蛋白质含量。取人脂肪来源干细胞（adipose derived stem cells,ADSCs）、小鼠成纤维细胞（NIH3T3）和人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,置于不同浓度DPMT浸提液中,培养后第1、3、5天采用细胞计数试剂盒8法测算细胞相对增殖率,评价材料细胞毒性;通过DPMT表面接种HUVECs体外共培养3 d后,行活死细胞染色评价其体外细胞相容性。采用SPF级雄性SD大鼠建立DPMT大鼠背部皮下植入模型,于植入3、7、14、28 d取材,大体观察材料降解情况,并测量其横径;行HE染色和CD31免疫组织化学染色观察其生物相容性和血管新生情况。结果 匀浆-球磨-去垢剂多步骤脱细胞方法操作简便,制备DPMT仅需1 d时间;检测显示DPMT脱细胞、脱脂完全,主要成分为Ⅰ型胶原及Ⅳ型胶原;DPMT中DNA含量为（15.902±1.392）ng/mg干重,总蛋白质含量占其干重的68.94%,显著低于新鲜猪骨骼肌组织[分别为（140.724±10.422）ng/mg干重及93.14%]（P〈0.05）;DPMT内部呈均质疏松网状结构。体外细胞相容性实验显示DPMT细胞毒性评级均为0~1级,HUVECs在DPMT表面能稳定生长。DPMT大鼠皮下植入后14 d内可保持大体结构的稳定性,至28 d时完全降解;炎性反应在3 d时最明显,7 d时明显减轻,两时间点炎性细胞数量比较差异有统计学意义（P〈0.05）;植入后7 d即可见DPMT内部新生血管环结构形成,14 d时新生血管环数量显著增加,比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 匀浆-球磨-去垢剂多步骤脱细胞方案省时高效、可重复性佳,所制备的DPMT脱细胞、脱脂完全,蛋白质成分保存良好,具有良好的体内外生物相容性,且可能具有一定诱导血管新生潜能。 展开更多
关键词 组织工程 支架材料 猪骨骼肌 无细胞基质 生物相容性 血管新生
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猪骨骼肌卫星细胞中miR-24功能的初步研究及靶基因分析
5
作者 徐建 于鑫 +2 位作者 曾芳 童雄 王翀 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1260-1265,共6页
为了探讨miR-24对猪骨骼肌发育的影响,对体外培养1日龄纯种长白公猪骨骼肌卫星细胞分别转染miR-24过表达载体和干扰片段,发现过表达miR-24后,成肌分化基因MyoD、Myogenin和Myf5表达量显著升高,骨骼肌卫星细胞分化趋势增强;干扰miR-24后,... 为了探讨miR-24对猪骨骼肌发育的影响,对体外培养1日龄纯种长白公猪骨骼肌卫星细胞分别转染miR-24过表达载体和干扰片段,发现过表达miR-24后,成肌分化基因MyoD、Myogenin和Myf5表达量显著升高,骨骼肌卫星细胞分化趋势增强;干扰miR-24后,Myogenin的表达量显著降低;同时,靶基因预测结果显示Myogenin可能是miR-24的靶基因。 展开更多
关键词 miR-24 猪骨骼肌卫星细胞 靶基因
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干扰ACACA基因对猪原代肌卫星细胞增殖和成脂转分化过程的影响
6
作者 雷宇航 谭娅 +5 位作者 黄志洋 赵梦颖 齐婧 甘麦邻 沈林園 朱砺 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期335-343,388,共10页
【目的】探究乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl-CoA carboxylaseα,ACACA)对猪原代肌肉卫星细胞(muscle satellite cells,MSCs)增殖凋亡以及成脂转分化的影响。【方法】通过体外培养MSCs模拟猪肌内脂肪的形成过程,根据ACACA基因序列构建3条小干... 【目的】探究乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl-CoA carboxylaseα,ACACA)对猪原代肌肉卫星细胞(muscle satellite cells,MSCs)增殖凋亡以及成脂转分化的影响。【方法】通过体外培养MSCs模拟猪肌内脂肪的形成过程,根据ACACA基因序列构建3条小干扰RNA,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)筛选出干扰效率最高的siRNA进行转染。成功干扰MSCs内ACACA的表达后,分别通过q RT-PCR、CCK-8细胞增殖实验、流式细胞术、油红O染色和检测甘油三酯(TG)等方法对MSCs增殖、凋亡以及转分化时期脂滴形成效果进行评估。【结果】在增殖期干扰ACACA,MSCs内细胞周期标志基因Cyclin D1(P<0.05)、Cyclin E(P<0.0001)以及抗凋亡基因BCL-2(P<0.05)的表达量下调,促凋亡基因BAX(P<0.05)的表达量上调;在对MSCs进行成脂转分化诱导作用下,MSCs具有向脂肪细胞转分化的能力,而干扰ACACA后,MSCs中脂滴极显著减少(P<0.0001)。【结论】干扰ACACA后抑制猪MSCs的增殖,促进其凋亡,并且对成脂转分化时期脂滴的形成具有抑制作用。研究结果为后续研究ACACA对肌内脂肪的影响及猪肉制品调控机制研究提供实验参考和基础数据。 展开更多
关键词 乙酰辅酶A羧化酶α 猪骨骼肌 原代肌卫星细胞 SIRNA 转分化
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腺病毒与慢病毒感染猪原代细胞的比较研究 被引量：4
7
作者 姚永曦 吴睿帆 +1 位作者 汪以真 王新霞 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2018年第4期83-88,共6页
本实验旨在探究腺病毒和慢病毒侵染猪原代细胞的最佳感染复数(MOI)和侵染时间,确定较优的侵染方式。实验选择体外分离培养猪骨骼肌卫星细胞、前体脂肪细胞和骨髓间充质干细胞后,分别用腺病毒(MOI=0、50、100、200、500、1 500)和慢病毒(... 本实验旨在探究腺病毒和慢病毒侵染猪原代细胞的最佳感染复数(MOI)和侵染时间,确定较优的侵染方式。实验选择体外分离培养猪骨骼肌卫星细胞、前体脂肪细胞和骨髓间充质干细胞后,分别用腺病毒(MOI=0、50、100、200、500、1 500)和慢病毒(MOI=0、30、50、80、100、300)感染细胞,每隔24 h在荧光显微镜下观察记录细胞中绿色荧光蛋白的表达情况。结果表明:当腺病毒MOI值为500、慢病毒MOI值为80,侵染4 d后,3种细胞荧光强度均较强且细胞形态完好。相比较而言,腺病毒能快速高效侵染猪骨骼肌卫星细胞;而对于猪前体脂肪细胞和猪骨髓间充质干细胞,2种病毒侵染速度相近,但慢病毒的侵染效率和荧光强度更高。因此,对于猪骨骼肌卫星细胞,选取腺病毒作为外源基因载体更为合适;对于猪前体脂肪细胞和猪骨髓间充质干细胞,慢病毒的侵染效果则更好。 展开更多
关键词 猪骨骼肌卫星细胞 猪前体脂肪细胞 猪骨髓间充质干细胞 腺病毒 慢病毒 MOI
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肌肉生理学
8
《国外科技资料目录（医药卫生）》 CAS 2002年第12期31-31,共1页
0244349 受力量和耐力训练的运动员中电的和力学的(max)/M(max)比值/Maffi-uletti N A//J Appl Physiol.-2001,90(1)-.3-9 医科图0244350 涉及信号传导和葡萄糖转运的蛋白队列与运动有关的差异/Yu M//J Ap.pl Physi01.-2001,90(1).
关键词 医科 葡萄糖转运 猪骨骼肌 耐力训练 信号传导 运动员 肌肉生理学 血管运动 队列 肌肉力学特性
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