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蚀斑法测定呼吸道合胞病毒滴度的建立和验证
1
作者 刘悦越 赵荣荣 +5 位作者 赵慧 李淑艳 英志芳 邵铭 王剑锋 李长贵 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第11期1515-1519,共5页
目的建立蚀斑法用于呼吸道合胞病毒的病毒滴度测定,并进行验证。方法通过测定样品的病毒滴度,比较滴度结果,筛选最佳覆盖物、覆盖物浓度和病毒孵育时间,从而建立蚀斑法用于测定呼吸道合胞病毒滴度。根据国际人用药品注册技术协调会指导... 目的建立蚀斑法用于呼吸道合胞病毒的病毒滴度测定,并进行验证。方法通过测定样品的病毒滴度,比较滴度结果,筛选最佳覆盖物、覆盖物浓度和病毒孵育时间,从而建立蚀斑法用于测定呼吸道合胞病毒滴度。根据国际人用药品注册技术协调会指导原则和《中华人民共和国药典》要求,验证该方法的准确性、精密性、线性和耐用性。结果采用0.8%微晶纤维素作为覆盖物,病毒孵育2~3 h为建立蚀斑法的最优条件。该蚀斑法测定不同浓度样品病毒滴度的结果相对偏倚均小于10%;试验内和试验间精密性几何变异系数分别为11%和18%;本方法的线性斜率为1.004,相关系数为0.9991;本方法中固定细胞的时间0.5~24 h均适用,差异无统计学意义(F=1.767,P=0.2225)。结论建立的蚀斑法具有较好的准确性、精密性、线性和耐用性,适用于呼吸道合胞病毒的滴度测定。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 病毒滴度 蚀斑法 微晶纤维素 方法验证
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冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度FFA法的建立及验证
2
作者 贾伟 支百慧 +5 位作者 韩玲 朱大永 王荣 张春 赵慧 刘大维 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1500-1506,共7页
目的:建立并验证荧光灶法(FFA)检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度的可行性。方法:采用FFA分别检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗H1N1型、H3N2型、B型单一病毒收获液病毒滴度,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性和耐用性。结果:该... 目的:建立并验证荧光灶法(FFA)检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度的可行性。方法:采用FFA分别检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗H1N1型、H3N2型、B型单一病毒收获液病毒滴度,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性和耐用性。结果:该方法专属性良好;准确度回收率均为80%~115%,病毒滴度的试验内及试验间精密度RSD值均<10%;3个型别样品稀释倍数对数与病毒滴度呈线性关系,相关系数R2均>0.98;不同孵育温度的病毒滴度RSD值均<10%,耐用性良好。结论:建立的FFA具有良好的专属性、准确度、精密度、线性及耐用性,可用于冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度检测。 展开更多
关键词 流感病毒 冻干鼻喷流感减毒活疫苗 病毒滴度 FFA
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腺病毒滴度不同测定方法比较 被引量：20
3
作者 孙鹏宇 张艳玲 +6 位作者 荆玉明 张信基 张哲欢 黎诚耀 陈白虹 谭万龙 李红卫 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期234-238,共5页
目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CB... 目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)扩增、纯化后,同时分别用OD260值法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法及CPE法测定病毒滴度,并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准,对各种方法所得结果进行比较研究。结果绿色荧光蛋白标记法、CPE法与壳蛋白免疫法同时测定4种腺病毒滴度,其结果无统计学差异(P>0.1)。荧光定量PCR法测定值明显高于壳蛋白免疫法(P<0.05),但与该法测定结果间存在良好的相关性(r=0.965),约为壳蛋白免疫法所测得结果的10倍。OD260法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性。结论绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法,其结果客观可靠,能真实地反映病毒的实际感染力。荧光定量PCR法测定结果反映的是完整的病毒颗粒数,能够间接反映病毒的感染力,且该方法操作简单,耗时短,同样有较高的实用性。 展开更多
关键词 腺病毒 病毒滴度测定 壳蛋白免疫法 绿色荧光蛋白 荧光定量PCR 细胞病变法
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广州地区无偿献血者HCV基因分型与病毒滴度的相关性研究 被引量：9
4
作者 黄杰庭 戎霞 +4 位作者 熊华平 许茹 黄珂 王敏 付涌水 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1063-1065,共3页
目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)6a亚型与病毒滴度的关系。方法从2009年11月～2011年8月收集广州地区无偿献血人群中抗-HCV阳性标本527份,对其进行HCV核酸检测(nucleic acid test,NAT)。对核酸阳性的标本采用罗氏COBAS Amp... 目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)6a亚型与病毒滴度的关系。方法从2009年11月～2011年8月收集广州地区无偿献血人群中抗-HCV阳性标本527份,对其进行HCV核酸检测(nucleic acid test,NAT)。对核酸阳性的标本采用罗氏COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV test进行病毒滴度的定量检测,以及采用NS5B基因扩增和直接测序法进行HCV基因分型的鉴定。对于标本的病毒滴度与基因分型采用SPSS16.0软件进行关联性分析。结果 527份抗-HCV阳性标本中,299份标本成功获得病毒滴度和分型结果。HCV 1型(1a+1b)、2型(2a)、3型(3a+3b)和6型(6a)的比例分别为48.8%,8.7%,12.4%和30.1%。统计分析结果表明,不同基因型之间的病毒滴度存在显著差异(F=6.675,P<0.01)。HCV 1型和6型的平均滴度分别为6.04,6.15 log10 IU/ml,均高于2型和3型(平均滴度分别为5.66和5.49 log10 IU/ml)。结论 HCV 1b和6a是广东地区无偿献血者人群中流行的主要亚型。HCV 1型(1a+1b)和6型(6a)的病毒滴度显著高于2型和3型。HCV 6a在广东地区的流行和传播可能其较高病毒滴度有关。研究HCV基因分型与病毒滴度的关系的研究有助于广东地区HCV的防控策略以及各亚型治疗方案的制定。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 病毒滴度 基因分型 HCV 6a 无偿献血者
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经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究 被引量：15
5
作者 江千里 王健民 +2 位作者 江汕 温丽敏 周虹 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第10期1101-1103,共3页
目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl... 目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl带有GFP 标记基因的病毒感染,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以流式细胞仪检测细胞eGFP+率。病毒滴度(TU/ml)=(2×105×细胞eGFP+率)/病毒原液体积。(2)LaSRT法:NIH3T3 细胞以5 000/孔接种于96 孔板,12 h后更换成完全培养液90 μl/孔,以8孔为一组,第1 孔中加入病毒液10 μl,此后每孔依次10∶1 倍比稀释,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以浓度自高到低的方向,在荧光倒置显微镜下确定计量孔(第n孔),计数孔中的阳性细胞数m。病毒滴度(TU/ml)=m×10n+1。(3)对7批病毒以LaSRT法研究,探讨冻存/复苏过程对重组病毒滴度的影响。结果经典方法测定的重组病毒滴度为(1.54±0.38)×106 TU/ml,LaSRT法测定的病毒滴度为(1.33±0.57)×106 TU/ml,两者无统计学差异(P>0.05)。LaSRT法可以大批量、快速地测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度。单次冻存/复苏后的病毒滴度为冻存前的(18.1±9.9)%(n=7)。结论LaSRT法和经典方法测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度,结果无统计学差异; 展开更多
关键词 经典方法 LaSRT法 测定 绿色荧光蛋白 病毒滴度测定法 基因重组逆转录病毒
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心安颗粒对病毒性心肌炎小鼠心肌酶及病毒滴度的影响 被引量：6
6
作者 陈美娟 肖顺汉 +2 位作者 杨思进 葛李 顾立 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-2,共2页
目的:探讨心安颗粒对病毒性心肌炎小鼠心肌酶及病毒滴度的影响。方法:采用BALB/C小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立小鼠病毒性心肌炎模型。小鼠随机分为空白对照组、模型组、心安颗粒10,20,40g(生药).kg-1.d-1和利巴韦林0.1g.kg-1.d-1... 目的:探讨心安颗粒对病毒性心肌炎小鼠心肌酶及病毒滴度的影响。方法:采用BALB/C小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立小鼠病毒性心肌炎模型。小鼠随机分为空白对照组、模型组、心安颗粒10,20,40g(生药).kg-1.d-1和利巴韦林0.1g.kg-1.d-1组,注射CVB32h后给药,连续用药7d,第8天处死小鼠,取血测定血清心肌乳酸脱氢酶(LDH)及中和抗体,取心肌制成细胞悬液,测定病毒滴度。结果:心安颗粒治疗组与模型组相比,血清LDH含量明显降低,中和抗体及病毒滴度明显降低(P<0.01)。结论:心安颗粒对病毒性心肌炎小鼠具有抗病毒、缓解心肌炎症作用。 展开更多
关键词 心安颗粒 病毒性心肌炎 心肌酶 病毒滴度 BALB/C小鼠
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应用荧光实时定量PCR方法检测重组慢病毒滴度及其感染效率 被引量：14
7
作者 马海燕 方彧聃 张敬之 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第5期394-398,共5页
慢病毒载体已经广泛应用于动物模型中基因治疗的研究和转基因动物的制备,而准确地测定重组慢病毒的滴度和感染效率是其关键步骤.通过荧光实时定量PCR的方法定量分析重组慢病毒的颗粒数以及病毒的活性滴度,并以GFP报告基因的方法作为对... 慢病毒载体已经广泛应用于动物模型中基因治疗的研究和转基因动物的制备,而准确地测定重组慢病毒的滴度和感染效率是其关键步骤.通过荧光实时定量PCR的方法定量分析重组慢病毒的颗粒数以及病毒的活性滴度,并以GFP报告基因的方法作为对照来验证定量PCR方法的准确性.研究结果显示,应用荧光实时定量PCR法与GFP报告基因法测定得到的病毒活性滴度成正相关,而且前者可以更加准确地测定病毒滴度和病毒感染效率. 展开更多
关键词 慢病毒载体 荧光实时定量PCR 病毒滴度 整合拷贝数 感染效率
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反复冻融次数和不同保存温度对病毒滴度的影响 被引量：8
8
作者 陈柯君 李佳 +7 位作者 邓乐君 陈灶妹 赵月 江丽 张俊辉 李伟达 李茹冰 李健 《动物医学进展》 北大核心 2018年第2期61-65,共5页
为探讨在有宿主细胞的情况下,反复冻融和不同保存温度对病毒滴度的影响,将收集的含ST细胞培养的猪细小病毒和含Vero细胞培养的伪狂犬病病毒经过不同次数的反复冻融,测定其病毒滴度。将收集的猪细小病毒液和伪狂犬病病毒液分别在4、22、... 为探讨在有宿主细胞的情况下,反复冻融和不同保存温度对病毒滴度的影响,将收集的含ST细胞培养的猪细小病毒和含Vero细胞培养的伪狂犬病病毒经过不同次数的反复冻融,测定其病毒滴度。将收集的猪细小病毒液和伪狂犬病病毒液分别在4、22、-20、-80℃保存,间隔一段时间后测定半数组织细胞感染剂量(TCID_(50)),以了解病毒滴度。结果显示,含ST细胞的猪细小病毒和含Vero细胞的伪狂犬病病毒经过反复冻融3次之后,病毒滴度比未经冻融的病毒滴度分别提高了1.81lg和1.86lg。同一温度下,随着放置时间的增加,病毒滴度均呈下降的趋势。在一定时间内,不同保存温度下病毒滴度有明显区别,但在-20℃和-80℃条件下保存的病毒滴度下降比4℃和22℃条件下保存的慢。因此,在培养病毒的时候可以用反复冻融3次的方法来提高病毒的滴度。4℃和22℃只能作为病毒的短期储存温度,-20℃和-80℃对于病毒来说是合适的保存温度。 展开更多
关键词 病毒 病毒滴度 反复冻融 保存温度
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运用流式细胞术快速检测汉滩病毒滴度 被引量：4
9
作者 蒋伟 杨栋强 +5 位作者 潘蕾 于海涛 李彧 王伟 王平忠 白雪帆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期579-581,584,共4页
目的:建立用流式细胞仪快速测定汉滩病毒滴度的方法。方法:汉滩病毒76-118株感染Vero-E6细胞,以汉滩病毒核蛋白单克隆抗体(mAb)3G1为一抗,FITC标记的羊抗小鼠抗体为二抗,用流式细胞术(FCM)检测阳性细胞率,评价感染后不同时间点,以及不... 目的:建立用流式细胞仪快速测定汉滩病毒滴度的方法。方法:汉滩病毒76-118株感染Vero-E6细胞,以汉滩病毒核蛋白单克隆抗体(mAb)3G1为一抗,FITC标记的羊抗小鼠抗体为二抗,用流式细胞术(FCM)检测阳性细胞率,评价感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率,并与间接免疫荧光法对比。结果:感染后36 h阳性细胞百分率为(10.06±0.42)%,最低检测的病毒滴度为100 TCID50/mL。结论:相对于传统的空斑实验及间接免疫荧光滴定法,FCM是一种简单、快速、有效检测汉滩病毒滴度的方法。 展开更多
关键词 汉滩病毒 流式细胞术 空斑实验 间接免疫荧光 病毒滴度
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鼠巨细胞病毒感染小鼠感染性病毒滴度和基因表达的研究 被引量：5
10
作者 刘兴楼 舒赛男 +3 位作者 王慧 张慧娟 李革 方峰 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期363-366,共4页
目的观察鼠巨细胞病毒(MCMV)全身播散感染小鼠唾液腺的感染性病毒滴度,唾液腺、肝、脾和肾MCMV DNA及mRNA水平,以了解MCMV感染小鼠易感组织和器官内的病毒状况。方法 30只BALB/c幼龄小鼠腹腔接种MCMV(Smith株),在感染后1、3、7、14、28... 目的观察鼠巨细胞病毒(MCMV)全身播散感染小鼠唾液腺的感染性病毒滴度,唾液腺、肝、脾和肾MCMV DNA及mRNA水平,以了解MCMV感染小鼠易感组织和器官内的病毒状况。方法 30只BALB/c幼龄小鼠腹腔接种MCMV(Smith株),在感染后1、3、7、14、28、60、75、90和120 d,各随机处死3只小鼠。噬斑法检测唾液腺感染性病毒滴度,实时定量PCR和逆转录PCR(RT-PCR)分别检测唾液腺、肝、脾和肾内MCMV DNA水平及mRNA表达。结果感染后7 d开始,噬斑法在唾液腺内检测到MCMV,14 d达到高峰,28 d以后不能再检测到;唾液腺、肝、脾和肾MCMV DNA在感染后1 d就可检测到,并持续到感染后120 d;唾液腺MCMV mRNA在感染后45 d不能检测到,而肝和肾MCMV mRNA在感染后28 d,脾MCMV mRNA在感染后14 d不能检测到。结论 MCMV感染的幼龄小鼠在感染28 d后不再排毒,在感染45 d后病毒不再复制,而在长达120 d的急慢性感染期内,病毒长期存在。 展开更多
关键词 鼠巨细胞病毒 感染性病毒滴度 小鼠
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两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究 被引量：5
11
作者 白露 叶伟 +6 位作者 于蒙蒙 张亮 于澜 刘梓谕 吴兴安 徐志凯 张芳琳 《科学技术与工程》 北大核心 2012年第9期2137-2141,共5页
比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA)法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。用汉坦病毒76—118株感染Vero—E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素... 比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA)法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。用汉坦病毒76—118株感染Vero—E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶(HRP),建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测上述细胞中的病毒抗原,并比较两者的检测灵敏度。用空斑形成实验结果作为金标准,以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果:用两种检测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原,双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早,而且其病毒滴度均较IFA法高(P<0.01)。说明ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高,并且操作简单、可重复性好、便于大批量规模化检测,因此更适用于汉坦病毒的检测。 展开更多
关键词 汉滩病毒 病毒滴度 双抗体夹心ELISA 直接免疫荧光
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荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究 被引量：3
12
作者 沈波 孟哲峰 +1 位作者 彭颖 吕建新 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期853-855,共3页
目的:建立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测.方法:利用Bac-to-Bac载体系统在E.coli菌株DH10 Bac中构建重组杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)和在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒,纯化的重... 目的:建立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测.方法:利用Bac-to-Bac载体系统在E.coli菌株DH10 Bac中构建重组杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)和在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒,纯化的重组Bacmid作为PCR检测的标准模板,由昆虫细胞中收获的病毒母液用于空斑测定和病毒DNA提取.以10倍梯度稀释的重组Bacmid作为标准模板,进行荧光定量PCR扩增IL18基因片段并绘制标准曲线,然后以提取的重组杆状病毒DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR反应检测.同时,以琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度.结果:成功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法.运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范围为101～108拷贝,病毒母液的DNA拷贝浓度(vg/ml)值约为空斑检测的滴度pfu/ml值的10倍.结论:荧光定量PCR方法可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒,并在较大的线性范围内检测重组杆状病毒滴度,较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的实际数量. 展开更多
关键词 荧光定量PCR 重组病毒鉴定 病毒滴度
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产生重组逆转录病毒包装细胞系建立及病毒滴度影响因素 被引量：5
13
作者 张惠中 范清宇 杨安钢 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第4期313-315,共3页
目的　探讨产生重组逆转录病毒包装细胞系建立及其病毒滴度 (以 cfu表示 )的影响因素 .方法　用逆转录病毒载体 p SL XCMV,以磷酸钙共沉淀法转染 PA317包装细胞 ,挑选抗性集落 (PA317/ p SL XCMV)扩大培养后 ,进行 PA317/p SL XCMV细胞... 目的　探讨产生重组逆转录病毒包装细胞系建立及其病毒滴度 (以 cfu表示 )的影响因素 .方法　用逆转录病毒载体 p SL XCMV,以磷酸钙共沉淀法转染 PA317包装细胞 ,挑选抗性集落 (PA317/ p SL XCMV)扩大培养后 ,进行 PA317/p SL XCMV细胞接种密度、培养温度 (37℃ ,32℃ )、纯化方法等对其培养上清中重组病毒 cfu影响的比较性研究 .结果　包装细胞的密度是影响 cfu滴度的关键因素 ;降低培养温度需延长培养时间方可提高 cfu滴度 ;对比离心纯化与过滤纯化 ,并未发现两者之间的差异 .结论　该实验结果为应用逆转录病毒载体进行的 ex 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 包装细胞 集落形成单位 病毒滴度 基因治疗
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流式细胞术快速测定逆转录病毒滴度的研究 被引量：4
14
作者 傅建新 白霞 +3 位作者 王玮 奚晓东 陈子兴 阮长耿 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 2002年第1期30-33,共4页
目的　建立一种快速测定逆转录病毒滴度的方法。方法　用通过乒乓转导获得的逆转录病毒 (G1FP ,LGSN ,CD87)分别感染NIH 3T3受体细胞 ,以流式细胞术 (FCM )定量分析受体细胞中绿色荧光蛋白 (EGFP)或CD87的表达 ,并与常规的耐药集落形成... 目的　建立一种快速测定逆转录病毒滴度的方法。方法　用通过乒乓转导获得的逆转录病毒 (G1FP ,LGSN ,CD87)分别感染NIH 3T3受体细胞 ,以流式细胞术 (FCM )定量分析受体细胞中绿色荧光蛋白 (EGFP)或CD87的表达 ,并与常规的耐药集落形成法进行比较。结果　PT6 7/G1FP细胞高度表达EGFP ,荧光强度较对照细胞提高 10 5 1倍 ;G1FP - 8,Am12 /G1FP ,PT6 7/G1FP ,Am12 /LGSN和Am12 /CD87细胞上清中病毒滴度分别为 2 .9× 10 6,1.1× 10 5,2 .0× 10 6,1.5× 10 5和 4.3× 10 5感染性颗粒 /ml,比集落形成法测得的滴度低 3～ 6倍。结论　FCM分析抗原表达是测定逆转录病毒滴度的有效方法 ,特别适宜于缺乏选择性基因的载体。 展开更多
关键词 基因治疗 临床实验载体 逆转录病毒滴度 分析 流式细胞术 绿色荧光蛋白 CD87抗原
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流式细胞仪在快速测定鲤春病毒血症病毒滴度中的应用 被引量：2
15
作者 王津津 贾鹏 +7 位作者 史秀杰 于力 阮周曦 郑晓聪 何俊强 兰文升 宋思静 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2015年第9期82-86,共5页
本研究建立了流式细胞仪快速检测鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)滴度的方法。运用荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)技术检测SVCV A1株对草鱼性腺细胞系(GCO)的感染情况。用SVCV病毒... 本研究建立了流式细胞仪快速检测鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)滴度的方法。运用荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)技术检测SVCV A1株对草鱼性腺细胞系(GCO)的感染情况。用SVCV病毒单克隆抗体为一抗,FITC标记的羊抗鼠抗体为二抗,运用FACS来检测感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率。感染第3天时为最佳的病毒滴度测定时间点,测得SVCV的病毒滴度为8.31×105 FIU/m L,最低检测病毒滴度为(1000 FIU/m L),与传统空斑试验(plaque assay,PA)相比,两种方法测得的结果基本一致。实验结果表明,FACS是一种简捷、高效、直接的检测SVCV滴度的方法,是一种新型的病毒滴度测定方法。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症 草鱼性腺细胞系 流式细胞术 空斑试验 病毒滴度
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克隆人血小板源性生长因子B基因构建腺相关病毒载体及其病毒滴度测定 被引量：1
16
作者 刘相萍 罗文娟 +3 位作者 隋爱华 杨堃 吕振华 王传富 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第24期4730-4733,共4页
目的:克隆人血小板源性生长因子B基因于腺相关病毒载体中,以获得高感染滴度的重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒。方法:实验于2005-10/2006-11在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。①健康足月产妇胎盘组织由青岛大学医学院... 目的:克隆人血小板源性生长因子B基因于腺相关病毒载体中,以获得高感染滴度的重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒。方法:实验于2005-10/2006-11在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。①健康足月产妇胎盘组织由青岛大学医学院附属医院妇产科提供,产妇及其家属均知情同意。DH5α宿主菌由青岛大学医学院附属医院中心实验室制备保存。②Trizol试剂提取健康足月产妇胎盘组织总RNA,反转录-聚合酶链反应一步法克隆人血小板源性生长因子B基因全长开放读框。聚合酶链反应产物定向克隆于腺相关病毒载体,重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体进行双酶切和测序鉴定。③采用磷酸钙转染法将重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体、腺相关病毒包装载体,腺相关病毒辅助载体共转染腺相关病毒293细胞,包装得到重组腺相关病毒并回收病毒原液,显微镜下观察细胞及培养基的变化。④以携带β-半乳糖苷酶基因的腺相关病毒作为报告基因同重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体一样共转染相关病毒293细胞,对报告基因行X-Gal染色,通过蓝染的细胞计算病毒滴度。结果:①重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体酶切鉴定及序列分析:聚合酶链反应产物经电泳证明大小正确,重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体酶经双酶切和测序鉴定证实将血小板源性生长因子B基因正确插入。②腺相关病毒293细胞转染过程中病毒颗粒的产生:腺相关病毒293细胞转染6h后培养基底部出现无数小黑色颗粒,为加入的转染复合物颗粒。24h后腺相关病毒293细胞部分变圆,随着病毒增殖,细胞成串浮起,出现细胞病理效应。48h后细胞变形,逐渐从壁上脱落。72h后培养基的颜色从红色变化为橙色或黄色。③病毒滴度检测:通过携带β-半乳糖苷酶基因的腺相关病毒感染细胞后X-gal染色计数,测定重组腺相关病毒滴度为1×1010 L-1。结论:成功构建表达人血小板源性生长因子B基因的重组腺相关病毒载体,为进一步研究血小板源性生长因子B基因治疗角膜病和相关细胞系与组织的增殖提供实验基础。 展开更多
关键词 基因克隆 重组腺相关病毒 病毒滴度 血小板源性生长因子
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重组腺病毒载体pDC316-hIL--24的构建及病毒滴度测定 被引量：2
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作者 李书华 陈婷婷 +3 位作者 刘谕昆 李灏 陈艺瑛 张雅洁 《分子影像学杂志》 2014年第3期135-139,共5页
目的构建重组腺病毒载体pDC316-hIL-24,并测定病毒滴度。方法从HEK293细胞中提取mRNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增hIL-24基因全编码区序列。将测序正确的片段用BglⅡ和HindⅢ双酶切定向插入到pDC316-EGFP穿梭质粒中。构建重组穿梭... 目的构建重组腺病毒载体pDC316-hIL-24,并测定病毒滴度。方法从HEK293细胞中提取mRNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增hIL-24基因全编码区序列。将测序正确的片段用BglⅡ和HindⅢ双酶切定向插入到pDC316-EGFP穿梭质粒中。构建重组穿梭质粒pDC316-EGFP-hIL-24,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC316-hIL-24,经HEK293细胞扩增,TCID50法测定重组腺病毒滴度。结果成功构建出表达h IL-24基因的重组腺病毒载体(pDC316-hIL-24),获得了高滴度表达hIL-24基因的重组腺病毒。结论重组腺病毒表达载体(pDC315-hIL-24)的成功构建及重组腺病毒的获得有利于进一步开展肿瘤的转基因治疗研究。 展开更多
关键词 hIL-24 重组腺病毒载体 病毒滴度 pDC316-hIL-24
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乙型脑炎减毒活疫苗病毒滴度参考品(200010)的建立和标定 被引量：1
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作者 贾丽丽 姚亚夫 +4 位作者 王志伟 王洪彬 李晓霞 田华 岳广智 《中国药事》 CAS 2003年第3期186-187,共2页
乙型脑炎减毒活疫苗病毒滴度的检测是疫苗活性和效力的直接数据佐证 ,是一项关键的指标。为了控制病毒检测系统的误差 ,建立了乙型脑炎病毒滴度参考品 (批号 2 0 0 0 10 )。该批参考品的制备工艺同乙脑活疫苗的生产工艺。参考品病毒滴... 乙型脑炎减毒活疫苗病毒滴度的检测是疫苗活性和效力的直接数据佐证 ,是一项关键的指标。为了控制病毒检测系统的误差 ,建立了乙型脑炎病毒滴度参考品 (批号 2 0 0 0 10 )。该批参考品的制备工艺同乙脑活疫苗的生产工艺。参考品病毒滴定采用金黄色地鼠传代细胞 (BHK— 2 1)蚀斑滴定法。该批乙脑减毒活疫苗病毒滴度参考品病毒滴度平均值 7 0lgPFU·ml-1,试验检测范围 (± 2S) :6 7～ 7 3lgPFU·ml-1。 展开更多
关键词 乙型脑炎 减毒活疫苗 病毒滴度参考品 检测
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重组逆转录病毒载体的包装及病毒滴度影响因素 被引量：3
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作者 杨生玺 蒋虹 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第14期F002-F002,共1页
目的:探讨产生重组逆转录病毒包装及其病毒滴度(以cfu表示)的影响因素.方法:用逆转录病毒载体pMNSTKM,以脂质体法转染包装细胞PA317细胞,挑选抗性集落(PA317/pMNSTKM)扩大培养后,进行PA317/pMNSTKM细胞接种密度、培养温度(37℃,32℃)、... 目的:探讨产生重组逆转录病毒包装及其病毒滴度(以cfu表示)的影响因素.方法:用逆转录病毒载体pMNSTKM,以脂质体法转染包装细胞PA317细胞,挑选抗性集落(PA317/pMNSTKM)扩大培养后,进行PA317/pMNSTKM细胞接种密度、培养温度(37℃,32℃)、纯化方法等对其培养上清中重组病毒cfu影响的比较性研究.结果:包装细胞的密度是影响cfu的关键因素;降低培养温度需延长培养时间方可提高cfu滴度.结论:该实验结果为应用逆转录病毒载体进行的基因治疗实验研究提供重要的参考依据. 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 包装细胞 病毒滴度
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水痘减毒活疫苗蚀斑法测定病毒滴度新方法的建立 被引量：5
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作者 公殿力 王瑛杰 +1 位作者 徐俊峰 徐秀凤 《中华医学全科杂志》 2004年第11期71-71,共1页
目前用于测定水痘减毒活疫苗病毒滴度的传统蚀斑法为6孔板单层细胞吸附法(简称单层法)，此方法操作复杂。将此方法进行改良，改为6孔板同时法测定病毒滴度，改良后的蚀斑法更为简单、快捷。本文就此作一报告。
关键词 病毒滴度 减毒活疫苗 水痘 改良 细胞 新方法 测定 复杂 传统 简称
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