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表达非洲猪瘟病毒p72蛋白重组猪痘病毒的构建及鉴定 被引量：1
1
作者 张梦雨 叶昱 +11 位作者 何后军 黄玉婷 江宁 邓佳丽 曾紫怡 应若嫣 余巧 唐玉新 宋德平 丁珍 樊惠英 黄冬艳 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期419-426,共8页
【目的】旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,为探索猪痘病毒(SPV)作为非洲猪瘟新型活疫苗载体的可行性。【方法】本研究优化合成非洲猪瘟病毒B646L基因,克隆至重组猪痘病毒通用转移载体pUSG11/P28,构建重组转移质粒p... 【目的】旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,为探索猪痘病毒(SPV)作为非洲猪瘟新型活疫苗载体的可行性。【方法】本研究优化合成非洲猪瘟病毒B646L基因,克隆至重组猪痘病毒通用转移载体pUSG11/P28,构建重组转移质粒pUSG11/P28-B646L,经脂质体介导转染预先感染猪痘病毒的PK15细胞,出现病变后通过绿色荧光标记筛选和纯化重组病毒。拯救的重组病毒经PCR和基因测序鉴定后,通过Western blotting和间接免疫荧光试验检测p72蛋白的表达情况,并测定重组病毒的增殖特性和遗传稳定性。【结果】重组转移质粒pUSG11/P28-B646L在PK15细胞内和SPV成功进行了同源重组,纯化得到的重组病毒含有B646L基因,且基因序列正确。Western blotting和间接免疫荧光试验结果表明,重组病毒rSPV-B646L在PK15细胞中能表达非洲猪瘟病毒p72蛋白,表达的蛋白大小正确,且能与p72单克隆抗体发生特异性反应。一步生长曲线显示,重组病毒与亲本病毒的增殖特性没有明显差异。重组病毒在PK15细胞上连续传15代后,插入的外源基因没有发生突变或缺失。【结论】研究以SPV为载体,成功构建了正确表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,重组病毒在PK15细胞中有良好的遗传稳定性,B646L基因的插入没有影响重组病毒在PK15细胞上的增殖能力,表达的p72蛋白具有反应原性。研究成果为非洲猪瘟多基因重组猪痘病毒载体疫苗的研发提供依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 重组猪痘病毒 活疫苗载体 p72蛋白
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猴痘病毒实时荧光LAMP检测方法的建立 被引量：2
2
作者 许晓琳 袁向芬 +3 位作者 孔玉方 方鉴军 王慧煜 吴绍强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第2期72-78,共7页
为建立一种特异性强、灵敏度高、操作简单的猴痘病毒(Monkeypox virus, MPXV)检测方法,试验针对MPXV保守区OPG002基因片段设计特异性引物,通过优化环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)反应体系中内引物... 为建立一种特异性强、灵敏度高、操作简单的猴痘病毒(Monkeypox virus, MPXV)检测方法,试验针对MPXV保守区OPG002基因片段设计特异性引物,通过优化环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)反应体系中内引物、环引物体积及反应温度建立了一种MPXV实时荧光LAMP检测方法,对该方法的特异性和灵敏度进行了分析,并应用该方法检测了临床样品和模拟样品。结果表明:建立的MPXV实时荧光LAMP检测方法于64℃恒温反应60 min即可完成DNA检测;该方法能特异性地检出MPXV,最低检出限为25 copies/μL,灵敏度是普通PCR方法的20倍;该方法对12份临床样品的检测结果均为阴性,可检测出质粒浓度为0.5×10~2~0.5×10~6 copies/μL的模拟阳性样品。说明建立的MPXV荧光LAMP检测方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单的优点,可用于MPXV的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 猴痘 猴痘病毒 环介导等温扩增技术 特异性 灵敏度
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猴痘病毒感染的神经系统表现研究进展 被引量：1
3
作者 狄晓萌 刘磊(综述) 王佳伟(审校) 《中风与神经疾病杂志》 CAS 2024年第2期99-102,F0002,共5页
在过去的一年内,猴痘的爆发已成为全球关注的问题。猴痘是猴痘病毒感染引起的人畜共患病,除典型的皮疹症状以外,猴痘病毒感染还可引起一系列神经系统表现,潜在的机制可能包括感染后免疫介导的神经系统损伤,以及病毒直接侵入神经系统。... 在过去的一年内,猴痘的爆发已成为全球关注的问题。猴痘是猴痘病毒感染引起的人畜共患病,除典型的皮疹症状以外,猴痘病毒感染还可引起一系列神经系统表现,潜在的机制可能包括感染后免疫介导的神经系统损伤,以及病毒直接侵入神经系统。本文围绕猴痘病毒感染的神经系统表现进行综述,以促进早期识别、诊断猴痘病毒感染神经系统并发症,及时采取相应的防治措施。 展开更多
关键词 猴痘病毒 神经系统 脑炎 急性播散性脑脊髓炎 疫苗 抗病毒药物
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靶向山羊痘病毒GPCR基因SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立
4
作者 张红强 任善会 +12 位作者 姚威 龚真莉 杨雪 马春玲 尤婷 张玉哲 柳民意 钱文洁 李柳杨 余志鹏 孙跃峰 陈豪泰 樊江峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4779-4784,共6页
基于山羊痘病毒(goat pox virus,GTPV)的基因组序列,建立靶向G蛋白偶联趋化因子受体(G-protein-coupled chemokine receptor,GPCR)基因的荧光定量PCR检测方法。基于GTPV全基因序列设计6对qPCR引物,并进行特异性和灵敏性的筛选和检测,最... 基于山羊痘病毒(goat pox virus,GTPV)的基因组序列,建立靶向G蛋白偶联趋化因子受体(G-protein-coupled chemokine receptor,GPCR)基因的荧光定量PCR检测方法。基于GTPV全基因序列设计6对qPCR引物,并进行特异性和灵敏性的筛选和检测,最终筛选得到1对高特异性和灵敏性的荧光定量PCR引物;根据GTPV/AV41疫苗株GPCR基因序列,设计普通PCR引物,扩增GPCR基因,构建真核表达载体,建立荧光定量PCR标准曲线。结果表明:筛选得到1对靶向于GPCR基因的特异性qPCR引物;构建pCAGGS-GPCR真核表达质粒,建立标准曲线y=-3.5289x+49.07,线性相关系数R^(2)=0.9972,扩增效率为92.7%;验证性试验结果显示,该引物最低检测限为2.0拷贝·μL^(-1),各批次内与批次间重复性结果的变异系数均小于2%,表明其具有特异性强、重复性好和灵敏度高的优点。建立了靶向山羊痘病毒GPCR基因的qPCR检测方法,为防控山羊痘提供了高效的检测手段。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 GPCR 荧光定量PCR
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山羊痘病毒锚蛋白ORF140对NF-κB信号通路的调控作用
5
作者 冯秋媛 余翰维 +8 位作者 杨云凤 张慧 韩武玮怡 孙心童 邵晓龙 刘俊林 陈国华 景志忠 陈轶霞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5191-5199,共9页
NF-κB通路是病毒调控宿主免疫功能的一个重要靶点,在病毒感染致病的过程中发挥重要作用。研究证明,一些痘病毒编码的锚蛋白可通过多种方式调控NF-κB通路,但山羊痘病毒编码的锚蛋白对NF-κB通路有怎样的调控作用尚未有研究报道。为了... NF-κB通路是病毒调控宿主免疫功能的一个重要靶点,在病毒感染致病的过程中发挥重要作用。研究证明,一些痘病毒编码的锚蛋白可通过多种方式调控NF-κB通路,但山羊痘病毒编码的锚蛋白对NF-κB通路有怎样的调控作用尚未有研究报道。为了探究山羊痘病毒编码的锚蛋白ORF140对NF-κB通路的调控作用,作者通过双荧光素酶报告系统检测山羊痘病毒锚蛋白ORF140对NF-κB通路的影响;采用间接免疫荧光检测ORF140在HEK293T细胞中的定位;应用Western blot技术分别检测在NF-κB通路被激活的不同时间点ORF140对NF-κB通路相关因子的影响。结果显示:ORF140能够抑制NF-κB通路;ORF140定位于细胞质中,且在NF-κB通路被激活的情况下也未发生核移位;ORF140能够抑制NF-κB-p65的核移位与p-IκBα的降解。山羊痘病毒锚蛋白ORF140定位在细胞质中,通过抑制NF-κB-p65的核移位与p-IκBα的降解来下调NF-κB通路的活性。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 锚蛋白 NF-ΚB ORF140
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基于P32蛋白的山羊痘病毒抗体荧光微球检测方法的建立
6
作者 孟卫芹 王金良 +5 位作者 吴信明 唐娜 李通 石竞楠 董帅 沈志强 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期89-94,共6页
为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法,试验将携带GTPV结构蛋白P32基因的重组质粒pET28a-P32转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后获得了重组蛋白,纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和反应原性... 为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法,试验将携带GTPV结构蛋白P32基因的重组质粒pET28a-P32转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后获得了重组蛋白,纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和反应原性。以荧光微球为标记材料对P32蛋白进行标记,通过优化反应条件制备了快速检测GTPV抗体的荧光微球免疫层析试纸条,并对其性能进行评价。结果:该试纸条与山羊副流感病毒3型(CPIV3)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口疮病毒(ORFV)的阳性血清均无交叉反应;阳性血清稀释至800倍仍能检出阳性,敏感性较高;批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,稳定性较好;与ELISA检测方法对比的总符合率为92.5%。综上,本试验建立的荧光微球试纸条可用于GTPV抗体的快速检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 P32蛋白 荧光微球 抗体
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猴痘病毒A5L蛋白的原核表达及其免疫原性评价
7
作者 熊嘉琦 贾梦乐 +6 位作者 杨领弟 王毅豪 孙静婷 王婷 黎美凤 孔令保 彭棋 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期365-372,共8页
【目的】获取高纯度猴痘病毒(Monkeypox virus, MPXV)A5L蛋白,制备小鼠抗A5L高效价抗血清,为MPXV A5L蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】构建重组质粒pET-28a-A5L,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,通过... 【目的】获取高纯度猴痘病毒(Monkeypox virus, MPXV)A5L蛋白,制备小鼠抗A5L高效价抗血清,为MPXV A5L蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】构建重组质粒pET-28a-A5L,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,通过分析不同IPTG诱导浓度、诱导温度、诱导时间条件下重组蛋白A5L表达情况,筛选最佳表达条件。通过Western blotting鉴定重组蛋白A5L表达,利用SDS-PAGE分析重组蛋白可溶性。A5L蛋白经His-Bind镍柱亲和层析纯化后免疫小鼠,通过ELISA法检测抗体效价。【结果】双酶切和测序结果显示,原核表达载体pET-28a-A5L构建成功。Western blotting结果显示重组蛋白A5L在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达;A5L蛋白在诱导温度42℃、诱导剂(IPTG)浓度为1.6 mmol/L、诱导16 h后表达量最高,大小为40 ku。SDS-PAGE分析结果显示,A5L蛋白主要以包涵体形式存在,最佳咪唑洗脱浓度为50 mmol/L。ELISA结果显示,制备的鼠抗A5L蛋白抗体最高效价达1∶205 440。【结论】本研究成功构建了重组质粒pET-28a-A5L,并在原核表达系统中成功表达重组蛋白A5L,制备的A5L多克隆抗体具有较好的免疫原性,研究结果为进一步探究MPXV A5L蛋白的生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 猴痘病毒 原核表达 A5L蛋白 免疫原性
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猴痘病毒B20R蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备
8
作者 杨领弟 李小梅 +3 位作者 芦晓鸥 彭棋 孔令保 王宇 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期217-225,共9页
【目的】构建猴痘病毒B20R蛋白原核表达系统,并评价原核表达获得的融合蛋白免疫原性,为后续的猴痘病毒检测及新型治疗方法开发提供技术支撑。【方法】参照GenBank已公布的猴痘病毒基因组序列,按照大肠杆菌密码子偏好性对B20R基因DNA序... 【目的】构建猴痘病毒B20R蛋白原核表达系统,并评价原核表达获得的融合蛋白免疫原性,为后续的猴痘病毒检测及新型治疗方法开发提供技术支撑。【方法】参照GenBank已公布的猴痘病毒基因组序列,按照大肠杆菌密码子偏好性对B20R基因DNA序列进行优化,人工合成B20R基因并将其分别克隆至表达载体pET-28a和pET-32a以构建原核表达载体;以构建的2种原核表达载体分别转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后使用SDSPAGE和Western blotting检测融合蛋白B20R的表达情况。通过控制变量法优化融合蛋白B20R的诱导表达条件,使用Ni柱亲和层析进行纯化;以纯化的融合蛋白B20R经腹腔注射免疫昆明小鼠,定期采集昆明小鼠血样,采用ELISA检测血清抗体效价。【结果】将B20R基因克隆至表达载体pET-32a能成功构建原核表达载体pET-32a-B20R,经IPTG诱导后,可在大肠杆菌BL21感受态细胞中表达出融合蛋白B20R,且主要以不可溶的包涵体形式进行表达。融合蛋白B20R最佳诱导表达条件为37℃下以0.6 mmol/L IPTG诱导12 h,Ni柱亲和层析纯化的最佳咪唑洗脱浓度为40 mmol/L。以纯化的融合蛋白B20R接种免疫昆明小鼠,可在短时间内引起昆明小鼠产生强烈的体液免疫,且至免疫第42 d仍然维持较高的抗体水平,抗体效价高达1∶409600。【结论】构建的猴痘病毒B20R蛋白原核表达载体可在大肠杆菌BL21细胞中以包涵体形式成功表达出融合蛋白B20R,且融合蛋白B20R具有良好的免疫原性,可在短时间内引起昆明小鼠产生强烈的体液免疫。 展开更多
关键词 猴痘病毒 B20R蛋白 原核表达 免疫原性 抗体效价
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广东地区人工驯养灵长动物的病毒组特征及猴痘病毒筛查
9
作者 李娜 任照文 +4 位作者 张翩 袁子国 陈晓凡 廖明 王晓虎 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期391-400,共10页
目的明确广东地区灵长动物携带病毒群落的结构特征,并评估重要人兽共患病毒猴痘病毒(MPXV)通过人工驯养灵长动物传入我国的风险。方法在广东省14个地级市的20个野生动物救护中心或动物园采集灵长动物样品,通过Illumina测序技术鉴定广东... 目的明确广东地区灵长动物携带病毒群落的结构特征,并评估重要人兽共患病毒猴痘病毒(MPXV)通过人工驯养灵长动物传入我国的风险。方法在广东省14个地级市的20个野生动物救护中心或动物园采集灵长动物样品,通过Illumina测序技术鉴定广东地区人工驯养灵长动物携带病毒组的结构特征;并通过荧光定量PCR方法,对MPXV进行检测,以确认MPXV经广东省人工驯养灵长动物传入的风险。结果共收集灵长动物口咽拭子和粪便489份。高通量测序结果显示,广东地区人工驯养灵长动物粪便中的病毒组结构复杂且具有地区差异,其中丰度最高的是Alphaflexiviridae和Virgaviridae的成员,其次为Parvoviridae和Genomoviridae成员。荧光定量PCR结果显示,广东省内野生动物救护中心或动物园的灵长动物全部为MPXV阴性。结论广东省人工驯养灵长动物携带病毒引起动物源性人兽共患病的风险极低,且MPXV通过广东省人工驯养灵长动物传入我国的风险几乎为零。 展开更多
关键词 灵长动物 宏病毒组 猴痘病毒 人兽共患病 荧光定量PCR
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猴痘病毒新型蛋白疫苗制备及其诱导抗体能力评估
10
作者 赵成燕 周兵 +5 位作者 闫虎 李文婷 孙岳宏 鞠斌 张政 鲁晓擘 《新疆医科大学学报》 CAS 2024年第5期647-652,共6页
目的构建有效的猴痘病毒(MPXV)和痘苗病毒(VACV)蛋白疫苗,并对其诱导抗体的活性进行初步评估。方法采用融合蛋白表达技术构建MPXV-A29-Fc和VACV-A27-Fc蛋白疫苗,酶联免疫吸附试验(ELISA)和蛋白质印迹法(Western blot,WB)体外检测蛋白结... 目的构建有效的猴痘病毒(MPXV)和痘苗病毒(VACV)蛋白疫苗,并对其诱导抗体的活性进行初步评估。方法采用融合蛋白表达技术构建MPXV-A29-Fc和VACV-A27-Fc蛋白疫苗,酶联免疫吸附试验(ELISA)和蛋白质印迹法(Western blot,WB)体外检测蛋白结合抗体的能力,BALB/c雌性小鼠体内评估不同剂量蛋白疫苗诱导抗体的效价。结果MPXV-A29-Fc和VACV-A27-Fc蛋白均能与A29单克隆抗体结合,蛋白疫苗免疫小鼠后,不同剂量组中的小鼠血清均可交叉识别MPXV-A29和VACV-A27蛋白,三针免疫可诱导更强的交叉免疫应答,三针免疫后,不同的血清稀释度下,低剂量组的IgG抗体结合强度均与高剂量组相当,可达到高剂量组的免疫效果。结论本研究初步构建有效的MPXV和VACV新型蛋白疫苗MPXV-A29-Fc和VACV-A27-Fc,在小鼠体内可诱导特异性抗体反应和交叉抗体反应,可为猴痘病毒的疫苗设计提供新的思路和方法。 展开更多
关键词 猴痘病毒(MPXV) 重组蛋白疫苗 结合活性 交叉反应性
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五株鼠痘病毒的分离及生物学特性分析
11
作者 邓雅丽 谢玲玲 +4 位作者 付杰 周敏 张艳芳 胡思婧 邓菲 《生物化工》 CAS 2024年第3期94-97,共4页
目的:通过对5例疑似感染鼠痘病毒的实验小鼠脑组织进行病毒分离培养、分子生物学鉴定和形态学研究,进一步深入探索鼠痘病毒的生长特性与形态学特征。方法:从感染的鼠脑组织中分离鼠痘病毒,针对鼠痘病毒基因设计特异性引物,建立一种实时... 目的:通过对5例疑似感染鼠痘病毒的实验小鼠脑组织进行病毒分离培养、分子生物学鉴定和形态学研究,进一步深入探索鼠痘病毒的生长特性与形态学特征。方法:从感染的鼠脑组织中分离鼠痘病毒,针对鼠痘病毒基因设计特异性引物,建立一种实时荧光定量PCR检测方法,对病毒进行检测鉴定;利用非洲绿猴胚胎肾细胞(Marc145细胞),通过电镜切片观察和生长曲线测定,考察病毒的形态特征和感染特征。结果:成功分离得到5株鼠痘病毒,病毒感染Marc145细胞后发生相应病变效应,在感染后0~72 h病毒滴度逐渐升高并在72 h达到最高值,随后滴度逐渐降低,但在感染96 h仍然保持较高病毒滴度;5株鼠痘病毒毒株在整体的生长特性与形态学方面具有相似性。结论:研究结果为深入探究鼠痘病毒的生命周期、感染机制、病毒结构和宿主免疫反应等病毒学基础提供了基础。 展开更多
关键词 鼠痘病毒 分离培养 生物学特性
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成都市锦江区污水中猴痘病毒的监测及基因特征分析
12
作者 陈欣 曹誉龄 +4 位作者 杨颖馨 曹昊 敬小丽 郑月茂 缪瑞琦 《遵义医科大学学报》 2024年第1期83-87,94,共6页
目的 调查成都市锦江区污水中猴痘病毒含量,并对其进行分型溯源。方法 2023年7~9月对成都市第九污水处理再生水厂未经消杀处理的污水进行24 h间断采样,共采集26个样本。用聚乙二醇沉淀法将水样从105 mL浓缩到0.6 mL后,提取核酸,用实时... 目的 调查成都市锦江区污水中猴痘病毒含量,并对其进行分型溯源。方法 2023年7~9月对成都市第九污水处理再生水厂未经消杀处理的污水进行24 h间断采样,共采集26个样本。用聚乙二醇沉淀法将水样从105 mL浓缩到0.6 mL后,提取核酸,用实时荧光聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)法检测猴痘病毒,用猴痘病毒假病毒标准物质制备标准曲线计算相对浓度。对阳性的样本进行猴痘病毒全基因组扩增子测序。结果 8个样本检测出猴痘病毒阳性,检出率30.8%,均为西非分支Ⅱb C.1型。各分离株基因与报道的临床阳性株非常相似,与2022年猴痘疫情暴发的基因组密切相关。各分离株序列之间也非常相似,相似性为99%以上。结论 污水中的猴痘病毒都与报道的临床毒株高度相似,可以推定污水中的猴痘病毒均来自于患者或携带者的人体脱落物或排泄物。污水中猴痘病毒浓度与阳性报告病例的发生率基本呈正相关,表明污水监测是监测猴痘感染传播趋势的可行方法。 展开更多
关键词 猴痘病毒 污水 环境监测 扩增子测序
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实时荧光定量PCR检测猴痘病毒的方法研究
13
作者 冯俊霞 陈锦峰 +3 位作者 崔晓虎 夏语嫣 薛冠华 袁静 《遵义医科大学学报》 2024年第5期508-512,521,共6页
目的建立猴痘病毒(mpox virus)的实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法。方法以猴痘病毒F3L基因为靶序列,设计特异性引物和探针,建立猴痘病毒RT-PCR检测方法,并对方法的灵敏度、特异性和重复性进行检测;对疑似猴痘阳性的人脓拭子临床样本核... 目的建立猴痘病毒(mpox virus)的实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法。方法以猴痘病毒F3L基因为靶序列,设计特异性引物和探针,建立猴痘病毒RT-PCR检测方法,并对方法的灵敏度、特异性和重复性进行检测;对疑似猴痘阳性的人脓拭子临床样本核酸进行检测,对RT-PCR方法检测临床样本能力进行评价。结果本研究建立的RT-PCR检测方法可实现猴痘病毒的特异性检测,与天花、痘苗、牛痘等其他正痘病毒无交叉反应,检测重复性好,最低检测限为103copies/μL。可以对人皮肤拭子样本中的猴痘病毒进行准确检测。结论本研究建立了猴痘病毒的RT-PCR检测方法,可在临床样本中快速、特异、灵敏的检测猴痘病毒。 展开更多
关键词 猴痘病毒 实时荧光定量PCR 快速检测方法 F3L基因
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表达猴痘病毒表面蛋白A35R和E8L稳转细胞株的构建与应用
14
作者 金浙东 李惠宜 +2 位作者 包汶鑫 崔彩霞 袁运生 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期315-321,共7页
【目的】构建稳定表达猴痘病毒(Mpox virus,MPXV)表面蛋白A35R和E8L的稳转细胞株,用于定性或定量分析相应猴痘表面蛋白的抗体或互作分子与细胞表面A35R或E8L结合活性。【方法】运用基因重组技术,构建表达A35R或E8L的慢病毒表达载体,以HE... 【目的】构建稳定表达猴痘病毒(Mpox virus,MPXV)表面蛋白A35R和E8L的稳转细胞株,用于定性或定量分析相应猴痘表面蛋白的抗体或互作分子与细胞表面A35R或E8L结合活性。【方法】运用基因重组技术,构建表达A35R或E8L的慢病毒表达载体,以HEK-293T作为宿主细胞,通过慢病毒转染技术形成稳定表达并定位在细胞表面A35R或E8L的稳转细胞株。采用Western Blot及细胞免疫荧光检测工程化细胞株中A35R或E8L的表达及蛋白定位情况,并运用流式细胞术验证稳转细胞与抗血清中多克隆抗体的结合能力。分别从表达A35R或E8L的稳转细胞中筛选出单克隆细胞株,并以单克隆稳转细胞作为工具定量分析商业化抗猴痘A35R或E8L单克隆抗体与细胞表面A35R或E8L的结合活性。【结果】成功构建稳定表达A35R或E8L并定位至细胞膜上的HEK-293T稳转细胞,经过单克隆化筛选,建立4株单克隆细胞株,其中2株稳定表达A35R(A35-2C10和A35-4E3)和2株稳定表达E8L(E8-6和E8-8)。筛选出的单克隆细胞在定量分析抗猴痘A35R或E8L的单克隆抗体结合活性方面显示出良好的拟合度。【结论】通过慢病毒转染技术构建的表达猴痘表面A35R或E8L的稳转细胞株可以作为通用研究工具,应用于抗A35与E8L中和抗体、核酸适配体或互作分子等相关分子与相应抗原结合活性的定性或定量分析。 展开更多
关键词 猴痘病毒 A35R E8L 慢病毒转染 稳转细胞株
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猴痘病毒B.1谱系遗传分支、毒力基因及蛋白功能
15
作者 林思宇 陈芳 +1 位作者 罗语思 张科 《热带病与寄生虫学》 CAS 2024年第1期1-6,53,共7页
2022年以来,猴痘疫情在全球暴发和流行。相较以往的猴痘病毒,2022年流行的猴痘毒株传播能力和宿主适应性等明显增强,猴痘B.1谱系毒株已成为全球猴痘疫情流行的主要毒株。为此,本文对猴痘病毒B.1谱系遗传分支、毒力基因及蛋白功能进行综... 2022年以来,猴痘疫情在全球暴发和流行。相较以往的猴痘病毒,2022年流行的猴痘毒株传播能力和宿主适应性等明显增强,猴痘B.1谱系毒株已成为全球猴痘疫情流行的主要毒株。为此,本文对猴痘病毒B.1谱系遗传分支、毒力基因及蛋白功能进行综述,并就部分基因产物的蛋白功能进行了注释,以期为猴痘疫情的科学防控提供参考。 展开更多
关键词 猴痘病毒 B.1谱系毒株 遗传分支 毒力基因 蛋白功能
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猴痘病毒A33R、L1R、B5R和A27L蛋白表达及生物学特性
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作者 詹思建 张帆 +3 位作者 段海潇 汪洋 胡翰 刘滨磊 《湖北工业大学学报》 2024年第5期80-86,共7页
为给猴痘病毒的抗原制备和疫苗制备奠定基础,原核表达带有GST标签的融合蛋白A33R、L1R、B5R和A27L,并简要分析这四个蛋白的一些生物学特性。用PGEX-6P-1为载体,构建重组融合蛋白表达质粒;用大肠杆菌DE3感受态细胞转化重组质粒后,在体外... 为给猴痘病毒的抗原制备和疫苗制备奠定基础,原核表达带有GST标签的融合蛋白A33R、L1R、B5R和A27L,并简要分析这四个蛋白的一些生物学特性。用PGEX-6P-1为载体,构建重组融合蛋白表达质粒;用大肠杆菌DE3感受态细胞转化重组质粒后,在体外诱导表达和纯化;纯化的蛋白进行SDS-PAGE电泳,做考马斯亮蓝染色分析并用WB进行验证。最后,通过生物信息学方法分析4个蛋白的生物学特性,用ExPAsy在线软件中的ProtParam工具和ProtScale工具分别分析其理化性质和亲疏水性,用SignalP4.1 service在线软件分析其信号肽,成功构建了4个重组目的蛋白表达质粒,并成功诱导表达并纯化出带GST标签的目的蛋白。通过生物信息学的方法分析可知,4个蛋白均为疏水蛋白,除了B5R,A33R、L1R和A27L均为分泌蛋白,为猴痘病毒的抗原制备和疫苗制备提供理论基础。 展开更多
关键词 猴痘病毒 原核表达 蛋白纯化 生物信息学
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猴痘病毒感染的流行病学及检测技术的研究进展
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作者 高福花 彭益俊 《医师在线》 2024年第3期87-89,共3页
猴痘病毒是一种具有传染性的病毒,该病毒与天花同属,均为正痘病毒属。猴痘病毒感染的临床症状与天花相似,但病情相比天花要轻,大多数通过治疗可以好转,但仍存在危及生命的风险。由于该病毒具有流行性和暴发性,动物与人都具有较高的感染... 猴痘病毒是一种具有传染性的病毒,该病毒与天花同属,均为正痘病毒属。猴痘病毒感染的临床症状与天花相似,但病情相比天花要轻,大多数通过治疗可以好转,但仍存在危及生命的风险。由于该病毒具有流行性和暴发性,动物与人都具有较高的感染率,感染后会出现蔓延的趋势,容易引起人们恐慌,已成为危害社会安全的公共问题。目前临床上对于猴痘病毒并无特效疗法,且无最佳控制感染的方法,因此对该病毒进行准确、快速的诊断具有重要的意义,有利于人畜共患病的筛查,为该病毒的防控提供先决条件。本研究通过综述猴痘病毒的流行病学趋势,探究该病毒的检测技术进展,为我国应对猴痘病毒的流行提供帮助。 展开更多
关键词 猴痘病毒 流行病学 检测技术 研究进展
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猴痘病毒的感染与猴痘的动物模型 被引量：1
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作者 包容 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第11期133-141,共9页
猴痘是猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)感染引起的传染性疾病。猴痘病毒的宿主依然没有完全明确,啮齿类与非人灵长类动物被认为是潜在的宿主。猴痘正在全世界范围内逐渐扩散,但我国一直以来并未开展猴痘的动物模型的研究。作为一种严重... 猴痘是猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)感染引起的传染性疾病。猴痘病毒的宿主依然没有完全明确,啮齿类与非人灵长类动物被认为是潜在的宿主。猴痘正在全世界范围内逐渐扩散,但我国一直以来并未开展猴痘的动物模型的研究。作为一种严重危害人类健康的病原体,猴痘病毒有多种感染类型;其在人群中的传播呈现新的特点。因此本文论述了猴痘病毒发现的经过与早期疫情、不同的感染类型和共感染。此外,本文还介绍了啮齿类和非人灵长类动物的实验性感染与猴痘动物模型。 展开更多
关键词 猴痘 猴痘病毒 痘病毒 动物模型 模式动物
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绵羊痘病毒和山羊痘病毒通用RPA检测方法的特异性试验 被引量：2
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作者 豆玲 周峰 +3 位作者 高军军 王雪莹 王志宇 康文彪 《畜牧兽医杂志》 2023年第3期21-22,共2页
应用我们建立的绵羊痘病毒和山羊痘病毒通用RPA检测方法,通过对口蹄疫病毒、传染性脓疱皮炎病毒、鸡痘病毒、绵羊痘病毒、羊痘疫苗和羊痘重组质粒样本的检测,验证绵羊痘病毒和山羊痘病毒通用RPA检测方法对绵羊痘/山羊痘病毒检测的特异... 应用我们建立的绵羊痘病毒和山羊痘病毒通用RPA检测方法,通过对口蹄疫病毒、传染性脓疱皮炎病毒、鸡痘病毒、绵羊痘病毒、羊痘疫苗和羊痘重组质粒样本的检测,验证绵羊痘病毒和山羊痘病毒通用RPA检测方法对绵羊痘/山羊痘病毒检测的特异性。结果显示该方法对羊痘疫苗、羊痘重组质粒、绵羊痘病毒核酸和山羊痘病毒核酸阳性样品能够在试纸条上显示出阳性条带,而对其他样品不显示阳性条带。表明该方法具有良好的特异性,在绵羊痘/山羊痘病毒检测中应用前景广阔。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增技术(RPA) 山羊痘病毒 试纸条 绵羊痘病毒
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基因得失与猴痘及其他正痘病毒的遗传变异研究进展 被引量：2
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作者 王雨茜 陈伟杰 +3 位作者 李艳娇 胡晶晶 王伟炳 熊成龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期622-630,638,共10页
2022年,猴痘在全球多个国家流行和传播,并于当年7月被世卫组织宣布为“国际关注的突发公共卫生事件”,使得猴痘病毒及其他正痘病毒传染病在全球范围内引起了极大的关注与重视。包括猴痘病毒在内的正痘病毒属病毒是双链DNA病毒,在其进化... 2022年,猴痘在全球多个国家流行和传播,并于当年7月被世卫组织宣布为“国际关注的突发公共卫生事件”,使得猴痘病毒及其他正痘病毒传染病在全球范围内引起了极大的关注与重视。包括猴痘病毒在内的正痘病毒属病毒是双链DNA病毒,在其进化过程中常会通过水平基因转移和基因重组的方式捕获新基因,通过基因缺失、移码突变、无义突变丢失基因。随着病毒基因的捕获和丢失,病毒不断变异,并逐渐进化为适应当前宿主环境的进化支。基于当前的研究进展,本文对正痘病毒进化过程中基因的捕获和丢失相关文献进行梳理,为研究正痘病毒的进化方式提供参考。 展开更多
关键词 猴痘病毒 正痘病毒 进化 基因获得 基因丢失
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