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百日咳毒素联合卡介苗诱导CD-1小鼠抑郁症模型研究
1
作者 李岑 赵苗 +8 位作者 许祎宁 毕宏涛 杨红霞 肖远灿 陈占娟 王嘉女 乔亚俊 周学青 魏立新 《青海科技》 2023年第4期62-72,共11页
为了构建具备良好的治疗性干预时间窗的新型抑郁症动物模型,本研究基于抑郁症发病的炎症假说,选用血脑屏障通透剂——百日咳毒素,联合低剂量免疫激活剂——卡介苗(牛结核分枝杆菌)对CD-1小鼠造模。实验发现,与单独低剂量卡介苗诱导相比... 为了构建具备良好的治疗性干预时间窗的新型抑郁症动物模型,本研究基于抑郁症发病的炎症假说,选用血脑屏障通透剂——百日咳毒素,联合低剂量免疫激活剂——卡介苗(牛结核分枝杆菌)对CD-1小鼠造模。实验发现,与单独低剂量卡介苗诱导相比,百日咳毒素联合低剂量卡介苗诱导可以增强小鼠的抑郁样行为,如行为绝望状态增加(悬尾实验中一动不动时间)、探索性行为降低(开场实验中的区域穿梭次数和抬头直立次数)、自发运动状态降低(开场实验总运动距离)等,促进小鼠中枢神经炎症和外周炎症(IL-1β、IL-6、IFN-γ等);同时,加剧脑中色氨酸-犬尿氨酸通路的激活,表现为其关键酶——吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)进一步显著升高。经口给予抗抑郁药丙咪嗪,可缓解百日咳毒素联合低剂量卡介苗诱导的小鼠抑郁样症状、炎症反应和激活的色氨酸-犬尿氨酸通路。另外,发现百日咳毒素联合低剂量卡介苗诱导的小鼠抑郁样症状可以从第7天至少持续到第28天。综上,本研究基于百日咳毒素和低剂量卡介苗构建的小鼠抑郁模型具有较好的表面效度、结构效度和预测效度,其长期持续性的抑郁表型可为抗抑郁疗法研究提供宝贵的治疗性干预时间窗。 展开更多
关键词 抑郁症 动物模型 百日咳毒素 卡介苗 炎症
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百日咳毒素减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型炎症反应的机制研究 被引量：4
2
作者 王进昆 高锋 +3 位作者 谢姝姮 陈雪菲 王崇谦 汤志伟 《国际神经病学神经外科学杂志》 北大核心 2016年第2期112-118,共7页
目的探讨百日咳毒素(PTx)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型的作用及机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、EAE组和PTx治疗组,每组12只。EAE组和PTx治疗组用MOG 35-55诱导EAE模型。PTx组于建模后第7天给予腹腔注射1000 ng... 目的探讨百日咳毒素(PTx)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型的作用及机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、EAE组和PTx治疗组,每组12只。EAE组和PTx治疗组用MOG 35-55诱导EAE模型。PTx组于建模后第7天给予腹腔注射1000 ng的PTx。随后观察两组临床症状,组织学染色评价炎症反应和脱髓鞘改变,并观察VEGF和血管新生现象,并用Western blot检测脊髓VEGF和Collagen IV的整体水平。在体外,用PTx刺激原代培养的神经元,评价PTx对在体外对神经元VEGF表达的影响。结果 PTx能减轻EAE模型的炎症反应和脱髓鞘改变,在大脑PTx将炎症评分从(3.4±0.55)分降至(1.2+0.45)分,P<0.01;脱髓鞘评分从(3.6+0.55)分降至(1.4+0.55)分,P<0.01。在脊髓PTx将炎症评分从(3.6+0.55)分降至(1.0+0.71)分,P<0.01;脱髓鞘评分从(4.2+0.84)分降至(1.4+0.55)分,P<0.01。Western blot检测显示,与正常对照组比较,EAE组VEGF下降49.0%(P<0.01),Collagen IV下降36.0%(P<0.01);PTx治疗后,与EAE组比较,VEGF上升59.5%(P<0.01),Collagen IV上升45.0%(P<0.01)。体外实验显示,PTx治疗24 h后VEGF在神经元上的表达增加,与正常对照相比,100 ng/ml组上调34.6%(P<0.01),400 ng/ml组上调76.9%(P<0.01)。结论 PTx可上调神经元内源VEGF的表达和血管新生现象,继而在EAE模型中起保护作用。 展开更多
关键词 百日咳毒素 多发性硬化 血管内皮生长因子 神经元 血管新生 小鼠
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百日咳毒素S1亚单位的表达及其免疫原性研究 被引量：6
3
作者 乔瑞洁 杨晓明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期205-207,224,共4页
目的 研究百日咳毒素S1(Pertussis toxin s1 subunit)亚单位在大肠杆菌中的表达及其免疫学特性。方法 采用PCR法从百日咳杆菌染色体中获得S1亚单位的结构基因并克隆到质粒pCR2.1-TOPO中,转化宿主菌DH5α和TOPO10。用抗S1的单抗1B7检测... 目的 研究百日咳毒素S1(Pertussis toxin s1 subunit)亚单位在大肠杆菌中的表达及其免疫学特性。方法 采用PCR法从百日咳杆菌染色体中获得S1亚单位的结构基因并克隆到质粒pCR2.1-TOPO中,转化宿主菌DH5α和TOPO10。用抗S1的单抗1B7检测表达产物。用粗制的重组S1(rS1)免疫小鼠,做主动免疫保护实验。rS1免疫家兔,检测rS1的免疫原性。并以家兔免疫血清在小鼠进行被动免疫保护实验。结果 rS1可在大肠杆菌中稳定高效表达,表达量分别占细胞总蛋白量的14％(DH5α)和24.2％(TOPO10)。rS1能被1B7识别,在小鼠主动免疫实验中,保护率可达56.3％。家兔免疫血清ELISA效价为1:32 000。抗rS1血清对小鼠被动的免疫保护率为100％。结论 rS1具有良好免疫原性,为百日咳基因工程疫苗或亚单位疫苗研制及百日咳免疫机理研究提供了依据。 展开更多
关键词 百日咳毒素 S1亚单位 表达 免疫原性 百日咳扦茵 被动保护
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百日咳毒素的等电点测定及层析分离 被引量：2
4
作者 刘国安 杨晓明 +1 位作者 葛瑞昌 何长民 《西北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第4期68-70,共3页
百日咳毒素是百日咳杆菌(Bordetellapertussis)产生的一种主要毒力因子,也是百日咳菌苗的主要成分之一.用等电聚焦法测得其等电点为pH6 8.将百日咳杆菌液体培养液在等电点盐析后,通过DEAE-Sephadex-A50阴离子交换剂进一步分离纯化了百... 百日咳毒素是百日咳杆菌(Bordetellapertussis)产生的一种主要毒力因子,也是百日咳菌苗的主要成分之一.用等电聚焦法测得其等电点为pH6 8.将百日咳杆菌液体培养液在等电点盐析后,通过DEAE-Sephadex-A50阴离子交换剂进一步分离纯化了百日咳毒素.ELISA测定其比活力表明,3批样品的提纯倍数分别为1 47,1 37和1 36. 展开更多
关键词 百日咳毒素 等电点 DEAE-Sephadex-A50
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百日咳毒素对棉铃虫神经细胞电压门控钠、钙通道的调节作用 被引量：3
5
作者 李杰 贺秉军 刘安西 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期26-30,共5页
用膜片钳技术研究了百日咳毒素对离体培养的棉铃虫幼虫中枢神经细胞电压门控钠、钙通道的影响。结果表明,对照组细胞钠通道在-50^-40mV激活,在-20mV左右电流达到最大值,在记录的20min内,电流-电压关系曲线(I-V)和电流幅值未有明显变化;... 用膜片钳技术研究了百日咳毒素对离体培养的棉铃虫幼虫中枢神经细胞电压门控钠、钙通道的影响。结果表明,对照组细胞钠通道在-50^-40mV激活,在-20mV左右电流达到最大值,在记录的20min内,电流-电压关系曲线(I-V)和电流幅值未有明显变化;细胞与百日咳毒素预孵后,钠通道在-40mV左右激活,电流在0mV左右达到最大值,在记录过程中,激活电压和峰值电压继续向正方向移动约10mV,电流持续下降。对照组钙通道在-40^-30mV激活,在0mV左右电流达峰值;经百日咳毒素处理后,I-V曲线向负电位方向移动约10mV,在记录过程中,I-V曲线继续向负电位方向移动,电流的衰减(rundown)现象比对照组严重,此外,百日咳毒素处理引起钙电流达到峰值的时间显著延长。结果提示,百日咳毒素敏感的G蛋白(Gi)可能通过直接途径或间接途径调节棉铃虫神经细胞钠、钙通道的电压敏感性和开放几率以及钙通道由备用态向激活态转化的速度。同时,经百日咳毒素处理后钠通道的I-V曲线与抗性棉铃虫I-V曲线非常相似,可能暗示Gi蛋白在棉铃虫抗药性形成中发挥作用。 展开更多
关键词 棉铃虫 Na通道 Ca2通道 Gi蛋白 百日咳毒素 全细胞膜片钳
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百日咳毒素及其应用 被引量：5
6
作者 王祖森 杨晓明 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期160-167,共8页
百日咳毒素（ＰＴ）是鲍特氏菌属百日咳杆菌所产生的一种主要毒力因子，具有多种生物学活性，能引起百日咳众多的临床症状，同时也是主要的免疫原。介绍了ＰＴ的形态和分子结构及国内外对纯化ＰＴ进行的大量研究，建立了检测ＰＴ各种生... 百日咳毒素（ＰＴ）是鲍特氏菌属百日咳杆菌所产生的一种主要毒力因子，具有多种生物学活性，能引起百日咳众多的临床症状，同时也是主要的免疫原。介绍了ＰＴ的形态和分子结构及国内外对纯化ＰＴ进行的大量研究，建立了检测ＰＴ各种生物学活性的方法。经化学脱毒的ＰＴ或其亚单位可制备成无毒副反应的无细胞百口咳组分菌苗，而且有些国家进一步对ＰＴ深入的研究，利用基因点突变构建新的突变体ＰＴ重组株，以产生高效表达、无毒性及有免疫原性的分子，把它作为预防百日咳疾病的基因工程菌苗，具有广阔的应用前景。同时也介绍了ＰＴ－ＭｃＡｂ在抗百日咳菌感染中的应用，证明具有良好的体外和体内中和ＰＴ毒性作用，目前已用于流行病学调查和临床检测，具有特异、灵敏、迅速。 展开更多
关键词 百日咳毒素 菌苗 单克隆抗体
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抗百日咳毒素单克隆抗体的纯化及应用研究 被引量：13
7
作者 徐颖华 张庶民 +1 位作者 侯启明 雷殿良 《药品评价》 CAS 2005年第2期113-116,共4页
目的纯化抗百日咳毒素(PT)的单克隆抗体(M cAb),并建立特异、准确的PT定量检测方法。方法采用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法纯化杂交瘤细胞腹水,并经阻断抑制试验筛选识别不同表位的M cAb,用于建立定量检测PT的ELISA方法。结果经S... 目的纯化抗百日咳毒素(PT)的单克隆抗体(M cAb),并建立特异、准确的PT定量检测方法。方法采用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法纯化杂交瘤细胞腹水,并经阻断抑制试验筛选识别不同表位的M cAb,用于建立定量检测PT的ELISA方法。结果经SDS-PAGE分析,纯化M cAb的纯度均在90%以上,选择二株识别不同抗原位点M cAbs,应用于检测PT的双抗夹心ELISA方法,灵敏度为2.14μg/L,批内变异系数5.85%,批间变异系数9.27%,平均回收率为108.12%,应用该法测定了国内几大生产厂家送检的无细胞百日咳疫苗原液中PT含量。结论获得了纯度高的抗PT M cAb,建立了一种特异、准确的定量检测PT的ELISA方法,并用于无细胞百日咳疫苗原液中PT含量的检测,为无细胞百日咳疫苗的质量控制提供了有力的手段。 展开更多
关键词 单克隆抗体 纯化 SDS-PAGE分析 百日咳疫苗原液 百日咳毒素(PT) 夹心ELISA方法 无细胞百日咳疫苗 定量检测方法 辛酸-硫酸铵 变异系数 杂交瘤细胞 亲和层析法 McAbs 平均回收率 抑制试验 抗原位点 生产厂家 质量控制 A蛋白
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百日咳毒素S1亚单位突变体在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量：1
8
作者 张晓丽 邹全明 +1 位作者 章金勇 张卫军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期264-266,270,共4页
目的克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性。方法采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得... 目的克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性。方法采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得到rS1活性结构域编码片段。将其插入pQE-30载体中,转化大肠杆菌M15株,经IPTG诱导表达。表达产物经镍离子柱纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果PCR及重叠延伸获得了约700bp的目的基因片段,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白,Western blot检测能与兔抗百日咳毒素多价抗血清发生反应。结论成功表达并纯化了百日咳毒素S1亚单位突变体,为研制百日咳疫苗候补抗原的相关分子免疫学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 百日咳毒素 S1亚单位 突变体 原核表达
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百日咳毒素单克隆抗体的制备及其ELISA定量检测方法的建立 被引量：3
9
作者 詹骞 刘志飞 +4 位作者 彭祥兵 宁浩然 陈雯 张爱华 杨晓明 《微生物学免疫学进展》 2013年第2期19-23,共5页
目的制备百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)的单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA用于检测PT的含量。方法采用杂交瘤技术制备PT的单抗,并对其进行鉴定;优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行精密性及准确性... 目的制备百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)的单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA用于检测PT的含量。方法采用杂交瘤技术制备PT的单抗,并对其进行鉴定;优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行精密性及准确性验证;应用建立的方法检测武汉生物制品研究所有限责任公司(简称武汉公司)73批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中的PT含量。结果获得4株稳定的抗PT杂交瘤细胞株,抗体亚型均为IgG2a,抗体腹水ELISA效价达1∶106以上,均能与PT发生特异反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉和破伤风类毒素未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA的线性检测范围在2.50～80.00 ng/mL之间,酶标板内和板间变异系数均小于10%;PT的高、中、低浓度的回收率分别为97.41%、106.60%和89.98%;73批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中的PT质量浓度在50.00～150.00 ng/mL之间波动,说明中间产物的批间一致性及稳定性趋势良好。结论已成功制备了抗PT的单抗,并建立了精密性和准确性均较好的定量检测PT的双抗体夹心ELISA,可用于无细胞百日咳疫苗生产中PT的定量检测。 展开更多
关键词 百日咳毒素 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验
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百日咳毒素与霍乱毒素对乙酰胆碱诱导气孔运动的影响 被引量：1
10
作者 张蜀秋 王恒彬 +2 位作者 孟凡霞 王学臣 娄成后 《自然科学进展》 北大核心 2002年第12期1314-1317,共4页
在动物细胞中神经递质乙酰胆碱与其受体结合后,通过G蛋白的偶联传递信号,在植物中,乙酰胆碱也普遍存在并参与调节许多生理过程,乙酰胆碱及其受体参与了气孔运动的调节,G蛋白的激活剂霍乱毒素与抑制剂百日咳毒素影响乙酰胆碱诱导的气孔开... 在动物细胞中神经递质乙酰胆碱与其受体结合后,通过G蛋白的偶联传递信号,在植物中,乙酰胆碱也普遍存在并参与调节许多生理过程,乙酰胆碱及其受体参与了气孔运动的调节,G蛋白的激活剂霍乱毒素与抑制剂百日咳毒素影响乙酰胆碱诱导的气孔开放,而且仅在含Ca^(2+)的介质中才能起作用;同时用Ca^(2+)荧光探针Fluo-3检测保卫细胞胞质Ca^(2+)动态变化,表明乙酰胆碱的胞内信号转导中有Ca^(2+)的参与,由此推测在毒蕈碱型乙酰胆碱受体介导乙酰胆碱诱导的气孔运动中,可能存在与G蛋白偶联的信号转导。 展开更多
关键词 乙酰胆碱 气孔运动 G蛋白 百日咳毒素 霍乱毒素 细胞信号分子 信号转导
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无细胞百日咳疫苗中百日咳毒素活性测定分析 被引量：1
11
作者 谭亚军 卫辰 +3 位作者 董国霞 李喆 王丽婵 马霄 《中国医药生物技术》 2021年第4期343-347,377,共6页
百日咳毒素(pertussis toxin,PTx)是鲍特氏菌属百日咳杆菌产生的一种主要毒力因子,具有多种生物学活性,如淋巴细胞增多促进活性、组胺致敏活性、中华仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)簇集作用、胰岛激活作用、T细胞有丝分... 百日咳毒素(pertussis toxin,PTx)是鲍特氏菌属百日咳杆菌产生的一种主要毒力因子,具有多种生物学活性,如淋巴细胞增多促进活性、组胺致敏活性、中华仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)簇集作用、胰岛激活作用、T细胞有丝分裂促进作用、红细胞凝集活性等[1-4],是引起百日咳众多临床症状的原因,同时也是无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine,APV)的主要保护性抗原组分[5]。 展开更多
关键词 淋巴细胞增多 百日咳杆菌 无细胞百日咳疫苗 百日咳毒素 保护性抗原 毒力因子 促进作用 临床症状
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分子修饰的重组百日咳毒素S1亚单位的生物学和免疫学特性 被引量：4
12
作者 于康震 Burnette W N +1 位作者 Kaslow H R Yilma T D 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期151-154,共4页
目的：对重组杆状病毒表达的经多种信号序列修饰的天然和变异百日咳毒素（ＰＴ）Ｓ１亚单位（ｒＳ１）的生物学及免疫学特性作出评价。方法：应用生物化学和免疫学技术与方法对这些ｒＳ１的酶活性、分泌性和免疫原性等做了系统鉴定。结... 目的：对重组杆状病毒表达的经多种信号序列修饰的天然和变异百日咳毒素（ＰＴ）Ｓ１亚单位（ｒＳ１）的生物学及免疫学特性作出评价。方法：应用生物化学和免疫学技术与方法对这些ｒＳ１的酶活性、分泌性和免疫原性等做了系统鉴定。结果：ｒＳ１变异子无可检出的酶活性；所有ｒＳ１均不能由细胞分泌，可从细胞膜组分中大量检出，但不能从可溶性胞浆蛋白组分或细胞培养上清中检出；ｒＳ１分子内部含有３个疏水性区域；ｒＳ１虽不能与Ｂ寡聚体结合形成ＰＴ全毒素，但均能诱导抗ＰＴ免疫应答。结论：这些ｒＳ１极可能以膜蛋白形式存在，其非分泌性与分子内部的疏水性区域有关；所有ｒＳ１均保持其免疫原性。 展开更多
关键词 百日咳毒素 S1亚单位 生物学特性 免疫应答
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百日咳毒素S1亚单位的分子修饰及在重组杆状病毒中的表达 被引量：4
13
作者 于康震 Burnette WN +3 位作者 Kaslow HR Mar VL Ahmad S Yilma TD 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期52-55,共4页
目的：百日咳毒素既是百日咳杆菌的主要毒性因子，又是重要的保护性抗原，其Ｓ１亚单位具有ＡＤＰ核糖转移酶活性和免疫保护性决定簇。为高效表达前构建的一个丧失酶活性但仍保持保护决定簇的Ｓ１变异子，开展了本研究。方法：通过添... 目的：百日咳毒素既是百日咳杆菌的主要毒性因子，又是重要的保护性抗原，其Ｓ１亚单位具有ＡＤＰ核糖转移酶活性和免疫保护性决定簇。为高效表达前构建的一个丧失酶活性但仍保持保护决定簇的Ｓ１变异子，开展了本研究。方法：通过添加人流感病毒血凝素基因信号序列或嵌膜序列的方法，对天然和变异Ｓ１亚单位基因片段作了遗传学修饰。然后使用重组杆状病毒技术使这些Ｓ１亚单位在昆虫细胞和昆虫幼虫中实现了高水平表达。结果：这些重组Ｓ１的表达水平介于每万个昆虫卵细胞０１８～１９３μｇ或每只昆虫幼虫０４６～４９８ｍｇ之间。天然信号肽和ＨＡ信号肽均可完整表达，但后者的切割效率（６１％～８１％）比前者（１６％～１９％）更高。所有带信号肽的Ｓ１亚单位均呈异质性表达（双带）。结论：重组Ｓ１亚单位的表达是高效和正确的，表达的异质性是由于信号肽切割不完全的缘故。 展开更多
关键词 百日咳毒素 S1亚单位 重组杆状病毒 分子修饰
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重组百日咳毒素S1亚单位的纯化及免疫原性 被引量：2
14
作者 杨晓明 乔瑞洁 《微生物学免疫学进展》 2003年第4期24-27,共4页
将重组百日咳毒素S1亚单位基因的质粒在DH5α和TOP10两株大肠杆菌中进行表达 ,并对表达产物进行了初步纯化。粗制的rS1免疫家兔所得血清 ,用HP—PT及 1B7—PT包被的ELISA测定效价 ,并做被动免疫保护试验。抗PT的抗体滴度为 1∶32 0 0 0... 将重组百日咳毒素S1亚单位基因的质粒在DH5α和TOP10两株大肠杆菌中进行表达 ,并对表达产物进行了初步纯化。粗制的rS1免疫家兔所得血清 ,用HP—PT及 1B7—PT包被的ELISA测定效价 ,并做被动免疫保护试验。抗PT的抗体滴度为 1∶32 0 0 0。该抗rSl血清在小鼠被动免疫保护试验中 ,对百日咳杆菌 1832 3毒株进行脑腔攻击的被动免疫保护作用达到 10 0 %。证明rS1亚单位具有良好的抗原性和免疫原性 ,并与天然S1具有相同的抗原表位。 展开更多
关键词 百日咳杆菌 百日咳毒素S1亚单位 免疫保护 纯化 基因重组 大肠杆菌
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百日咳毒素和丝状血凝素的纯制和检测现况 被引量：2
15
作者 秦力 何长民 《微生物学免疫学进展》 1997年第1期87-89,共3页
介绍了百日咳毒素和丝状血凝素的分离纯化及纯度、活性检定的方法。
关键词 百日咳 百日咳毒素 丝状血凝素 研制 鉴定
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κ阿片激动剂的致心律失常作用涉及百日咳毒素敏感的G蛋白机制
16
作者 陆源 胡爱萍 +3 位作者 单绮娴 沈岳良 夏强 黄德明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期505-508,共4页
目的：探讨百日咳毒素（ＰＴＸ）敏感的Ｇ蛋白是否介导κ阿片激动剂的心脏效应。方法：应用离体大鼠心脏Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ灌流模型观察κ阿片激动剂Ｕ５０４８８Ｈ的心脏作用并探讨其可能机制。结果：研究结果表明，Ｕ５０４８８Ｈ... 目的：探讨百日咳毒素（ＰＴＸ）敏感的Ｇ蛋白是否介导κ阿片激动剂的心脏效应。方法：应用离体大鼠心脏Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ灌流模型观察κ阿片激动剂Ｕ５０４８８Ｈ的心脏作用并探讨其可能机制。结果：研究结果表明，Ｕ５０４８８Ｈ可导致心律失常、降低心率、心肌收缩力量和冠脉流量；ＭＲ２２６６和百日咳毒素（ＰＴＸ）预处理后，可取消Ｕ５０４８８Ｈ的致心律失常作用，但不能取消其降低心肌收缩力量和冠脉流量的作用。结论：结果提示κ阿片激动剂的致心律失常作用涉及ＰＴＸ敏感的Ｇ蛋白机制。 展开更多
关键词 k 阿片激动剂 心律失常 百日咳毒素 G蛋白
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抗百日咳毒素单克隆抗体的制备及其特性鉴定
17
作者 徐颖华 孟淑芳 +2 位作者 张庶民 侯启明 雷殿良 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期58-59,63,共3页
目的制备抗百日咳毒素(PT)的单克隆抗体(mAb)。方法按常规细胞融合技术制备抗PT的mAb,并对其特异性、相对亲和力及中和活性等进行了鉴定。结果获得7株分泌抗PT的mAb的杂交瘤细胞。7株mAb的Ig亚类(型)均为IgG1(κ),并能特异性识别PT,与... 目的制备抗百日咳毒素(PT)的单克隆抗体(mAb)。方法按常规细胞融合技术制备抗PT的mAb,并对其特异性、相对亲和力及中和活性等进行了鉴定。结果获得7株分泌抗PT的mAb的杂交瘤细胞。7株mAb的Ig亚类(型)均为IgG1(κ),并能特异性识别PT,与百日咳丝状血凝素及C型肠毒素无交叉反应。其中2株mAb1D4和3E4有中和抑制PT聚集CHO细胞的活性。Western blot的结果表明,2D7、5F9、5F8、1D4和2C25株mAb,均能识别PT抗原的S1亚单位蛋白,mAb1B8可识别S2亚单位蛋白,mAb3E4可识别S3亚单位蛋白。结论成功地制备抗PT的mAb,经鉴定具有良好的特异性,为研制定量检测PT的ELISA试剂盒提供了制剂。 展开更多
关键词 百日咳毒素 MAB ELISA 白日咳
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CD24分子调节百日咳毒素诱导小鼠急性肝损伤的实验研究
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作者 钟玉霞 葛睿 +2 位作者 吴丽媛 戴钰 张学军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期387-390,共4页
目的:探讨CD24分子对百日咳毒素诱导急性肝损伤的影响及其可能的分子机制。方法:建立百日咳毒素诱导小鼠急性肝损伤的实验模型,观察anti-CD24中和抗体(200μg/mouse)和百日咳毒素(200 ng/mouse)联合注射组小鼠的生存率,H&E染色观察... 目的:探讨CD24分子对百日咳毒素诱导急性肝损伤的影响及其可能的分子机制。方法:建立百日咳毒素诱导小鼠急性肝损伤的实验模型,观察anti-CD24中和抗体(200μg/mouse)和百日咳毒素(200 ng/mouse)联合注射组小鼠的生存率,H&E染色观察小鼠肝组织损伤,血清化学方法检测小鼠谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)等肝功能的生化指标,ELISA方法检测小鼠血清中TNFα-的含量,流式细胞仪分析anti-CD24中和抗体对百日咳毒素诱导小鼠kupffer细胞(存在于肝脏中的巨噬细胞,KC)凋亡率的影响。结果:一定剂量的anti-CD24中和抗体和百日咳毒素联合注射组(实验组)生存率显著低于对照组;H&E染色观察实验组小鼠肝出血程度明显高于对照组,实验组小鼠ALT、AST等肝功能生化指标显著高于对照组(P<0.05);ELISA检测实验组小鼠血清中TNFα-明显升高(P<0.05);流式细胞术分析表明:anti-CD24中和抗体导致小鼠kupffer细胞坏死百分数增加。结论:CD24分子抑制百日咳毒素诱导的小鼠急性肝损伤。 展开更多
关键词 CD24分子 百日咳毒素 急性肝损伤 枯否氏细胞
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百日咳毒素对抗性及敏感棉铃虫神经细胞L型钙通道的调制作用
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作者 赵强 王勇 +4 位作者 孙丹 刘燕强 范贤林 贺秉军 刘安西 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期100-106,共7页
通过催化抑制性G蛋白α亚基(Gαi／o)的ADP核糖基化,百日咳毒素(PTX)使Gαi／o不能活化,继而抑制Gαi／o-腺苷酸环化酶(AC)-cAMP-蛋白激酶A(PKA)-L型电压门控钙(Ca(L)2+)通道．Ca(L)2+通道可能是拟除虫菊酯类杀虫剂的靶标．本实验观察了... 通过催化抑制性G蛋白α亚基(Gαi／o)的ADP核糖基化,百日咳毒素(PTX)使Gαi／o不能活化,继而抑制Gαi／o-腺苷酸环化酶(AC)-cAMP-蛋白激酶A(PKA)-L型电压门控钙(Ca(L)2+)通道．Ca(L)2+通道可能是拟除虫菊酯类杀虫剂的靶标．本实验观察了PTX对三氟氯氰菊酯(Cy)抗性及敏感棉铃虫神经细胞Ca(L)2+通道的影响, 以期从Ca(L)2+通道动力学的角度探讨棉铃虫对拟除虫菊酯类杀虫剂产生抗性的机制．急性分离并经12-16 h无菌培养3-4龄棉铃虫神经细胞．实验分4组:①Cy敏感组(Cy-S组);②Cy抗性组(Cy-R组);③Cy-S-PTX组; ④Cy-R-PTX组．400 ng／mL PTX加入培养基中．采用全细胞膜片钳技术记录各组,ICa(L)．结果显示:(1)各组 Ca(L)2+通道的激活电压均是-35--30 mV,最大激活电压是0 mV,但Cy-S-PTX组的最大激活电压是 -10 mV;(2)分别与Cy-S组和Cy-R-PTX组峰值电流密度相比,Cy-S-PTX组峰值电流密度分别增高52．06 ％和44．81％(P<0．01),提示Cy-S-PTX组Ca(L)2+通道电导可能增大．Cy-S组和Cy-R组间的峰值电流密度无统计学差异;(3)与Cy-S组相比,Cy-S-PTX组神经细胞Ca(L)2+通道的半数激活电压向超极化方向移动5．1 mV (P<0．05),半数失活电压向超极化方向移动5．93 mV(P<0．05),提示PTX使敏感组神经细胞的Ca(L)2+通道更容易激活和失活;(4)与Cy-R组相比,Cy-R-PTX神经细胞Ca(L)2+通道的半数激活电压几乎未变,半数失活电压向去极化方向移动2．42 mV(P>0．05),提示PTX对抗性组神经细胞的影响不明显;(5)Cy-R组与Cy-S组神经细胞Ca(L)2+通道的半数激活电压和半数失活电压无显著性差异．结果提示:(1)棉铃虫神经细胞存在(Gαi／o)-AC- cAMP-PKA-Ca(L)2+通道信号传导途径;(2)PTX敏感的抑制性Gi／o蛋白的基础活性对棉铃虫神经细胞Ca(L)2+通道有影响;(3)PTX对敏感虫神经细胞的Ca(L)2+通道的影响较对抗性棉铃虫神经细胞Ca(L)2+通道的影响明显,提示抗性棉铃虫对拟除虫菊酯类杀虫剂产生抗性的机理可能与其Ca(L)2+通道对Gαi／o-AC-cAMP-PKA-Ca(L)2+通道调控不敏感有关． 展开更多
关键词 百日咳毒素 L型钙通道 Gαi/o蛋白 全细胞膜片钳技术 棉铃虫 抗性
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内毒素和百日咳毒素在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中的不同作用
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作者 陈杰 孙卫民 +4 位作者 宋斗 张超雄 王金泉 徐晓 陶君 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期593-598,共6页
背景 研究表明,使用百日咳毒素（PTX）诱导的传统实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU）模型在病原学和流行病学上与人类葡萄膜炎的发病环境有明显差异,且PTX本身可影响免疫应答.我们先前的研究已成功建立了内毒素——脂多糖（LPS）诱... 背景 研究表明,使用百日咳毒素（PTX）诱导的传统实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU）模型在病原学和流行病学上与人类葡萄膜炎的发病环境有明显差异,且PTX本身可影响免疫应答.我们先前的研究已成功建立了内毒素——脂多糖（LPS）诱导的EAU模型,但PTX与LPS在EAU模型中的不同作用尚不清楚. 目的 比较在不同免疫阶段注射PTX和LPS对EAU诱导的不同影响,探讨LPS和PTX在葡萄膜视网膜炎中的作用机制. 方法 将SPF级6～8周龄C57BL/6（H-2 b）小鼠20只采用随机数字表法随机分为0 d-PTX-EAU组、7 d-PTX-EAU组、0 d-LPS-EAU组和7 d-LPS-EAU组,分别于人类光感受器间维生素A类结合蛋白多肽片段1-20（IRBP 1-20）及完全弗氏佐剂（CFA）免疫小鼠后即刻或第7天在小鼠足底注射10 g/L LPS 30 μl或腹腔内注射1.0 mg/L PTX 0.5 ml,分别建立PTX和LPS诱导的EAU模型.于免疫后第19天,耳廓皮内分别注射IRBP 1-20,48 h测量模型鼠耳廓厚度,比较两种模型小鼠的迟发型超敏反应（DTH）;制备小鼠脾脏细胞匀浆,用3H脱氧胸苷（3H TdR）掺入法比较各组小鼠的特异性淋巴细胞增生反应;收集小鼠视网膜组织行苏木精-伊红染色,观察各组小鼠视网膜的炎症表现并参照Caspi标准进行炎症评分,对不同模型组小鼠的检测结果进行比较. 结果 0 d-PTX-EAU组和7 d-LPS-EAU组小鼠均出现典型的葡萄膜视网膜炎病理损害,可见明显的炎性细胞浸润、视网膜皱褶和脱离及视网膜全层结构排列紊乱,0 d-PTX-EAU组小鼠玻璃体炎和肉芽肿反应略重于7 d-LPS-EAU组;而7 d-PTX-EAU组小鼠仅见视网膜血管轻度扩张,0 d-LPS-EAU组小鼠可见少量视网膜血管扩张和个别区域的视网膜折叠.0 d-PTX-EAU组和7 d-LPS-EAU组小鼠的EAU评分明显高于7 d-PTX-EAU组和0 d-LPS-EAU组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.0 d-PTX-EAU组和7 d-PTX-EAU组小鼠耳廓厚度分别为（62.600±3.362） μm和（60.000±2.345） μm,均明显高于0 d-LPS-EAU组的（30.400±1.817） μm和7 d-LPS-EAU组小鼠的（32.800±1.643） μm,4个组间的总体差异有统计学意义（F分组=259.751,P=0.000）.0 d-PTX-EAU组和7 d-PTX-EAU组小鼠体外培养的淋巴细胞克隆数显著增加,其3H TdR掺入值（cpm）分别为（16 150.000±799.218）/min和（16 120.000±729.383）/min,均明显高于0d-LPS-EAU组的（8 348.000±258.979）/min和7 d-LPS-EAU组的（8 540.000±81.548）/min,4个组间小鼠淋巴细胞增生的差异有统计学意义（F分组=316.978,P=0.000）. 结论 免疫的同时注射PTX和免疫后第7天注射LPS均可诱导典型的EAU,LPS在EAU中的作用与PTX不同,主要作用于免疫的效应阶段,可能与血-眼屏障的破坏有关. 展开更多
关键词 葡萄膜视网膜炎 免疫 获得性免疫 自身免疫 内毒素 百日咳毒素 小鼠 C57BL 6(H-2b)
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