目的探讨环指蛋白157(RING finger protein 157,RNF157)在黑素瘤细胞增殖中的作用及相关机制。方法采用慢病毒转染技术构建RNF157过表达黑素瘤细胞株,小干扰RNA(siRNA)技术构建敲减RNF157的黑素瘤细胞株,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q...目的探讨环指蛋白157(RING finger protein 157,RNF157)在黑素瘤细胞增殖中的作用及相关机制。方法采用慢病毒转染技术构建RNF157过表达黑素瘤细胞株,小干扰RNA(siRNA)技术构建敲减RNF157的黑素瘤细胞株,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹实验验证转染效果。采用MTT实验、克隆形成实验检测RNF157过表达黑素瘤细胞和敲减RNF157黑素瘤细胞的细胞增殖能力。采用裸鼠皮下成瘤实验及免疫组化染色检测RNF157过表达黑素瘤细胞体外增殖能力。采用免疫共沉淀(Co-IP)结合质谱分析、蛋白质组学和泛素化组学,探究RNF157在ERK通路中的潜在作用机制。结果免疫组化染色结果显示,RNF157在黑素瘤组织中的表达高于瘤旁组织(P<0.01)。qRT-PCR和Western印迹实验结果显示,过表达组的RNF157表达水平显著高于对照组(P<0.0001);si3转染效率最高,si3组的RNF157表达水平显著低于对照组(P<0.01)。MTT实验、克隆形成实验结果显示,RNF157过表达可促进黑素瘤细胞增殖,敲减RNF157抑制黑素瘤细胞增殖。进一步检测发现,RNF157过表达可以激活黑素瘤细胞的ERK通路。Co-IP结合质谱分析、蛋白质组学和泛素化组学结果显示,RNF157可结合小凹蛋白-1(caveolin-1,CAV1)并下调其表达水平,从而调控ERK通路。结论RNF157可促进黑素瘤细胞的体内外增殖;在黑素瘤细胞中,RNF157可能通过结合并下调CAV1表达水平,参与细胞内ERK通路激活。展开更多
目的探讨环指蛋白213（RNF213）基因P．R4810K（G〉A）单核苷酸多态性与中国汉族缺血性卒中的关系。方法纳入2013年6月～2013年12月入住郑州大学第一附属医院神经内科汉族缺血性脑卒中患者，所有患者均行血管影像学检查，包括磁共振血...目的探讨环指蛋白213（RNF213）基因P．R4810K（G〉A）单核苷酸多态性与中国汉族缺血性卒中的关系。方法纳入2013年6月～2013年12月入住郑州大学第一附属医院神经内科汉族缺血性脑卒中患者，所有患者均行血管影像学检查，包括磁共振血管成像（MRA）或者CT血管成像（CTA），分为颅内大动脉狭窄或闭塞亚组（intracranial major artery stenosis／occlusion，ICASO）及无颅内大动脉狭窄或闭塞亚组（norl-ICASO），同时选取性别、年龄与缺血性脑卒中组相匹配的健康汉族人为对照组。通过聚合酶链式反应及直接测序方法行多态性位点分析。结果共纳入285例中国汉族缺血性脑卒中患者，其中139例（48．8％）存在不同程度颅内动脉狭窄或者闭塞，146例（51．2％）无颅内大动脉狭窄或闭塞。RNF213基因P．R4810K多态性在缺血性卒中组、1CASO亚组、非ICASO亚组、正常对照组的发生率分别为0．35％（1／285）、0．72％（1／139）、0（0／146）、0．33％（1／300）。和对照组相比，RNF213基因P．R4810K多态性与缺血性卒中组差异无统计学意义（P=1，oddsratio[OR]1．053，95％confi-denceinterval[CI]0．066-16．912），与合并颅内大动脉狭窄或者闭塞亚组问差异同样无统计学意义（P=0．533，OR2．167，95％CI0．135-34．894）。结论RNF213基因P．R4810K单核苷酸多态性与中国汉族缺血性脑卒中及存在ICASO的缺血性脑卒中患者的易患性无相关性，但需在较大样本中进一步验证。展开更多
文摘目的探讨环指蛋白157(RING finger protein 157,RNF157)在黑素瘤细胞增殖中的作用及相关机制。方法采用慢病毒转染技术构建RNF157过表达黑素瘤细胞株,小干扰RNA(siRNA)技术构建敲减RNF157的黑素瘤细胞株,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹实验验证转染效果。采用MTT实验、克隆形成实验检测RNF157过表达黑素瘤细胞和敲减RNF157黑素瘤细胞的细胞增殖能力。采用裸鼠皮下成瘤实验及免疫组化染色检测RNF157过表达黑素瘤细胞体外增殖能力。采用免疫共沉淀(Co-IP)结合质谱分析、蛋白质组学和泛素化组学,探究RNF157在ERK通路中的潜在作用机制。结果免疫组化染色结果显示,RNF157在黑素瘤组织中的表达高于瘤旁组织(P<0.01)。qRT-PCR和Western印迹实验结果显示,过表达组的RNF157表达水平显著高于对照组(P<0.0001);si3转染效率最高,si3组的RNF157表达水平显著低于对照组(P<0.01)。MTT实验、克隆形成实验结果显示,RNF157过表达可促进黑素瘤细胞增殖,敲减RNF157抑制黑素瘤细胞增殖。进一步检测发现,RNF157过表达可以激活黑素瘤细胞的ERK通路。Co-IP结合质谱分析、蛋白质组学和泛素化组学结果显示,RNF157可结合小凹蛋白-1(caveolin-1,CAV1)并下调其表达水平,从而调控ERK通路。结论RNF157可促进黑素瘤细胞的体内外增殖;在黑素瘤细胞中,RNF157可能通过结合并下调CAV1表达水平,参与细胞内ERK通路激活。
文摘目的探讨环指蛋白213（RNF213）基因P．R4810K（G〉A）单核苷酸多态性与中国汉族缺血性卒中的关系。方法纳入2013年6月～2013年12月入住郑州大学第一附属医院神经内科汉族缺血性脑卒中患者，所有患者均行血管影像学检查，包括磁共振血管成像（MRA）或者CT血管成像（CTA），分为颅内大动脉狭窄或闭塞亚组（intracranial major artery stenosis／occlusion，ICASO）及无颅内大动脉狭窄或闭塞亚组（norl-ICASO），同时选取性别、年龄与缺血性脑卒中组相匹配的健康汉族人为对照组。通过聚合酶链式反应及直接测序方法行多态性位点分析。结果共纳入285例中国汉族缺血性脑卒中患者，其中139例（48．8％）存在不同程度颅内动脉狭窄或者闭塞，146例（51．2％）无颅内大动脉狭窄或闭塞。RNF213基因P．R4810K多态性在缺血性卒中组、1CASO亚组、非ICASO亚组、正常对照组的发生率分别为0．35％（1／285）、0．72％（1／139）、0（0／146）、0．33％（1／300）。和对照组相比，RNF213基因P．R4810K多态性与缺血性卒中组差异无统计学意义（P=1，oddsratio[OR]1．053，95％confi-denceinterval[CI]0．066-16．912），与合并颅内大动脉狭窄或者闭塞亚组问差异同样无统计学意义（P=0．533，OR2．167，95％CI0．135-34．894）。结论RNF213基因P．R4810K单核苷酸多态性与中国汉族缺血性脑卒中及存在ICASO的缺血性脑卒中患者的易患性无相关性，但需在较大样本中进一步验证。
