氨基酸组成及分子表面属性对胶原与盘状结构域受体DDR2结合能力的影响

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作者 韩庆秋 寇慧芝 +3 位作者 未本美 许承志 侯袁静 汪海波 《材料导报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第20期265-271,共7页

本工作利用ELISA实验和细胞黏附实验研究了不同物种来源的胶原样本与盘状结构域受体DDR2及人舌鳞癌细胞CAL-27的结合能力,并进一步探讨了氨基酸组成对胶原与细胞受体DDR2结合能力的影响。结果表明,不同来源的胶原样本与DDR2及CAL-27细... 本工作利用ELISA实验和细胞黏附实验研究了不同物种来源的胶原样本与盘状结构域受体DDR2及人舌鳞癌细胞CAL-27的结合能力,并进一步探讨了氨基酸组成对胶原与细胞受体DDR2结合能力的影响。结果表明,不同来源的胶原样本与DDR2及CAL-27细胞的结合能力存在显著性差异,其中,哺乳动物胶原的结合能力明显大于鱼类胶原,各鱼类胶原之间也存在差异性。通过分析胶原蛋白的氨基酸组成与胶原-受体DDR2结合能力之间的相关性可知,胶原-DDR2结合能力与天冬氨酸、苏氨酸、谷氨酸、甘氨酸、缬氨酸、酸性氨基酸、带电荷极性氨基酸、非极性氨基酸呈负相关,与羟脯氨酸、亚氨基酸、羟基化率(%)、不带电荷极性氨基酸、总极性氨基酸呈正相关(P<0.05)。与此同时,进一步研究了胶原蛋白分子的表面属性对胶原-受体DDR2结合能力的影响。分析表明,较低的Zeta电位绝对值或较高的亲水性均有助于胶原与DDR2的结合。 展开更多

关键词 胶原蛋白 盘状结构域受体ddr2 氨基酸 结合能力

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盘状结构域受体1与基质金属蛋白酶2在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义 被引量：2

2

作者 王智明 叶明 +5 位作者 张雨霏 杨东升 马颖 周卓 张力平 刘维贤 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2015年第3期326-330,共5页

目的:检测唾液腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)组织中盘状结构域受体1(discoidin domain receptor 1,DDR1)与基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)的表达,探讨两者在SACC中的表达意义及相关... 目的:检测唾液腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)组织中盘状结构域受体1(discoidin domain receptor 1,DDR1)与基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)的表达,探讨两者在SACC中的表达意义及相关性。方法:应用SP免疫组织化学方法检测54例SACC标本和30例正常唾液腺组织中DDR1与MMP2的表达情况。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:DDR1在SACC中的阳性表达率为87.0%,显著高于正常唾液腺组织(10%,P<0.01)。DDR1的高表达与SACC的神经侵袭、淋巴结转移相关(P<0.05)。MMP2在SACC中的阳性表达率为68.5%,显著高于正常唾液腺组织(13.3%,P<0.01)。经Spearman等级相关分析,DDR1与MMP2呈现显著正相关(r=0.332,P<0.05)。结论:在SACC中,DDR1与MMP2共同高表达,与SACC的发生与发展相关。 展开更多

关键词 盘状结构域受体1 基质金属蛋白酶2 唾液腺 腺样囊性癌

原文传递

盘状结构域受体2胞外区在酵母系统中的融合表达、纯化和功能鉴定 被引量：1

3

作者 陈健康 张伟 +3 位作者 刘楠楠 刘利兵 田菲 铁茹 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第14期1249-1252,共4页

目的:盘状结构域受体2(discoidin domain recep-tor2,DDR2)是一种与肿瘤细胞转移相关的蛋白酪氨酸激酶,研究DDR2在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)软骨破坏和肿瘤转移中的作用.方法:在毕赤酵母中表达DDR2胞外区片段(不含信号... 目的:盘状结构域受体2(discoidin domain recep-tor2,DDR2)是一种与肿瘤细胞转移相关的蛋白酪氨酸激酶,研究DDR2在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)软骨破坏和肿瘤转移中的作用.方法:在毕赤酵母中表达DDR2胞外区片段(不含信号肽和跨膜区,命名为DR),并将所表达的蛋白进行纯化和功能鉴定,以备将来用作DDR2的特异性阻断剂.结果:获得了两株较高表达His-DR融合蛋白的毕赤酵母克隆;其表达的蛋白质中可溶性部分约占全部融合蛋白的18%;经Ni-NTA(nitric-tri-acetic acid)柱纯化后,获得了纯度约90%以上的可溶性His-DR融合蛋白;竞争结合抑制实验显示,His-DR具有阻断和细胞表面天然DDR2受体结合的功能.结论:所表达的融合蛋白His-DR具有抑制天然DDR2功能的作用. 展开更多

关键词 盘状结构域受体2 胞外区 基因表达 阻断剂

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绿色荧光蛋白与鼠盘状结构域受体2融合基因的构建与表达 被引量：1

4

作者 周洁 刘新平 张远强 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第6期481-483,共3页

目的: 构建以绿色荧光蛋白 (GFP)为报告基因的重组表达质粒DDR2 /pEGFP N3并分析该融合基因在活细胞中的表达.方法: 利用反转录PCR扩增鼠盘状结构域受体2(DDR2)cDNA,并重组于pEGFP N3载体.脂质体体外瞬时转染培养的COS 7细胞,RT PCR和We... 目的: 构建以绿色荧光蛋白 (GFP)为报告基因的重组表达质粒DDR2 /pEGFP N3并分析该融合基因在活细胞中的表达.方法: 利用反转录PCR扩增鼠盘状结构域受体2(DDR2)cDNA,并重组于pEGFP N3载体.脂质体体外瞬时转染培养的COS 7细胞,RT PCR和WesternBlot分析该融合基因的表达.结果: 从NIH3T3细胞中克隆到DDR2基因的cDNA,并成功构建DDR2 EGFP融合表达载体.以该质粒转染细胞 48h后,RT PCR和WesternBlot分析表明该融合基因能够在COS 7细胞中正确表达.结论: DDR2 /pEGFP N3融合基因真核表达载体构建成功.该融合蛋白具有DDR2和EGFP双重特性,为进一步研究DDR2的功能提供了工具. 展开更多

关键词 融合基因 盘状结构域受体2 EGFP 表达 RT-PCR COS-7细胞 体外 绿色荧光蛋白(GFP) DNA 活细胞

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促炎分子盘状结构域受体2在泛素化修饰过程中与泛素分子的偶联方式

5

作者 于江天 卜歆 +2 位作者 赵虎 李霞 苏金 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1077-1080,共4页

目的研究泛素分子中哪些位点的赖氨酸(Lys)残基参与了具有促炎效应的膜受体盘状结构域受体2(DDR2)的多聚泛素化修饰。方法将DDR2、Cbl-b及泛素分子不同位点Lys的突变体共转染HEK293T细胞,以胶原蛋白刺激细胞诱导DDR2发生活化。利用免疫... 目的研究泛素分子中哪些位点的赖氨酸(Lys)残基参与了具有促炎效应的膜受体盘状结构域受体2(DDR2)的多聚泛素化修饰。方法将DDR2、Cbl-b及泛素分子不同位点Lys的突变体共转染HEK293T细胞,以胶原蛋白刺激细胞诱导DDR2发生活化。利用免疫沉淀方法分离细胞中的DDR2,Western blot法检测DDR2与不同泛素分子的偶联情况。结果仅保留27位Lys的泛素分子偶联到DDR2分子上的能力与野生型泛素分子相接近,保留33位Lys的泛素分子有较微弱与DDR2偶联的能力。27位Lys突变可使泛素分子彻底丧失与DDR2相偶联的能力,而33位Lys突变使得泛素分子偶联DDR2的能力部分丧失。结论 Cbl-b介导的DDR2的多泛素化修饰主要是通过泛素分子的Lys27偶联的,Lys33可能也部分参与了DDR2的泛素化修饰。 展开更多

关键词 盘状结构域受体2 泛素化 泛素 泛素连接酶 CBL-B

原文传递

盘状结构域受体2与EGFP融合载体的构建及细胞中的活性分析

6

作者 于江天 苏金 +1 位作者 任婷婷 刘新平 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第20期1825-1828,共4页

目的:寻找使盘状结构域受体2(DDR2)在细胞内的表达情况易于检测并能动态追踪其蛋白表达分布的途径方法:采用PCR技术扩增获得DDR2编码区无终止码序列通过限制性酶切将DDR2片段亚克隆入pEGFP-N3载体中,转染293T细胞后通过倒置显微镜观察... 目的:寻找使盘状结构域受体2(DDR2)在细胞内的表达情况易于检测并能动态追踪其蛋白表达分布的途径方法:采用PCR技术扩增获得DDR2编码区无终止码序列通过限制性酶切将DDR2片段亚克隆入pEGFP-N3载体中,转染293T细胞后通过倒置显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,并用免疫印迹技术检测融合载体的表达及胶原刺激后活化状况.结果:成功构建了DDR2/EGFP融合表达载体,进一步的分析也证明此融合表达载体能在细胞中正确表达并可以被配体所激活.结论:DDR2/EGFP的成功构建及可进一步检测磷酸化,为深入研究DDR2的功能奠定了基础. 展开更多

关键词 盘状结构域受体2 融合载体 EGFP 磷酰化

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盘状结构域受体2在前列腺癌组织标本中的表达及临床意义 被引量：3

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作者 许妍妮 张键 +1 位作者 李婧 张燕 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2015年第10期692-695,共4页

目的探讨盘状结构域受体2（DDR2）蛋白在前列腺癌组织标本中的表达,分析其与其临床病理特征的关系,初步明确DDR2在前列腺中的作用,为探寻新的治疗靶点提供基础。方法采用免疫组化检测46例前列腺癌和18例良性前列腺增生组织标本中DDR2的... 目的探讨盘状结构域受体2（DDR2）蛋白在前列腺癌组织标本中的表达,分析其与其临床病理特征的关系,初步明确DDR2在前列腺中的作用,为探寻新的治疗靶点提供基础。方法采用免疫组化检测46例前列腺癌和18例良性前列腺增生组织标本中DDR2的表达情况。结果前列腺癌组织的DDR2阳性表达率（82.61%）明显高于良性前列腺增生组织的DDR2的阳性表达率（11.11%,P〈0.05）。Gleason 5～7分组和8～10分组前列腺癌组织的DDR2阳性表达率明显高于Gleason 2～4分组前列腺癌组织DDR2阳性表达率（P〈0.05）。DDR2蛋白阳性表达与TNM分期比较,TNM分期越晚,DDR2阳性表达率越高（P〈0.05）。血清PSA水平≤20μg/L组前列腺癌组织的DDR2阳性表达率明显低于PSA〉20μg/L组（P〈0.05）。而DDR2阳性表达率与患者的年龄因素无关（P〉0.05）。结论 DDR2在前列腺癌中高表达,提示其在前列腺癌的发生发展中可能起重要作用。 展开更多

关键词 前列腺癌 盘状结构域受体2 免疫组化 蛋白表达 治疗靶点

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大黄酚与转化生长因子-β1对体外培养人成纤维细胞胶原及盘状结构域受体2的调控作用及机制 被引量：4

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作者 杨成华 巫岳龙 +2 位作者 李敏 程基焱 颜丽萍 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2020年第18期3947-3950,共4页

目的探讨中药大黄提取物大黄酚和转化生长因子(TGF)-β1对体外培养人成纤维细胞Ⅰ型(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、盘状结构域受体(DDR)2的调控作用及机制。方法体外培养人成纤维细胞,用大黄酚干扰24 h,观察细胞生长特征,并用实时定量聚... 目的探讨中药大黄提取物大黄酚和转化生长因子(TGF)-β1对体外培养人成纤维细胞Ⅰ型(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、盘状结构域受体(DDR)2的调控作用及机制。方法体外培养人成纤维细胞,用大黄酚干扰24 h,观察细胞生长特征,并用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、DDR2表达,流式细胞技术检测成纤维细胞细胞周期。细胞分为对照组、TGF组和大黄酚组。结果TGF-β1、大黄酚上调DDR2表达,与对照组有显著性差异(P<0.05)。TGF-β1组Col-Ⅰ表达上调,与对照组有显著性差异(P<0.05);大黄酚组Col-Ⅰ表达下调,与对照组有显著性差异(P<0.05)。TGF-β1组Col-Ⅲ表达与对照组无显著性差异(P>0.05);大黄酚组Col-Ⅲ表达上调,与对照组有显著性差异(P<0.05)。G1/G0期细胞比例,TGF-β1组与对照组无显著性差异(P>0.05),大黄酚组低于对照组,有显著性差异(P<0.05);S期细胞比例,TGF-β1组与对照组无显著性差异(P>0.05),大黄酚组高于对照组,有显著性差异(P<0.05);G2期细胞比例,各组间无明显差异(P>0.05)。结论大黄酚和TGF-β1对培养成纤维细胞的DDR2、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达具有调控作用,并能影响其细胞周期。TGF-β1作用是通过上调Col-Ⅰ表达促进组织修复,而大黄酚作用的机制可能是降低了G1/G0期细胞比例而增加细胞增殖活性来促进组织修复,同时上调DDR2,增加Col-Ⅰ降解,减少瘢痕形成。 展开更多

关键词 大黄酚 成纤维细胞 盘状结构域受体(ddr)2 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 细胞周期

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miR-198通过调控盘状结构域受体2影响肺癌细胞放疗抵抗的分子机制 被引量：2

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作者 田映国 金勇 +7 位作者 陈丽 陈洪明 粟芙蓉 何裕 许琴 蒋成英 田雨 万小亚 《中国医药生物技术》 2019年第5期430-435,共6页

目的旨在探讨 miR-198 通过调控盘状结构域受体 2(DDR2)影响肺癌细胞放疗抵抗的分子机制。方法培养人正常胚肺细胞与肺癌细胞,通过克隆形成实验比较各种细胞对放疗的敏感性。双荧光素酶报告基因实验检测 DDR2 与 miR-198 的关系。RT-PCR... 目的旨在探讨 miR-198 通过调控盘状结构域受体 2(DDR2)影响肺癌细胞放疗抵抗的分子机制。方法培养人正常胚肺细胞与肺癌细胞,通过克隆形成实验比较各种细胞对放疗的敏感性。双荧光素酶报告基因实验检测 DDR2 与 miR-198 的关系。RT-PCR 和 Western blot 实验检测相关基因的表达水平。Transwell 实验检测细胞迁移能力。结果人肺癌细胞株 A549 对放疗最不敏感,放疗抵抗细胞株 A549-R 中 miR-198 表达显著低于其他细胞且 DDR2 表达显著高于其他细胞。DDR2 是 miR-198 的直接靶基因,过表达 miR-198 显著抑制 A549-R 细胞中 DDR2 蛋白的表达水平,增强细胞对放疗的敏感性,同时显著抑制了细胞的迁移能力。结论 miR-198 通过直接靶向 DDR2 调控肺癌细胞对放疗的抵抗作用。 展开更多

关键词 miR-198 盘状结构域受体 2 肺癌细胞 放疗抵抗

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人参皂苷Rh2调控盘状结构域受体1对糖尿病大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响 被引量：9

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作者 沈炳香 王法财 +3 位作者 周艺 李婷 何春远 赵为陈 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1107-1113,共7页

目的分析人参皂苷Rh2(G-Rh2)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法SPF级,雄性,SD大鼠30只,随机分为对照组(Control组)、DN组以及G-Rh2药物干预组。DN和G-Rh2药物干预组大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建DN大鼠模型... 目的分析人参皂苷Rh2(G-Rh2)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法SPF级,雄性,SD大鼠30只,随机分为对照组(Control组)、DN组以及G-Rh2药物干预组。DN和G-Rh2药物干预组大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建DN大鼠模型,Control组大鼠给予等量的柠檬酸缓冲溶液注射。待DN大鼠模型构建成功后,G-Rh2药物干预组给予G-Rh2(20 mg·kg^(-1)·d^(-1))连续灌胃12周,Control和DN大鼠给予等量的生理盐水灌胃。HE染色和PAS染色观察大鼠肾组织形态,Masson染色观察大鼠肾组织纤维化程度,TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况;Western blot检测大鼠肾组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleaved-caspase-3、Bcl-2、DDR1表达水平;免疫组化定位检测肾组织DDR1表达情况。结果与Control组相比,DN组肾组织纤维化程度加重,细胞凋亡指数升高(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleaved-caspase-3、DDR1表达上调(P<0.01),Bcl-2表达下调(P<0.01);与DN组相比,G-Rh2药物干预组肾组织纤维化程度,细胞凋亡指数,CollagenⅠ、CollagenⅢ、Cleavedcaspase-3、DDR1表达均显著降低(P<0.05或P<0.01),Bcl-2表达显著升高(P<0.05)。结论G-Rh2抑制糖DN肾纤维化和细胞凋亡可能与下调DDR1表达有关。 展开更多

关键词 糖尿病肾病 人参皂苷RH2 盘状结构域受体1 肾纤维化 细胞凋亡

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鼠盘状结构域受体真核表达载体的构建与表达

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作者 周洁 刘新平 +1 位作者 贺小舟 张远强 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期599-602,共4页

目的分别构建DDR2的野生型(FLDDR2)、嵌和体(FcDDR2)和截短体(ttDDR2)的真核表达载体,并在哺乳动物细胞表达,为进一步研究DDR2与类风湿性关节炎发病机制的关系奠定基础。方法FLDDR2和ttDDR2通过RTPCR的方法获得,测序正确后亚克隆入pCDNA... 目的分别构建DDR2的野生型(FLDDR2)、嵌和体(FcDDR2)和截短体(ttDDR2)的真核表达载体,并在哺乳动物细胞表达,为进一步研究DDR2与类风湿性关节炎发病机制的关系奠定基础。方法FLDDR2和ttDDR2通过RTPCR的方法获得,测序正确后亚克隆入pCDNA3.1(+)。FcDDR2是利用人IgG1的Fc段替代部分胞浆区,测序正确后亚克隆入pMKITNeo。重组产物经脂质体2000介导瞬时转入COS7细胞,48h后收取蛋白,分别利用蛋白印迹法和免疫沉淀法检测重组产物的表达。转入重组质粒的细胞经胶原刺激3h后收取蛋白,利用免疫印迹和免疫沉淀法检测磷酸化水平的变化。结果所构建的三种真核表达载体均可在COS7细胞中正确表达。将ttDDR2和FLDDR2共转染COS7细胞并给予胶原刺激后FLDDR2的磷酸化水平有所下降,而FcDDR2在无胶原刺激时也可自身活化,其程度与FLDDR2经胶原刺激后的活化程度相仿。结论成功构建了FLDDR2、ttDDR2和FcDDR2三种真核表达载体,其中FcDDR2可以作为一种激活剂,而ttDDR2在一定程度上具有负性竞争的作用。 展开更多

关键词 盘状结构域受体2 类风湿性关节炎

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心肌成纤维细胞DDR2对整合素β1调控的机制研究

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作者 郝春媛 李同华 +2 位作者 李霞 葛兴利 张誉洋 《医学研究杂志》 2023年第8期94-99,共6页

目的探究心肌成纤维细胞盘状结构域受体(discoid domain receptor 2,DDR2)对于整合素(integrin)β1表达的调控分子机制。方法体外培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,使用RNA干扰和高表达载体分别下调和上调DDR2的表达,Western blot法检测血... 目的探究心肌成纤维细胞盘状结构域受体(discoid domain receptor 2,DDR2)对于整合素(integrin)β1表达的调控分子机制。方法体外培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,使用RNA干扰和高表达载体分别下调和上调DDR2的表达,Western blot法检测血管紧张素Ⅱ(angiogensinⅡ,AngⅡ)作用细胞后其整合素β1、细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,Erk1/2)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达水平。其后使用Erk1/2的特异性抑制剂PD98059以及TGF-β1的RNA干扰阻断相应信号通路,Western blot法再次检测AngⅡ刺激细胞后整合素β1的表达变化。结果AngⅡ可以上调心肌成纤维细胞DDR2以及整合素β1的表达水平。DDR2的RNA干扰可以阻断AngⅡ引起的心肌成纤维细胞整合素β1的升高效应,同时降低了磷酸化Erk1/2(p-Erk1/2)和TGF-β1的表达水平。使用Erk1/2的特异性抑制剂PD98059可以削弱AngⅡ引起的心肌成纤维细胞TGF-β1和整合素β1的升高效应,而TGF-β1的RNA干扰可以削弱AngⅡ引起的心肌成纤维细胞整合素β1的升高效应。高表达DDR2可以显著性升高TGF-β1和整合素β1的表达水平,而TGF-β1的RNA干扰可以削弱DDR2上调引起的心肌成纤维细胞整合素β1的升高效应。结论AngⅡ通过DDR2-Erk1/2-TGF-β1信号途径调控心肌成纤维细胞整合素β1的表达水平,该信号途径可能在心肌损伤后结构改建中起着重要作用。 展开更多

关键词 心肌成纤维细胞 盘状结构域受体2 整合素Β1 ERK1/2 TGF-Β1

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盘状结构域受体2在肿瘤微环境中的作用研究进展

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作者 李倩倩 李小丽 +4 位作者 王变丽 窦文杉 张雯 程龙 张德奎 《中国肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期773-779,共7页

盘状结构域受体2(DDR2)是一种被胶原纤维激活的受体酪氨酸激酶(RTK),近年来研究发现,DDR2在多种肿瘤及其宿主肿瘤环境细胞中表达升高并且能够影响肿瘤的转移。肿瘤微环境(TME)作为肿瘤赖以生存的环境,在肿瘤的发生及进展过程中发挥着重... 盘状结构域受体2(DDR2)是一种被胶原纤维激活的受体酪氨酸激酶(RTK),近年来研究发现,DDR2在多种肿瘤及其宿主肿瘤环境细胞中表达升高并且能够影响肿瘤的转移。肿瘤微环境(TME)作为肿瘤赖以生存的环境,在肿瘤的发生及进展过程中发挥着重要的作用。研究表明,DDR2通过与TME中的细胞及非细胞成分相互作用促进肿瘤的生长、增殖、侵袭及转移。全文对DDR2在TME中的作用进行综述,以探讨DDR2作为肿瘤基因治疗这一潜在治疗靶点的应用前景。 展开更多

关键词 盘状结构域受体2 肿瘤微环境 肿瘤

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MEK/ERK和PI3K/Akt通路对大鼠脉络膜新生血管中DDR2和MMP-13表达的调控作用 被引量：5

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作者 杨秀梅 王雨生 +2 位作者 张建 李燕 药立波 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期678-685,共8页

背景 研究表明盘状结构域受体2（DDR2）和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）在肿瘤新生血管发生中具有重要作用,是相关疾病治疗的关键靶点,但DDR2和MMP-13在脉络膜新生血管（CNV）发生中的作用尚不清楚.目的 探讨DDR2和MMP-13在大鼠CNV中的... 背景 研究表明盘状结构域受体2（DDR2）和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）在肿瘤新生血管发生中具有重要作用,是相关疾病治疗的关键靶点,但DDR2和MMP-13在脉络膜新生血管（CNV）发生中的作用尚不清楚.目的 探讨DDR2和MMP-13在大鼠CNV中的表达特点以及MEK/ERK和PI3 K/Akt通路对DDR2及MMP-13表达的调控作用.方法 采用532 nm倍频激光视网膜光凝法制备棕色挪威（BN）大鼠CNV模型,将78只BN模型鼠按照随机数字表法分为正常对照组（n=7）、模型对照组（n=39）、PD98059（MEK1抑制剂）组（n=16）和LY294002（PI3K抑制剂）组（n=16）,PD98059组和LY294002组大鼠分别于光凝后1d、7d玻璃体内注射5 mmol/L PD98059 3μl或5 mmol/L LY294002 3μl.分别于光凝前和光凝后1、3、7、14 d用过量麻醉法处死动物并制备样本和切片,采用Western blot法检测各组大鼠眼杯中ERK、p-ERK、Akt和p-Akt蛋白的表达变化,采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测各组大鼠眼杯中DDR2 mRNA和MMP-13 mRNA的表达变化,采用组织病理学方法测定各组大鼠CNV厚度,采用免疫组织化学和免疫荧光染色法分别定位和测定大鼠CNV区域DDR2和MMP-13的表达.结果 光凝后3d,光凝局部细胞增生,光凝后7 d CNV形成,至光凝后14 d CNV趋于稳定.免疫组织化学染色结果显示,DDR2在正常大鼠视网膜血管内皮细胞层、视网膜神经节细胞（RGCs）层和内核层细胞中呈弱表达,但在CNV中呈强阳性表达;MMP-13在正常对照组大鼠视网膜内界膜层、光感受器层和巩膜层均呈强阳性表达,在模型对照组中呈强阳性表达.免疫荧光结果显示,CNV组织中DDR2和MMP-13共表达.RT-PCR结果显示,模型对照组光凝后1、3、7、14 d DDR2 mRNA相对表达水平分别为55.22±4.03、47.74±2.23、14.82±4.56和5.59±2.47,MMP-13 mRNA相对表达水平分别为25.54±3.83、43.51±4.36、10.90±4.00和5.23±3.23,与正常对照组相比,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.免疫荧光结果显示,模型对照组光凝后3、7、14 d大鼠CNV区DDR2相对荧光密度单位（RFU）值分别为2.73±0.53、5.21±0.31和3.22±0.33,MMP-13 RFU值分别为1.66±0.17、3.57±0.44和2.67±0.21,组间总体比较差异均有统计学意义（F=81.01,P＜0.05;F=40.31,P＜0.01）;PD98059组和LY294002组光凝后14 d CNV区DDR2 RFU值分别为1.14±0.19和1.03±0.14,与模型对照组比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,MMP-13RFU值分别为1.37±0.25和1.24±0.20,与模型对照组比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.Western blot结果显示,模型对照组光凝后7d眼杯中p-ERK和p-Akt水平升高,与正常对照组大鼠相比差异均有统计学意义（均P＜0.05）;至光凝后14 d恢复至近正常水平,与正常对照组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）.PD98058组大鼠眼杯p-ERK水平明显下降,注射后7d、14 d PD98058组大鼠眼杯中p-ERK表达的抑制率分别为71.58％和65.21％,PD98058组7d与模型对照组7d比较、PD98058组14 d与模型对照组14 d比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.LY294002组大鼠眼杯中p-Akt表达水平明显下降,LY294002注射后7d、14d大鼠眼杯中p-Akt表达的抑制率分别为65.62％和67.04％,LY294002组7d与模型对照组7d比较、LY294002组14d与模型对照组14 d比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.各组眼杯中ERK和Akt的表达水平总体比较差异均无统计学意义（F=0.62,P＞0.05;F=0.81,P＞0.05）.模型对照组、PD98059组和LY294002组光凝后14 d大鼠CNV厚度分别为（119.19±18.03）、（51.00±11.29）和（59.18±9.00） μm,总体比较差异有统计学意义（F=29.376,P＜0.05）,与模型对照组比较,PD98059和LY294002注射后CNV厚度分别减少57.21％和50.34％,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 DDR2和MMP-13在大鼠CNV中表达上调,参与CNV的形成;MEK/ERK和PI3K/Akt通路通过参与调控DDR2和MMP-13在CNV局部的表达而抑制CNV的发生和进展. 展开更多

关键词 盘状结构域受体2 脉络膜/病理 新生血管 基质金属蛋白酶-13 疾病模型 BN大鼠

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DDR2/Fc融合基因真核表达载体的构建及表达 被引量：2

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作者 张燕 王保莉 +3 位作者 苏金 车红磊 于江天 刘新平 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第3期197-200,共4页

目的:构建DDR2/Fc真核表达载体,使其在HEK293细胞中进行表达.方法:采用PCR技术,分别从大鼠脑组织、含人IgG1Fc全长互补DNA(cDNA)的质粒中扩增出盘状结构域受体2(DDR2)的DS区域、Fc段,以定向克隆的方法将其串联至真核表达载体pcDNA3.1(-)... 目的:构建DDR2/Fc真核表达载体,使其在HEK293细胞中进行表达.方法:采用PCR技术,分别从大鼠脑组织、含人IgG1Fc全长互补DNA(cDNA)的质粒中扩增出盘状结构域受体2(DDR2)的DS区域、Fc段,以定向克隆的方法将其串联至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得重组表达载体DDR2/Fc-pcDNA3.1(-);采用脂质体转染技术转染HEK293细胞;RT-PCR、免疫印迹检测融和蛋白的表达.结果:DNA测序和限制型酶切鉴定证明两段基因正确克隆至pcDNA3.1(-)的多克隆位点,细胞裂解物中检测到融合蛋白的表达,其分子质量与预期大小一致,该融合蛋白能正确表达于HEK293细胞中.结论:成功构建了DDR2/Fc融和表达载体,表达了融合蛋白. 展开更多

关键词 盘状结构域受体2 FC DS区域 融合表达

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DDR1a在结肠癌细胞株中的表达及与基质金属蛋白酶2,9的关系 被引量：10

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作者 何苗 傅仲学 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期161-163,共3页

目的:探讨结肠癌细胞中盘状结构域受体酪氨酸激酶1(Discoidin domain receptor tyrosine kinases1a,DDR1a)的表达和基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase9,MMP9)的活性及其相... 目的:探讨结肠癌细胞中盘状结构域受体酪氨酸激酶1(Discoidin domain receptor tyrosine kinases1a,DDR1a)的表达和基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase9,MMP9)的活性及其相互的关系。方法:用Westernblot检测结肠癌细胞株和人正常结肠平滑肌细胞株中DDR1a表达,明胶酶谱法检测各细胞株中的MMP2,MMP9的活性。结果:侵袭能力强的结肠癌细胞LOVO中,DDR1a呈显著高表达(P<0.01)及MMP2、MMP9呈显著高活性(P<0.01),此外在所测细胞中DDR1a表达与MMP2及MMP9活性呈显著正相关(P<0.05)。结论:本研究提示DDR1a可作为反映结肠癌细胞侵袭力生物学指标之一。 展开更多

关键词 盘状结构域受体酪氨酸激酶1a 结肠癌细胞 基质金属蛋白酶2 基质金属蛋白酶9

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佐剂型类风湿关节炎模型改良与DDR2表达的研究 被引量：2

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作者 李伟 张远强 +1 位作者 刘新平 孙岚 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期89-93,共5页

目的　建立更加简便实用的类风湿关节炎模型 ,为类风湿关节炎发病机制的研究提供良好的实验材料 ;观察盘状结构域受体 2 (DiscoidinDomainReceptor2 ,DDR2 )在类风湿模型动物早期的表达 ,为探讨DDR2与类风湿关节炎滑膜细胞损伤的关系提... 目的　建立更加简便实用的类风湿关节炎模型 ,为类风湿关节炎发病机制的研究提供良好的实验材料 ;观察盘状结构域受体 2 (DiscoidinDomainReceptor2 ,DDR2 )在类风湿模型动物早期的表达 ,为探讨DDR2与类风湿关节炎滑膜细胞损伤的关系提供依据。方法　放射影像学、酶联免疫检测和免疫组织化学。结果　从病理学、影像学、血清学及临床特征观察模型的改良情况 ,符合类风湿关节炎临床特征的个体达到 85 %以上 ,且建模时间明显缩短 ;免疫组化显示 ,DDR2免疫反应阳性产物定位于关节囊滑膜细胞和滑膜下层细胞的胞膜和胞浆。结论　经改良的佐剂型类风湿关节炎模型优于常规的动物模型 ; 展开更多

关键词 类风湿关节炎 盘状结构域受体2 佐剂诱导型关节炎 滑膜组织

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类风湿性关节炎滑膜细胞中DDR2相互作用蛋白的筛选 被引量：1

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作者 赵薇 董晓薇 +2 位作者 舒震 徐玉金 张伟 《宁夏医科大学学报》 2015年第9期1000-1003,1012,封2,共6页

目的筛选盘状结构域受体(discoidin domain receptors 2,DDR2)的相互作用蛋白。方法原代培养类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)。用人DDR2过表达腺病毒(Ad5-DDR2)感染FLSs,... 目的筛选盘状结构域受体(discoidin domain receptors 2,DDR2)的相互作用蛋白。方法原代培养类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)。用人DDR2过表达腺病毒(Ad5-DDR2)感染FLSs,上调DDR2的表达。采用Ⅱ型胶原诱导的方法活化FLSs细胞膜上的DDR2;提取细胞总蛋白,通过小鼠来源的DDR2抗体免疫沉淀FLSs中的DDR2蛋白复合物;双向电泳分离抗原抗体复合物,质谱分析确认DDR2活化前后的差异蛋白。结果 Ad5-DDR2感染RA FLSs后,Westernblot结果显示细胞中DDR2表达水平显著上调。双向电泳分离DDR2免疫沉淀复合物,考马斯亮蓝染色显示胶原刺激前后,DDR2免疫复合物存在7个差异蛋白点。质谱分析及生物信息学分析显示,DDR2相互作用蛋白主要包括波形蛋白(vimentin)、膜脂联蛋白A2(Annexin A2)、免疫球蛋白和肌动蛋白等。结论筛选获得了两个可能与RA病程相关的DDR2相互作用蛋白——波形蛋白和膜脂联蛋白2,为DDR2-MMPs通路作用机制的阐明奠定了基础。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 盘状结构域受体2 相互作用蛋白

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类风湿性关节炎成纤维样滑膜(FLS)细胞中DDR2相互作用分子的筛选鉴定及其对FLS细胞侵袭能力的影响 被引量：1

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作者 刘楠楠 赵薇 +4 位作者 穆楠 田菲 薛晓畅 颜真 张伟 《生物技术通讯》 CAS 2015年第3期305-310,共6页

目的:在类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜(FLS)细胞中筛选并鉴定盘状结构域受体2(DDR2)的相互作用蛋白,并研究其对FLS细胞侵袭能力的影响。方法:首先利用免疫沉淀结合SDS-PAGE分离鉴定DDR2互作蛋白波形蛋白,进而采用免疫沉淀和激光共聚... 目的:在类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜(FLS)细胞中筛选并鉴定盘状结构域受体2(DDR2)的相互作用蛋白,并研究其对FLS细胞侵袭能力的影响。方法:首先利用免疫沉淀结合SDS-PAGE分离鉴定DDR2互作蛋白波形蛋白,进而采用免疫沉淀和激光共聚焦实验,进一步验证波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,最后采用Transwell实验考察波形蛋白对RA FLS细胞侵袭能力的影响。结果:Ⅱ型胶原刺激引起RA FLS细胞中DDR2的磷酸化水平升高,DDR2被活化,活化前后共有8个DDR2相互作用蛋白发生变化,经质谱分析,其中变化最大的是波形蛋白和膜联蛋白A2;在HEK293T细胞中,免疫共沉淀结果显示Fc DDR2与波形蛋白存在相互作用;激光共聚焦结果显示在RA FLS细胞中,DDR2和波形蛋白存在共定位;下调RA FLS细胞中波形蛋白的表达后,细胞的侵袭能力较对照组显著下降。结论:波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,Ⅱ型胶原可引起RA FLS细胞的DDR2磷酸化水平升高,并通过波形蛋白促进RA FLS细胞的侵袭。 展开更多

关键词 类风湿性关节炎 盘状结构域受体2 波形蛋白 成纤维样滑膜细胞

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DDR2胞外区的可溶性表达、纯化和功能检测

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作者 聂晓燕 王吉村 +3 位作者 刘新平 吴国强 米文娟 药立波 《生物技术通讯》 CAS 2002年第5期327-330,共4页

盘状结构域受体2(discoidindomainreceptor2,DDR2)一种受体型酪氨酸蛋白激酶,其配体为纤维型胶原,胶原诱导的DDR2磷酸化可上调细胞基质金属蛋白酶1的过表达。DDR2在人体内广泛分布并与肿瘤的转移相关。为进一步研究DDR2在肿瘤转移中的... 盘状结构域受体2(discoidindomainreceptor2,DDR2)一种受体型酪氨酸蛋白激酶,其配体为纤维型胶原,胶原诱导的DDR2磷酸化可上调细胞基质金属蛋白酶1的过表达。DDR2在人体内广泛分布并与肿瘤的转移相关。为进一步研究DDR2在肿瘤转移中的作用和DDR2在细胞内的信号通路,对DDR2的胞外区进行了原核融合表达并纯化可溶性部分,获得纯度约85%的纯化蛋白,竞争结合抑制实验证明,纯化的融合蛋白可以特异性阻断II型胶原与天然DDR2受体的结合。 展开更多

关键词 ddr2胞外区 可溶性表达 纯化 功能检测 盘状结构域受体2 肿瘤转移 信导转导

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