目的探讨在动态负荷压力对体外软骨前体干细胞(PSC)甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)的影响,寻找在细胞外基质呈差异性表达的蛋白质。方法体外培养大鼠软骨PSC,并用磁性细胞分选系统分离纯化,所得PSC行不同强度(30、60、90 mm Hg)和持续时间(2...目的探讨在动态负荷压力对体外软骨前体干细胞(PSC)甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)的影响,寻找在细胞外基质呈差异性表达的蛋白质。方法体外培养大鼠软骨PSC,并用磁性细胞分选系统分离纯化,所得PSC行不同强度(30、60、90 mm Hg)和持续时间(2、6、24 h)的压力刺激,设未刺激组为对照组,采用逆转录PCR检测各组细胞的PTHrP水平;随机将软骨前体干细胞分成实验组与对照组,实验组以90 mm Hg强度的压力持续24 h处理软骨前体干细胞,对照组不予处理,提取两组蛋白质行双向电泳,以基质辅助激光解吸/离子化飞行时间质谱仪鉴定2组细胞呈差异表达的蛋白质。结果 PSC在动态压力培养环境下,各时间点PTHrP表达水平均明显高于对照组(P<0.01);PTHrP mRNA的表达水平随时间增加而升高;同一时间点,压力越大,PTHrP mRNA表达水平越高。质谱鉴定在压力作用下的实验组与对照组呈差异表达共6种蛋白质,分别为脯氨酰羟化酶α亚单位、丙酮酸激酶、L-乳酸脱氢酶、脯氨酰羟化酶β亚单位、细胞骨架蛋白、烯醇酶。实验组的所有差异性蛋白表达均强于对照组。结论压力能促进体外培养的大鼠软骨前体干细胞PTHrP的表达,压力作用下软骨细胞外基质有6个关键蛋白呈差异表达,其在软骨改建中可能起重要作用。展开更多
目的:构建并表达鼠源甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1～84片段的载体,并检测其在促进骨形成中的作用。方法:应用RT-PCR方法体外扩增mPTHrP1～84基因,经测序后重组入原核表达载体pGEX-2TK,将构建正确...目的:构建并表达鼠源甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1～84片段的载体,并检测其在促进骨形成中的作用。方法:应用RT-PCR方法体外扩增mPTHrP1～84基因,经测序后重组入原核表达载体pGEX-2TK,将构建正确的pGEX-2TK/mPTHrP1～84原核表达载体转化E.coliBL21,IPTG诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,通过细胞学实验确定纯化的重组PTHrP片段在促进骨形成中的作用。结果:构建的重组表达载体pGEX-2TK/mPTHrP1～84诱导表达产物以可溶性的形式存在;纯化的mPTHrP1～84可促进小鼠的间充质干细胞向成骨方向增殖和分化。结论:构建、表达的mPTHrP1～84片段可促进骨形成。展开更多
目的:构建重组甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1-36并观察其在促进牙槽骨骨形成中的作用。方法:构建pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体,表达重组小鼠PTHrP1-36蛋白。通过处理小鼠原代骨髓间充质细胞和...目的:构建重组甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1-36并观察其在促进牙槽骨骨形成中的作用。方法:构建pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体,表达重组小鼠PTHrP1-36蛋白。通过处理小鼠原代骨髓间充质细胞和卵巢切除致颌骨疏松的小鼠,体外和体内观察重组PTHrP1-36在促进牙槽骨骨形成中的作用。采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实验结果显示,pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体构建成功,IPTG可诱导新生蛋白表达。体外处理小鼠骨髓细胞,发现重组PTHrP1-36蛋白可以增加总成纤维细胞克隆形成单位(CFU-f)、碱性磷酸酶阳性的CFU-f和钙化结节的数目。在卵巢切除致颌骨疏松的小鼠体内注射重组PTHrP1-36蛋白,发现小鼠牙槽骨骨密度增加。H-E染色以及骨胶原染色显示,牙槽骨骨量明显增加。结论:重组PTHrP1-36可促进骨髓间充质细胞的成骨分化,促进牙槽骨骨密度和骨量的增加,提示PTHrP1-36在促进牙槽骨形成中具有积极作用。展开更多
文摘目的探讨在动态负荷压力对体外软骨前体干细胞(PSC)甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)的影响,寻找在细胞外基质呈差异性表达的蛋白质。方法体外培养大鼠软骨PSC,并用磁性细胞分选系统分离纯化,所得PSC行不同强度(30、60、90 mm Hg)和持续时间(2、6、24 h)的压力刺激,设未刺激组为对照组,采用逆转录PCR检测各组细胞的PTHrP水平;随机将软骨前体干细胞分成实验组与对照组,实验组以90 mm Hg强度的压力持续24 h处理软骨前体干细胞,对照组不予处理,提取两组蛋白质行双向电泳,以基质辅助激光解吸/离子化飞行时间质谱仪鉴定2组细胞呈差异表达的蛋白质。结果 PSC在动态压力培养环境下,各时间点PTHrP表达水平均明显高于对照组(P<0.01);PTHrP mRNA的表达水平随时间增加而升高;同一时间点,压力越大,PTHrP mRNA表达水平越高。质谱鉴定在压力作用下的实验组与对照组呈差异表达共6种蛋白质,分别为脯氨酰羟化酶α亚单位、丙酮酸激酶、L-乳酸脱氢酶、脯氨酰羟化酶β亚单位、细胞骨架蛋白、烯醇酶。实验组的所有差异性蛋白表达均强于对照组。结论压力能促进体外培养的大鼠软骨前体干细胞PTHrP的表达,压力作用下软骨细胞外基质有6个关键蛋白呈差异表达,其在软骨改建中可能起重要作用。
文摘目的:构建并表达鼠源甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1～84片段的载体,并检测其在促进骨形成中的作用。方法:应用RT-PCR方法体外扩增mPTHrP1～84基因,经测序后重组入原核表达载体pGEX-2TK,将构建正确的pGEX-2TK/mPTHrP1～84原核表达载体转化E.coliBL21,IPTG诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,通过细胞学实验确定纯化的重组PTHrP片段在促进骨形成中的作用。结果:构建的重组表达载体pGEX-2TK/mPTHrP1～84诱导表达产物以可溶性的形式存在;纯化的mPTHrP1～84可促进小鼠的间充质干细胞向成骨方向增殖和分化。结论:构建、表达的mPTHrP1～84片段可促进骨形成。
文摘目的:构建重组甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1-36并观察其在促进牙槽骨骨形成中的作用。方法:构建pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体,表达重组小鼠PTHrP1-36蛋白。通过处理小鼠原代骨髓间充质细胞和卵巢切除致颌骨疏松的小鼠,体外和体内观察重组PTHrP1-36在促进牙槽骨骨形成中的作用。采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实验结果显示,pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表达载体构建成功,IPTG可诱导新生蛋白表达。体外处理小鼠骨髓细胞,发现重组PTHrP1-36蛋白可以增加总成纤维细胞克隆形成单位(CFU-f)、碱性磷酸酶阳性的CFU-f和钙化结节的数目。在卵巢切除致颌骨疏松的小鼠体内注射重组PTHrP1-36蛋白,发现小鼠牙槽骨骨密度增加。H-E染色以及骨胶原染色显示,牙槽骨骨量明显增加。结论:重组PTHrP1-36可促进骨髓间充质细胞的成骨分化,促进牙槽骨骨密度和骨量的增加,提示PTHrP1-36在促进牙槽骨形成中具有积极作用。
